MUNDO VETERINARIO RUMIANTES

Toma de muestras enproblemas reproductivos

Llegar hasta eldiagnóstico de losabortos, de la mortalidadperinatal (2-3 días devida) y de la infertilidadno es sencillo, y enalgunas ocasiones resultainfructuoso.

I. Albizu y R. Baselga.Exopol. Autovacunas yDiagnóstico.San Mateo (Zaragoza)

E

xisten varias razones que com-plican la realización de un diag-nóstico preciso en los casos deabortos, mortalidad perinatal

(2-3 días de vida) e infertilidad en losrumiantes:• El agente responsable del proceso no

está ya presente cuando el problemaaparece clínicamente.

• Algunos fetos presentan tal estado deautolisis que impide un estudio ade-cuado.

• El agente infeccioso no pasa al feto ola placenta (procesos febriles y siste-micos).

• La cantidad de anticuerpos presentesen el feto (inmunológicamente ma-duro) limitan la posibilidad de en-contrar el antígeno.

• No todos los fetos abortados tienenpor qué estar infectados, por elloconviene remitir varios fetos al labo-ratorio.

• Las hembras no han seroconvertidoen el momento del aborto.

• Existen causas no infecciosas cau-santes de problemas reproductivos.

• El muestreo en casos de infertilidades dificil.Como siempre, se puede hacer un

diagnóstico presuntivo de la etiologíainfecciosa de los abortos, a partir de lossignos clínicos, edad de las hembrasabortadas, situación vacunal, epide-miología del proceso, y fundamental-mente a partir del historial de la granja,pero la realidad es que es realmente di-ficil, especialmente cuando hay que en-frentarse a granjas nuevas de las que nose conoce bien su historial anterior.

Como en cualquier otro proceso, sepueden encontrar cuadros agudos,muy graves y que afectan simultánea-mente a un gran número de animalesde todas las edades durante un periodolimitado de tiempo y que normalmenteestán asociados a infecciones nuevas enla explotación o a procesos ya crónicosque recirculan afectando a los animalesjóvenes no protegidos inmunológica-

•ro 1. Principales puntas de abortos.

Patógeno

Órganos dianaArcanobactenUM pyogenes Pulmón, hígado, placenta

Aspergillus spp Pulmón, cuajar, placentaBroce 1/a

BVD/Border

Campylobacter fetus

Pulmón, hígado, cuajar, placenta

Pulmón, encéfaloPulmón, hígado, cuajar, placenta, lavados prepuciales

Candida albicans Pulmón, hígado, placentaComalia bumetti

Pulmón, cuajar, placentaChlamydia Placenta, pulmón, cuajarIBR Pulmón, hígado

»Mira Hígado, riñón, cuajarListeria Hígado, placenta

Neospora Corazón, encéfalo, músculoSalmonella sppToxoplasmaTnchomona foetus

Pulmón, hígado, placenta, cuajarEncéfalo, corazónLavados prepuciales y vaginales

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Neosporosis, Chlamydia,Toxoplasma, Coxiella

ELISA No se conoce el momento de la seroconversión.

RUMIANTES MUNDO VETERINARIO

~Ir "7' 71•131N. nermai

r070-7777Campylobacter spp aislada de hisopo endocervical de oveja abortada. En la placa de Columbia Blood Agar se depositaron25 microlitros de suplemento antibiótico Preston y se extendieron. En la placa así preparada se sembró el hisopo y se incubó hasta 6 días encondiciones de microaerofilia. Obsérvese las colonias de Campylobacter muy pequeñas, no hemofílicas, con aspecto de "gota de agua" quese extienden por la placa.

Foto 2. Feto ovino a término cubierto por una capa densa de fibrina. De los órganos fetales se aisló Arcanobacterium pyogenes y porinmunocitoquímica se detectó Chlamydia psittacci en pulmón e hígado. El diagnóstico diferencial se realizó frente a Salmonella, Brucella,Border Desease, Leptospira, Coxiella y Campylobacter, resultando negativo.

Foto 3. Feto bovino sin lesiones macroscópicas aparentes. El diagnóstico diferencial incluyó BVD, IBR, Chlamydia, Neospora, Coxiella,Leptospira interrogans y Campylobacter por inmunoperoxidasa, resultando positivo a BVD en bazo y a Campylobacter foetus en contenidode estómago.Se realizó un cultivo bacteriano para detectar la presencia de Bruce/la, Sa/mofle//a y Listeria con resultado negativo.

-nn•• • 2-• l I ar•-•••,1111,

mente. En todos los casos conviene to-mar los datos clínicos y epidemiológi-cos para poder comparar las caracterís-ticas del problema con los resultadosdel laboratorio, el resultado del trata-miento, los cambios de manejo y laevolución en el tiempo, todo lo cual esuna importante fuente de conocimien-to. Además los laboratorios agradecenespecialmente el compartir estos datosporque les ayuda a aprender y a mejo-rar su trabajo.

En las tablas y figuras anexas se ci-tan las principales etiologías infeccio-sas responsables de problemas repro-ductivos así como las técnicashabitualmente disponibles para el diag-nóstico de cada uno de los patógenosimplicados.

AbortosLas causas de aborto se pueden agru-par fundamentalmente en dos. Losagentes que causan una infección pri-maria del tracto reproductivo (BVD,Border Disease, Chlamydia, Leptospira,etc.) y las que no lo hacen (toxinas, es-trés ambiental o nutricional, y enfer-medades sistemicas como la Agalaxia ola Listeriosis).

En casos de abortos, se recomiendaenviar el feto (órganos diana en bovi-no) con placentas y cotiledones en unabolsa limpia y en refrigeración, suerode la madre y del feto cuando es posi-ble (Cuadro I). Los hisopos tambiénson muy útiles y más económicos, ypermiten muestrear animales en losque no se encuentra el feto o aborta- »

Cuadro II. Interpretad serología en los casos de aborto.

Enfermedad

Técnica ObservacionesBrucelosis Cualquiera Cualquier resultado positivo debe ser considerado como relevante e informado

a las autoridades sanitarias.

IBR

ELISA No es de utilidad si los animales están vacunados con vacuna sin marcar. I Leptospirosis

Macroaglutinacion Puede dar falsos negativos, aunque tiene la ventaja de su facilidad.

Microaglutinación Es necesario estudiar la variación de títulos. Sólo la realizan algunos laboratorios.

Salmonelosis AglutInacion Los resultados son muy inespec ficos porque hay seroconversión

por salmonelas intestinales.

BVD/Border Disease

ELISA Con vacuna inactivada se distingue a los animales vacunados de los infectados.

Carnpylobacter No existen técnicas serológicas.

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~1=11~1111~~1~. •It

Foto 4. Feto bovino abortado tras 50 días de gestación. Se diagnosticó Leptospirosis mediante inmunoperoxidasa. El antígeno de L.

interrogans se detectó en hígado y en anejos fetales, utilizando un pool de anticuerpos monoclonales que reconocen epitopos específicosdel serogrupo automnalis y de las serovares bratislava, can/cola, grippotyphosa, icterohaemorrhagiae y pomona (Royal Tropical Institute,Holanda). El diagnóstico diferencial incluyó IBR Y BVD.

Foto 5. Feto ovino abortado a final de gestación, con áreas de necrosis en hígado y coágulos de sangre en peritoneo por la rotura delhígado. Se aíslo únicamente Campylobacter spp en cultivo puro. Mediante IPX fue negativo a Chlamydia spp, Coxiella bumeti, BorderDisease, Toxoplasma y Leptospira interrogans. La madre también fue negativa a Brucelosis mediante serología. aireFoto 6. Cepa de Salmonella abortus ovis en agar XLD tras 48 horas de incubación a 37 °C. Forma colonias pequeñas que se vuelven de colornegro debido a la producción de ácido sulfdrico. Aislado en ovino.

ev qilianwiess ola- di

Cuadro III. Perfiles serológicos transversales.

2 3 4 5 6

Grupo de edadExplotación infectada previamente, con estabilización y entradade reposición negativa

Explotación positiva con recirculación

Cuadro IV. Resultados de detecciónde antígeno en cuadros

en ov

Patógeno(casos estudiados)

Positivos

I nmunoperoxidasa

Chlamydia (2.477)Toxoplasma (1.926)

33%

5%

L. interrogans (1.891) 16%

Border Disease (1.851) 6 00

Coxiella (1.566) 12%

Campylobatcter fetus (1.034)16%Listeria (26) 27%

CultivoSa/mofle//a spp (4.493) 4%Arcanobactenum 2%pyogenes (4.493)

Cuadro V. Resultados de detecciónde antígeno en cuadros

• , reproductivos en capri

Patógeno Positivos(casos estudiados)Inmunoperoxidasa

Chlamydia (604)L. interrogans (461)

33%21%

Toxoplasma (441) 5%Border Disease (434) 6%

Coxiella (406) 15%Campylobatcter fetus (254) 9%

dos hace algunos días, aunque no entodas las patologías.

InfertilidadEl diagnóstico de los problemas de in-fertilidad es más difícil y normalmen-te el manejo y la alimentación influyentanto o más que las causas infecciosas;sin embargo no hay porque descartar-las a priori.

En caso de infertilidad debe enviar-se moco cervical, lavados prepucialesy suero de animales con problemas.

Los hisopos cervicales permiten loca-lizar algunos patógenos como Chla-mydia, Campylobacter, Leptospira, etc.La orina obtenida con sondas permiteestudiar la Leptospirosis crónica. Paratomar los hisopos hay que limpiar lavulva con agua y jabón, y retirar elmoco exterior que aparecerá muycontaminado con patógenos ambien-tales. Es importante raspar la paredcervical para descamar células giran-do el hisopo.

Para ver la toma de muestras en la-vados prepuciales se puede visitar lapágina www.cpap.embrapa.br/publica-coes/download.php?arq_pdf=CT45.

MetritisLa metritis es la inflamación del úteroy se produce como un desorden post-parto que puede estar asociado a unaborto, retención de placentas, mani-pulaciones obstétricas o simplemente auna infección ascendente después deun parto normal, y más frecuentemen-te como consecuencia de la manipula-ción en la inseminación artificial. Encaso de metritis se debe enviar un hiso-po cervical.

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Los títulos de anticuerpos de la hem-bra deben ser tomados con cuidadoporque un resultado positivo sólo indicaque ha habido contacto entre el patóge-no y el animal, y no que sea la causa delaborto, por lo que normalmente se ne-cesitan sueros pareados en número sufi-ciente y títulos crecientes para tenerevidencia de una infección reciente(Cuadro II). También se puede compa-rar la serología de los animales aborta-dos y sanos. El estudio serológico deanimales de diferentes edades permitiráconocer el momento de seroconversiónfrente a las diferentes patologías(Cuadro III).

Al final de la gestación los fetos soninmunocompetentes y pueden produciranticuerpos en respuesta a un agenteinfeccioso con el que entren en contac-to. Por lo tanto, el hallazgo de inmuno-globulinas en algún líquido fetal, porejemplo fluido torácico, indica la pre-sencia de un agente infeccioso en elfeto. Por otra parte, los neonatos ad-quieren inmunidad maternal por el »

calostro que puede durar hasta variosmeses.

En el caso de BVD, la infección engestación puede dar lugar a animalespersistentemente infectados.

Etiologia

Pequeños rumiantesComo causas infecciosas se encuentranfundamentalmente ChlanOia, Leptospiraspp, Coxiella, Campylobacter quedandoSalmonella y Toxoplasma como agentesmucho menos importantes. Los datosaportados tienen que considerarse »

4

, En la infertilidad influyen elmanejo y la alimentación,

pero no hay por qué descartar apriori las causas infecciosas

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Cuadro VI. Resultados de detecciónde antígeno en cuadros

en bo

lnmunoperoxidasa

interrogans (1.387) 15%

Patógeno Positivos

(casos estudiados)

BVD (1.603)

16%

I BR (1.399) 8%

[ Neospora (1.004) 14%

Toxoplasma (58) 000

Listeria (41) 5%

L. hardjo (37) 38%

L pomona (19) 26%

L. automnalis (18) 11%

L. can/cola (18) 22%

L. grippotyphosa (18) 6%

L. icterohemorrha (18) 0%

L. bratislava (13) 8%

CultivoArcanobacteriumpyogenes (2.543)

3%

Campylobatcter fetus (392) 25%

Chlamydia (1.352) 21%

Coxiella (769) 11%Foto 7. Cepa de Candida albicans aislada en agar Sabouraud aislada en porcino.Incubación 5 días a 22 °C. Obsérvese las colonias redondas, de bordes nítidos y colorblanco. El cultivo tiene un olor característico a levadura de panadería.

Foto 8. Cultivo de Trichomona. Observación en fresco. Microscopio de campo claro 63X.

I> Mida

también en función del número de casosestudiados.

En los Cuadros IV, V y VI se pre-sentan los resultados de detección deantígeno encontrados en el laboratoriode los autores (25.600 casos 2000-2004). Se han empleado diferentestécnicas y los resultados microbiológi-cos son bajos por la gran cantidad demuestras que llegan contaminadas.Estos resultados no son una prevalen-

Datos clínicos y epidemiológicos

Toma de muestras

cia ya que el muestreo está muy sesga-do por las analíticas requeridas por elveterinario y por la cantidad de mues-tras estudiadas en cada caso. Por ejem-plo, el 27% de positivos a Listeria sólose explica porque el veterinario teníaya una sospecha clínica. Además el re-sultado sólo evidencia la presencia deun patógeno y no necesariamente queel patógeno identificado sea el respon-sable del cuadro clínico. •

Sospecha clínica

Diagnóstico directo !Diagnóstico indirecto

eHistopatología Bacteriología

generalInmunodiagnóstico Aislamiento e Biología

identificación viral molecular

o especial;identificación

(PCR)

BVD/BorderI BR

Bruce//a sp.Campylobacter sp.

BVD/BorderI BR

BVD BVD/BorderIBR IBR

Leptospira sp. Sa/mofle//a sp. Leptospira sp. Leptospira sp.Neospora A. Pyogenes Campylobacter fetus Coxiella

Toxoplasma Listeria Coxiella ChlamydiaAborto bacteriano Chlamydia Neospora

Neospora ToxoplasmaToxoplasma

Listeria

RestrOSpeCtiv0(sueros pareados)

BVD/BorderIBR

Leptospira sp.Coxiella

ChlamydiaToxoplasma

Diagnóstico monosueroBruce/lae Neospora

Leptospira (microaglutinación)Toxoplasma

BVDI BR (marcada)

Figura 1. Enfermedades infecciosas que cursan con abortos y/o infertilidad. 1111111111~11111111beimaneummen

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