tesis.comparacion de la proteccion inmunologica conferida por dos vacunas inactivadas contra la...
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UNIVERSIDAD JUAREZ AUTONOMA DE TABASCO
UNIDAD SIERRA
DIVISION CIENCIAS AGROPECUARIAS
MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
COMPARACION DE LA PROTECCION INMUNOLOGICA
CONFERIDA POR DOS TIPOS DE VACUNAS INACTIVADAS
CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE
T E S I S
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE :
MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA
PRESENTA:
RAUL ALEJANDRO KIM GOMEZ
ASESOR:
M.V.Z.,E.P.A. JOSE J. URRUTIA LOPEZ
VILLAHERMOSA,TAB. 1988
DEDICATORIAS
A MIS PADRES:
Por todo el apoyo que me han brindado
Para la culminación de mi carrera
A MIS HERMANOS(HAS):
Con todo cariño .
A CATALINA:
Con todo mi amor,por su apoyo
y comprensión para la realizaci-
on de este trabajo.
C O N T E N I D O
RESUMEN ……………………………………………………………………………….. 1
INTRODUCCION …………………………………………………………………………. 2
OBJETIVO…………………………………………………………………………………….6
MATERIAL Y METODOS ………………………………………………………………. 7
RESULTADOS ……………………………………………………………………………….10
DISCUSION …………………………………………………………………………………..16
CONCLUSION ……………………………………………………………………………… 19
BIBLIOGRAFIA …………………………………………………………………………….. 20
R E S U M E N
Se comparo la protección inmunológica conferida por dos tipos de vacunas
inactivadas contra la enfermedad de Newcastle, una a base de virus
inactivado emulsionado en aceite (VIEA),por vía subcutánea a los quince
días de edad y la otra a base de virus inactivado adsorbido en hidróxido de
aluminio(VIAHA),por vía subcutánea a los quince días de edad.Hubo
diferencia altamente significativa entre los efectos de los tratamientos
(P<0.01),obteniéndose con la primera (VIEA) altos niveles de anticuerpos
inhibidores de la hemoaglutinación que persistieron hasta los 60 días de
edad de las aves, y con la segunda (VIAHA) se obtuvieron niveles muy
bajos de anticuerpos durante toda la fase experimental.
1
COMPARACION DE LA PROTECCION INMUNOLOGICA
CONFERIDA POR DOS TIPOS DE VACUNAS INACTIVADAS
CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE.
INTRODUCCION
La enfermedad de Newcastle (ENC) es una infección viral altamente
contagiosa que se caracteriza por producir trastornos respiratorios, digestivos y
nerviosos a una gran cantidad de especies aviares (1,12,14).Kraneveld (1926),in
formo de una infección altamente difusible y mortal de las gallinas que pre
valecía en las indias orientales Holandesas. Doyle (1927) observo la enfermedad
cerca de Newcastle-on-tyne,dio a esta enfermedad el nombre de esta localidad y
demostró que era una entidad diferente de la peste aviar(1,6,7) La enfermedad fue
reconocida y diagnosticada por primera vez en México por Camargo y Téllez
Girón en 1946 (3).Desde 1948 en que Olvera (13) registro la muerte de 300 000
aves en el Distrito Federal, la enfermedad de Newcastle (ENC) ha sido un serio
problema para la avicultura mexicana. La enfermedad de Newcastle afecta
principalmente a las gallinas, pollos, pavos, además son susceptibles en mayor o
menor grado otras aves domesticas y silvestres, así como ciertos mamíferos --
2
incluyendo al hombre, en el que puede producir afecciones oculares (conjuntivitis)
y cefalea intensa.El agente infeccioso causal de la enfermedad de Newcastle es
un virus clasificado dentro de los paramyxovirus (1,6,7,8,10,12) pudiendo tener
cuatro diferentes formas de presentación dependiendo del patotipo (1,7,8,12).La
mayoría de los países del mundo en donde la enfermedad de Newcastle es
enzootica entre ellos México, han adoptado la vacunación como el método básico
para su control (1,15)
Dado el carácter enzootico de la enfermedad en nuestro país, es vital tener
programas de prevención y control con el objetivo de mantener un adecuado nivel
inmunitario en las aves y evitar en lo posible el contacto con el virus a temprana
edad. Para ello se necesita implantar medidas higiénico-sanitarias estrictas y
programas de vacunación adecuados (9,12).La prevención y control de la
enfermedad de Newcastle se lleva a cabo por medio de la vacunación de las aves
con vacunas elaboradas con virus activo (vivo) y virus inactivado (muerto)
(7,12).Las vacunas con virus activo se elaboran con cepas vacunales suaves
,tales como los virus tipo Hitchner: Cepa B1,Cepa La Sota (1).Las vacunas a
virus vivo pueden causar reacciones respiratoria adversas, las cuales pueden
aumentarse si se aplican en aves susceptibles o infectadas con mycoplasma
(7,12,14).Este tipo de vacunas producen un bloqueo celular a nivel de la mucosa
respiratoria que constituye la vía natural de entrada del virus (5).Las vacunas a --
3
virus muerto o inactivado generalmente no provocan reacción respiratoria
postvacunal (1,9,12).
Si la mayor parte de las vacunas a virus vivo pueden ser administradas
colectivamente, las vacunas a virus inactivado por lo contrario, deben ser
aplicadas individualmente .Esta diferencia se debe al hecho que las vacunas a
virus inactivado deben ser aplicadas por vía parenteral, mientras que las vacunas
a virus vivo pueden ser administradas por vías diversas, tanto individual
(instilación conjuntival, intranasal o intramuscular) como masiva (por aerosol o en
el agua de bebida).(1,12,21).Como se menciono anteriormente las vacunas
inactivadas requieren ser aplicadas por inyección, y mientras las vacunas
adsorbidas en gel de hidróxido de aluminio pueden ser aplicadas con seguridad
por vía intramuscular, las vacunas emulsionadas en aceite tienen que ser
aplicadas por vía subcutánea para evitar la formación de abscesos (6).
La vacunación simultanea con virus vivo y virus inactivado tiene por objeto
provocar una respuesta inmune local con el primero, así como la producción de
anticuerpos sistémicos con el segundo (5).Los anticuerpos locales protegen contra
la implantación de la enfermedad, en tanto que los segundos lo hacen contra la
infección generalizada (22).Se han usado extensamente formalina y
betapropiolactona para la inactivación del virus de la enfermedad de Newcastle.
El resultado de la inactivación es la ausencia de la multiplicación del antígeno --
3
dentro del organismo (11).
Para incrementar la respuesta inmune, las vacunas inactivadas usualmente tiene
un adyuvante a base de hidróxido de aluminio o pueden estar en la
forma de una emulsión producida por fluidos alantoideos y un aceite mineral
(11).Estos adyuvantes utilizados en las vacunas inactivadas producen una
liberación lenta del antígeno que tiene el efecto de provocar múltiples estímulos
antigénicos por periodos que llegar a alcanzar varias semanas (12,18).
5
O B J E T I V O
El objetivo de este trabajo fue comparar la protección inmunológica conferida por
dos tipos de vacunas inactivadas contra la enfermedad de Newcastle
(Emulsionada en aceite vs Adsorbida en hidróxido de aluminio) en base a los
títulos de anticuerpos conferidos, medidos por la prueba de inhibición de la
hemoaglutinación (2).
6
MATERIAL Y METODOS
Se utilizaron 120 pollitos mixtos de engorda de un día de edad de una línea
comercial, los cuales se alojaron en una nave construida con materiales propios
de la región, con piso de cemento, ubicada en el km 5 de la carretera Vi
llahermosa - Nacajuca .Durante la fase experimental las aves fueron alimentadas
con alimento comercial y sometidas a las mismas condiciones de manejo. Fueron
utilizadas dos vacunas comerciales contra la enfermedad de Newcastle, una a
base de virus inactivado emulsionado en aceite*(VIEA) y la otra a base de virus
inactivado adsorbida en hidróxido de aluminio**(VIAHA).Los pollos se dividieron en
tres grupos de 40 animales cada uno. El diseño experimental fue completamente
aleatorizado con dos tratamientos y un testigo y dos repeticiones por tratamiento.
* Lab. Pfizer
**Lab Intervet
7
Se describen los tratamientos utilizados en este trabajo:
TRATAMIENTO No.1
Los pollos de este grupo fueron vacunados a los quince días de edad con virus
inactivado emulsionado en aceite (VIEA) por vía subcutánea 0.5 ml a cada uno.
TRATAMIENTO No.2
Los pollos de este grupo se vacunaron a los quince días de edad con virus inacti
vado adsorbido en hidróxido de aluminio (VIAHA) por vía subcutánea 0.5 ml a
cada pollo.
TESTIGO
Los pollos de este grupo no fueron vacunados.
8
Posteriormente a la vacunación se sangraron por punción cardiaca 20 pollos de
cada grupo a los 30,45 y 60 días de edad, con la finalidad de obtener suero para
determinar los niveles de anticuerpos séricos contra la enfermedad de Newcastle.
Los sueros que se obtuvieron se sometieron a la prueba de inhibición de la
hemoaglutinación (HI).
Para el análisis estadístico de los resultados se realizo la transformación raíz
cuadrada y= √ x + 0.5 que permite utilizar la técnica de análisis de varianza en
grupos de datos en los que se presentan observaciones con valor cero (16). Para
la comparación de medias fue realizada la prueba de Tukey.
9
RESULTADOS
Los resultados de este trabajo fueron obtenidos en tres etapas: a los 30,45 y 60
días de edad de las aves. En la primera etapa a los 30 días de edad, según el
análisis de varianza para los datos transformados (cuadro 1) existió diferencia
altamente significativa (P < 0.01) entre los efectos de los tratamientos.
En la grafica 1 se observa que en esta etapa el tratamiento 1 (VIEA) fue el que
tuvo el mejor comportamiento, obteniéndose un mayor nivel de anticuerpos con
respecto al tratamiento 2 (VIAHA) que mostro un nivel muy bajo de anticuerpos,
comportándose estadísticamente igual al grupo testigo (P<0.05).
El análisis de las medias para la prueba de tukey se muestra en el cuadro 2.
En la segunda etapa a los 45 días de edad de las aves el cuadro 3 muestra el
análisis de varianza para los datos transformados, en el cual puede observarse
que existió diferencia altamente significativa (P< 0.01) entre los efectos de los tra
mientos. En esta etapa (grafica 1) el tratamiento 1 (VIEA) mostro una buena
respuesta inmunológica, alcanzando niveles mas altos de anticuerpos con los que
se obtiene una mayor protección que la conferida por el tratamiento 2 (VIAHA),con
el que se obtuvieron muy bajos niveles de anticuerpos, mostrando un comportami
ento inferior al tratamiento 1 (VIEA).En el cuadro 4 se presentan los resultados de
la comparación de medias por la prueba de Tukey.
10
En la tercera etapa a los 60 días de edad, el análisis de varianza para los datos
transformados que se presenta el cuadro 5, muestra que en esta etapa hubo
diferencia altamente significativa (P<0.01) entre los efectos de los tratamientos.
En la grafica 1 se puede observar que en esta etapa con el tratamiento 1 (VIEA)
se alcanzaron niveles mas altos de anticuerpos con los que se obtiene adecuada
protección, mostrando una respuesta inmunológica superior con respecto al
tratamiento 2 (VIAHA) que mostro niveles de anticuerpos muy bajos durante toda
la fase experimental, que no confieren suficiente protección.
El análisis de las medias por la prueba de tukey se presenta en el cuadro 6.
CUADRO 1.Analisis de varianza para los datos transformados de los títulos
de anticuerpos a los 30 días.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
G.L. S.C. C.M. F. F.V.
Tratamiento 2 8.3954 4.10 20.37**
Error 57 11.7443 0.21
Total 59 20.1397
**Altamente significativo. (P<0.01)
11
CUADRO 3.analisis de varianza para los datos transformados de los títulos
de anticuerpos a los 45 días.
F.V. G.L. S.C. C.M. F.
Tratamiento 2 27.9327 13.97 122.45**
Error 57 6.5013 0.11
Total 59 34.4339
**Altamente significativo (P< 0.01)
CUADRO 5.Analisis de varianza para los datos transformados de los títulos
de anticuerpos a los 60 días.
F.V. G.L. S.C. C.M. F.
Tratamiento 2 30.6533 15.32 142.70**
Error 57 6.127 0.1074
Total 59 39.7803
**Altamente significativo (P<0.01)
12
CUADRO 2.Comparacion de las medias de tratamientos mediante la prueba
de Tukey a los 30 días de edad.
Tratamiento X Datos originales X Datos transformados
1 VIEA 2.45 1.60ª
2 VIAHA 0.45 0.87b
3 Testigo 0.1 0.76b
Medias con distinta literal son diferentes estadísticamente (P< 0.05)
CUADRO 4.Comparacion de las medias de tratamiento mediante la prueba de
Tukey a los 45 días de edad.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tratamiento X Datos originales X Datos transformados
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 VIEA 5.2 2.35a
2 VIAHA 1.05 1.17b
3 Testigo 0.05 0.73c
Medias con distinta literal son diferentes estadísticamente (P< 0.05)
13
CUADRO 6.Comparacion de las medias de tratamientos mediante la prueba
de Tukey a los 60 días de edad.
Tratamiento X Datos originales X Datos transformados
1 VIEA 5.25 2.38a
2 VIAHA 1.0 1.11b
3 Testigo 0 0.70c
Medias con distinta literal son diferentes estadísticamente (P< 0.05)
14
Grafica No.1
*T.A.
6 VIEA
5
4
3
2
1 VIAHA
TESTIGO
0 30 45 60
Días de edad.
*Títulos de Anticuerpos
15
DISCUSION
De las vacunas probadas, las de virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA)
demostró mayor efectividad, alcanzando mayores niveles de anticuerpos. Después
de la vacunación, el titulo de anticuerpos fue aumentando lentamente a la primera
valoración a los 30 días, y a los 45 días de edad se encontraron altos niveles de
anticuerpos que presentaron una tendencia horizontal sin disminuir hasta los 60
días de edad de las aves que fue el tiempo de duración de este trabajo.
Aguilera y Ortega (1) realizaron un trabajo en que vacunaron por diversas vías
utilizadas con mayor frecuencia, al vacunar con virus inactivado emulsionado en
aceite (VIEA) únicamente, por vía subcutánea, obtuvieron altos niveles de
anticuerpos que persistieron por varias semanas, lo cual concuerda con los
resultados obtenidos.
En otro trabajo, Vega (20) utilizando virus inactivado emulsionado en aceite por
vía subcutánea, encontró que el antígeno mantuvo un estimulo continuo durante
50 días. En el presente trabajo la vacuna inactivada emulsionada en aceite
mantuvo un estimulo constante postvacunacion hasta los 60 días de edad de las
aves que fue la duración del periodo experimental. Téllez Girón (18) en
1968,realizo un trabajo en que comparo una vacuna en base oleosa con respecto
16
a vacunas a base de virus vivo, vacuna inactivada simple y vacuna inactivada
adsorbida en hidróxido de aluminio, los resultados que obtuvo demostraron
que la vacuna emulsionada produjo una respuesta inmunológica elevada que
perduraba por largo tiempo con respecto a las otras vacunas utilizadas. Lo
que coincide con los resultados que obtuvimos al comparar la protección
inmunológica conferida por la vacuna inactivada emulsionada en aceite
contra la vacuna inactivada adsorbida en hidróxido de aluminio,
obteniéndose una alta respuesta inmunológica con la primera.
Según Garza (5),la prolongada permanencia del antígeno viral inactivado que
se logra con el adyuvante emulsionado establece una solida base para lograr
un estimulo mas prolongado de la vacuna por periodos que llegan a alcanzar
varias semanas. Sin embargo es incapaz de estimular inmunidad en el epitelio
respiratorio (9).
Urrutia (19) en 1987 realizo un trabajo no publicado, utilizando virus
inactivado adsorbido en hidróxido de aluminio en una vacuna triple aviar,
encontró un titulo de HI de 2.36, esto nos indica que habría que realizar otros
17
trabajos con vacunas a virus muerto en hidróxido de aluminio, porque la
cantidad de antígeno (18%) puede variar de una marca a otra, para
determinar el verdadero valor de estos productos biológicos.
18
CONCLUSION
En base a los resultados obtenidos en esta prueba puede concluirse que con la
vacuna a base de virus inactivado emulsionado en aceite (VIEA) contra la
Enfermedad de Newcastle se obtiene un mayor nivel de anticuerpos inhibidores de
la hemoaglutinación que persisten por varias semanas. Se recomienda al utilizar la
vacuna inactivada emulsionada en aceite (VIEA) aplicar simultáneamente virus
vivo por vía ocular, ya que la primera (VIEA) no protege la vía natural de entrada
del virus.
19
BIBLIOGRAFIA
1.-Aguilera,R.M.,Ortega,s.t.(1983) Titulación de anticuerpos y su duración contra
la enfermedad de Newcastle en pollos de engorda vacunados por diversas vías
utilizadas en México. Avirama 3:4-35.
2.-Beard,C.W. (1980) Serologic procedures in: Isolation and identification of Avían
pathogens.American association of avian patholigists,Departament of Veterinary
microbiology,Texas A&M University,College Station,Texas.
3.-Campos,N.E.(1947)Enfermedad de Newcastle. Tesis de Licenciatura. Escuela
nacional de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM, México, D.F.
4.-Dorn,P. (1973) Manual de Patología Aviar,Edit. Acribia, Zaragoza, España.
5.-Garza,R.J. (1976) Aspectos inmunológicos de la Enfermedad de Newcastle.
Vet. Mex., UNAM, Vol. Vll No2.
6.-Gordon,R.F. (1983) Enfermedades de las aves. Edit. El Manual Moderno,
México.
7.-Hanson,R.P. (1972) Newcastle Disease in:Disease of poultry,The Iowa State
University Press,Ames,Iowa,USA.
8.-Lucio,M.B. (1976) Panorama de la Enfermedad de Newcastle en México. Vet.
Mex., UNAM, Vol. Vll No2.
20
9.-Lozano,D.B. (1984) Brotes de la Enfermedad de Newcastle. Boletín técnico,
Lab. Pfizer, S.A., Mexico.
10.-Lardizabal,P.G. (1981) Determinación de anticuerpos por el método de
inhibición de la hemoaglutinación en pollos de engorda vacunados contra la en
fermedad de Newcastle en el municipio de Veracruz, Ver. Tesis de Licenciatura,
FMVZ-Universidad Veracruzana.
11.-Lancaster,J.E.,(1981) The control of Newcastle disease. World Poultry Sci
ence Journal,Vol.37 No1.
12.-Mosqueda,T.A.;Lucio,M.B.;Cruz,C.J.S (1984)Enfermedades de las aves, tomo
I Enfermedades infecciosas, SUA,FMVZ-UNAM.
13.-Olvera,H.E. (1948) Enfermedad de Newcastle. Tesis de licenciatura. Esc.Nal
.de Med. Vet. Y Zoot. UNAM.
14.-Parada,A.J.,Tellez,G.A.,Green,M.J. (1977) Experiencias en México con una
vacuna contra la enfermedad de Newcastle emulsionada en aceite. Memorias del
congreso Latinoamericano de Avicultura. Caracas, Venezuela.15.-Perelman,A.B.
(1976) Importancia de las cepas de desafío en la evaluación de las vacunas contra
la enfermedad de Newcastle. Vet. Mex. UNAM, Vol. VII No2.
21
16.-Steel,G.D. y J.H. Torrie (1980) Bioestadística, Principios y procedimientos,1ª
ed. En esp., Libros Mc Graw-Hill, México, D.F.
17.-Tellez,G.A. (1968) Experiencias con la vacuna Newcastle inactivada y
emulsionada en aceite. Bol. Tec. Div. Vet., Lab. Pfizer, S.A., México.
18.-Tizard,I, (1984) Inmunología Veterinaria, Edit. Interamericana,2da. ed., México,
D.F.
19.-Urrutia,L.J.J., (1988) Comunicación Personal.
20.-Vega,M.A. (1975) Estudio comparativo de varios programas de vacunación
contra la enfermedad de Newcastle. Valoración de la inmunidad obtenida durante
la vida comercial de las aves. Tesis de Licenciatura. Escuela de Ciencias
Químicas. Universidad Autónoma de Querétaro.
21.-Eidson,C.S. and Kleven, S.H. (1976) A comparison of various routes of
Newcastle disease vaccination at one day of age.Poultry Science 55:1778-1787.
22.-Levy,R.,G. Spira and Z. Zakay –Rones (1976) Newcastle disease virus pa
thogenesis in the respiratory tract of local or systemic inmunized chickens. Avian
Disease Vol. 19:4.
22