UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS E.A.P. Ing. En Industrias Alimentarias

CURSO: Microbiologa De Alimentos ITEMA: Identificacin De Indicadores De Microorganismos DOCENTE: Dr. Rodolfo Orejuela Chirinos

INTEGRANTES: Crdenas Quiliche Miriam Guevara Becerra Arelis Huaripata Novoa Yessenia Jara Castrejn Laura Mosqueira Hernndez Lilian Nez Meja Edith Pompa Castope Leonidas Ramos Vsquez Walter Requejo Ilatoma Rubely Reyes Vargas Everaldo Romero Cojal Jos Snchez Muoz Ana Cecilia Tello Daz Edward Valera Ramos Johana CICLO: V

Cajamarca, mayo de 2014

IDENTIFICACIN DE INDICADORES DE MICROORGANISMOSENTEROCOCOSRECUENTO DE ENTEROCOCOS IntroduccinLa gran mayora de las especies de Enterococcus habitan normalmente en el tracto gastrointestinal, y se encuentran en una concentracin de ms de 107 organismos por gramo de heces fecales.1 Son miembros de la microbiota natural del tracto genital femenino1 y no representan daos para el organismo en condiciones normales. Sin embargo, en ocasiones se comportan como patgenos oportunistas y pueden causar diferentes enfermedades, sobre todo en aquellos pacientes que han sido hospitalizados por perodos prolongados o sometidos a terapia antimicrobiana previa, que los convierte en un importante patgeno nosocomial.2

Estos microorganismos son considerados indicadores de la calidad sanitaria de las aguas y de algunos alimentos, por lo que su presencia en el ambiente indica contaminacin de origen fecal.3 Por su elevada incidencia en las infecciones nosocomiales, su resistencia antimicrobiana, y por ser considerados indicadores de contaminacin fecal, estos microorganismos han adquirido una importancia notable en la actualidad y se ha desarrollado una gran cantidad de medios de cultivo de diferentes propsitos, tanto convencionales como cromognicos y/o fluorognicos, especficos para este gnero, que son empleados en los laboratorios de Microbiologa de todo el mundo para lograr su aislamiento e identificacin de muestras clnicas, aguas y algunos alimentos. La seleccin del tipo de medio a utilizar depende de la experiencia, as como tambin del tipo de muestra, el mtodo de cultivo y del grado de contaminacin de la muestra con otros organismos, por lo que resulta de gran importancia realizar una revisin bibliogrfica sobre esta temtica.4 El objetivo de esta segunda revisin bibliogrfica sobre el tema consisti en realizar una recopilacin de los principales medios de cultivo existentes para este gnero, su principio de funcionamiento, as como los principales ingredientes que contienen, y resaltar las ventajas que resulta el uso de los medios cromognicos y/o fluorognicos al ser mucho ms sensibles, rpidos y exactos.Los Enterococos pueden tener un papel significativo como indicadores de prcticas de limpieza y desinfeccin deficientes en las industrias alimentarias, debido a su gran resistencia a la desecacin, a las temperaturas elevadas y bajas y a los detergentes y desinfectantes. Material El necesario para realizar diluciones decimales. Pipetas de 1 mL. Placas de Petri estriles. Botes prex de 100 mL.

Preparacin del medio Agar KAA (Agar Kanamacina Aesculina Acida) Se disuelven 24 g en 500 mL de agua destilada en un matraz Erlenmeyer de 1L de capacidad y se hierve la mezcla hasta disolver el medio en placa calefactora con agitacin. Pasar a botes de prex de 100 mL. Esterilizar en autoclave a 121C durante 20 minutos. Mtodo Atemperar el medio una vez fundido en un bao a 50C. Poner 1 mL de cada dilucin en una placa de Petri, estril. Aadir 15 a 20 mL de medio KAA Realizar movimientos rotatorios y homogenizar. Incubar 24 horas a 37C Contar las colonias tpicas (pequeas, de color gris oscuro con halo negro, como consecuencia de la hidrlisis de la esculina) y expresar el resultado como Unidades formadoras de colonias de colonias por gramo o mL. De alimento.

NUMERACIN DE MICROORGANISMOS AEROBIOSMESOFILOS VIABLES

Este mtodo se basa en la presuncin de que cada clula bacteriana puede crecer en un medio de cultivo slido formando colonias. De acuerdo a este criterio el nmero de colonias desarrolladas en un medio de cultivo slido, puede corresponder al nmero de clulas bacterianas viables presentes en una cantidad determinada de muestra que haya sido inoculada.

El nmero de bacterias aerobias mesfitas encontrado en los alimentos es uno de los Indicadores microbianos de calidad de los mismos (ste ndice no es vlido-para alimentos fermentados: queso, leches fermentadas, yogurt, mantequilla).

Esta determinacin se utiliza para:

a) Verificar la eficacia de los sistemas de limpieza y desinfeccin y, averiguar la temperatura a que fueron mantenidos los alimentos durante los procesos de tratamiento industrial, transporte y almacenamiento.b) Tener una idea sobre la alteracin incipiente de los alimentos, de su probable vida til, de la descongelacin no controlada de los alimentos congelados o de las fallas en el mantenimiento de la temperatura de refrigeracin en los alimentos refrigerados.c) Poner de manifiesto las fuentes de contaminacin durante el proceso de elaboracin de los alimentos.

I. MATERIALES1) Los requisitos necesarios para la Preparacin y Dilucin de la Muestra.2) Placas de Petri (100 x l5mm).3) Pipetas bacteriolgicas de 1 mi, 5 ml y 10 ml.4) Bao de agua regulado a 44 _460C para mantener el agar licuado.5) Incubadora regulada a 29 31 OC (chequear frecuentemente la constancia y uniformidad de la temperatura interior terrnocuplas o termmetros adecuados en diferentes posiciones del incubador mientras se encuentre lleno con varias Placas de agar).6) Contador de colonias.7) Agar de Recuento (Medio NO 17).

II. PROCEDIMIENTO1) Preparar la muestra por uno de los procedimientos recomendados en el Captulo de Preparacin y Dilucin de la Muestra, teniendo en cuenta la naturaleza del producto, as, para la leche cruda deber hacerse mayores diluciones que para la leche pasteurizada.2) Pipetear por duplicado a. placas de Petri estriles alcuotas de 1 ml a partir de dilucin 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 y 10-5 y una alcuota de 0.1 ml de la dilucin 10-5 para obtener de 10-1 a 10-6 g o ml de muestra por placa de Petri. Se sugiere esta serie de diluciones cuando no se conoce el rango aproximado de nmero de bacterias.3) Licuar el agar de recuento en un bao de vapor o en un bao de agua hirviente, sin exponerlo a tal calentamiento por un perodo prolongado. Temperar el agar a 44 - 46C y controlar la temperatura cuidadosamente, para evitar la muerte de las bacterias en la muestra diluida. Agregar rpidamente a las placas de Petri 15 ml de agar licuado y temperado. Entre la preparacin de la dilucin y la adicin del agar no deben transcurrir ms de 10 minutos.4) Mezclar inmediatamente las alcuotas con el agar mediante movimientos de vaivn y de rotacin de las placas Petri. Una secuencia satisfactoria de pasos es la siguiente:

a) mover la placa de arriba abajo 5 veces en una direccinb) rotar la placa 5 veces en el sentido de las agujas del relojc) mover la placa 5 veces en la direccin que haga ngulo recto al usado en el primer tiempod) rotar la placa 5 veces en sentido inverso al de las agujas del reloj.

5) Para control de esterilidad, adicionar a placas de Petri, agua sin inocular y agar inoculado con el diluyente.6) Una vez solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a 29 31 oC durante 48 3 horas.7) Cmputo del Recuento Estndar en placa.

a. Seleccionar 2 placas correspondientes a una dilucin que contenga entre 30 y 300 colonias utilizando un contador de colonias.b. Tomar la media aritmtica de los 2 recuentos y multiplicar por el factor de dilucin (recproco de la dilucin utilizada). Reportar segn el caso, el resultado como numero de microorganismos aerobios mesfilos por gramo o mililitro.

Ejemplo: Dilucin. 10-2Placa 1: 72 colonias x 102 = 7,200 Placa 2: 77 colonias x 102 = 7,700Se promedia: Se reporta 7,450 colonias/g o ml.

c. Si las placas de 2 diluciones consecutivas presentan recuentos menores que 30 y mayores que 300, tomar el promedio de los 2 recuentos.

Ejemplo Dilucin: 10-2N de colonias contadas: 350 Dilucin 10-3N de colonias contadas: 27 Se promedia: 350x 102 = 35,000 27 x 103 = 27,00035,000+ 27,00 = 31,0002Se reporta 31,000 colonias/g o ml

d. Si el nmero de colonias de las placas de 2 diluciones consecutivas estn dentro del rango de 30-300, computar el recuento para cada una de las diluciones y establecer la relacin de los 2 recuento& Si el cociente es menor que 2, reportar el promedio de los 2 valores, pero, si el recuento mayor contiene 2 veces o mas al menor, en este caso se reportar el recuento del menor.

Ejemplo 1: Dilucin 10-1 N de colonias contadas: 290 Dilucin 10-2 N de colonias contadas: 35 Se relaciona el cmputo de los 2 recuentos: 3,500 = 1.2 2,900

En este caso se reporta el promedio2,900 + 3,500 = 3,2002

Ejemplo 2: Dilucin 10-2 N de colonias contadas: 170 Dilucin 10-3 No de colonias contadas: 45 Se relaciona el cmputo de los recuentos:45,000 = 2,217,000 En este caso se reporta el recuento menor, es decir:17,000 colonias por g. o ml

8) Cmputo del Estimado del Recuento Standar en Placa.

a) Si las placas de todas las diluciones muestran ms de 300 colonias, dividir cada duplicado de placas de la dilucin ms alta en secciones radiales convenientes (2,4,8) y contar todas las colonias en una o mas secciones. Multiplicar el total en cada caso por el factor apropiado para obtener el nmero de colonias en toda la placa. Promediar los estimados de las 2 placas duplicadas y multiplicar por la dilucin correspondiente. Reportar el resultado como un estimado del nmero.

b) Si hubiese ms de 200 colonias por 1/8 de seccin de la placa, multiplicar 1,600 (200 x 8) por la dilucin y expresar el estimado como mayor que (>) el nmero resultante. Ej.: 1,600 x 103 = > l600,000/g ml.

c) Si no hubiese colonias en placas de la mayor concentracin, reportar el estimado como menor que (