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Universidad de ColimaFacultad de Medicina
Centro Universitario de Investigaciones Biomédicas
EFECTO DEL TEDISAMIL SOBRE LAS PROPIEDADESELECTRICAS DEL MUSCULO CARDIACO
TesisPara obtener el grado deMestro en Ciencias con
especialidad en Farmacología
Presenta
Q.F.B. MARIA LUISA TORRES DUARTE
Asesor
DR. JOSE ANTONIO SANCHEZ CHAPULA
Colima, Col. 1998
INDICE
INTRODUCCION
OBJETIVOS
HIPOTESIS
METODOS
RESULTADOS
DISCUSION
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
1
24
25
26
31
48
52
53
INTRODUCCION
Z.- FASES Y MECANISMOS ZONZCOS DEL POTENCLAL DE ACCZON
cAzzDzAc0.
La electrofisiología del músculo cardíaco es notoriamente complicada. En el
pasado algunas de las dificultades en la interpretación de los datos &eniak/s can ia
técnica de fijación de voltaje, se originaron de la compleja morfología del tejido
cardíaco y de las inadecuadas herramientas para separar inequivocamente los
componentes de varias corrientes iónicas. Sin embargo, nuevos métodos han sido
desarrollados de tal forma que, en células cardíacas aisladas se puede realizar
fijación de voltaje y diálisis interna; los canales iónicas pueden ser identificados y
analizados por el método de fijación de voltaje en parche de membrana (Patch
Clamp) (Reuter, H., 1984).
.
Las células del músculo cardíaco comparten con todas las células excitables
ciertas propiedades eléctricas incluyendo una alta resistencia de la membrana y una
diferencia de potencial de reposo negativo ( -40 a -70 mV ó -80 a -90 mV, según el
tipo de célula). A esta diferencia de potencial entre ambos lados de la membrana se
le denomina potencial de reposo y su valor permanece estable en la mayoría de las
células cardíacas.
Si a una célula cardíaca en reposo se le aplica un pulso despolarizante de
suficiente intensidad, el potencial de membrana se desplaza hacia valores cada vez
1
menos negati\*os, y si se alcanza un determinado valor crííico, denominado potencial
umbral, se originará un potencial de accion (PA) (Carmeliet, E. y J. Vereecke.,
1979).
La forma y duración de los potenciales de acción cardíacos dependen de la
region donde se registren y de la especie en que se trabaje (fis. 1) (HofSman y *
Cranefield, 1960). Como caractenstica distintiva tienen que son de una mayor
duración que los registrados en nervio y músculo esquelético y presentan una meseta
más prominente.
En las fibras de purkinje el P.A. dura aproximadamente 300 ms. y pueden ser
definidas moflológicamente 5 fases: La fase 0 se caracteriia por una rápida
despolariiación e inversión del potencial de membrana y la Vmax ( velocidad máxima
de despolarización) es de aproximadamente 500 VIS. La fase 1 ó de repolarización
inicial es de corta duración y es seguida de la meseta ó fase 2 la cúal es
principalmente responsable de la larga duración del P.A. cardíaco, durante la fase
3 se inicia la repolarización final, la fase 4 corresponde al potencial de membrana
en reposo. En las células de nodo AV y SA la fase 0 tiene un ascenso lento y las
fases 1, 2 y 3 no pueden distinguirse claramente, la fase 4 corresponde al potencial
marcapaso ó despolarización diastólica espontánea ( fig. 1). En fibras auriculares
y ventriculares de trabajo la Vmax es de aproximadamente 200 V/s. (Sanchez-
Chapula, 1987).
2
NSA
NAV
Figura 1. - Trazos de potenciales de acción de membrana Qicos, registrados delas siguientes regiones (de arriba hacia abajo): Nodo Seno-Auricular,A4úsculo Auticular, Nodo Aurícula- Ventricular, Haz de His, Fibraterminal de Purkinje y Músculo Ventricular. Note la secuencia deactivación de las diferentes regiones. (tomada de HofSman yCranefYeld, I960).
3
l.l.- Corrientes iónicas involucradas en la génesis de las respuestas cardíacas.
Todas las fases del PA cardíaco que hemos descrito anteriormente son debidas
a una secuencia de cambios en las corrientes iónicas a través de la membrana de las
células cardíacas.
En el miocardio, como en la mayoría de las células excitables la fase 0 ó de
rápida despolarización diastólica es debido a un aumento especifico en la
permeabilidad de la membrana a los iones de Na+ (DECK, K.A. Y TRAUTWEIN,
W. 1964), Cuando el potencial de membrana alcanza el nivel del potencial umbral
la permeabilidad de la membrana al Na + aumenta bruscamente, produciendose una
corriente rápida de entrada de Na+ hacia el interior de la célula cardíaca (1ya) que
actúa como corn’ente despolarizante. Por lo tanto, la amplitud y la Vmox de la fase
0 del potencial de acción dependen de la magnitud de la INa.
Diversos experimentos han demostrado que los Na+ son los responsables de
acarrear la corriente rápida de entrada:
a) . - El potencial de inversion de la IN0 corresponde al po tencial de equi1ibn.o
para iones Na (ENa y depende de la I;Iva/o en la forma predicha por la ecuación de
Nemst. (Beeler, G:W: y H-Reuter, 1970; Dudel, J., K. Peper, R. Rudel, y W.
Trautwein, 1966).
4
b) .- La corriente de sodio (INa) desaparece en soluciones carentes de Na+ ó
en las que éste a sido sustituido por colina ó sacarosa (Deck, KA. y Trautwein, W.,
1964).
c).- Como en el nervio (Hodgkin, A. L., y F. Huxley, I952), la permeabilidad
para Na (PNa) es independiente de la concentración de Na. ( Dudel, J.; K. Peper; .
R. Rudel; W. Trautwein; 1966).
d).- La Ina se bloquea espectficamente con la tetrodotoxina (Tnr). (Dudel, J.;
KPeper; R. Rudel; W. Trautwein; 1967).
El proceso de repolarización en las células cardíacas es complejo e implica
la interacción de diversas corrientes iónicas que varian, según la especie animal ó
el tipo de fibras estudiadas (Bassingthwaighte, J.B.; y H. Reuter: 1972).
La fase 1 ó de repolarikación inicial rápida, es característica de P.A. de
aurícula, epicardio ventricular y fibras de Purkinje pero no aparece ó es mínima en
el endocardio ventricular (Connors, y Stevens, 1971; Hagiwara, Saito, 1960; Neher,
1971). En fibras de Purkinje la fase 1, ha sido atribuida a: a) Rápida inactivación
de la INo, b) Activación de una corriente de K+ dependiente de tiempo llamada
corriente transitoria de salida ó I,. (Deck & Trautwein, 1964). La Ito ha sido
encontrada en varias preparaciones cardíacas de distintas especies y en algunas de
5
éstas especies puede variar con la edad, la localización anatómica y fisiopatologias
(Gintant y Col., 1992).
.
Se han identificado dos componentes de la Il; a) una corn’ente de Ki-
activada por voltaje (llOJ, bloqueada selectivamente por (4-AP), y b) un .s~:gundo
componente (I, j activada por Ca + + y acarreada por Cl-, demostrado en trabajos
recientes en miocitos ventriculares de conejo (Zygmunt y Gibbon, IFFO), de gato
(Sanchez-Chapula, 1992), y de perro (Zygmunt, 1991). La Ito2 es resistente a 4-4-
AP, pero sensible a cafeína, rianodina y cationes divalentes (Co+ +. Sr+ +)
(Kenyon y Sutko, 1987).
En preparaciones multicelulares de ventrículo de perro los PA del epicardio
presentan una fase 1 de mayor amplitud que los PA del endocardio. Estas diferencias
entre ambos tejidos se atribuyen a una Itol de mayor tamaño en epicardio que en
endocardio (Litovsky y Antzelevitch, 1988).
La fase sostenida del potencial es llamada fase 2 ó meseta (plateau).
Experimentos realizados con la técnica de fijación de voltaje revelaron una
segunda corriente entrante (despolarizante) I,. Esta corriente participa parcialmente
en el mantenimiento de la meseta del P.A. en todos los tejidos cardíacos y los
procesos excitatorios (fase de despolarización ó fase 0) del P.A. de los nodos SA y
6
AV, dependen de esta corriente.
La corriente lenta ó secundaria dependiente de Ca+ f difiere de la INa en
su dependencia de voltaje, cinética, selectividad iónica y sensibilidad a agentes
farmacológicos. Ello fué comprobado por diversos experimentos:
a).- La I, desaparece en solución carente de Ca+ i- y su magnitud aumenta
al aumentar la [Calo. (Beeler, G. W. Jr., y H. Reuter, 1970; Reuter, H., y Scholz,
H., 1977a).
b).- Cuando se adiciona La, Mn, Co, Ni, Sr, Ba, Verapamil, bloqueadores de
canal lento, no se afecta la despolarización rápida pero si se deprime la magnitud
de la fase 2 del P.A. (Reuter, H., 1973).
Avances con técnicas electrofisiológicas han permitido la caracterización de
la ICa. Análisis de corrientes empleando la técnica de fijación de voltaje en la
modalidad de célula completa (whole-cell) y canales unicos en células ventn’culares,
auriculares, de nodo SA y fibras de Purkinje sugieren que dos tipos de canales de
Ca+ + contribuyen a la I, en el corazón, canales de Ca + + tipo T y canales de
Ca+ i- tipo L (Bean, B. P. 1985; Hagiwara, N., Irisawa, H., y Kameyana, M.,
1988; Mitra. R., y Morad, M., 1986; Tseng, G. N. 1988).
7
El umbral de activación para IcaL e IcaT en miocitos cardíacos es alrededor
de -30 mV y entre -6.5 a -50 mV respectivamente, utilizando una concentración de
2 mA4 de Ca+ + en la solución externa. La inactivación en estado estable de los
canales T inicia a -90 mV y es completa a -50 mV. La curva de inactivación de los
canales L se encuentra entre -40 y 0 mV. A Este último potencial la inactivación es
completa. Los canales tipo T presentan una conductancia semejante al Ca+ + y
Ba+ + y son bloqueados fácilmente a bajas concentraciones por iones Niquel y la
Amilorida, mientras que en los canales de Ca tipo L la conductancia es mayor a
Ba+ + que a Ca+ + y son bloqueados por iones Cadmio y las Dihidropiridinas.
(Bean, B. P., I989; Tsien, R. W., Hess, P., Mccleskey, E. W. y Rosenberg, R.L.,
1987).
Colatsky & Gadsby (1980), utilizando la técnica de fijación de voltaje en
fibras de Purkinje observaron que durante la meseta del P.A. además, de la corriente
entrante de Ca+ + permanece un componente sostenido de la corriente inicial de
sodio que es sensible a TTX y a ha sido llamado “corriente de ventana “. La
presencia de ésta corriente de sodio que fluye durante la meseta en las fibras de
Purkinje, determina la gran sensibilidad de la duración de la meseta a algunos
fármacos anh*arritmicos (Colatsky, 1982).
La fase 3 ó de repolarización relativamente rápida del P.A. comienza con la
inactivación de las corrientes entrantes de calcio y la activación de corrientes de
8
salida acarreadas por K+, éstas corn’entes son activadas lentamente durante la
meseta del P.A. cardíaco, contribuyendo a la terminación del mismo.
Las corrientes de salida de K+ que han sido identificadas en los tejidos
cardíacos durante la meseta del P.A. son:
La corriente IK conocida como corriente de rectificación tardía, que es
dependiente de tiempo. La IK esta presente en varias regiones anatómicas del corazón
en distintas especies. Por ejemplo, en miocitos de cobayo y de rana se han reportado
la presencia de una I, de gran magnitud (Hume y Col., 1986); ésta corriente es
relativamente pequeña en perro (Tseng y Col., 1987), en aurícula y ventrículo de
rata (Josephson, Sanchez-Chapula y Brown, 1984), y en el conejo (Imaizumi y Giles,
1987).
En preparaciones multicelulares ésta corriente ha sido dividida en dos (Noble
& Tsien, 1968) y hasta tres componentes con cinética diferente. Sanguinette y
Jurkiewikz (1990), realizaron estudios en miocitos de ventrículo de cobayo
encontrando evidencia consistente respecto a la presencia de dos tipos de corriente
de recttficación tardía. Una de ellas fué especificamente bloqueada por un potente
agente antiarrítmico clase III (E-4031), a la que se le llamo Ik,,* la cúal exhibe una
prominente rectificación hacia adentro y se activa rápidamente comparada con la
activación que presenta la I,; la que está caracterizada por una activación lenta que
9
ocurre en rangos de voltaje clásicamente descritos para IK. El potencial de inversión
de Ifi (-93 mV fué similar a EK (-94 mV para [KJo = 4 mM), mientras que el
potencial de inversión de IKs fué -77 mV con lo que se concluye que la IKr es más
selectiva para K-k. Aunque la I, completamente activada fué II. 4 veces más
grande que la IKr completamente activada, las dos corrientes fueron de similar
magnitud cuando se midieron durante un pulso relativamente corto (225 ms) a
potenciales de membrana (-20 a +20 m1/3 tlpicos de la fase de meseta del potencial
de acción cardíaco. La I, tiene la capacidad de modificar la forma y duración del
P.A. en respuesta a variaciones en la frecuencia (sobre todo a frecuencias altas,
mayores de 0.5 Hz). A éste fenómeno se le conoce como acumulación activa del
rectificador tardío y se explica en base a la lenta desactivación ( = 200 ms, en
Purkinje) de la corriente IK (Gintant, y Col., 1992).
La otra corriente de potasio activada al final de la repolarización del P.A. es
la I,,. Su activación puede ser virtualmente instantánea a temperatura y potenciales
fisiológicos.
La propiedad más importante de la IKI es la rectificación interna que presenta
a potenciales más positivos que EK. Esta rechficación se produce en parte por las
caracten’sticas de apertura y cierre de la compuerta del canal y en parte por un
rápido bloqueo del canal causado por el Mg+ + intracelular, en ese rango de
potenciaes (Vandenberg, C., 1987; Matsuda, H., Saigusa, A., e Irasawa H., 1987).
10
La fase 4 es el período que transcurre desde que se alcanza el nivel de
potencial de reposo hasta que se inicia de nuevo el P.A. Este intervalo es isoeléctrico
en las fibras cardíacas no automáticas, mientras que en las fibras automáticas (nodo
seno auricular, fibras de Purkinje) aparece, tras la repolarización, una fase 4 de
lenta despolarización diastólica que desplaza progresivamente el potencial de
membrana hacia valores cada vez menos negativos, hasta que se alcanza el potencial *
umbral y aparece un nuevo P.A.
Las células marcapaso del nodo SA carecen de I,, por lo que corn’entes de
pequeña magnitud pueden producir grandes cambios del potencial de membrana.
La fase 4 de lenta despolarización diastólica, hpica de las células automáticas
podría ser debida a: a) la activación de una corriente de entrada voltaje y tiempo-
dependiente que se activa a potenciales más negativos de -50 mV en células de N-SA
de conejo y en células de Purkinje (corriente activada durante la hiperpolarización).
Esta corriente es llamada I, es dependiente de la /Na+]0 y es bloqueada por
Cs+ +. El potencial de inversión está entre -20 y -40 mV en solución fisiológica y
la corriente es acarreada por Na+ y K+ b) La desactivación del rectificador tardío
(Ip3 más la activación de la IB que es una corriente voltaje, pero no tiempo-
dependiente. Esta corriente es denominada corriente de fondo (background), es de
menor amplitud que la I? es acarreada fundamentalmente por Na + y su dependencia
II
de voltaje es lineal.
Aún se desconoce cúal de las dos posibilidades es la principal responsable de
la generación de la actividad marcapaso.
12
1.2.- ANTURRITMICOS. -
Las drogas antiarrítmicas son útiles para evitar y tratar algunos trastornos del
ritmo cardíaco producido por una alteración en la formación, en la conducción ó en
ambos, del impulso eléctrico del corazón..
La farmacoterapia de las arritmias cardíacas depende de: Primero: El
conocimiento del mecanismo, consecuencias e historia natural de las arrítmias.
Segundo: El conocimiento del mecanismo de acción de la amplia variedad de los
agentes farmacológicos disponibles y finalmente del conocimiento general de los
efectos clínicos de los agentes antiarrítmicos.
En años recientes se ha intenstjicado la búsqueda de antiarríltmicas nuevos y
mas eficaces. Parte del estímulo para ello ha provenido de comprobar que la muerte
súbita constituye un problema importante y que los antiarrítmicos actualmente
disponibles son ineficaces, ó de empleo limitado por la toxicidad grave que causan
cuando se administran en forma crónica.
La clastficación de antiarrítmicos utilizada mas frecuentemente es la de
Vaugham Williams (1984). De acuerdo con ésta los fármacos se clasifican en clases
basadas en su acción electrofisiológica predominante. En años recientes a sido
propuesta, una sub-clastjicación de fármacos con acción clase I basada en las
13
diferencias de su potencia y sus diferentes efectos sobre repolarización. (tabla 1).
14
TABLA l.- Clasificación de fármacos Antiarrí’tmicos de acuerdo a su Mecanismo
de Acción.
CLASE ACCION FARMACOS
1.
A.
Bloqueadores de canales de Na + .
- Moderada depresión en fase 0 y
conducción lenta (2+); prolon -
gan la Repolarización.
.
Quinidina, Procainamida,
Disopiramida.
B. -Mínima depresión en fase 0 y -
conducción lenta ( 0 a l+ 9; -
acortan la repolarikación.
C. -Marcada depresión en fase 0 -
y conducción lenta (4-k); poco -
efecto sobre la repolarikación.
II. Bloqueo Beta-Adrenérgico.
III. Prolongan la Repolatización.
ll? Bloqueo de los canales de Ca+ + Diltiazem, Verapamil.
Lidocaína, Fenitoína,
Tocaínida, Mexiletina.
Encainida,Lorcainida, Fle
cainida.
Propanolol, Otras.
Amiodarona, Bretilio.
* La magnitud relativa del efecto sobre la velocidad de conduccción se indica
en una escala de 1 + a 4-k.
15
Este sistema de clasificación es didacticamente útil, pero la limitante más
importante de un esquema común es el hecho de que casi todos los fármacos
actualmente disponibles tienen acciones múltiples. Raramente es aparente cúal de
éstas acciones son responsables de la supresión de una arrítmia en un paciente dado.
.
La mayoría de los fármacos actualmente en uso son bloqueadoras de canales
de Na ( clase I ). En concentraciones altas estos son tambíen capaces de bloquear la
conducción nerviosa debido a su acción como anestésicos locales. La acción
bloqueante de la INO por diversos fármacos antiarrítmicos ha sido explicada con base
a la union del fármaco a un hipotético receptor asociado al canal de sodio. Hodgkin
& Huxley (1952), propusieron que los canales de sodio de tejido neural pasan a
través de 3 diferentes estados durante el potencial de acción. La interacción de
fármacos con el receptor del canal de Na fué descrita simultáneamente por Hille, B.,
(1977) para explicar la acción de los anestésicos locales en las fibras nerviosas y
por Hondeghem, L. M. y Katzung, B. G. (1977) para drogas antiarritmicas con el
canal de sodio de lrr fibras cardíacas. Esta hipótesis ha sido llamada la hipotesis del
receptor modulado ( HM). La hipótesis asume (fis 2) que el canal, en ausencia
de fármaco puede adoptar tres estados ó configuraciones diferentes: a) Reposo
(cerrado); b) Activado (abierto) y c) Cerrado.
Este modelo propone:
a).- Los fármacos antiarríímicos pueden interaccionar con cualquiera de los
16
tres estados en los que puede estar el canal de Na+; Reposo, Activado ó Inactivado.
b).- Las constantes de velocidad de asociación (K) ó disociación (1) de los
fármacos amiarrítmicos con cada uno de los tres estados del canal de Na+ son
caracterikticas para cada uno de ellos.
c). - La asociación del fármaco con los diversos estados dei canal de Na +
sigue la ley de acción de masas, y tiene lugar a concentraciones de fármaco libre
proporcionales a las presentadas.
d). - El canal de Na+ puede pasar de un estado a otro, estando regulada
dicha transición por las correspondientes constantes de tiempo descritas por Hodgkin
y Huxley (HH en la fig. 2).
e).- Los canales asociados al fármaco pueden comportarse como si la
dependencia de voltaje de la inactivación en estado estable se encontrara desviada
a potenciales negativos.
B. - Cuando el fármaco está unido al canal éste no permite la entrada de
Na+, incluso cuando aquel se encuentre en estado activado.
Cada fármaco antiarríímico presenta sus constantes caractert’sticas de
17
asociación (KR, KA y KI) y de disociación (&, IA y 1,) con el canal de Na-k. Durante
el potencial de acción cardíaco los canales de Na-k pasan del estado en Reposo al
Activado y al Inactivado.
Rajo condiciones normales de reposo la membrana está hiperpolarizada y los
canales de .Na f están predominantemente en reposo (R). Durante la subida del P.A.
la membrana se despolariza y es cuando los canales cambian al estado abierto
activado (A) y el sodio entra rápidamente a través de la membrana celular. La
cokente de Sodio (INO) disminuye rápidamente cuando los canales cambian al estado
inactivado (1) . La HRM asume que los canales unidos al fármaco exhiben diferentes
velocidades de transición entre los diferentes estados que los exhibidos por los
canales libres.
Uno de los sucesos que más ha influido en la terapia antiarrítmica en los
últimos años ha sido la publicación de los primeros resultados de los estudios
realizados por grupo CAST (Estudio de Supresión de arn’tmias cardíacas) patrocinado
por NIH ( Instituto Nacional de la Salud) y FDA (Administración de Drogas y
Alimentos), a principios de 1989 donde la hipótesis a probar fué si el tratamiento
profiláctico de arritmias utilizando antiarríímicos clase I, reduce el riesgo de muerte
súbita.
Para dicho estudio se eligieron pacientes con arrítmias ventriculares
18
asintomáticas con infarto reciente en los que se comparó el efecto de 3 antiarrítmicos
(encainida, flecainida y moricizina) y un placebo. Tres meses despues de iniciar el
estudio hubo de suspenderse ya que se observó que dos de las drogas utilizadas
(flecainida y encainida), duplicaban y hasta trtplicaban el riesgo de mortalidad
comparada con el placebo. Después de mostrarse estos resultados muchas de las
drogas con actividad clase I se han hecho a un lado y es poco probable que drogas
similares sean probadas en un futuro próximo. Actualmente varios agentes nuevos
con actividad predominante clase III están siendo probados.
.
Los fármacos antiarríímicos que prolongan la -duración del P.A. han sido
clastficados como clase III (Vaugham Williams, 1984), varias de éstas drogas han
sido ampliamente reconocidas como efectivas en tratamientos clínicos de arritmias
cardíacas potencialmente letales (Singh y Nadimanee, 1985). Recientemente han sido
estudiados nuevos fármacos con selectividad clase III han sido estudiadas:
N-acetilprocainamida (Sangman y Homn, 1981); UK 68798 (Gwilt y Col. 1989);
risotilida (Colatsky y Col., 1989); E-4031 (Sanguinetti y Jurkiewkz, 1989); tedisamil
(Walker y Beatch, 1988; Beatch y Col., 1991); almokalant (H234/09) (Carlsson, L.,
Abrahmsson, C., Almgren O., Lundberg, Ch., y Duker, G., 1991).
19
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Figura 2.- Diagrama del Mecanismo de Acción del receptor modulado de drogasAntiarrítmicas.
R: Canales de sodio en estado en reposo (cerrado);A: Canales de sodio en estado activado (abierto); .I: Canales de sodio en estado inactivado;R’, A’, J’: Representan las distintas posiciones del canal de sodio
unidos al fármaco;
- cHH: Constantes de velocidad de Hodgkin-Huley.HH’: Las mismas constantes de velocidad pero alteradas por
dependencia de voltaje por la union del fármaco;KR, KA y KI: Constantes de velocidaad de asociación.
2 0
1.3.- CAUACTEKISTICAS QUIMKAS LlEL TIDISAMIL
En estudios realizados por Beatch y Col., 1991, utilizando ratas anestesiadas
a las que se les induj’o arritmias por oclusión de la arterias coronaria descendente
anterior izquierda, tedisamil a dosis de 1-4 mg/kg, causó bradicardia, elevación de
presión sanguínea y redujo la incidencia de fibrilación ventricular. Además,
tedisamil alargó el período rejractario efectivo de manera dependiente de la dosis y.
prolongó la duración del P.A., en epicardio por encima de .un 400%.
Dukes y Morad 1989 y Dukes y Col., 1990, realizaron estudios en
miocitos de ventn’culo de rata encontrando que tedisamil actuaba bloqueando la
corriente transitoria de potasio de salida (Bol). Tedisamil; a concentraciones de 1 -
3 PM, causó una disminución dosis dependiente de la amplitud del pico de I,, y un
incremento en la velocidad de su inactivación.
En miocitos de ventrículo de cobayo, tedisamil tambíen bloquea la corriente
de potasio de rectificación tardía dependiente de tiempo (IJ a los mismos rangos de
concentración que para I, en miocitos de ventrículo de rata (Dukes y Col., 1990).
Tedisamil no modificó la corriente de calcio a concentraciones mayores de 50 PM.
A concentraciones mayores de 20 PM, tedisamil presenta un efecto depresor sobre la
corriente de sodio, y a concentraciones de 50 t..J4 la corriente de sodio fué
completamente abolida ( Dukes y Col., 1990).
El objetivo del presente trabajo es estudiar los efectos del tedisamil sobre los
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diferentes parámetros del P.A. cardíaco en diferentes preparaciones de corazón de
perro: Fibras de Purkinje, Músculos papilares (Endocardio) y Epicardio. Se sabe que
dependiendo de la región donde se registren los potenciales y de la especie que se
trate su morfología es diferente y aún dentro del mismo ventrículo hay diferencias
entre epicurdio y endocardio, no solo en su moflología sino en la respuesta a
isquemia y a fármacos antiarrríímicos como se demuestra en los estudios realizados
por Litovsky y Antzelevitch (1990).
Algunas drogas antiarrítmicas ejercen sus efectos de manera dependiente de
frecuencia (Strauss y Col., 1970; Nattel y Zeng, 1984; Roden y Ho@nan, 1985). Por
lo tanto, en el presente trabajo me propuse examinar las caracteristicas de
pendientes de frecuencia de los efectos de tedisamil sobre el P.A. cardíaco.
La razón de utilizar corazón de perro es que no hay nada reportado para el
efecto de Tedisamil en esta especie, siendo el modelo clisico que ha sido utilizado
para el estudio de todos los antiarrítmicos. Ademas, se sabe que en perros no existe
una sola corriente repolarizante predominante del P.A. sino una mezcla de IK, I,,,
Ilo1 e Iro de forma similar a lo que se sabe sucede en humano cuando menos en los
tejido estudiados, principalmente la aurícula.
23
OBJETIVOS
OBJETIVO:
ESTUDIAR LOS EFECTOS DEL TEDISAMIL SOBRE LOS
POTENCIALES DE ACCION DE FIBRAS DE PURKINJE,-
EPICXRDIO Y ENDOCARDIO DE CORAZON DE PERRO.
24
HIPOTESIS
HIPOTESIS:
ELTEDISMIL AUMENTA LA D URACION DEL POTENCIAL, DE
ACCION DE LOS TEJIDOS VENTRICUMRES DE PERRO.
EL EFECTO ES DIFERENCIAL, DEPENDIENDO DE LA REGION
VENTRICULAR QUE SE ESTUDIE.
25
PROCEDIMIENTO EXPERZYMENAL
IZ.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.-
2.1.- Montaje de las Preparaciones:
Para los experimentos se utilizaron corazones de perros de 12 a 15 kg de
peso, sin distinción de sexo. Los animales fueron anestesiados con pentobarbital ’
sódico ( 30 mgs/kg) y se les extirpó rápidamente el corazón a través de una incisión
en el torau, colocandolo en un recipiente que contenía solución de Tyrode,
burbujeada con mezcla carbógena (95% 0, f 5 % COJ a la temperatura ambiente
(2s-q
Dentro de éste recipiente se realizaba la disección de las preparaciones
multicelulares utilizadas: músculos papilares (endocardio), fibras de Purkinje y
trozos de la pared libre del ventn’culo derecho de aproximadamente 1 x 1 cm
(epicardio) .
Posteriormente las preparaciones se colocaron en una cámara de lucita de 2
ml. de capacidad, fijandolas con alfileres entomológicos en el fondo cubierto con
Sylgard. Las preparaciones se perjundieron en forma continua con una solución
Tyrode ( pH 7.4), cuya composición se describe en la tabla 2. La solución se
oxigenaba con mezcla carbógena y se mantenía a una temperatura constante de 36
f 0.2OC durante todo el experimento. Las preparaciones se esh*mularon con un
26
electrodo bipolar de plata conectado por medio de una unidad aisladora de estímulos
a un. estimulador (WY 1800). Los estímulos fueron pulsos rectanculares de I ms de
duración a una frecuencia de 1 Hz. y de una intensidad de 50% superior al voltaje
umbral. cfig3).
En estas condiciones las preparaciones se equilibraban durante al menos 60 *
minutos antes de iniciar los protocolos expenhentules.
2.2.- Sistema de Registro y Protocolo Experimental.-
Trás un periodo de estabilización de 60 min., se procedió al registro de los
potenciales de acción (P.A.), utilizando para ello la técnica convencional de registro
con microelectrodos intracelulares. Estos se llenaron con una solución de KCl 3 M
y tenian una resistencia de 8 - 15 megaohms.
Los electrodos se acoplaron con hemiceldas de Ag/AgCl a la entrada de un
ampltficador (VW KS- 700).
La señal de salida del amplificador se visualizaba en la pantalla de un
osciloscopio (Tektronix 5113) y los registros se ifotografiaron con una cámara
quimográfica (Grass modelo C-4) en película pancromática de 3.5 mm. La velocidad
27
máxima de la despolarización de los potenciales de acción (Vmax) se registró
utilizando un diferenciador analógico lineal en el rango de 0 a 1000 V/s. cfig. 3).
Despues de obtener los registros control, las preparaciones se expusieron al
Tedisamil a la concentración deseada (0.3 -10 ,uM) disuelta en solución de Tyrode..
Cada concentración seperfudía durante 30 min., iniciando con la concentración más
baja. Los e$ectos de ésta droga sobre las características del P.A. fueron estudiadas
a diferentes frecuencias de estimulación (0.5 - 3 Hz.).
De los registros fotográficos se midieron los siguientes parámetros:
- Potencial de membrana en reposo.
- Amplitud del P.A:
- Duración del P.A. medida al 50% (DPA,J y al 90% @PA&, de
repolarización.
- Velocidad tiima de la despolarización de la fase 0 del P.A. ó Vmax.
2.3.- Soluciones. -
La composición de la solución Tyrode utilizada en los experimentos se muestra
en la tabla 2.
28
TABLA 2.- COMPOSICION DE LA SOLUCION TYRODE.
mM gdl.
NaCl.
1.25 58.440
KCI 5.40 74.600
CaCl, 1.80 14.700
Mg Ch 1.05 20.328
NaH$O, 0.42 0.600
NaHCO, 24.00 84.000
G L U C O S A ll.00 2.000
PH 7.4 burbujeada con mezcla carbógena (95 % de 0, + 5 % CO 2).
29
Figura 3.- kkqrrc~rrn dc La Gímm de I’etfksih utilizada para el registro depotetrcitrles de crccicNl erl preparaciones rrudticelrdures. Cúmara deLrrcita (A), Fmdo de Sylgard (Ll), Tejido (C), Electrodo bipolar paraestimrltrr (Ll), PerJiilirsiórt (E), Electrodo de tierra (F), Succión (G),I!stirr~rrludor (II), Microelectrodo de registro (I), Meroelectrodoirrti{firalte (.I), ArryliJicudor d~erenciul (K), Osciloscopio (L) yïCl7rlclstato (M).
30
RESULTADOS
zzz. - RESULTADOS.-
EFECTOS DEL TEDZSAMZL SOBRE EL POTENCL4L DE ACCZON DE
FIBRAS DE PUZXZNJE, CELULAS DE ENDOCARDIO Y EPZCARDZO.
.. El tedisamil, a las concentraciones usadas (0.3 10 @4), no modificó
signtficativamente el potencial de membrana en reposo (tabla 3, 4 y S), de ios
diferentes tejidos estudiados.
En la figura 4 se muestran los efectos del tedisamil ( 1 y 3 PM), sobre el
potencial de acción de una fibra de Purkinje a dos diferentes frecuencias de
estimulación (0.5 y 3 Hz.). Se puede apreciar que el fármaco produjo un incremento
en la duración del potencial de acción tanto al 50% (DPAJ como al 90% (DPAA
de la repolarización y en la amplitud de la meseta. Ademas se observa que la
amplitud del P.A. y la Vmax se reducen con la concentración de 3@? y a la
frecuencia de 2 Hz. En la tabla 3 se resumen los efectos del tedisamil (0.3 - 10 t..&l)
sobre los P.A. de las fibras de Purkinje (n =5) a la frecuencia de 1 Hz. Como se
puede apreciar, el incremento observado en la DPA,, y DPA, fué signtfkativo con
todas las concentraciones de tedisamil utilizadas. En contraste, la reducción de la
Vmax solo jüé sign@cativa con las concentraciones de 3 y 10 u,M Los cambios
observados en la amplitud del P.A. no fueron estadísticamente signtfkativos con esta
frecuencia de esh’mulación.
31
En la figura 5 se muestran los @ectos del tedisamil (1 y 3 $kl), sobre el P.A.
del músculo ventrííular de endocardio a dos diferentes frecuencias de estimulación
(0.5 y 3 Hz.) En este tejido se puede observar que el fármaco produjo un incremento
en la duración del P.A. tanto al 50% (DPA,J como al 90% (DPAW, de la
repolarización en ambas concentraciones y a ambas frecuencias de estimulación. Se
observa ademas que el tedisamil no modifica la amplitud del P.A. pero reduce la
Vmax a concentraciones de 3 ,uA4 y una frecuencia de estimulación de 3 Hz. En la
tabla 4 se resumen los efectos del tedisamil (0.3 - 10 PM) sobre los P.A. del
endocardio (músculos papilares), ( n =5 ) a la frecuencia de 1 Hz. Puede observarse
un incremento en la DPA,, y la DPA, significativo a todas las concentraciones de
tedisamil utilizadas. En comparación, la reducción de la Vmax solo fué significativa
a la concentración mas alta utilizada ( 10 t.&l ). En éste caso, los cambios
observados en la amplitud del P.A. tampoco fueron estadísticamente sign@cativos a
ésta frecuencia de estimulación.
En la figura 6 se muestran los efectos del tedisamil ( 1 y 3 PM 9, sobre
el P.A. de células de epicardio a dos diferentes frecuencias de estimulación ( 0.5 y
3 Hz.). Al igual que en las fibras de Purkinje y células de endocardio, las células de
epicardio responden al tedisamil prolongando la duración del P.A. tanto al 50%
(DPA& como al 90% (DPA& de la repolatización en ambas concentraciones y
am.bas frecuencias de estimulación. Bajo condiciones control se registró la típica
configuración de espiga y domo del P.A. de epicardio (Litovshy y Antzelevitch, 1988).
32
Puede apreciarse que el fármaco produjo un incremento de la amplitud de la fase 0,
una elevación de la meseta del P.A. y una atenuación de la mo@ología de espiga y
domo dependiente de la concentración y de la frecuencia de estimulación;
observandose una disminución de la Vmax a la concentración de 3 &I y a una
frecuencia de estimulación de 3 Hz. En la tabla 5 se resumen los efectos del tedisamil
(0.3 - 10 @4) sobre los parámetros del P.A. de epicardio a una frecuencia de *
estimulación de 1 Hz. Se observa un incremento significativo de la DPA,, y DPA, con
todas las concentraciones de tedisamil utilizadas. La reducción de la Vmax sólo fué
significativa a la concentración más alta utilizada (10 ,uM). En contraste con lo
observado en fibras de Purkinje y células de endocardio, las células de epicardio
muestran un incremento sign@cativo de la amplitud del P.A.desde concentraciones
de 1 PM y mayores.
EFECTOS DEPENDIENTES DE CONCENTRACION Y FRECUENCIA
DEL TEDISAMIL SOBRE LOS PARAMETROS DEL P.A. DE FIBRAS DE
PURKINJE CELULAS DE ENDOCARDIO Y EPICARDIO.
En las figuras 7, 8 y 9, se muestran los efectos dependientes de concentración
y frecuencia de tedisamil sobre los parámetros del P.A. de fibras de Purkinje, células
de endocardio y epicardio. Se puede apreciar que el #ecto del fármaco sobre la
duración del P.A. (DPA, y DPA& depende sign@icativamente de la concentración
del mismo pero no de la frecuencia de estimulación íj?gs. 7, 8 y 9 A y B). Por otra
33
parte se encontró que el tedisamil a las concentraciones de 0.3 y 3 uh4 no modificó
de manera significativa la amplitud del P.A. de fibras de Purkinje flg. 7C), la
reducción de éste parámetro sólo fué signtjkah*va a la concentración de 10 PM y
a las frecuencias de 2 y 3 Hz. En el endocardio, el tedisamil no modificó
significativamente la amplitud del P.A. a ninguna de las concentraciones y
frecuencias de estimulación estudiadas (fig. 8 C). Los efectos del tedisamil sobre la ’
amplitud del P.A. en células de epicardio se muestra en la fig. 9 C) donde puede
apreciarse un incremento que fué dependiente de la frecuencia de estimulación y
concentración, el efecto fié mas pronunciado a la más alta concentración y
frecuencia de estimulación. Se encontró que la reducción de la Vmax mostraba una
clara dependencia de la frecuencia de estimulación, observandose que en fibras de
Purkinje la dependencia de frecuencia fué significativa con las concentraciones de
3 y 10 ,uM (fig. 7 D), mientras que en células de endocardio y epicardio unicamente
a la concentración de 10 fl (fis. 8 y 9 0).
RECUPERACION DEL BLOQUEO (DE LA INACTIKACION) DE LA V,,
EN CELULAS DE ENDOCARDIO ( MUSCULOS PAPILARES)
Los resultados hasta aquí obtenidos nos muestran que el tedisamil prolonga
la duración del P.A., apreciandose así mismo una reducción del la Vmax, lo que nos
indica de manera indirecta que el fármaco produce una reducción de la corriente de
Na+ (INo).
34
Los efectos dependientes de frecuencia del tedisamil sobre la Vmax observados
a concentraciones de 3 y 10 ,uM sugieren que el período de reposo entre estímulos
es insuficiente para la recuperación del bloqueo que ocurre durante la actividad.
Para analizar éste problema se procedió a realizar el siguiente protocolo
experimental:
Se aplicó un estímulo de prueba a diferentes tiempos despues de un tren de
10 estímulos condicionantes aplicados a una frecuencia de estimulación de 1 Hz.
En la fis. 10 se muestra el e$ecto del tedisamil sobre la recuperación de la
inactivación en células de endocardio. Bajo condiciones control el proceso de
recuperación de la Vmax fué ajustado a una exponencial con r=l3 + 4 ms (n=.5).
En presencia de tedisamil (3 y IO $k!) la recuperación de la Vmax fué ajustada a dos
exponenciales (VmaxtNmaxc X 100 = A, exp W) i- A, exp w2) ): una rápida con
una constante de tiempo similar a la encontrada bajo condiciones control ( rI = ll
f 3 ms); y una más lenta (r2 =685 f 15 ms); ( n=lO). El proceso rápido
representa la recuperación de los canales libres del fármaco y el lento representa la
recuperación de los canales ocupados por el fármaco durante el tren condicionante.
Las constantes de tiempo de la recuperación fueron similares en la presencia de
ambas concentraciones de tedisamil pero la amplitud del componente lento de
recuperación fié 13 f 3 % (n =5) en la presencia de 3 ,uM de tedisamil y 22 f 4 %
en la presencia de 10 PM (n =5).
35
POSTDESPOLARIZACIONES TEMPRANAS INDUCIDAS POR
TEDISAMIL.
Algunos fármacos antiarrítmicos que prolongan la duración del potencial de
acción producen postdespolarizaciones tempranas a bajas frecuencias de estimutacih
y una concentración baja de potasio externo (Roden y HofSman, 1985). En el *
presente trabajo, la posible inducción de postdespolarizaciones tempranas por
tedisamil en fibras de Purkinje fileron evaluadas en la presencia de una concentración
baja de potasio externo (KC12.7 mM). Cuando las preparaciones bajo condiciones
control fueron estimuladas a bajas frecuencia-s ( 0.2 Hz.) ó automaticidad normal,
no se observaron postdespolarizaciones tempranas. Despues de 60 min., de perfusión
con la solución que contenía 1 PM de tedisamil fueron observadas
postdespolarizaciones tempranas en tres de cinco preparaciones ( fis. II). Las
postdespolarizaciones desaparecieron despues de 60 min., de lavado con solución de
Tyrode sin el fármaco.
36
TABLA 3.- Efectos del Tedisamil (0.3 - 10 PM), sobre los parámetros del
potencial de acción de las Fibras de Purkinje.
Frecuencia de estimulación de 1 Hz
-----.-- --.--- ----- --
l-EDISAMIL P R Amp Vx4x DPAm DPA, ’
TESTIGO -89+_3 í26*6 548+_35 191 f9 278+_12
0.3 -9023 I28f5 .530,37 213f8” 317+11*
1 -87+2 127+4 526+28 234+11* 349f16”
3 -87+2 125+5 424+23* 241 +I2* 408+19”
10 -85+3 120+4 258&29* 263&14* 439+22”
PR: Potencial de Reposo. Amp: Amplitud. V,,: Velocidad Máxima de
Despolarización. DPA,,: Duración del Potencial de Acción al 50% de
Repolarikación. D P A , : Duración de Potencial de Acción al 90% de
Repoalrización.
Valores promedio f Desviación Estandar de n =5. *Diferencia significativa
de P < 0.05.
37
TABLA 4. - Efectos del Tedisamil (0.3 - 1 O$W), sobre los parámetros del potencial
de acción de células de Endocardio (músculos papilares). Frecuencia
de estimulación de 1 Hz.
TESTIGO -86+3 12.5+3 238+14 175+8 208f9
0.3 -87f2 125+3 234fl5 190+8” 229+10”
1 -87+3 128+3 238+13 204+ 7* 248+11”
3 -85f2 126+5 227fl4 222f9” 282fl3”
10 -84+2 123+2 212fl5” 231 fl0” 299+ 15”
PR: Potencial de Reposo. Amp: Amplitud. VMm* Velocidad máxima de de
Despolarización. DPA,,: Duración del Potencial de Acción al 50% de
Repolarización. DPA,= Duración del Potencial de Acción al 90% de
Repolarización.
Valores promedio f Desviación Estandar de n =5. *Diferencia signigicativa
de P < 0.05.
38
TABLA 5.- Efectos del Tedisamil (0.3 - 10 PM), sobre los parámetros del
potencial de acción de células de Epicardio.
Frecuencia de estimulación de 1 Hz.
TEDISAMIL P R Amp
(PW (mV) (mV
TESTIGO -8.5+2 104f2 228+21 141+9 187flO
0.3 -8.5+2 106f2 230+24 172+9 201+11
1 -86+3 109f3” 224+22 178flO” 211+12*
3 -84+3 114+3* 219&27 85fll” 225+14*
10 -84+3 117*4* 198f25” 194kll” 243+13*
PR: Potencial de Reposo. Amp:Amplitud. V,,: Velocidad máxima de
Despolarikación. DPA,,: Duración del Potencial de Acción al 50% de
Repolarización. DPA,: Duración del Potencial de Acción al 90% de
Repolarización.
Valores promedio f Desviación Estandar de n =5. *Diferencia significativa
de P < 0.05.
39
Al.- TESTIGO
mV
05 H z 2 Hz
c>.-3JJM
400 vis!
Figura 4.- Efectos del Tedisamil sobre el Potencial de Acción de fibras dePurkinje a dos diferentes frecuencias de estimulacion: 0.5 y 2 Hz.El potencial transmembrana se muestra en el trazo superior y laprimera derivada del potencial de acción (dV/dt) en el trazo inferior.En ésta y figuras subsiguientes: A) Potencial de Acción Testigo; B)Potencial de Acción en presencia de Tedisamil 1 $kfy C) Potencial deAcción en presencia de Tedisami13 ,uh4.
40
Al.- TESTIGO 3 Hz
c>.-
3YM
2QOms
Figura 5.- Efectos del Tedisamil sobre el Potencial de Acción de MúsculosPapilares (céluh de Endocardio), a frecuencias de estimulación de0.5 y 2 Hz. EL potencial transmembrana se muestra en el trazosuperior y la primera derivada (dV/dt) en el trazo inferior.
41
Al.- TESTIGO
0
m V
-84 i
8) *-
iyM
Cl.-
2oows 1 -1200ms
Figura 6.- Efecto del Tedisamil sobre el Potencial de Acción de células deEpicardio a frecuencias de estimulación de 0.5 y 2 Hz. El potencialtransmembrana semuestra en el trazo superior y la primera derivada(dV/dt) en el trazo inferior.
42
Al.-
,s4cM-,'13c
&zcn11C
aI.-200
1802;lSO
Tl40k
1 2 0
1 0 0
C) .-
F r e c u e n c i a ( Hz )
0.5 1 2 3Frecilencia (/-ji)
Frecuencia ( Hz. )
,
;' 0 . 5 1 2 .3Frewencic (Si)
Figura 7.- Efectos producidos por Tedisamil sobre diferentes parámetros delPotencial de Acción (comoporciento de los valores testigo), de Fibrasde Purkinje registrados con frecuencias de estimulación de 0.5 a 3 Hz.En ésta y figuras subsiguientes : A y B): duración del Potencial deAcción al 50 y 90% de 0 repolarización (DPA,, y DPA&; C) :Amplitud (Amp) y D): Máximu velocidad de despolarización (VM&.
de Tedisamil utilizadas fueron 0.3 $kI (0); 1~M
1.
43
C).-Al.---
140
.g120
2n 110
100
El).-
100
F r e c u e n c i a ( Hz . )
0.5 1 2 3Frecuencia (Hz)
. I
110
Axal 00EQ
9 0
D ) . -
.
100A 95v 90 !
F r e c u e n c i a ( H z 1
0.5 1’ 2 3Frecuencia (Hz)
Figura 8.- Efectos producidos por Tedisamil sobre diferentes parámetros delPotencial de Acción de células de Endocardio. Resultados estánexpresados en forma similar a la figur
b7, a concentracion de
Tedisamil de 0.3 (0); 1 ,&? ( 0); 3 ,uM ( _ b 10 CCM (A ) .
44
x>.-
130
g200 .u-l
$ 1 1 0
100
SI.-740-
$30--920.
Qzi 110.
tool
Frecuencia I Hz.)
-O-O õ
0.5 ‘11
2 3.Frecuencia (HZ)
C) --13c
Gl20. ..-/
$10
100
D).-lOO-
- 95.v 90.
::E 85,' 80:
751
Frecuencia ( HZ.)
0.5 1 2 3Frpxencia (Hz)
Figura 9.- Efectos producidos por Tedisamil sobre diferentes parámetros delPotencial de Acción de células de Epicardio. Los resultados estánexpresados en forma similar a la fig. 7 a 1
‘i)concentraciones de
Tedisamil de 0.3 ,uM (0); 1 $kf ( q ); 3 ,uM (_ )y 10 ,uM ( A).
4 .5
c) ccnwi0 Edisamtl 3iM* TeClsami IOpM
O! 10 ti0 8 0 0 12W~OO23CO2GOO
Figura 10. - Efecto del Tedisamil sobre la recuperación del bloqueo de la V,,despues de un potencial de acción condicionante. Los valoresnormalizados ( VMKt / V,,c X 100 ; VMt= V,, del potencial deacción de prueba y Vwc = V,, del potencial de acción testigo),fueron graficados contra el intervalo de prueba dejinido como elintervalo entre el 90% de la repolarización del potencial de accióncondicionante y el inicio del potencial de acción de prueba. Elpotencial de acción de prueba fié introucido despues de un tren de 10estímulos condicionantes a una frecuencia de estimulación de 0.1 Hz.
46
A CONTROL
01.
mV I
-841
B
-LLLLJ .
TEDIS-AMIL IjlMt
.m
\
Llj
-\1. i’..?
400ms.
Figura ll.- Postdespolarizaciones tempranas inducidas por el Tedisamil ( I&? )en fibras de Purkinje en potasio externo bajo ( 2.7 mkf ), a
frecuencias de estimulación de 0.2 Hz. (A) y espontáneos (B).
47
DZSCUSZON
IV. - DISCUSION. -
Los resultados obtenidos en el presente estudio nos muestran que la nueva
droga antiarritmic,c ciase, 111. t~disamil, produce un incremento en la duración dei
potencial de acción lo cúal justifica su clasificación como una droga antiarrítmica
clase III. este ejecto es dependiente de la concentración (0.3 - 10 ,uM), en
preparaciones ventriculares de epicardio, endocardio y fibras de Purkinje de perro.
Y es independiente de la frecuencia de estimulación. Estos resultados confirman en
una especie diferente los resultados encontrados en ventrículo de rata “in vivo ” (
Beatch y Col., 1991)
Los efectos del tedisamil sobre la prolongación de la DPA de ventrículo de
rata han sido explicados por efectos bloqueadores del fármaco sobre Itol (Dukes et
Al., I990). Sin embargo, en preparaciones de ventrículo de perro ( Litovsky y
Antzelevitch, 1988) y fibras de Purkinje (Kenyon y Gibbons, 1979), el bloqueador
espectpco de la Ilo1 4-Aminopiridina (4-AP), disminuyó la DPA medida al final de la
repolartzación. Ademas la 4-AP produjo una reducción de la fase 1 y atenuación de
la muesca, separando la repolatización temprana de la meseta, @ecto que puede ser
explicado por el @ecto bloqueador de la droga sobre IIoI. En el presente trabajo, se
encontró que el tedisamil produce efectos similares que aquellos producidos por la
4-AP sobre repolarización temprana y la meseta del potencial de acción. Estos efectos
48
pueden ser e.xplicados por un efecto bloqueador sobre la I,,. El incremento observado
en la DPA, inducido por tedisamil sobre las preparaciones ventn’culares de perro
pudiera ser explicado por una disminución de una corriente saliente como puede ser
Ik*
El orden de potencia inducido por tedisamil sobre el incremento de la
DPA fué: fibras de Purkinje > endocardio > epicardio. Al comparar los efectos de
tedisamii sobre el epicardio y el endocardio, encontramos que la droga producía un
efecto más marcado sobre la amplitud de la fase 0 y fase 1 y mayor atenuación de
la configuración de espiga y domo sobre epicardio que sobre endocardio, pero el
efecto sobre la DPA fué más marcado sobre endocardio. Similares resultados
comparativos han sido encontrados con Quinidina (Antzelevitch et al., I990). Estas
diferencias han sido atribuidas a la presencia de una prominente 1, en epicardio pero
no en tejidos de endocardio del ventrículo canino. Los efectos de diferentes drogas
antiarríímicas como Quinidina y bretilio ( Nattel and Zeng, 1984; Roden and
HoJTman, 1985), sobre la duración del potencial de acción se ha encontrado que son
dependientes de la frecuencia de estimulación, con una mayor prolongación que
ocurre cuando la longitud del ciclo es mas largo. En el presente trabajo hemos
encontrado que el efecto de tedisamil sobre la DPA no fké dependiente de frecuencia
de estimulación. El mismo incremento relativo en la DPA fié observado con todas las
frecuencias estudiadas (OS- 3 Hz.).
En resumen, se confrmo que tedisamil producía un incremento en la DPA.
49
Tambien se encontró que ésta droga produce una disminución en la Vmax con
las concentración de 3 y 10 t..&f y que éste efecto es dependiente de la frecuencia de
estimulación. Este efecto es compartido por diferentes drogas antiarn’tmicas (Johnson
and McKinnon 1957; Heistracher, 1971). Hille (1977) y Hondeghem y Katzung
(1977), han propuesto que el estado del canal de sodio ( reposo, activado e
inactivado) modula la probabilidad de union y equilibn’o entre la droga y sus
receptores. Alternativamente, Starmer et al., í1984), han propuesto que el receptor
tiene una constante unica de afinidad para los fármacos, pero que el acceso a estos
sitios es controlado por las compuertas de activación e inactivación. De acuerdo con
éstas hipótesis, la reducción de la Vmax está dada por la acumulación del fármaco
asociado a los canales. La estimulación repetitiva produce aperturas repetitivas e
inactivación de los canales de sodio. Los resultados obtenidos en el presente trabajo
con el tedisamil sugieren que éste fármaco se une prtlferentemente a los canales
cuando están en su estado inach’vado y (0) activado mas que durante su estado de
reposo. El bloqueo dependiente de uso y la recuperación de la Vmax del bloqueo de
tedisamil tenian cursos temporales similares a aquellos observados con otras drogas
clast@adas como agentes Fast in - Fast out, como Lidocaína y Mexiletina (Campbell;
1983). Dukes et al., (1990) encontró que el tedisamil deprimia la corriente de sodio
en miocitos aislados de rata bajo condiciones de fijación de voltaje a concentraciónes
por arriba de 20 t.üM, aplicando los pulsos de prueba cada 5 s.
Estos resultados no son contradictorios con los obtenidos en éste trabajo, ya
5 0
que a las concentraciones usadas ( 3 y 10 ,uM ) el tedisamil no produjo efectos
tónicos. Solo encontramos una disminución en la Vmax a frecuencias de estimulación
de 1 Hz. ó mayores.
En observaciones clínicas, la combinación de hraa$;~ara’ir;, ir.,-,!-/~,~c3:s,~t: y.
Quinidina produce una marcada prolongación del intervalo QT y predispone a la
aparición de Torsades de points, una característica taquicardia ventricular polimor$a
(Smith and Gallagher, 1980). Durante la terapia con otras drogas antiarrítmicas que
producen un incremento de la DPA como Procainamida. y Disopiramida se ha
reportado que ocurren efectos similares ( Krikler and Curry, 1976; Tzivone et al.,
1981). Roden y Hoffman (1980) han encontrado que postdespolarizaciones
tempranas pudieran jugar un papel en la aparición de Torsades de points inducidas
por Quinidina. En el presente trabajo se encontró que el tedisamil tambíen induce
postdespolarizaciones tempranas en la presencia de concentraciones bajas externas
de potasio y a bajas frecuencias de estimulación.
51
CONCLUSIONES
v.- CONCLUSIONES:
1 .- EL l-liDISAkíIL PROLONGOLA DURACIONDEL POTENCIALDEACCION.
ESTE EFECTO SE PRESENTO A TODAS LAS CONCENTRACIONES
UTILIZAD,4S ( (3. .? - 10 gM). EL EFECTO FUE INDEPENDIENTE DE LA.
FRECUENCIA DE ESTIMULACION.
2.- EL TEDISAMIL ( 3 - 10 DISMINUYO LA AMPLITUD DE LA V,,. ESTE
EFECTO FUE MAS PRONUNCIADO EN FIBRAS DE PURIUNJE QUE EN
MUSCULO VENTRICULAR Y FUE ALTMEh5’E DEPENDIENTE DE LA
FRECUENCIA DE ESTIMULACION, SINDO MAYOR EL BLOQUEO A
MAYOR FRECUENCIA DE ESTIMJLACION.
3.- AL SUPRIMIR LA FORMA DE ESPIGA Y DOMO CXRACTERISTICA DEL
POTENCIAL DE ACCION DE EPICARDIO HIZO MAS HOMOGENEA LAS
CAR4ClERISTICAS DEL POTENCIAL DE ACCION DE EPICARDIOY
ENDOCARDIO, LO CUAL PUDIERA TENER IMPLICACIONES EN LA
PROPAGACION DEL POTENCIAL DE ACCION DE UN TEJIDO A OTRO,
4.- EL TEDISAMIL EN PRESENCIA DE BRADICXRDIA Y (0) HIPOKALEMA
PUEDE Ih!DUCIR LA APARICION DE ARRITMIAS, DEBIDAS A
POSTDESPOLARIZ4CIONES TEMPRANAS.
5 2
BIBLIOGWIA
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