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Las reacciones de hipersensibilidad tipo I o alergias se distinguen por
presentar una respuesta inmune a antígenos ambientales. Están
implicadas células secretoras de citocinas tipo 2 (linfocitos Th2 e ILC2),
eosinófilos, linfocitos B productores de IgE que se unen a receptores
en mastocitos y basófilos, liberando mediadores que aumentan la
permeabilidad vascular, vasodilatación, contracción del musculo liso
bronquial y visceral e inflamación, siendo la manifestación sistémica
más grave el choque anafiláctico (Abbas y col., 2014). Durante un
choque anafiláctico los cobayos como como modelo experimental,
presentan inquietud, erizamiento de pelo, prurito nasal, estornudos,
tos, respiración espasmódica, relajación de esfínteres, convulsiones y
por ultimo muerte (Mendoza y col., 2008). Una alternativa de
tratamiento regulador de la respuesta a alérgenos es el Factor de
Transferencia (FT), el cual se consigue a partir de un Extracto
Dializable Leucocitario (EDL) obtenido del lisado de células linfoides,
que contiene al menos 200 diferentes moléculas entre 1 a 12 kDa. De
ellas a la fracción de péptidos con pesos moleculares (PM) entre 3.5 y
5 kDa se les denomina FT, con actividad inmunomoduladora
interespecífica (Aldana Velazco L., y col., 2004). El FT está compuesto
por péptidos hidrofílicos polares, con partes ácidas y dos regiones: una
variable y una constante (Vicuña, 2006). Debido a su baja probabilidad
de transmisión de zoonosis se seleccionó al caballo para la obtención
del EDL y purificación del FT (Blood, 2002).
OBJETIVO Evaluar la acción inmunomoduladora del Extracto Ultrafiltrable
Leucocitario de caballo con actividad de Factor de Transferenrcia en
reacciones de hipersensibilidad tipo I en un modelo de roedor.
METODOLOGÍA Para llevar a cabo el proyecto se realizaron las siguientes actividades:
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
El FT de caballo (por ultrafiltracion) registro PM similares al FT humano (por
diálisis) observados en el patrón electroforético registrado, con una concentración
mayor en un 51.3 %. Cabe señalar también que el tiempo se reduce a un 10% ya
que en lugar de utilizar 24 h. durante la diálisis se redujo de 2 a 3 h. por
ultrafiltración.
Con base al efecto inmunomodulador en reacciones de hipersensibilidad tipo I en
los diferentes grupos de cobayos como animales de prueba se registró 112% de
mayor protección en el FT de caballo con respecto al FT de referencia (comercial)
de origen humano. Muy probablemente debido a su mayor concentración obtenida
por el método de ultrafiltración.
Abbas, A.K.,. Lichtman, H., & Pillai, S. (2004). Inmunología Celular y Molecular.
Madrid: Elsevier.
Aldana Velazco L., Cosme Díaz K., Porras Castellanos D., Merino García N.,
Valenzuela Silva C., Amaya Izquierdo R., Suárez Alba J., Vázquez Bonachea
A., Bacardí Fernández D., Milá Cáceres L., y Sánchez Álvarez K., Ensayo de
Primera Ola del Factor de Transferencia (Hebertrans), CENIC Ciencias Biológicas,
2004: No. 3, Vol. 35, pág. 197-200.
Blood, C. D. (2002). Manual de Medicina Veterinaria. 9ª. Ed. Mc. Graw Hill.
México, D.F.
Mendoza Yanavilca, A., Fuentes Paredes, F., Rosales Fernández, A., &
Cisneros Tameño, R. (2008). Guía y manejo de animales de laboratorio. Lima,
Perú: Centro nacional de productos biológicos.
Evaluación de la acción inmunomoduladora del Extracto
Dializable Leucocitario de Caballo con actividad de Factor de
Transferencia en Hipersensibilidad tipo I en roedores
Alarcón Bonilla, Jesús, Rodríguez Meléndez, Israel J.; y Cerón Montes Genaro I.
División Químico Biológicas, Universidad Tecnológica de Tecámac.
km 37.5, Carretera Federal México-Pachuca, Col. Sierra Hermosa, Tecámac, México. C.P. 55740.
Palabras clave: Alergias, Extracto Dializable Leucocitario, Factor de
Transferencia, Inmunodifusión, Ultrafiltración.
El FT humano (de referencia) registro una concentración de 135.39
μg/mL y el FT de caballo 205 μg/mL, un 52% más concentrado con
respecto al de referencia. En la Figura 1. se aprecia el mismo patrón
electroforético entre los FT de origen humano y de origen equino.
Figura 1. Patrón electroforético del FT comercial de origen humano (A) y del EDL
con actividad FT de origen equino (B, C y D).
En la Tabla 1. se muestran las ponderaciones de signos observados en
los animales durante el choque anafiláctico.
Tabla 1. Ponderación de signos presentados por cobayos en el choque anafiláctico
inducido.
A partir de la suma de los signos presentados de acuerdo a la
ponderación de la Tabla 1. se evaluó el efecto inmunomodulador del FT
de referencia (humano) y de prueba (equino) para ver su efectividad en el
control del control del choque anafiláctico (reacción de hipersensibilidad
tipo I (Ver. Figura 2).
Figura 2. Signos acumulados por grupo experimental de cobayos posterior a la
inducción del choque anafiláctico con ovoalbúmina al 10% A: grupo control, B:
Testigo ( + ) FT comercial humano (de referencia), C: Testigo ( + ) FT de origen
equino (de prueba) y D: Testigo ( - )
El porcentaje de sobrevivencia después del choque anafiláctico inducido
fue del 100% en el grupo A o control, demostrando el estado de salud de
los animales. Un 80% en el grupo B de referencia, un 100% de
sobrevivencia con el FT de caballo (más concentrado) y como era de
esperarse 100% de muerte en el grupo D que no le fue administrado
ningún FT, comprobando así su efecto inmunomodulador.
Obtención de sangre de
caballo
Prueba de Rosa
de Bengala
Lisis celular (choque
térmico) y eliminación
detritus celulares
Obtención de la fracción
leucocitario (reposo y
centrifugación)
Obtención del EUL con
actividad FT
(ultrafiltración)
Determinación de
concentración y pureza
(Lowry y PAGE)
Determinación de
concentración y pureza
(Lowry y PAGE)
Grupos de cobayos:
A: Control, B: T(+)/FTref.
C: Pba./Ftcab., D:T(-)
Inmunomodulación:
A: Control (sin FT)
B: T(+)/FTref. 5dosis/3d
C: Pba./Ftcab. 5 dosis/3d
D:T(-) Sin dosis de FT
Inducción de choque
anafiláctico:
Grupos B, C y D con
ovoalbúmina al 10%
Inmunización:
Grupos B, C y D con
ovoalbúmina al 0.1%
Evaluación de signos de
choque anafiláctico:
Grupos A, B, C y D
Desecho de muestra
Valor Signo
2 Aletargamiento
3 Molestia en nariz
4 Estornudo
5 Tos
10 Insuficiencia respiratoria