practicas_biotecnologia_305689

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA GUIA COMPONENTE PRCTICO DEL CURSO: 305689 BIOTENOLOGA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUA COMPONENTE PRCTICO

305689 BIOTECNOLOGA

NOMBRE DEL DIRECTOR

Fedra Lorena Ortiz Benavides

NOMBRE DEL ACREDITADOR

Acreditador

SAN JUAN DE PASTO

Enero de 2014


2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

Autor Gua: FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDS

Versiones: 2006-2010

Actualizaciones: FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDES

Versiones: 2010 - 1 - 2010 2-2014-1

El presente Documento se rige por la normatividad que con base a derechos de autor de

publicaciones universitarias ha expedido la Direccin Nacional de Derechos de Autor, de

all que el presente documento se reglamente bajo la Circular No 16 del 15 de Abril de

2002 expedida por este organismo de control pblico a las Instituciones de educacin

superior, sobre "Los Derechos de Autor en el mbito Universitario". Al igual que los

reglamentos sobre derechos de Autor consagrados en la Ley No. 23 de 1982 sobre

Derechos de Autor del congreso de la repblica de Colombia y la Ley No. 44 de 1993 que

hace adiciones a la Ley 23 del 82.

Para tales efectos de establece que el presente Documento hace parte de los repositorios

documentales y digitales la Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD de

Colombia.

@CopyRight

Universidad Nacional Abierta y a Distancia

ISBN

2014

Centro Nacional de Medios para el Aprendizaje


3. INDICE DE CONTENIDO

Pg.

4. LISTADO DE TABLAS 4

4.1 LISTADO DE GRFICOS Y FIGURAS 4

5. CARACTERSTICAS GENERALES 5

6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS PRACTICA No. 1: Determinacin de la curva de crecimiento en organismos

unicelulares

PRACTICA 2:Cuantificacin de azucares

PRACTICA 3:Aislamiento de microorganismos productores de amilasa

PRCTICA 4: Aislamiento de ADN Bacteriano

8

12

16

20

7. RUBRICA DE EVALUACION DE LAS PRCTICAS 23

8. FUENTES DOCUMENTALES 25


4. LISTADO DE TABLAS

TABLA 1. Resultado de cuantificacin de azucares

TABLA 2: Recuento de colonias

4.1 LISTADO DE GRFICOS Y FIGURAS: En este documento no hay grficos

y figuras


5. CARACTERSTICAS GENERALES

Introduccin

El desarrollo de la biologa en las ltimas cuatro dcadas, ha hecho

posible el desarrollo de sofisticados, procedimientos para el

aislamiento, manipulacin y expresin de material gentico, lo que ha

llevado consigo al avance de una nueva disciplina: La

Biotecnologa. , la cual tiene aplicaciones tanto en la investigacin

bsica, como en la aplicada. Las tcnicas de esta ciencia se han

utilizado para estudiar los mecanismos de la replicacin y expresin

gnicas en procariotas, eucariotas y sus virus. Algunos de los ms

importantes descubrimientos bsicos de la gentica se han realizado

utilizando tcnicas ingenieriles. En cuanto a la investigacin aplicada,

la Biotecnologa permite el desarrollo de cultivos microbianos capaces

de fabricar productos valiosos, tales como la insulina humana, la

hormona humana del crecimiento, interfern, vacunas y enzimas

industriales. La aplicacin industrial de la Biotecnologa, parece tener

un potencial ilimitado.

La Biotecnologa, se ha convertido en la herramienta para un nuevo

desarrollo social, basado en el conocimiento del funcionamiento de la

vida y sus posibilidades de manipularlo y transformarlo. Su impacto en

la Medicina, la agricultura, el mejoramiento de las especies, la

evolucin, la industria alimenticia y la farmacologa, dan muestra de la

importancia que tiene esta disciplina, que se ha convertido sin lugar a

dudas en la base de la revolucin tecnolgica que ha acaparado la

atencin de los cientficos y gobiernos como posible estrategia para

encontrar soluciones a los problemas que aquejan a la humanidad.

Justificacin Dada la naturaleza interdisciplinaria de la Biotecnologa, se ha

desarrollado esta gua de laboratorio con el fin de que los estudiantes


complementen los conceptos tericos con la prctica, al mismo tiempo

que desarrollen competencias procedimentales que les permita en un

futuro prximo llevar a cabo proyectos de investigacin pero igualmente

les permita mejorar su desempeo laboral en la medida que sean

capaces de buscar soluciones prcticas a problemas Biotecnolgicos

industriales.

Intencionalida

des formativas

Propsitos: Fomentar las bases conceptuales y procedimentales que

le permitan al estudiante hacer uso de nuestros recursos biolgicos de

forma sustentable y de esta forma contribuya con el desarrollo

tecnolgico y cientfico de nuestro pas

Objetivos:

Conocer algunos procedimientos empleados para la obtencin de producto utilizando los fundamentos biotecnolgicos.

Identificar los procedimientos para la obtencin de un determinado productos y su aplicacin industrial.

Relacionar los conceptos cientficos con los procedimientos tcnicos utilizados en Biotecnologa.

Metas: El estudiante identificar y resolver las diferentes actividades

de aplicacin donde demuestre suficiente dominio de los conceptos

cientficos y tcnicos en el campo de la Biotecnologa

El estudiante describir diferentes procedimientos biotecnolgicos

vistos en las prcticas de laboratorio y presentara un informe en el que

analizara los resultados con suficientes argumentos tcnicos y

cientficos.

Competencias: El estudiante describe y analiza y aplica de manera

suficiente las condiciones tcnicas para el desarrollo de las

biotecnologas de fermentacin en sus diversas modalidades y usos,

as como en el modelamiento de procesos a cargo de enzimas y

microorganismos, apoyado en el estudio de protocolos de manejo de

los insumos biotecnolgicos

Denominacin

de practicas

Prctica 1: Determinacin de la curva de crecimiento en organismos

unicelulares

Practica 2:Cuantificacin de azucares

Practica 3:Aislamiento de microorganismos productores de amilasa


Prctica 4: Aislamiento de ADN Bacteriano

Nmero de

horas

12 Horas de prctica en el laboratorio, aunque ests requieren de muchas horas previas de preparacin.

Porcentaje Las prcticas equivalen a 50 puntos del total de la ponderacin del curso , equivalente al 10% del peso evaluativo

Curso

Evaluado por

proyecto

SI___ NO: X

Seguridad

industrial

Los estudiantes en el laboratorio, debern atender las normas de Bioseguridad recomendadas para cada una de estas prcticas. En trminos generales debern llevar bata que cubra su vestuario, zapatos cerrados, guantes, mascarilla. No debern manipular ningn reactivo con la boca , no pueden consumir alimentos ni lquidos dentro del laboratorio , Los microorganismos con lo que se va a trabajar pueden tener algn riesgo para la salud, razn por la cual se debe evitar conversar durante la prctica Hacer uso adecuado de las canecas de residuos y no desechar alcantarillado residuos peligrosos. Tener en cuenta el tipo de riesgo de cada reactivo con el fin de tomar las precauciones necesarias en cada caso. Debern estar pendientes de los implementos asignados y rotularlos antes de la prctica, debern seguir atentamente las instrucciones del laboratorista y haber ledo la gua de laboratorio antes de ingresar a la prctica.


6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS

PRACTICA No. 01 DETERMINACION DE LA CURVA DE CRECIMIENTO E

ORGANISMOS UNICELULARES

Tipo de practica PRESENCIAL

Porcentaje de evaluacin 2.5%

Horas de la practica 2

Temticas de la prctica Biotecnologa de las fermentaciones, crecimiento microbiano.

Intencionalidades formativas Propsito(s): Iden

Objetivo(s): Ejercitar de la determinacin de la curva de crecimiento de organismos unicelulares (bacterias y levaduras), determinando los parmetros principales que la caracterizan. Meta(s) El estudiante entregar un informe de laboratorio,

en el que presente los resultados de la prctica y la

fundamentacin terica de crecimiento microbiano que

respaldan los resultados

Competencia(s) A partir de ste trabajo el estudiante

fortalezer sus competencias procedimentales ,

argumentativas y de escritura cientfica.

Fundamentacin Terica: El crecimiento microbiano est definido como el aumento armnico e irreversible de masa y estructura. Esto puede estar acompaado o no de la divisin celular, ya que sta no es un obligatorio requerimiento. En el cultivo de microorganismos en condiciones artificiales, es muy empleado el cultivo batch, discontinuo o en lote. Generalmente se trata de un cultivo en medio lquido, aireado o esttico y a temperatura constante, y en el cual se parte de una pequea poblacin inicial o inoculo. En este no se adiciona medio fresco ni se extrae material exhausto, por lo cual todos los parmetros varan con el tiempo, es decir, es un proceso en estado transiente. Bajo estas condiciones, si determinamos el comportamiento de una poblacin de organismos unicelulares en funcin del tiempo (log del # de clulas o de viables o de absorbancia vs tiempo) podremos al menos observar cuatro etapas o estadios fisiolgicos conocidos en su conjunto como curva de crecimiento.


Existen muchos mtodos para la medicin del crecimiento. Entre los ms utilizados se encuentran: recuento total de clulas, conteo de viables, peso seco y turbidimetra. Este ltimo es el ms empleado para organismos unicelulares por la rapidez y facilidad con que se logran los resultados, midiendo la densidad del cultivo a medida que este crece. Para ello se utilizan los fotocolormetros o espectrofotmetro. El aspecto de la curva de crecimiento vara de acuerdo con las condiciones del cultivo, el medio empleado y caractersticas del inculo (edad del cultivo y medio de donde proceda) entre otros aspectos.

Descripcin de la prctica: Esta prctica consiste en que los estudiantes a partir de un

mtodo fotomtrico midan la curva de crecimiento de un microorganismo, ya que dentro

de la Biotecnologa de las fermentaciones es necesario conocer las caractersticas

metablicas del microorganismo con el fin de optimizar las condiciones de rendimiento y

obtencin del producto deseado. De esta manera los estudiantes estarn en capacidad

de emprender estudio de optimizacin de crecimiento microbiano en las empresas

alimentarias o biotecnolgicas que requieran de estos procedimientos.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Material curva de crecimiento.- -cua de c/u de las cepas de saccharomyces cerevisiae en medio malta-agarizado (18 h) -erlenmeyers de 100 ml con 20 ml de medio extracto de malta, estriles (2) -erlenmeyers de 250 ml con 48 ml de medio extracto de malta, estriles (9) -placas de medio extracto de malta-agar (10) -tubos de ensayo con 9 ml de solucin salina estril (80) -reactivo 3,5-dns 500 ml o reactivos del fenol sulfrico 500 ml -puntas estriles para las pipetas automticas. en su defecto -pipetas de 1 y 5 ml, estriles. (35 de c/u) -placas de medio extracto de malta-agar (80) -tubos de ensayos de 15 x 150 mm (30) -fotocolormetro -centrfuga -zaranda orbital (shaker) -vortex -microscopios.


Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de

la prctica: Los datos se los puede ingresar a Excel con el fin de obtener la curva de

crecimiento, pero esto no es un requisito necesario para la prctica.

Seguridad Industrial: Los estudiantes en el laboratorio, debern atender las normas de

Bioseguridad recomendada para estas prcticas, debern llevar bata blanca que cubra

de su vestuario, zapatos cerrados, guantes, mascarilla. No debern manipular ningn

reactivo con la boca , no pueden consumir alimentos ni lquidos dentro del laboratorio y

debern estar pendientes de los implementos asignados, debern seguir atentamente las

instrucciones del laboratorista y haber ledo la gua de laboratorio antes de ingresar a la

prctica.

Metodologa:

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Crecimiento microbiano, modelos matemticos aplicados al crecimiento microbiano, espectrofotometra. Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes, mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern entregar al tutor que dirija la prctica. Procedimiento:

Sistema de evaluacin

Informe o productos a entregar: Los estudiantes debern entregar un informe de

laboratorio con los siguientes acpites :

- Introduccin : Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin

- Justificacin : Describa brevemente la importancia de la medicin del

crecimiento microbiano en la Biotecnologa fermentativa

- Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico sobre el

crecimiento microbiano, los modelos matemticos al crecimiento microbiano y los

diferentes procedimientos que se utilizan para describir el mismo.

- Metodologa: Realice un diagrama de flujo sobre los procedimientos que utiliz

para desarrollar la prctica, puede utilizar esquemas fotografas.


- Resultados y anlisis de resultados: Cuantifique los resultados y presntelos

en tablas y grficas para ellos puede utilizar Exel presentarlo en papel

milimetrado, argumente y explique con bases cientficas las razones de los

resultados

- Conclusiones: Redacte los apartes ms importantes del desarrollo del tema, los

resultados y el anlisis de resultados.

- Bibliografa. Realice una lista de las fuentes consultadas, teniendo en cuenta las

normas APA

Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el informe

de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso, y a partir de esta fecha el

tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual ser

enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha

establecido la escuela, una vez recibidas las notas el director o tutor del curso las

registrar en el aula virtual.


PRACTICA No. 02: Cuantificacin de azucares

Tipo de practica

Presencial X Autodirigida Remota



Temticas de la prctica Metabolismo microbiano

Intencionalidades formativas

Propsitos: El estudiante comprender la

importancia de conocer el metabolismo de los

microorganismos promisorios a nivel industrial

Objetivos: Evaluar

Metas

Competencias

Fundamentacin Terica: Los microorganismos consumen diferentes tipos de

sustratos, pero poseen preferencia por un tipo particular de sustrato y algunos

resultan no consumibles para algunas cepas de una especie en particular.

Cuando dos o mas sustratos estn presentes en el medio de cultivo, los

microorganismos no los consumen por igual, sino que consumen

preferencialmente uno de ellos hasta agotarlo. Solo en este punto inician el

consumo del siguiente sustrato preferido. Este fenmeno se conoce como diauxia.

Esa preferencia por un sustrato en particular es diferente para cada una de las

cepas de un organismo, y puede ser medida como la variacin en la velocidad de

crecimiento, consumo de sustrato o generacin de producto.

Descripcin de la prctica: Para que un microorganismo produzca el metabolito

deseado es necesario proporcionarle un sustrato que garantice un mayor

rendimiento. Para ello, es necesario realizar diferentes ensayos que nos permita

saber las diferencias en preferencia de diferentes tipos de sustrato. En este

ejercicio de laboratorio analizaras estadsticamente las diferencias existentes en el

consumo de diferentes tipos de azcar por diferentes cepas comerciales de


levaduras

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos):

8 x 2 g de levadura seca o hmeda de cerveza o de

panadera. Preferiblemente 3 grupos de laboratorio deben trabajar con el mismo tipo de

levadura.

200 cm3 de solucin de fructosa 0.2M

200 cm3 de solucin de galactosa 0.2M

200 cm3 de solucin de glucosa 0.2M

200 cm3 de solucin de lactosa 0.2M

200 cm3 de solucin de maltosa 0.2M

200 cm3 de solucin de rafinosa 0.2M

200 cm3 de solucin de sucrosa 0.2M

8 x 0.5g de ortofosfato dihidrogeno de amonio

8 x 0.5g de sulfato de amonio

(Alternativamente puede emplearse 1g de nutriente de levadura disponible

comercialmente, para reemplazar las dos sales de amonio)

8 x 250 cm3 erlenmeyers

8 x tapones de caucho con dos orificios

Varillas de vidrios

Bureta de 50 cm3

Jeringas aforadas de 25 cm3 o equivalentes para

muestreo

8 x 100 cm3 erlenmeyers para titulacin

Solucin de hidrxido de sodio 0.1M (alrededor de

400cm3)


Solucin indicadora de fenolftaleina y gotero.

Software a utilizar en la practica: No aplica

Metodologa

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Nutricin y metabolismo microbiano,

Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes, mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern entregar al tutor que dirija la prctica.

Procedimiento: 3.2 Curva patrn (Concentracin de azucares totales) A partir de caldo estril (5 g/l = 5000 mg/l = 5.000.000 ug/l) obtenga una solucin de 150 ug/l (solucin estndar) A partir de la solucin estndar prepare diluciones de 100 ug/l, 70 ug/l, 50 ug/l, 25 ug/l, 10 ug/l, y 5ug/l. En un erlenmeyer de 50 ml y se le aade 1 ml de solucin de fenol al 5 %, mezclndolos bien. Se aade entonces 5 ml de cido sulfrico al 95%. se esperan 30 minutos y se lee la absorbancia a 489 nm. Consigne los datos de absorbancia como se muestra en la siguiente tabla

para cada uno de los azucares.

Tabla 1. Resultado de cuantificacin de azucares

En Excel obtenga la ecuacin de regresin lineal que relaciona la concentracin de azcar con la absorbancia, con punto de corte en 0,0 y = ax y= absorbancia, x = concentracin de azcar 3.3 Cuantificacin de azcar consumido


De los tiempos 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; y 3 horas colecte muestras para cuantificar azucares totales. Colecte 100mlts y dilyalos hasta 3ml de esta muestra tome 1ml en un erlenmeyer de 50 ml y se le aade 1 ml de solucin de fenol al 5 %, mezclndolos bien. Aada 5 ml de cido sulfrico al 95%. Se esperan 30 minutos y se lee la absorbancia a 489 nm. Aplique la ecuacin (x= y/a). y el resultado divdalo por 0.33 (factor de disolucin ) elabore una grafica en donde relacione produccin de biomasa y consumo de sustrato. 4: Variables de respuesta 2,3 (log x2 - log x1) = ----------------------------- t2 - t 1 yx/s = - (x2 x1) / (s2 s1)

Sistema de Evaluacin: No aplica



- Introduccin : Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin corta de la experiencia

- Justificacin : Describa brevemente la importancia del conocer el metabolismo

de los microorganismos promisorios de inters industrial

- Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico metabolismo

microbiano, sustratos y tipos de sustratos que se utilizan en los diferentes

procedimientos biotecnolgicos.



- Resultados y anlisis de resultados: Cuantifique los resultados y presntelos en

tablas y grficas para ellos puede utilizar Exel presentarlo en papel milimetrado,

argumente y explique con bases cientficas las razones de los resultados



Bibliografa. Realice una lista, teniendo en cuenta las normas APA de las fuentes

consultadas


Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el informe

de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso; a partir de esta fecha el

tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual ser

enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha



PRACTICA No. 03: Aislamiento de microorganismos productores de amilasa

Tipo de practica




Temticas de la prctica Enzimas


Propsitos:Que los estudiantes identifiquen las

caractersticas metabolicas de microorganismos

productores de enzimas amilolticas.

Objetivo: Aislar y seleccionar microorganismos

productore de enzimas amilolticas a partir de

muestras de suelo.

Metas: El estudiante entregar un informe de

laboratorio dnde describir claramente el

procedimiento de aislamiento de microorganismos

productores de enzimas amilolticas, as como sus

caractersticas morfolgicas.

Competencias: El estudiante durante el laboratorio

podra ejecutar con desenvoltura y propiedad cada

una de las actividades propuestas durante la

prctica; cmo tambin demostrar fluidez en la

escritura del informe de laboratorio demostrando

coherencia cientfica entre la metodologa

desarrollada, los resultados y las conclusiones


presentadas.

Fundamentacin Terica: El almidn est conformado por un polmero lineal de

glucosa llamado amilosa y por un polmero ramificado tambin de glucosa

llamado amilopectina; lo que hace, que sea considerado como un polmero

natural con una alta riqueza calrica, la degradacin del mismo en las molculas

de glucosa que representan energa para las clulas se realiza a partir de

enzimas extracelulares como la amilasa, la cul es segregada por una gran

variedad de microorganismos en ambientes naturales. Uno de los objetivos de la

biotecnologa es encontrar microorganismos productores de enzimas, que bajo

condiciones ptimas produzcan enzimas a nivel industrial.

Descripcin de la prctica: En esta prctica se identificaran

microorganismos aislados del suelo capaces de producir amilasa.


- 50 ml de agua destilada previamente esterilizada agua peptonada 0.1%

(p/v)

- Pipeta de 10 ml

- Pipetas de vidrio 1 ml estril

- 1 gr de tierra seca recogida 1 cm por debajo de la superficie, de diferentes

sitios tambin a diferentes alturas se pueden tomar muestras de

diferentes tipos de suelo (Se debe colocar en bolsas estriles y rotular).

Mnimo utilizar tres muestras

- Una solucin de yodo

- Bastoncillos de algodn estril

- Cajas de petri estril con 15 a 20 mm con nutriente de agar preparado con

0,2 de almidn soluble

- Rotulador.

Software a utilizar en la prctica: No aplica

Metodologa

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Concepto de enzimas,


procedimientos aspticos para el cultivo de microorganismos, preparacin de medios nutritivos y reaccin del almidn con el yodo

Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes, mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern entregar al tutor que dirija la prctica. Procedimiento:

1. Mezclar un gramo de tierra seca y diluirlo con 15 ml de agua esterilizada 2. Sembrar en superficie en una placa de agar nutriente / almidn y extender

la muestra uniformemente por toda la superficie 3. Rotular la caja petri con el nombre del grupo, fecha y sitio de muestra 4. Incubar a 30 grados durante 48 horas. 5. Realizar el recuento de todas las colonias, de cada uno de los sitios 6. Vierta con mucho cuidado la dilucin de yodo sobre las placas inoculadas

hasta cubrir completamente la superficie del agar. Las zonas en que todava quede almidn se teirn de un color entre azul y negro. S los microorganismos han degradado el almidn aparecern zonas de color marrn claro

7. Realice el recuento de aquellas colonias que presenten halos de hidrlisis alrededor de las mismas. Este recuento corresponder a las colonias con actividad amiloltica.

8. Mida con una regla el dimetro en milmetros (mm) de cada uno de los halos. Teniendo en cuenta la siguiente frmula: C= A-B en donde: A. Dimetro de la colonia ms el halo de hidrlisis en mm B. Dimetro de la colonia en mm C. Dimetro del halo de la hidrlisis en mm

9. Escriba los resultados de los puntos 5, 7 y 8 en la siguiente tabla. TABLA 2 : Recuento de colonias

Sitio de muestreo

N. de colonias totales (5)

N. de colonias con halos amiloliticos (7)

Dimetro de halo de Hidrlisis de colonias ms representativas (8)

Col 1 Col 2 Col 3





- Introduccin: Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin de la experiencia.

- Justificacin : Describa brevemente la importancia del procedimiento descrito

para encontrar microorganismos de inters industrial

- Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico sobre el enzimas ,

enzimas de inters industrial y los diferentes procedimientos que se utilizan para

obtencin de enzimas



- Resultados y anlisis de resultados: Cuantifique los resultados y presntelos

en tablas y grficas explique con bases cientficas las razones de los resultados




consultadas

Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el

informe de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso; a partir de esta

fecha el tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual

ser enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha




PRACTICA No. 04: Aislamiento de ADN Microbiano

Tipo de practica




Temticas de la prctica Tcnicas de ingeniera gentica aplicada a la Biotecnologa


Propsitos:Que los estudiantes reconozcan la

importancia de las tnicas de ingeniera gentica

aplicadas al desarrollo Biotecnolgico .

Objetivo: Aislar los cidos nucleicos de la Bacteria

Scherichia colli

Metas: El estudiante entregar un informe de

laboratorio dnde describir claramente el

procedimiento de aislamiento de Acidos nucleicos en

bacterias y la importancia de la tcnica en el

desarrollo de la Biotecnologa

Competencias: El estudiante durante el laboratorio

podra ejecutar con desenvoltura y propiedad cada

una de las actividades propuestas durante la

prctica; cmo tambin demostrar fluidez en la

escritura del informe de laboratorio demostrando

coherencia cientfica entre la metodologa

desarrollada, los resultados y las conclusiones

presentadas.

Fundamentacin Terica: Sin lugar a dudas con el descubrimiento de la

doble estructura axial del cido "Desoxi-ribonucleico" (ADN) por Crick y Watson en 1953, seguido por los procesos que permiten la

inmovilizacin de las enzimas, los primeros experimentos de ingeniera gentica realizados por Cohen y Boyer en 1973 y aplicacin en 1975 de

la tcnica del "hibridoma" para la produccin de anticuerpos "monoclonales", gracias a los trabajos de Milstein y Kohler.(1983). Han


constituido un avance sin precedentes en el desarrollo de la

Biotecnologa. Estos importantes descubrimientos han dado lugar a numerosos trabajos de mejoramiento gentico tanto en plantas como

animales; el cultivo de tejidos vegetales y animales a partir de clulas madre, y el importante acontecimiento de la aparicin de la oveja Dolli

en el contexto cientfico, que dio un vuelco total al concepto de Biotecnologa.

Descripcin de la prctica: En esta prctica se aislar el ADN microbiano a

partir de un procedimiento sencillo desarrollado por Hertel et al (1975)


- Cultivo previamente preparado de Scherichia colli

- Lizozima en polvo

- 6 ml de etanol frio

- 0, 5 ml de detergente domstico

- Sistema de inoculacin

- 3 ml de agua destilada

- Tubos de ensayo

- Pipetas de 1 ml Pasteur

- Bao Mara a 60C

- Incubadora a 37C

-

Software a utilizar en la prctica: No aplica

Metodologa

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Estructura de los cidos nucleicos,

Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes, mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern entregar al tutor que dirija la prctica.


Procedimiento:

1. Preparar un cultivo de E. Colli en un caldo nutritivo y dejarlo madurar por lo menos durante 4 das

2. Aadir 10 mg de lisozima a 5 ml de suspensin bacteriana y agitarla durante 2 minutos

3. Incubar la mezcla durante 30 minutos a 37 C 4. Aadir a la suspensin bacteriana 5 ml de detergente domstico 5. Llevar la mezcla a bao mara a 60C durante 2 minutos 6. Enfriar la mezcla en agua fra 7. Lentamente y con mucho cuidado verter etanol frio sobre la superficie de

la mezcla de manera que forme una capa 8. Los cidos nucleicos precipitarn en la capa superior de etanol de la cual

se extraern utilizando una pipeta 9. Se puede aadir unas gotas de azul de metileno con el fin de teir el ADN

y volverlo ms visible.




- Introduccin: Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin de la experiencia.

- Justificacin : Describa brevemente la importancia del procedimiento descrito

en el desarrollo de la Biotecnologa

- Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico sobre cidos

nucleicos y tcnicas de ingeniera gentica aplicadas a la Biotecnologa ,



- Resultados y anlisis de resultados: Analice los resultados obtenidos,

explicando cientficamente cada uno de los pasos que se realizaron durante el

procedimiento





consultadas

Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el

informe de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso; a partir de esta

fecha el tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual

ser enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha



RUBRICA DE EVALUACIN: La siguiente rbrica de evaluacin se aplicar a todas las prcticas de laboratorio, para un total de 50 puntos

tem Evaluado Valoracin Baja Valoracin Media Valoracin Alta Mximo

Puntaje

Estructura del

informe

El estudiante

tuvo en cuenta

las normas

bsicas para

construccin

del trabajo

(Puntos = 0)

Aunque los

documentos

entregados

presentan una

estructura base, la

misma carece de

algunos

elementos del

cuerpo

Solicitado.

(Puntos = 5)

Los documentos

presentan una

excelente

estructura con los

requerimientos

solicitados

(Puntos = 10

10

Redaccin y

ortografa

Los

documentos

presentan

deficiencias en

redaccin y

errores

ortogrficos

(Puntos = 0)

No hay errores de

ortografa y Los

documentos

presentan una

mediana

articulacin de las

ideas y la

estructura de los

prrafos

(Puntos = 5)

La redaccin es

excelente, las

ideas estn

correlacionadas,

y el cuerpo del

texto es

coherente en su

totalidad

(Puntos =10)

10


Fines del

trabajo

No se

desarrolla el

objetivo del

laboratorio y el

informe

presentado

carece de

coherencia

cientfica

(0)

El informe de

laboratorio

desarrolla el

objetivo del

mismo; sin

embargo en

algunos a partes

no se evidencia

coherencia

cientfica entre los

diferentes

acpites del

informe de

laboratorio.

(10)

El informe de

laboratorio

desarrolla el

objetivo del

mismo; se

evidencia

coherencia

cientfica entre

los diferentes

acpites del

informe de

laboratorio.

(20)

20

Referencias

Mo presenta

referencias

bibliogrficas.

(0)

Presenta un

marco terico

basado en

referencias

bibliogrficas

poco con

muchas de estas

no se encuentran

acorde con la

temtica tratada ,

las referencias

bibliogrficas

cumplen con la

normatividad APA

(5)

Presenta un

marco terico

basado en

referencias

bibliogrficas

confiables y estas

se encuentran

acorde con la

temtica tratada ,

las referencias

bibliogrficas

cumplen con la

normatividad APA

10

TOTAL DE

PUNTOS

POSIBLES

50


7. FUENTES DOCUMENTALES

1. AYALA FRANCISCO. Evolucin molecular, Edicin Omega, Barcelona 1980

2. BURGES A. Biologa del suelo. Edicin Omega S.A. Barcelona 1971

3. BYONG H. Lee Fundamentos de Biotecnologa de los alimentos Editorial Acribia, Zaragoza. (1996).

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5. CRUGER Y CRUGER. Biotecnologa: Manual de Microbiologa Industrial. Editorial Acribia S.A. Zaragoza, Espaa. 1989

6. CRUZ L. Revista Ciencia. Impacto social de la Biotecnologa. El desafio cubano. Cdigo ISPN de la Publicacin: EPAVAPVEKLDMNMTNRV, Publicado Wednesday 22 de September de 2004

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11. MARTINES JORGE, Microbiologa Industrial. Una experiencia Cubana. Editorial: El pueblo. Universidad de la Habana. 1997

12. MONTOYA DOLLY- Las fermentaciones como soporte de los procesos biotecnolgicos. Universidad Nacional de Colombia. Bogot, D.C. 1989

13. OEA .Organizacin de Estados Americanos.: Microbiologa industrial, 2000

14. OSORIO, M. Biotecnologa, Eds. Echenique,V.; Rubinstein, C. y Mroginski L. INTA. Buenos Aires, Argentina

15. OWEN P Word. Biotecnologa de la Fermentacin. Editorial Acribia. Zaragoza 1979

16. RAVEN, J. Biology, 2002. Second Edition. is published by Princeton University Press and copyrighted, 2007,

17. SCRIBAN Ren. Biotecnologa. UNAM. Editorial Manual Moderno. Mxico D.F. 1985


18. SMITH, J.E. (1996): Biotechnology (3 edicin). Cambridge: Cambridge University Press (ISBN: 0-521-44911-1).

19. SOBERON, M La ingeniera gentica y la nueva tecnologa, Fondo de cultura econmica. Mxico, 1996

20. WISEMAN, A.; Principios de biotecnologa; Acribia, Zaragoza, 1985.

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