Laboratorio de Biologa General Responsable de las Prcticas: Dra. Maritza Lizeth Alvarez Ainza Criterios de evaluacin para el Laboratorio Asistencia al 80% de las prcticas 30% Bitcora y tareas 60% Comportamiento durante el desarrollo de la prctica 10%

Para acreditar el laboratorio, es necesario asistir al 80% de las prcticas, los

reportes se elaboraran en una bitcora por cada uno de los alumnos a mano, y esta se entregara al final del curso, anexando ah mismo las tareas.

Para cada prctica se realizar un reporte en su bitcora con el siguiente orden: nombre de la prctica, pequea introduccin resaltando la importancia de dicha prctica, objetivo(s), materiales y mtodos, resultados y discusiones, conclusin, referencias. Todos los puntos anteriores deben de ser lo suficientemente claros para que dicha prctica pueda ser reproducida e interpretada en un futuro desde su bitcora.

PROGRAMA DE PRCTICAS

Prctica # 1: Normas Generales para el Uso del Laboratorio.

Prctica # 2: Manejo y Uso del Microscopio ptico.

Prctica # 3: Observacin de las Caractersticas coloniales Macroscpicas y Microscpicas de algunos Miembros del Reino Monera.

Practica # 4: Observacin de las Caractersticas Macroscpicas y Microscpicas de algunos

miembros del Reino Fung.

Practica # 5: Observacin de las Caractersticas Microscpicas de Algunos Miembros del Reino Protista.

Practica # 6: Observacin de Clulas Animales: Clulas Epiteliales, Clulas Sanguneas y

Gametos Masculinos.

Practica # 7: Observacin de Clulas Vegetales: Epidermis de Cebolla y Cromoplastos de

Tomate.

Practica # 8: Estudio de la Mitosis en Clulas de la Raz de Cebolla

Laboratorio de Biologa 1 Dra. Maritza Lizeth Alvarez Ainza

Prctica # 1

Normas generales para el uso del laboratorio

Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta las siguientes normas elementales.

1. El uso de bata es indispensable en cualquier laboratorio. 2. Es importante vestir la ropa adecuada as como tambin cmoda para la

realizacin de las prcticas, el uso de short, huaraches, faldas cortas no esta permitido.

3. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan.

4. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado.

5. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material.

6. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin.

7. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor.

8. No tacar con las manos y menos con la boca los productos qumicos. 9. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y

microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos.

10. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.

11. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se vertern bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarn resbalar suavemente por su pared.

12. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: cido sobre agua.

13. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre lquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco.

14. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro.

15. Las pipetas se tomaran de forma que sea el dedo ndice el que tape su extremo superior para regular la cada de lquido.

16. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal.

17. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos debe evitarse la ebullicin violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercar a la llama inclinado y procurando que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo nuevamente a los pocos segundos y retirndolo otra vez al producirse una nueva ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitar dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.

18. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos calentado con el fin de evitar roturas.

19. Los cubreobjetos y portaobjetos deben tomarse por los bordes para evitar que se engrasen.

Tarea:

1. Tipos de reactivos de existe de acuerdo a su peligrosidad 2. Cuantos y cuales tipos de laboratorio existen?

Practica # 2 Manejo y uso del microscopio ptico.

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema ptico

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico

SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, ..

REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se guardo correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el

de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.

b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.

Empleo del objetivo de inmersin:

1. Bajar totalmente la platina. 2. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que

nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. 3. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino

entre ste y el de x40. 4. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. 5. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de

inmersin. 6. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la

lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

7. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.

8. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3.

9. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin.

10. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.

5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

Tarea:

1. Cuales son los tipos de microscopios que existen y para que tipo de objetos se utiliza cada uno de ellos?

Prctica # 3 Observacin de las Caractersticas coloniales Macroscpicas y

Microscpicas de algunos Miembros del Reino Eubacteria.

MATERIAL

Microscopio Porta y cubreobjetos Mechero Solucin salina 0.85%

Hisopos estriles Colorantes tincin gram Bacterias gram positivas y

negativas (cocos y bacilos)

Muestra:

El alumno se responsabilizar de llevar una muestra a la sesin de laboratorio

como yogurt, orina o aquella donde se puedan observa bacterias.

Preparacin de un frotis:

Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se

va a teir (si es lquido). Si el material es solido en este caso una colonia bacteriana se coloca una gota de solucin salina sobre el portaobjetos y con el asa previamente estril

se toma una porcin de una colonia con el asa y se deposita frotando suavemente en la gota de solucin salina.

El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias

veces por la zona azul de la llama de un mechero de bunsen hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no queme.

Tcnica para la tincin Gram:

1. El Frotis fijado con calor se tie 1 minuto con el colorante Cristal violeta 2. Se lava con agua corriente

3. Se cubre con yodo durante 1 min y se lava de nuevo con agua corriente 4. Decolorar con mezcla alcohol etlico/acetona 30 segundos

5. Enjuagar, escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 1 minuto 6. Lavar y secar

Tarea:

1. Tipos de bacterias de acuerdo a morfologa microscpica. 2. Fundamento tincin gram.

Prctica # 4

Observacin de las caractersticas macroscpicas y microscpicas de

algunos miembros del reino fung.

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asas

Azul de lactofenol Levaduras Hongos filamentosos

Muestras

El alumno traer una muestra de su casa, de alguna comida que se encuentre contaminado con

hongos (del refrigerador, de la cocina o bao).

Tcnica para la preparacin de levaduras y hongos en fresco:

1. Colocar una o dos gotas de solucin salina en un portaobjetos. 2. Tomar una porcin de la colonia de levaduras o hongos y frotar suavemente para

dispersar la muestra en la solucin salina. 3. Colocar un cubreobjetos encima de la preparacin. 4. Lleva la preparacin a la platina del microscopio y realiza una observacin con pequeos

aumentos. Selecciona el mejor grupo de clulas y pasa a mayores aumentos. Mximo 40X.

5. Observar y dibujar lo que se observe en tu bitcora. Tarea;

1. Describa las caractersticas generales de los hongos filamentosos 2. Describa las caractersticas generales de las levaduras 3. Cual es la importancia tecnolgica de estos organismos

Prctica # 5

Observacin de las caractersticas microscpicas de algunos

miembros del reino protista.

MATERIALES

Microscopio Portaobjetos Cubreobjeto

PROCEDIMIENTOS

Cultivo de protozoarios.

Colocar agua estancada y colocarla en un recipiente, agregarle flores, hojas, hojas de repollo o

lechuga. Dejar reposar por varios das (1 semana) hasta observar turbia con formacin de una capa

blanquecina en la superficie. Observar la muestra al microscopio hasta objetivo de 40X. Anotar sus

observaciones.

Observacin de microalgas:

Mediante el cultivo proporcionado por el Maestro, hacer una preparacin en fresco y observar al

microscopio hasta objetivo de 40X. Anotar sus observaciones.

Tarea:

1. Describa la clasificacin de los organismos del reino de los protozoarios

2. Por que son tan importantes las microalgas para el medio ambiente

Prctica # 6

Observacin de clulas vegetales: Epidermis de cebolla y

cromoplastos de tomate.

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Pinzas Lancetas estriles

Bistur Verde de metilo actico o azul de metileno Levaduras Cebolla y tomate

Muestras: El alumno traer una cebolla y un tomate.

MTODOS:

Tcnica para la preparacin de epidermis de cebolla:

1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava.

2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas.

3. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo!

4. Con un gotero baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. 5. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al

microscopio. 6. Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. Identifica las

distintas clulas del tejido epidrmico y dibjalos en tu bitcora.

Tcnica para preparacin de pulpa de tomate:

1. Utilizando un escalpelo, corta en dos mitades el tomate. 2. Obtn, ayudndote de unas pinzas, un trozo de pulpa de tomate de unos 2mm de grosor. 3. Depostalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua. 4. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente con los dedos hasta obtener un

completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate. 5. Lleva la preparacin a la platina del microscopio y realiza una observacin con pequeos

aumentos. Selecciona el mejor grupo de clulas y pasa a mayores aumentos. 6. Identifica los distintos orgnulos celulares visibles y dibuja lo que observes en tu bitcora.

Tarea

1. Haga un esquema general de las clulas vegetales en una hoja, indique todas sus partes y

describa brevemente

Prctica # 7

Observacin de clulas animales: clulas sanguneas y gametos

masculinos.

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Abatelenguas Lancetas estriles

Bistur Verde de metilo actico o azul de metileno Giemsa Muestra de Semen

Tcnica para la preparacin de clulas sanguneas:

1. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar. 2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. 3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta

de manera que se pueda obtener una fina pelcula de sangre.

4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin.

5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido.

6. Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto. 7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. 8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. 9. Observar al microscopio.

Al microscopio se vern predominantemente los glbulos rojos, hemates o eritrocitos teidos de

color rojo por la eosina. No tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes. Los

glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia de ncleo, teido de morado

por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos: de tamao aproximado al de los

glbulos rojos, tienen un solo ncleo que ocupa casi todo el glbulo. Monocitos: son los leucocitos

mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su funcin

principal es la fagocitosis. Polimorfonucleares: ncleo segmentado, pueden ser eosinfilos (con

granulaciones teidas de rojo) neutrfilos y basfilos.

Observacin de gametos masculinos

1. Tomar una porcin del lquido seminal con un palillo y colocarlo en un portaobjetos suavemente.

2. Dejar que seque al aire o pasar por el mechero.

3. Teir con giemsa 10 minutos.

4. Secar, y observar al microscopio con los diferentes objeticos y anotar resultados en tu bitcora.

Tarea:

1. Describa la morfologa de las clulas sanguneas

2. Describa esquemticamente la morfologa de los espermatozoides

Prctica # 8

Estudio de la mitosis en clulas de la raz de cebolla y clulas

epiteliales.

MATERIALES

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Lanceta estril Cubeta de tincin Aguja enmangada Pinzas Palillos

Frasco lavador Mechero de alcohol Tijeras Papel de filtro Vaso de precipitados Vidrio de reloj Orcena A Orcena B

Mitosis en clulas de raz de cebolla

TCNICA

1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 das aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud.

2. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremo de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orcena A.

3. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues.

4. Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar durante 1 minuto.

5. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raz quede extendida.

6. Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice.

7. Observar al microscopio.

OBSERVACIN MICROSCPICA

Se realizar a fuertes aumentos. La orcena A reblandece las membranas celulares y la B

completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta de la preparacin se logra una

extensin y difusin de las clulas del meristemo de la cebolla.

La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el campo que abarca el

microscopio. Se observan clulas en diversas fases o estados de divisin celular. Se ven los

cromosomas teidos de morado por la orcena. El aspecto reticulado as como el mayor tamao de

algunos ncleos corresponde a las clulas que se encontraban en los procesos iniciales de la

divisin mittica.

ESQUEMA SECUENCIAL DE LA MITOSIS

Mitosis en clulas epiteliales de la boca

1. Un con abatelenguas raspar las paredes interiores del epitelio bucal (de las mejillas).

2. Colocar el rapado en un portaobjeto, al cual se le coloco una gota de solucin salina

fisiolgica, extendindolo suavemente.

3. Teir 1 minuto con azul de metileno.

4. Observar al microscopio comparando los diferentes objetivos y anotar resultados en tu

bitcora.

TAREA

1. Describe todas las etapas de la mitosis y meiosis 2. Porque los cromosomas se tien de morado con la tincin con orcena. 3. Qu diferencia existe entre Orceina A y Orceina B 4. Cual es la funcin del HCl 0.1N 5. Estudio del cariotipo humano

Se denomina cariotipo al conjunto de cromosomas de una especie determinada. Su

determinacin se realiza observando durante la metafase la dotacin cromosmica de una clula

y la obtencin de una fotografa de esta observacin permite investigaciones genticas sobre ese

individuo o esa especie.

1. La figura siguiente representa un cariotipo humano.

2. Recorta cada uno de los cromosomas. 3. Agrpalos de acuerdo con su tamao, forma y bandas de tincin. 4. Identifica cada pareja de homlogos ayudndote del cariotipo ordenado de la figura

siguiente.

5. Pega cada pareja en una plantilla vaca como la de la figura anterior.