Reconocimiento del Material de Laboratorio de Microbiología.Normas de Bioseguridad

I. INTRODUCCIÓNCada laboratorio según lo que realiza, disponen de diferentes materiales atendiendo a su área de conocimiento, líneas de investigación y presupuesto, además, todos ellos disponen de un material comúnmente conocido como material no inventariable. Éste a su vez puede distribuirse según el elemento que lo conforma en material de vidrio o de plástico, así como según su posibilidad de reutilización en desechable o reutilizable.

II. OBJETIVOS1. Familiarizar al estudiante con los implementos que se usan para un Análisis

Microbiológico de Alimentos2. Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de instrumentos en

el Análisis Microbiológico de Alimentos3. Instruir al estudiante en las reglas básicas de comportamiento y normas de

bioseguridad.

III. MATERIALES y MÉTODOS1. Material de uso en Análisis Microbiológico de Alimentos.2. Reconocer los materiales de uso en Análisis Microbiológico de Alimentos

IV.BIBLIOGRAFÍA1. Aquiahuatl M. 2004. Manuel de Prácticas - Laboratorio de Microbiología General.

Universidad Autonoma Metropolitano- México.2. OMS. 2005. Manual de Bioseguridad en Laboratorio. Tercera Edición.

PRÁCTICA N° 01

Acondicionamiento y Esterilización de Material para un Análisis Microbiológico de Alimentos

V. INTRODUCCIÓNUn correcto acondicionamiento de los materiales así como la esterilización adecuada de los mismos es el primer paso un correcto análisis microbiológico de los alimentos, pues de él dependerá su éxito.

VI.OBJETIVOS4. Dar a conocer las técnicas para el acondicionamiento y esterilización de

materiales y equipos empleados para un Análisis Microbiológico de Alimentos5. Ejecutar con habilidad y destreza el acondicionamiento de materiales para el

análisis microbiológico.6. Justificar la importancia de los métodos de esterilización para el control y poder

realizar un correcto análisis microbiológico de los alimentos.

VII. MATERIALES 5 Pipetas de 1 ml por grupo 2 Pipetas de 2 ml por grupo 3 Pinzas por grupo 6 Placas petri por grupo 2 Erlenmeyer por grupo 10 Tubos de ensayo de 10 x 1.5 cm por grupo 5 Tubos de ensayo de 5 x 1 cm por grupo 1 Pliego Papel craff, 100g de algodón 1 tijera 1 Estufa de aire caliente 1 Autoclave

VIII. MÉTODOSA. Preparación de tubos y matraces

- Los tubos, matraces y frascos antes de su esterilización deben llevar sus tapones de algodón respectivamente, los cuales deben cerrar suavemente no muy flojos ni apretados, ni largos ni cortos.

- Formar un paquete de tubos de ensayo taponados, empaquetarlos con papel kraft y amarrarlos, en su defecto se le envuelve con papel sólo la zona de las bocas.

- Los frascos y matraces se taponan con algodón, se cubre con papel kraft y se amarra con hilo pabilo.

- Preparación para proteger las pipetaso En el extremo de succión de cada pipeta introducir una porción de algodón

con auxilio de una aguja o puntero delgado, evitando que quede muy ajustado.

o Cortar tiras largas de papel kraft de unos 3 cm. de ancho, y colocar uno de sus extremos, en una de las puntas del papel envolver la punta de la pipeta en forma oblicua y envolver toda la longitud de la pipeta girándose en espiral en forma ajustada y en la parte terminal de la boquilla se remata con una torsión para protegerla y se rompe el resto de papel sobrante.

o Anotar con un lápiz la medida de la pipeta y la fecha de su esterilización. - Preparación de las placas petri

PRÁCTICA N° 02

o Cortar papel kraft tamaño adecuado para cubrir íntegramente las placas petri completas.

B. ESTERILIZACIÓN CON CALOR SECO El procedimiento de esterilización por aire caliente sólo se puede emplear con utensilios de vidrio o metal. - Procedimiento para la esterilización en horno

o Ponga el termostato a l00ºC y encienda el horno. o Si hay un ventilador verifique que esté funcionando. o Cuando la temperatura llegue a l00ºC.sígase calentando durante 60

minutos más.o Apague el horno. Espere a que la temperatura descienda hasta 60ºC. Abra

la puerta del horno.C. ESTERILIZACIÓN CON CALOR HÚMEDO

- Procedimiento para la esterilización con autoclave o Llene con agua destilada el fondo del autoclave (hasta el soporte de la

canasta). Cerciórese que el agua no toque la canasta. o Introduzca en el autoclave la canasta con los materiales que se van a

esterilizar, se pueden añadir indicadores de la esterilización. o Cierre la tapa del autoclave.o Cuando se obtenga la temperatura adecuada 120ºC se deberá regular el

calor para conservarla. Y esperar por 15 minutos.o Reduzca completamente el calor tan pronto como se cumpla el tiempo

requerido. o Cuando la temperatura descienda a menos de 80ºC abra la válvula de

salida de aire para igualar las presione dentro y fuera del autoclave.o Deje enfriar el autoclave y a continuación retire cuidadosamente la

canasta con los utensilios estériles

D. ALMACENAMIENTO DEL MATERIAL ESTÉRILUna vez que un material está estéril debe estar protegido en la forma apropiada, la duración de la esterilidad no está relacionada directamente con el tiempo, sino con factores que comprometen su exposición al medio ambiente.Los materiales estériles pierden su esterilidad:- Cuando se produce cualquier ruptura, accidental o no, del material que lo

recubre durante su transporte o almacenamiento.- Al humedecerse el material de empaque.- Es importante no manipular los materiales estériles con las manos húmedas,

ni colocarlos sobre superficies mojadas.- Al almacenar los materiales estériles se deben tomar una serie de

precauciones, tales como:oControlar el acceso a las áreas de almacenamiento de materiales estériles.oMantener el área de almacenamiento limpia, libre de polvo, sucio e

insectos.oControlar la temperatura y la humedad de las áreas de almacenamiento.oLa temperatura ideal debe estar por debajo de los 26ºC y la humedad

relativa entre 30 y 60%.oLos periodos prolongados de almacenamiento en lugares tibios y húmedos,

pueden producir condensación de humedad sobre el material de empaque.oUtilizar, preferiblemente, estantes cerrados para colocar el material.oDejar que los materiales que salen del horno o el autoclave alcancen la

temperatura ambiente antes de ser almacenados; de esta forma se evita la condensación dentro del empaque.

E. BIBLIOGRAFÍA

3. Aquiahuatl M. 2004. Manuel de Prácticas - Laboratorio de Microbiología General. Universidad Autonoma Metropolitano- México.

4. BROCK, TH. D: 1998. Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.

Preparación de Medios de CultivoIX. INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos, constituyen el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos.Por su minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicación in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hábitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquello microorganismos que interfieren en el estudio del microorganismo de interés, al que además de proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento multiplicación.

X. OBJETIVOS7 . Preparar correctamente los medios de cultivo líquido y solido. 8 . Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.9 . Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes

de acuerdo al uso que se les dará.

XI.MATERIALES 1 matraz de 250ml por grupo 5 Placas petri por grupo 5 Tubos de ensayo de 5 x 1 cm por grupo Papel craff, Algodón 1 tijera Medios de cultivo deshidratado Balanza electrónica. 1 Estufa de aire caliente 1 Autoclave

XII. MÉTODOSF. Preparación y Esterilización de Medios de Cultivo.

- Pesar y disolver los componentes en el medio en el volumen indicado de agua destilada.

- Ajustar el pH del medio, si procede.- Para la preparación de medios sólidos se adiciona agar-agar como agente

solidificante. Para asegurar la completa disolución del agar, el medio se calienta hasta ebullición al mismo tiempo que se somete a agitación previamente a su esterilización en el autoclave.

G. Esterilización de medios de cultivo:- Una vez preparado el medio, éste se debe esterilizar lo antes posible para

evitar el crecimiento de microorganismos.- Medios sólidos en placa - tapar el matraz con tapón de algodón graso y cubrir

con papel de aluminio para llevar a esterilizar en el autoclave (121º C, 15-20 min).

- Una vez estéril repartir el medio en placas de Petri estériles y dejar en reposo para su solidificación.

PRÁCTICA N° 03

H. BIBLIOGRAFÍA5. Aquiahuatl M. 2004. Manuel de Prácticas - Laboratorio de Microbiología General.

Universidad Autonoma Metropolitano- México.6. BROCK, TH. D: 1998. Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall.

USA.

Siembra y Aislamiento de bacterias.XIII. INTRODUCCIÓN

La finalidad de la siembra y aislamiento de bacterias a partir de muestras complejas, es obtener un cultivo puro de bacterias, a través de colonias aisladas. Cada colonia representa una población de microorganismos, a partir de la cual se posee la seguridad de obtener dicho cultivo puro de un solo tipo de microorganismo. Para ello se utilizan diferentes técnicas de aislamiento, basadas en diluir la muestra inicial para obtener colonias aisladas.

XIV. OBJETIVOS1 0 . Manejar correctamente la técnica de siembra y aislamiento en estría.1 1 . Obtener colonias de bacterias aisladas.

XV. MATERIALES Matraz de 250ml Tubos de ensayo con cultivo de bacterias Agar Bair Packer Placas Petri Papel craff, Algodón Mechero Ansa microbiológica Estufa a 37°C

XVI. MÉTODOS1. Esterilizar el ansa en el mechero2. Tomar con el ansa una gota del cultivo mixto del tubo de ensayo3. Aplicar la técnica de estria en superficie en la placa petri la cual contiene agar.4. Llevar a estufa a 37°C.

I. BIBLIOGRAFÍA7. Aquiahuatl M. 2004. Manuel de Prácticas - Laboratorio de Microbiología General.

Universidad Autonoma Metropolitano- México.

PRÁCTICA N° 04

8. BROCK, TH. D: 1998. Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.

Tinción Gram y Obtención de Cultivo PuroXVII. INTRODUCCIÓN

La tinción gram es una tinción diferencial usada en microbiología que nos permite clasificar entre células Gram positivas absorben el color azul-violeta del colorante cristal violeta; mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina, la cual se fundamenta en la diferencia que hay entre la estructura y composición química de la pared celular de las mismas.Se denomina cultivo puro (axénico) al que contiene sólo un tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la misma composición genética. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las características de los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad.

XVIII. OBJETIVOS1 2 . Realizar una tinción Gram13. Realizar un cultivo Puro

XIX. MATERIALES Placas con colonias Tubos con medio inclinado. Microscopio óptico Colorantes para tinción de Gram Mechero asa microbiológica Pizeta Aceite de inmersión Plumón indeleble

XX. MÉTODOSTINCIÓN GRAM1. Tomar una gota de agua destilada y colocarla en el porta.2. Tomar un porción de colonias aisladas de la placa con el ansa.3. Fijar con calor.4. Añadir 1 ó 2 gotas de cristal violeta a la preparación, hasta que se cubra por

completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.5. Una vez transcurrido el tiempo, lavar la preparación con la pízeta sobre el

recipiente de plástico para tinciones.6. Agregar 1 ó 2 gotas de solución lugol a la preparación, y dejar actuar 1 minuto.

Transcurrido el tiempo, lava.7. Con cuidado, añadir gota a gota el alcohol-acetona lavando la preparación

durante 10 segundos.8. Añadir el colorante de contraste, safranina (1 ó 2 gotas) y dejar actuar durante

30 segundos. Lava con la pizeta.9. Dejar secar al aire y observar al microscopio, siguiendo la técnica de la práctica

anterior para enfocar correctamente. Observar con el objetivo de inmersión.OBTENCIÓN DE CULTIVO PURO1. Tomar con el asa una porción de una colonia de la placa.2. Sembrar en estría en el tubo de ensayo con medio inclinado.3. Incubar a 37°C por 24 horas.

J. BIBLIOGRAFÍA

PRÁCTICA N° 05

9. Aquiahuatl M. 2004. Manuel de Prácticas - Laboratorio de Microbiología General. Universidad Autonoma Metropolitano- México.

10. BROCK, TH. D: 1998. Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.