Darwin Sáez Laboratorio De Nutrición Animal

Temas: Determinación de Proteína

Objetivos: Determinar la cantidad de proteína bruta en alimentos ( vicia y balanceado) para animales

mediante el método de Kjeldahl.

PRINCIPIO:

Mediante digestión caliente con H2S04 concentrado y catalizador, el nitrógeno amínico,

imínico y de otros tipos que contiene la muestra se convierte en (NH4)2S04, que

posteriormente por acción de un álcali fuerte (NaOH) se descompone liberando amoniaco

(NH3) que se destila y se recoge en ácido bórico. Finalmente el ácido proporcional a la

cantidad de nitrógeno es valorado por retroceso con un ácido normalizado y a partir de la

cantidad de ácido que ha reaccionado con el amoniaco, se calcula la cantidad de nitrógeno que

mediante multiplicación por un factor, se obtiene la cantidad de proteína bruta.

Equipo y materiales:

Destilador Kjeldahl

Bloque digestor

Sorbona

Balanza Analítica

Bureta

Erlenmeyer 250 mi

Tubos Kjeldahl

Gradilla

Fundamento teórico

El término proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en

1838, tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel

primario .(2)

Las proteínas como un grupo de biomoleculas , desempeñan una gran variedad de funciones ,

algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras

trasportan y almacenan moléculas pequeñas.(2)

Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica) son proteínas al

igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.(2)

Las proteínas pueden llevar a cabo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de

combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.

La diversidad que presentan las proteínas está en relación con la gran variedad de funciones de

que son responsables en nuestro metabolismo. Sus moléculas están constituidas por unidades,

aminoácidos, a modo de piezas de mecano que, una vez desarmado, son utilizadas por nuestro

organismo para construir las suyas propias y poder desarrollar multitud de funciones im-

portantísimas en nuestro metabolismo.(3)

Tabla 1. Contenido de proteína (%) en diferentes pastos

Fuente: Laboratorio de Nutrición EESC-INIAP. Elaborado: Jorge Grijalva

Ms: Materia seca, PC: Proteína cruda, PD: Proteína digestible, PNDR: proteína no digerible

Tabla 2. Contenido de proteína (%) en diferentes marcas de balanceados

MS PC PD PND

trebol blanco+pasto azul+alfalfa. Ray grass 22,45 20,6 15 5,6

Alfalfa plena floración 24,6 22,3 17,3 5

Alfalfa despues de la floración 27,6 22,9 16,5 6,4

Avena antes de la floración 24,7 7,5 4,3 3,2

Avena Inicio de la floración 27,4 5,7 2,7 3

Cebada, antes de la floración 20,4 8,8 5,4 3,4

Centeno, antes de la floración 20,3 9,3 5,8 3,5

Holco, antes de la floración 25 14,1 8,8 5,3

Holco, inicio de la floración 28,8 14,2 8,1 6,1

Kikuyo, antes de la floración 22,4 15,3 9,7 5,6

Kikuyo, inicio de la floración 21,3 15 9,3 5,7

Pasto azul antes de la floración 24,4 16,5 8,7 7,8

Pasto azul inicio de la floración 24,5 14,5 7,8 6,7

Rye grass perenne antes de la floración 17,2 19,5 14,6 4,9

Rye grass perenne inicio de la floración 23,5 17,5 13,1 4,4

Rye grass bianual antes de la floración 21,3 14,7 11 3,7

Rye grass bianual inicio de la floración 25 11,3 8,4 2,9

Trebol blanco antes de la floración 20,5 25,5 21,1 4,4

Trebol blanco inicio de la floración 18,8 24,8 19,8 5

Trebol rojo antes de la floración 21,2 24,9 20,7 4,2

Trebol rojo inicio de la floración 21,4 22,1 18,3 3,8

Vicia antes de la floración 19,7 25,2 18,9 6,3

%PASTOS

humedad MS PB

% % %

la fortaleza 12 88 16

winavacas estandar 13 87 14

winavaca energía 13 87 13

wayne 13 87 14

super lechero 13 87 14

super lechero AP 13 87 16

super lechero praderas 13 87 14

nutrifot leche TDN 68 13 87 16

winavacas producción 13 87 16

lechero plus 13 87 12

nutrifot leche TDN 75 13 87 18

nutrifort leche TDN 78 13 87 18

fortyvaca 13 87 18

winavaca alta producción 13 87 18

BALANCEADOS

Método Kjeldahl

Actualmente todos los métodos para determinar el contenido proteico total de los alimentos

son de naturaleza empírica. Un método absoluto es el aislamiento y pesado directo de la

proteína pero dicho método se utiliza sólo a veces en investigaciones bioquímicas debido a

que es dificultoso y poco práctico. (4)

En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad

para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno

orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los

alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno

orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio. La mezcla digerida

se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución

de ácido bórico. Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (H2SO4) estandarizado

para determinar el nitrógeno contenido en la muestra.(4)

Cálculos Y Resultados

Fuente: Darwin Sáez

Nitrógeno %= N ac X Vac X eq ac

Peso muestra

Nitrógeno %= 0,0494 X 0,1134 X 14

0,2043

Nitrógeno %= 3,838

Proteína% = % nitrógeno X k(factor de proteína)

Proteína% = 3,838 X 6,25

Proteína%= 23,99

# muestra descripción peso de muestra(g) volumen titulación(L) factor de prot peso equi % N % proteina

1 vicia 0,2043 0,01134 6,25 14 3,84 23,99

2 vicia 0,202 0,01131 6,25 14 3,87 24,2

2 balanceado 0,2054 0,0088 6,25 14 2,96 18,52

4 control 12,42 6,25 14 4,29 26,84

Cuadro 1. resultados de la determinación de proteína en las muestras de balanceado y vicia en el laboratorio de FCA-UCE

X 100

X 100

Resultados:

Después de haber realizado los cálculos necesarios se puede apreciar en el cuadro 1, las

muestras de vicia que presenta para muestra 1 un 23,99% y para la dos 24,2% de proteína, la

diferencia entre las dos muestras es de 0,21 % de proteína lo cual indique no existe un mal

manejo de las muestras en laboratorio, sabiendo que la diferencia entre los resultados de dos

determinaciones efectuadas una después de otra, por el mismo analista, no debe exceder 0.06

% de Nitrógeno o 0.38 % de proteína. (1)

Del balanceado no se puede efectuar este análisis ya que la muestra 1 se echó a perder en la

práctica.

Conclusiones:

Después de haber establecido cuál de las dos muestras vicio o balanceado tiene la mayor

cantidad de proteína presente en la misma, se puede concluir que la vicia es una fuente muy

importante de proteína ya que presenta un 24% por lo cual se la puede ocupar en diferentes

potreros en combinación con otros cultivos para realizar una mezcla forrajera para

alimentación de animales según su demanda nutricional.

El balanceado como su mismo nombre lo indica se encuentra en un balance entre los

diferentes compuestos que lo forman, por lo que es ideal para ser consumido por los animales

dependiendo así mismo de sus requerimientos nutricionales.

Cuestionario

1. Porque es importante la proteína en una dieta alimenticia

La diversidad que presentan las proteínas está en relación con la gran variedad de

funciones de que son responsables en nuestro metabolismo. Sus moléculas están

constituidas por unidades, aminoácidos, a modo de piezas de mecano que, una vez

desarmado, son utilizadas por nuestro organismo para construir las suyas propias y

poder desarrollar multitud de funciones importantísimas en nuestro metabolismo.

Desde las funciones estructurales y mecánicas (músculos, tendones y ligamentos), las

reguladoras (enzimas y hormonas), de transporte (hemoglobina) y tantas otras, sin

obviar que, aún no específicamente destinadas a esta finalidad, también pueden

actuar como fuente energética proporcionando 4 kcal/g (el mismo valor que el de los

hidratos de carbono).(3)

2. Consultar 5 factores de proteína para diferentes productos

6.25: para carne, pescado, huevo, leguminosas y proteínas en general

5.7 : para cereales y derivados de soya

6.38: leche

5.55: gelatina

5.95: arroz (1)

Bibliografía:

1. INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE, 2014. DETERMINACIÓN DE PROTEINAS

Método Kjeldahl (en línea).consultado el 6 de febr. 2015. Disponible en

http://www.ispch.cl/lab_amb/met_analitico/doc/ambiente%20pdf/Proteina.pdf

2. El Rincon del Vago, 2015. Determinación de proteínas(en línea). Consultado en 6 de

febr. del 2015. Disponible http://html.rincondelvago.com/determinacion-de-

proteinas.html

3. Fundación Triptolemos.2015. La importancia de las proteínas en los alimentos (en

línea). Consultado en 6 de febr. del 2015. Disponible en

http://www.triptolemos.org/archivos/La_importancia_de_las_proteinas.pdf

4. Francisco Santiago. Engineering Department.2011. Determinacion De Proteinas Por El

Metodo De Kjeldahl / Kjeldahl Method For Protein Determination(en línea).

Consultado el 6 de febr. Del 2015. Disponible en http://www.grupo-

selecta.com/notasdeaplicaciones/analisis-alimentarios-y-de-aguas-nutritional-and-

water-analysis/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-kjeldahl-kjeldahl-

method-for-protein-determination/