UNIDAD 5.

CONTROL DE CALIDAD, GESTION Y ADQUISION DE CONSUMIBLES DE LABORATORIO.

Normas de Bioseguridad.

Código De Prácticas

Este código es una enumeración de las prácticas y los procedimientos de laboratorio esenciales que constituyen la base de las técnicas microbiológicas apropiadas. En muchos laboratorios y programas nacionales, este código puede utilizarse para elaborar una guía escrita de prácticas y procedimientos para el trabajo de laboratorio en condiciones de seguridad. Cada laboratorio debe adoptar un manual de seguridad o de trabajo en el que se identifiquen los riesgos conocidos y potenciales y se especifiquen las prácticas y los procedimientos encaminados a eliminar o reducir al mínimo esos riesgos. Las técnicas microbiológicas apropiadas son fundamentales para la seguridad en el laboratorio y no pueden sustituirse por equipo de laboratorio especializado, que no pasa de ser un complemento. A continuación se exponen los conceptos más importantes.

Acceso

1. El símbolo y signo internacional de peligro biológico deberá colocarse en las puertas de los locales donde se manipulen microorganismos del grupo de riesgo 2 o superior.

2. Sólo podrá entrar en las zonas de trabajo del laboratorio el personal autorizado.

3. Las puertas del laboratorio se mantendrán cerradas.

4. No se autorizará ni permitirá la entrada de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.

5. El acceso a los locales que alberguen animales habrá de autorizarse especialmente.

6. No se permitirá el acceso al laboratorio de animales que no sean objeto del trabajo del laboratorio.

Protección personal

1. Se usarán en todo momento monos, batas o uniformes especiales para el trabajo en el laboratorio.

2. Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan entrañar contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros materiales potencialmente infecciosos o animales infectados. Una vez utilizados, los guantes se retirarán de forma aséptica y a continuación se lavarán las manos.

3. El personal deberá lavarse las manos después de manipular materiales y animales infecciosos, así como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.

4. Se usarán gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de protección cuando sea necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de radiación ultravioleta artificial.

5. Estará prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo en cantinas, cafeterías, oficinas, bibliotecas, salas para el personal y baños.

6. No se usará calzado sin puntera.

7. En las zonas de trabajo estará prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o manipular lentes de contacto.

8. Estará prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de trabajo del laboratorio.

9. La ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos armarios o taquillas que la ropa de calle.

Procedimientos

1. Estará estrictamente prohibido pipetear con la boca.

2. No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas.

3. Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la formación de aerosoles y gotículas.

4. Se limitará el uso de jeringuillas y agujas hipodérmicas, que no se utilizarán en lugar de dispositivos de pipeteo ni con ningún fin distinto de las inyecciones por vía parenteral o la aspiración de líquidos de los animales de laboratorio.

5. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio. Se mantendrá un registro escrito de esos accidentes e incidentes.

6. Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.

7. Los líquidos contaminados deberán descontaminarse (por medios químicos o físicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento. Puede ser necesario un sistema de tratamiento de efluentes, según lo que indique la evaluación de riesgos del agente con el que se esté trabajando.

8. Los documentos escritos que hayan de salir del laboratorio se protegerán de la contaminación mientras se encuentren en éste.

Zonas de trabajo del laboratorio

1. El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo.

2. Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.

3. Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados deberán ser descontaminados antes de eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.

4. El embalaje y el transporte de material deberán seguir la reglamentación nacional o internacional aplicable.

5. Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que impidan el paso de artrópodos.

Gestión de la bioseguridad

1. Incumbirá al director del laboratorio (la persona que tiene responsabilidad inmediata respecto del laboratorio) garantizar la elaboración y la adopción de un plan de gestión de la bioseguridad y de un manual de seguridad o de operación.

2. El supervisor del laboratorio (que dependerá del director) velará por que se proporcione capacitación periódica en materia de seguridad en el laboratorio.

3. Se informará al personal de los riesgos especiales y se le exigirá que lea el manual de seguridad o de trabajo y siga las prácticas y los procedimientos normalizados. El supervisor del laboratorio se asegurará de que todo el personal los comprenda debidamente. En el laboratorio estará disponible una copia del manual de seguridad o de trabajo.

4. Habrá un programa de lucha contra los artrópodos y los roedores.

5. Se ofrecerá a todo el personal en caso de necesidad un servicio apropiado de evaluación, vigilancia y tratamiento médico, y se mantendrán los debidos registros médicos.

Diseño e instalaciones del laboratorio

Al diseñar el laboratorio y asignarle determinados tipos de trabajo, se prestará especial atención a aquellas condiciones que se sepa que plantean problemas de seguridad. Entre ellas figuran:

1. La formación de aerosoles.

2. El trabajo con grandes cantidades o altas concentraciones de microorganismos.

3. El exceso de personal o de material.

4. La infestación por roedores y artrópodos.

5. La entrada de personas no autorizadas.

6. El circuito de trabajo: utilización de muestras y reactivos concretos.

En las figuras 2 y 3, respectivamente, aparecen ejemplos de diseños de laboratorios de los niveles de bioseguridad 1 y 2.

Características de diseño

1. Se dispondrá de espacio suficiente para realizar el trabajo de laboratorio en condiciones de seguridad y para la limpieza y el mantenimiento.

2. Las paredes, los techos y los suelos serán lisos, fáciles de limpiar, impermeables a los líquidos y resistentes a los productos químicos y desinfectantes normalmente utilizados en el laboratorio. Los suelos serán antideslizantes.

3. Las superficies de trabajo serán impermeables y resistentes a desinfectantes, ácidos, álcalis, disolventes orgánicos y calor moderado.

4. La iluminación será adecuada para todas las actividades. Se evitarán los reflejos y brillos molestos.

5. El mobiliario debe ser robusto y debe quedar espacio entre mesas, armarios y otros muebles, así como debajo de los mismos, a fin de facilitar la limpieza.

6. Habrá espacio suficiente para guardar los artículos de uso inmediato, evitando así su acumulación desordenada sobre las mesas de trabajo y en los pasillos. También debe preverse espacio para el almacenamiento a largo plazo, convenientemente situado fuera de las zonas de trabajo.

7. Se preverán espacio e instalaciones para la manipulación y el almacenamiento seguros de disolventes, material radiactivo y gases comprimidos y licuados.

8. Los locales para guardar la ropa de calle y los objetos personales se encontrarán fuera de las zonas de trabajo del laboratorio.

9. Los locales para comer y beber y para descansar se dispondrán fuera de las zonas de trabajo del laboratorio.

10. En cada sala del laboratorio habrá lavabos, a ser posible con agua corriente, instalados de preferencia cerca de la salida.

11. Las puertas irán provistas de mirillas y estarán debidamente protegidas contra el fuego; de preferencia se cerrarán automáticamente.

12. En el nivel de bioseguridad 2 se dispondrá de una autoclave u otro medio de descontaminación debidamente próximo al laboratorio.

13. Los sistemas de seguridad deben comprender medios de protección contra incendios y emergencias eléctricas, así como duchas para casos de urgencia y medios para el lavado de los ojos.

14. Hay que prever locales o salas de primeros auxilios, convenientemente equipados y fácilmente accesibles.

15. Cuando se planifique una nueva instalación, habrá que prever un sistema mecánico de ventilación que introduzca aire del exterior sin recirculación. Cuando no se disponga

de ventilación mecánica, las ventanas deberán poder abrirse y, a ser posible, estarán provistas de mosquiteras.

16. Es indispensable contar con un suministro regular de agua de buena calidad. No debe haber ninguna conexión entre las conducciones de agua destinada al laboratorio y las del agua de bebida. El sistema de abastecimiento público de agua estará protegido contra el reflujo por un dispositivo adecuado.

17. Debe disponerse de un suministro de electricidad seguro y de suficiente capacidad, así como de un sistema de iluminación de emergencia que permita salir del laboratorio en condiciones de seguridad. Conviene contar con un grupo electrógeno de reserva para alimentar el equipo esencial (estufas, CSB, congeladores, entre otros), así como para la ventilación de las jaulas de los animales.

18. Es esencial un suministro fiable y adecuado de gas. La instalación debe ser objeto del debido mantenimiento.

19. Tanto los laboratorios como los locales destinados a los animales son a veces objeto de actos de vandalismo. Hay que prever sistemas de protección física y contra incendios. Cabe mejorar la seguridad reforzando las puertas, protegiendo las ventanas y limitando el número de llaves en circulación. Se podrán estudiar y aplicar otras medidas, según proceda, para incrementar la seguridad.

De la Higiene y Seguridad

El lugar deberá mantenerse ordenado, limpio y libre para la circulación.

Se prohíbe cualquier actividad que conlleve riesgo de contaminación, biológico o químico.

Se seguirán las normas de Higiene y Seguridad para la manipulación de sustancias, uso de equipos y descarte de residuos que rigen en la FCEyN, así como la prohibición de fumar, comer y beber dentro del laboratorio (Res. CD. 53/98).

Esta estrictamente prohibido el ingreso, uso o manipulación de sustancias radioactivas.

Particularmente se recuerda:

1. La manipulación de sustancias químicas se realizará bajo la campana.

2. Uso de la campana:

- encenderla 15 minutos antes de su empleo.

- mantener el vidrio lo más bajo posible mientras está manipulando material bajo la campana. Mantener la cabeza fuera de la campana.

- trabaje al menos 15 cm hacia adentro de la campana.

- bajar el vidrio totalmente cuando deja material evaporando.

- apagarla al terminar de utilizarla. Tardará unos 15 minutos en detener el motor.

- dado el uso comunitario, no se permite dejar ningún elemento de trabajo dentro de la campana.

3. Limpiar todo lo que ensucie, barrer cuando se caiga resina o parafina al piso. Se dispone de escobillón, pala y tacho para residuos.

4. Descarte de líquidos: traiga su propio bidón (cada usuario deberá procurarlo del Servicio de Higiene y Seguridad), anotar en su exterior el/los líquidos que contendrá. Una vez que finalice con el uso, ciérrelo bien y retírelo del Laboratorio de Histología. Manténgalo en su laboratorio hasta el descarte. Cuide las mezclas químicas.

6. Descarte de sólidos: traiga su propia caja con bolsa negra (cada usuario deberá procurarlas del Servicio de Higiene y Seguridad). Una vez que finalice con el uso, ciérrela y retírela del Laboratorio de Histología. Manténgalo en su laboratorio hasta el descarte.

7. Descarte de vidrios, agujas y elementos punzantes/cortantes: deberán ser descartados en recipientes especiales dispuestos para tal fin en el laboratorio de cada usuario.

8. En caso de derrame se deberá contener el mismo con los elementos disponibles en el gabinete anti-derrames ubicado en la Secretaría de Carrera de Ciencias Biológicas.

9. En caso de incendio se deberán emplear los matafuegos más próximos al laboratorio.

10. El nivel de bioseguridad con el que se trabajará en el laboratorio es exclusivamente 1 (no virus, ni bacterias ni patogénicos).

CLASIFICIÓN DE MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO DE HISTOLOGIA.

PAPEL FILTRO.

El papel filtro es un papel utilizado como tamiz que se usa principalmente en el laboratorio para filtrar. Es de forma redonda y este se introduce en un embudo, con la finalidad de filtrar impurezas insolubles y permitir el paso a la solución a través de sus poros. También son utilizados para la exhibición de muestras sobre él. Existen de distintos tamaños y proporciones.

CASETES DE INCLUSION.

Fabricados en polioximetileno (POM), totalmente resistentes a los disolventes orgánicos y a los agentes decalcificantes utilizados en las técnicas histológicas.

Con amplias superficies de rotulación para una correcta identificación de las muestras.

ANILLOS DE INCLUSIÓN.

Fabricados en plásticos ABS de alta calidad, Superficie de rotulación para una perfecta identificación de las muestras. Dimensiones base 40x28mm; dimensiones del anillos 25x25 mm. Caja de 1000 unidades.

MOLDES DE INCLUSIÓN.

Para la confección de los bloques de parafina durante el proceso de muestras. Moldes hechos en acero inoxidable, pueden ser reutilizados indefinidamente. Compatibles con los casetes y anillos de inclusión.

PINZAS.

Hay varios tipos de pinzas como, pinzas de punta curva, pinzas de punta recta, pinzas de punta plana y ancha, pinzas de punta fina, son fabricadas en acero inoxidable, con puntas estriadas y ranuras antideslizantes, para la ayuda de los tejidos.

PORTAOBJETOS ESTÁNDAR, CAJA DE 50 UNIDADES.

Especificaciones:

Ref. 052-30532120: Portaobjetos esmerilados 90º, banda mate. Caja de 50 unidades.

Medidas: 26x76 mm. Espesor: 1/1,2 mm. Esmerilados al agua. Banda mate a doble cara.

Ref. 052-30532010: Portaobjetos bordes cortados 90º. Caja de 50 unidades.

Medidas: 26x76 mm. Espesor: 1/1,2 mm. Ref. 052-30542020: Portaobjetos esmerilados, superficie hidrofílica. Caja de 50

unidades. Superficie hidrofílica. Garantiza una óptima aplicación de la muestra sobre el portaobjetos. Bordes esmerilados. Ángulo: 90º. Medidas: 26x76 mm. Espesor: 1,1 mm.

Apto para biología humana.

Parafina: Es una sustancia formada por cadenas alifáticas de carbono, saturadas con H, cuya fórmula general es (CnH2n+2), donde n es el número de átomos de carbono. Su punto de fusión y ebullición se sitúa entre 45º y 60º C, dependiendo de la longitud de sus cadenas que pueden oscilar entre C22 hasta C28.

La parafina o cera de parafina, a temperatura ambiente, es un sólido con aspecto de cera de color blanco, inodoro e insípido. Es insoluble en agua, pero soluble éter, benceno, xileno y tolueno, así como algunos ésteres. La parafina no se afecta por los reactivos químicos más comunes, pero se quema con facilidad. Es el medio de inclusión más

utilizado en los laboratorios de histología y de anatomía patológica.

Paraplast: Mezcla de parafina muy pura con diferentes polímeros. Su coloración es muy blanca y funde a 57º C. Tiene la peculiaridad de no fragmentarse y no necesitar ser enfriada para ser cortada con el micrótomo. Su uso es el mismo que el de la parafina, aunque menos generalizado.

Celoidina: Insustituible para incluir ciertos materiales como ojos, vasos, embriones, etc. Se trata de di nitrito de celulosa o colodión y se obtiene por acción del ácido nítrico diluido sobre la celulosa. Es ideal también para cortar grandes piezas.

Gelatina: Es una sustancia semisólida, incolora y transparente formado por el colágeno obtenido por la cocción del tejido conectivos de los despojos animales (pequeños fragmentos de hueso y cartílago). No se precisa de la deshidratación cuando se utiliza la gelatina. Es especialmente útil en el estudio del tejido adiposo. Produce escasa retracción de los tejidos.

Plásticos y resinas: Utilizados especialmente para obtener cortes muy finos. Si los cortes son para su observación en el microscopio electrónico de transmisión, deben ser muy finos (entre 60 y 100 nm) por lo que se les denomina cortes ultra finos (thin sections, en inglés). Si son para su observación con microscopio óptico, se habla de cortes semifinos (semithin sections, en inglés) y su espesor oscilará entre 0,5 µm y 1 µm.

PIPETAS PASTEUR.

Para transferir líquidos de forma segura y práctica, SARSTEDT le ofrece una amplia gama de pipetas de transferencia.

Las pipetas Pasteur desechables son adecuadas para multitud de usos, sin peligro de heridas ni de infección por rotura del cristal.

Como artículos de un solo uso, las pipetas evitan el arrastre de porciones residuales.

La graduación es muy práctica para la repartición de las muestras. El posible cierre por sellado de la punta de la pipeta guarda los remanentes en la pipeta.

Existen modelos estériles para la transferencia de líquidos en condiciones estériles, disponibles por unidades o en paquetes de 10.

Fabricadas en polietileno, no dañan el medio ambiente y se pueden eliminar sin problemas.

ARCHIVADOR PARA HISTOLOGÍA. METÁLICO DE BLOQUES.

Archivador metálico para bloques parafina. 6 cajones por archivador 12 guías por cajón Capacidad: 4800 bloques Dimensiones: 48x45x39 cm Apilables

EQUIPOS.

Para estudiar la estructura de las células, tejidos y órganos que constituyen los componentes del cuerpo humano y organismos pluricelulares, el hombre ha desarrollado diversos métodos y técnicas, y ha ido perfeccionando los instrumentos necesarios para conocer con más profundidad la morfología y función de los diferentes niveles de organización de la materia. Es pues importante conocer, antes de estudiar la estructura y la composición de las células y los tejidos, algunos métodos, técnicas e instrumentos de los que se dispone para llegar a estos conocimientos.

OBSERVACIÓN MICROSCOPICA A finales del siglo XVI los hermanos Hans y Zacarías Janssen, construyeron el primer microscopio compuesto. Galileo, que es conocido por sus estudios de Astronomía, fue uno de los primeros investigadores que utilizó el microscopio para fines científicos. El empleo del microscopio originó nuevos términos, tales como el de célula (empleado por Robert Hooke, 1635-1703) y las primeras descripciones y grabados de organismos microscópicos (como los realizados por Leeuwenhoeck, 1632-1723); este último empleó lentes compuestas en la observación de protozoarios y otros organismos unicelulares. El ojo humano es capaz de discriminar dos puntos que se encuentren separados por una distancia mayor de 0.1 mm solamente. Esto constituye un obstáculo para el estudio de las estructuras internas de la célula y es por esto que es necesario el empleo de equipos que aumenten la resolución. La posibilidad de un sistema óptico de distinguir por separado (resolver) dos puntos muy cercanos, se denomina poder de resolución. El poder de resolución en los microscopios, está en relación inversa con la longitud de onda de la radiación empleada en la fuente de iluminación. La resolución del microscopio óptico aumenta y alcanza su límite cuando se utiliza como fuente de iluminación la luz ultravioleta, producto de su pequeña longitud de onda. El microscopio óptico fue perfeccionándose hasta llegar a los modelos actuales, que pueden alcanzar hasta 0.2 µm de resolución.

A mediados del siglo XX, se inventó un tipo de microscopio que utiliza como fuente de iluminación los electrones. Con este equipo se puede realizar un estudio más detallado de la célula y los elementos subcelulares, moleculares y atómicos. El microscopio electrónico al emplear una fuente de emisión de electrones, de una longitud de onda de 0.005 nm, puede alcanzar valores resolutivos mucho mayores que el alcanzado por los microscopios ópticos. El límite de poder de resolución del microscopio electrónico es de 0.2 nm.

Actualmente se utilizan las siguientes unidades de medidas

µm - micrómetro (antes, micra)

nm - nanómetro (antes, milimicra)

0.1 nm = 1 Å (antes, Amstrong)

TIPOS DE MICROSCOPIOS

Existen diversos tipos de microscopios, los cuales describiremos brevemente señalando sus características fundamentales.

MICROSCOPIO ÓPTICO DE CAMPO BRILLANTE Este tipo de microscopio utiliza como fuente de iluminación la luz visible. Cuando la muestra a observar es transparente a la luz empleada, el haz luminoso la atraviesa iluminando el campo que se quiere observar. Aquí se emplea un sistema de iluminación de luz transmitida.

Este tipo de microscopio, se encuentra formado por un sistema de iluminación compuesto por una fuente de luz que puede ser emitida por una lámpara incandescente, en la base del equipo, o proyectada por un espejo. Este haz de luz atraviesa una lente condensadora que lo concentra sobre la muestra, para obtener una iluminación óptima de la misma. Otra parte importante del equipo es el sistema óptico, el cual está constituido por varias lentes las que están diseñadas y construidas para evitar o corregir los defectos y las aberraciones que pueden producirse durante la proyección de la imagen.

La lente objetivo recibe este nombre por ser la que se encuentra más cerca del objeto a examinar. Esta lente forma una imagen primaria ampliada del objeto, en el plano focal de una segunda lente compuesta, la lente ocular, que recibe este nombre por estar cerca del ojo del observador. La lente ocular amplia la imagen primaria y forma una final ampliada en la retina del observador. Además del sistema de iluminación y del sistema óptico, en el microscopio existe un sistema mecánico que está constituido por aquellas partes que sostienen los sistemas de lentes y de la muestra, y que además sirve para el enfoque y el movimiento de la muestra bajo el objetivo. Este tipo de microscopio puede trabajar acoplado a distintos instrumentos, uno de ellos, el micro manipulador, que permite mediante movimientos en los distintos planos del espacio, y de una forma muy precisa, hacer disecciones sobre tejidos y células, introducir micro pipetas y micro electrodos para suministrar sustancias o medir potenciales eléctricos en las células.

El esquema básico del microscopio de campo brillante, sirve para el estudio de los diferentes microscopios ópticos, los que al presentar un aditamento, dispositivo o accesorio adicional permitirá una observación más especializada; por ejemplo, el invertido, el de polarización, el de fluorescencia, el de contraste de fase, etc. Debido a esto es importante estudiar detenidamente las partes de que consta un microscopio óptico de campo brillante, para así comprender mejor el funcionamiento de los microscopios ópticos más especializados que serán descritos posteriormente

MICROSCOPIO ÓPTICO DE CONTRASTE DE FASE. Cuando una muestra, por ejemplo una célula, debe ser observada viva, no se puede procesar por ninguna de las técnicas que serán descritas más adelante (inclusión, corte y coloración) y, por tanto, al ser vistas en un microscopio de campo brillante, serían pocos los detalles observables de la muestra. Para una visualización con suficiente contraste, se utiliza un microscopio especial que tiene un dispositivo que transforma las diferencias de fase de la longitud de onda de la luz empleada, en diferencias de amplitud. La luz, al atravesar una muestra, es desfasada normalmente con respecto a la luz que atraviesa el medio donde se encuentra dicha muestra (agua, aire, aceite. etc.). Este desfasaje es pequeño y el ojo humano no es capaz de distinguirlo; ahora bien, mediante dispositivos que existen en los llamados microscopios de contraste de fase, la diferencia de fase se aumenta lo suficiente como para que el ojo lo distinga, pudiéndose apreciar distintas intensidades de luz que van desde la oscuridad hasta el brillo intenso. Los diferentes tonos intermedios están determinados por las diferencias de espesor en la muestra.

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA Y DE FLUORESCENCIA La luz ultravioleta, que no es visible al ojo humano, pero que si se puede utilizar en microfotografía, tiene una longitud de onda muy corta (300 µm) y es absorbida por algunos componentes celulares como los ácidos nucleicos, o por determinadas sustancias que se le pueden suministrar a las células. El microscopio de luz ultravioleta puede utilizarse para la toma de microfotografías usando una película sensible a esta radiación, o mediante la visualización de las imágenes captadas por una cámara de televisión sensible a la luz ultravioleta. La luz ultravioleta, por ser una radiación de alta energía, se utiliza en las técnicas de fluorescencia que consisten en la excitación de los electrones de sustancias presentes en las células o tejidos, o que pueden ser suministrados previamente. Para esto se utilizan colorantes especiales o fluorocromos, los cuales, dependiendo del tipo empleado y de la energía de excitación, emitirán con

una longitud de onda que mediante filtros puede ser observado por ojo humano. Un ejemplo de esta técnica, consiste en suministrar a células vivas en cultivo o a animales de investigación vivos, uno de estos reactivos y examinar después al microscopio de fluorescencia el sitio donde este material se acumula, por ejemplo, usando naranja acridina como fluorocromo se puede demostrar la localización de ADN, al cual se le observa una fluorescencia de color verde naranja en el núcleo de las células que han captado dicho colorante.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN. Como ya tratamos, los electrones al tener una longitud de onda muy pequeña (0.005 nm) permiten a este instrumento un alto poder de resolución. El microscopio electrónico se asemeja en algunos aspectos al microscopio óptico, ya que consta de: a) sistema de iluminación; b) sistema de manipulación de la muestra; c) sistema de formación de la imagen; d) sistema de proyección de la imagen La fuente de iluminación es un fino filamento de tungsteno (cátodo) que al ser calentado por el paso de una corriente emite electrones, los cuales son desprendidos a gran velocidad al establecerse una diferencia de potencial eléctrico entre el cátodo y el ánodo (este se encuentra cerca del primero), pasando a través de este último por una apertura hacia una columna metálica hueca, donde existe un alto vacío para evitar que los electrones que viajan a través de ella sean difractados por moléculas extrañas. Una vez acelerados los electrones por el ánodo, a traviesan un campo magnético producido por la condensadora, la cual concentrarán los electrones en un haz fino y lo dirigirán hacia la muestra. Esta última se introduce dentro de la columna por un dispositivo especial que expone el objeto a estudiar al haz de electrones el cual constituye el sistema de manipulación de la muestra. La muestra se contrasta con sustancias que contienen metales pesados de alta densidad electrónica en sus átomos, los cuales presentan diversas afinidades por determinados componentes celulares; una vez que el haz de electrones atraviesa la muestra, los mismos chocan con la nube electrónica de estos compuestos que se han depositado sobre los componentes celulares lo que produce un retardo y dispersión de la trayectoria de alguno de los electrones, mientras que otros continuarán su trayecto hasta llegar a la pantalla fluorescente, donde se forma la imagen. El dispositivo con la muestra puede moverse en distintas direcciones en un plano perpendicular al eje de la columna o puede ser ligeramente inclinado para algunos estudios en que se requiere este movimiento. Luego de atravesar la muestra, los electrones pasan inmediatamente a través de la lente objetivo, donde se forma una imagen primaria invertida, la cual es rectificada por una lente intermedia y proyectada hacia una pantalla fluorescente, formando la imagen final aumentada al chocar los electrones y producirse una emisión de ondas en el rango de la luz visible. Por debajo de esta pantalla existe una cámara fotográfica donde se registran las imágenes, una vez retirada la pantalla fluorescente.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO. Existe otro tipo de microscopio electrónico que recibe el nombre de microscopio electrónico de barrido y que se basa en el estudio de los electrones reflejados por una superficie. Un dispositivo integra la imagen, la cual se observa en un sistema de televisión; mediante este equipo es posible estudiar la estructura tridimensional de las superficies; por ejemplo, los cilios de una

célula, la forma bicóncava de los hematíes, etcétera. Este tipo de microscopio electrónico, dado su poder de resolución (alrededor de 20 nm o más), permite el estudio detallado de estructuras cuyas dimensiones se encuentran entre los límites de resolución del microscopio óptico (0.2 µm) y el microscopio electrónico de transmisión que puede alcanzar de 0.3-0.1 nm.

UNIDAD DISPENSADORQA DE PARAFINA.

Indispensable en laboratorios de histología y anatomía patológica para el proceso de inclusión de tejidos en bloques de parafina para su posterior corte con el micrótomo.

Regulación independiente de la temperatura de las distintas zonas del equipo(plataforma de trabajo, depósito de parafina, depósitos para moldes y casetes y grifo dispensador). La temperatura en cada una de las partes es regulable entre 55 ºC y 70 ºC en pasos de 5 ºC.

Programación de inicio de funcionamiento en la hora y dia de la semana deseados para disponer del equipo siempre a punto para su utilización.

Plataforma de trabajo con amplia superficie de granito de fácil limpieza, área con regulación independiente de la temperatura y soporte para pinzas.

Sistema de drenaje que facilita la acumulación de la parafina sobrante en un deposito situado debajo de la plataforma de trabajo y fácilmente extraíble para su vaciado.

Soporte calefactor para pinzas, con capacidad para 6 pinzas, que permite tabajar cómodamente tanto con la mano derecha como con la izquierda.

La depósito de parafina de 2L situado en la parte superior ydos depósitos de 1L para moldes y casetes.

El grifo dispensador de parafina puede ser accionado manialmente o bien mediante un pedal suministrado con el equipo.

PLACA FRIA.

Especialmente diseñada para ser utilizada junto con la unidad dispensadora de parafina durante de cortes con el micrótomo.

Dispone de un marco alrededor de la superficie de acero inoxidable que mejora el rendimiento y previene el goteo de agua alrededor del equipo.

Temperatura hasta -20ºC. Dimensiones placa: 31x29.8 cm.

BAÑO TERMOSTATIZADO.

Baño termostatizado para cortes de parafina. Novedoso equipo de diseño y materiales, de alta estabilidad funcional y fácil manejo, que forma parte del instrumental empleado en Histología y Patología para el tratamiento de tejidos.

Amplio panel de control de fácil comprensión y manejo. Cubeta termostatizada para la solución de montaje que, a la temperatura

adecuada, permite la separación y posterior aplicación en el portaobjetos de la tira de cortes obtenida mediante el micrótomo.

Superficie en negro de la cubeta que permite una buena observación del corte.

Amplio borde térmico para un excelente secado de la preparación.

CARACTERÍSTICAS:

Capacidad: 2 L (aprox.)Temperatura: ambiente hasta 90 ºCPrecisión: -3/+5 ºCDimensiones cubeta: 24x18x5.4 cm.

CONTADOR DIGITAL LEUCOCITARIO.

El recuento de leucocitos en muestras de sangre es esencial para poder determinar anomalías que indiquen procesos patológicos como infecciones o leucemias. Para facilitar este recuento le ofrecemos un práctico contador digital equipado con teclas de recuento para 10 tipos leucocitarios distintos (basófilos, eosinófilos, monocitos, linfocitos, neutrófilos maduros e inmaduros, promielocitos, etc.) La pulsación de cada

tecla añade una unidad a su correspondiente pantalla y al recuento total. El contador presenta además función de puesta a cero y cálculo del porcentaje que representa cada tipo delular con respecto al total contabilizado.

CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS:

Rcuento: 0-1000 para cada tipo celular.Funciones: Recuento diferencial y total, porcentaje diferencial.

PLACA CALEFACTORA

En el laboratorio, las placas calefactoras se utilizan generalmente para calentar el  material de vidrio o su contenido. Poseen un selector de potencia que permite ajustar la emisión térmica y el tiempo necesario para calentar un determinado recipiente.

Una placa analógica típica tiene unas dimensiones aproximadas de 300 x 300 mm y una superficie de cerámica capaz de resistir el ataque químico. Alcanzan temperaturas máximas en la superficie de hasta 450 °C, aunque por lo general no se emplean temperaturas tan elevadas.

Sus aplicaciones son muy variadas, aunque predomina el calentamiento de recipientes con líquidos como vasos de precipitados, matraces de fondo plano. Se deben cumplir las instrucciones de uso y mantenimiento y cumplir los requisitos de seguridad para evitar accidentes.

Placa calefactora de laboratorio acoplada a un agitador magnético empleada para preparar sustancias químicas y disoluciones.

Algunas placas también contienen un agitador magnético, permitiendo que el líquido calentado se agite de forma automática si introducimos en él un pequeño imán o barra de agitación.

Temperatura de trabajo: hasta 400 °C. Plato calefactor: 450 x 600 mm. Platina superior en Aluminio reforzado. Control de temperatura automático digital. Corriente: 220 V. Potencia: 2400 W.

BALANZA DE PRECISIÓN.

La balanza PCE-BS 6000 es excelente para ser utilizada en sectores de producción, comercios, laboratorio y también en mercados en los que no se tenga suministro eléctrico ya que la balanza cuenta con baterías  para su funcionamiento. Además es una balanza con muy buena relación precio/rendimiento. Esta balanza tiene un plato de acero inoxidable removible canalizado, lo cual es útil para limpiar la balanza. 

Especificaciones

Ref.: 55062310

Fabricadas en plástico de alta calidad. Paravientos desmontable Plato de acero inoxidable, diámetro 13cm Sensor de bandas extensiométricas Pies regulables y burbuja de nivel Pesada en gramos, quilates, libras y onzas Función de tara, recuento de piezas y calibración Capacidad 1000 g Precisión: 0.01 g Rango tara 0-1000g Dimensiones 270x200x80mm Alimentación adaptador CA o pila 9V Incluida pesa externa para calibración automática

MICROTOMOS.

Tipos de micrótomos mecánicos o no manuales: Dependiendo de cómo hayamos obtenido el material (Figura 1) y de lo que se espere y desee obtener de él, al observar los cortes, la muestra deberá ser cortada con uno u otro tipo de micrótomo de los que a continuación se describen. A) Micrótomos de congelación: Si la forma de obtener los cortes es congelando la pieza, se puede hacer utilizando las siguientes variedades de micrótomos:

a) Micrótomo de congelación tradicional: Micrótomo que enfría la pieza produciendo nieve carbónica, al liberar CO2 de una botella cargada con éste gas. Una vez congelada la pieza, los cortes se obtienen deslizando horizontalmente, la cuchilla sobre la superficie de la pieza congelada. Los cortes obtenidos con este micrótomo son demasiado gruesos para la histología convencional (de 20 a 30µm), siendo difícil obtener cortes menores de 10µm. Actualmente se usa poco, salvo para algunos estudios histoquímicas, de neurofisiología o de carácter estructural con necesidad de cortes gruesos.

b) Criostato o criotomo :Otra forma de micrótomo de congelación es el criostato o criotomo en el que se alcanzan bajas temperaturas (-20ºC). Consta de un micrótomo de tipo Minot, incluido en una cámara de congelación. Permite realizar cortes de hasta 2 µm, mucho más delgados que los del micrótomo de congelación. Con ambos aparatos podemos obtener cortes tanto de material fijado como fresco.

Microtomos para bloques de parafina: Para cortes de parafina se pueden utilizar dos tipos diferentes de micrótomos:

a) Microtomos de rotación Son microtomos del tipo Leitz (de cuchilla fija) mejorados, conocidos como Universitat d´Alacant Departament de Biotecnologia 7 micrótomos de tipo Minot o de rotación o micrótomo para cortes seriados.Este micrótomo es uno de los más utilizados en los laboratorios de histología y anatomía patológica. Se caracteriza porque la cuchilla permanece fija mientras que el porta bloques, colocado verticalmente, se mueve de arriba abajo, delante del filo de la cuchilla, a la vez que se produce el avance de aquel hacia ésta. Los cortes de parafina suelen tener un espesor entre 4 y 6 µm. Los movimientos también pueden ser realizados por un pequeño motor eléctrico.

b) Microtomos de deslizamiento: En ellos el movimiento que produce el corte es un deslizamiento horizontal, de avance y retroceso, de la porción móvil del micrótomo (cuchilla o portabloques) sobre unas guías metálicas. Se utilizan poco, generalmente para obtener cortes de material "encastrado" (no incluido) en gelatina, o incluidos en celoidina.

Microtomos para bloques de resinas y plásticos (Ultramicrotomo): Cuando los cortes que se obtienen están por debajo de los 100 nm se habla de cortes ultrafinos y se usan en microscopia electrónica de transmisión. Los cortes de 0,5-2µm se denominan cortes semifinos. Ambos tipos, se obtienen con micrótomos de alta precisión o ultramicrotomos (Figura 8A), a partir de material incluido en resinas sintéticas o en plásticos. El ultramicrotomo, es una transformación del micrótomo tipo Minot con importantes mejoras. Entre ellas, el fino avance térmico del portamuestras hacia la cuchilla, lo que permite obtener cortes ultrafinos. El movimiento del portamuestras es automático y en general todo el instrumento está finamente monitorizado. Dado el pequeño tamaño de las piezas la observación de los cortes se controla mediante una lupa estereoscópica.

Vibratomos: El vibratomo (Figura 8B) es una forma de micrótomo que nos permite obtener finas rodajas de tejido tanto fresco como fijado. En este caso la pieza no debe ser incluida ni congelada. La cuchilla va penetrando en el tejido gracias a una vibración controlada de aquella. De esta manera se pueden obtener finas rodajas de tejidos frescos, mantenidos “vivos” mediante liquidos fisiológicos, lo que permite realizar estudios “in vitro” como: registros electrófisiológicos, estudios bioquímicos y moleculares, etc. Igualmente permite una mejor preservación molecular y estructural del espécimen al no ser congelado, fijado ni incluido. Es ampliamente utilizado en estudios inmunihistoquícos.

Cuchillas para la obtención de cortes de microscopía óptica: Las cuchillas de los microtomos son un elemento fundamental en la microscopía y presentan una gran variedad de varieddes atendiendo al tipo de material a cortar, al tipo de microscopio utilizado y a otros aspectos relacionados con la práctica habitual del laboratorio (económicos, funcionales, preventivos, etc.).

Dentro de las cuchillas de microtomo podemos encontrar las siguientes variedades:

A) Cuchillas desechables Son las que más se utilizan en la actualidad. Como su nombre indica se trata de cuchillas que o bien una vez utilizadas son eliminadas o tras un pequeño número de usos.

B) Cuchilla permanente: Son cuchillas de acero que a diferencia de las anteriores, tras una larga serie de cortes, se pueden afilar y volver a utilizar, así por muchos años.

Existen cuatro tipos básicos de cuchillas para los micrótomos empleados en la obtención de cortes de microscopia óptica: Tipos de cuchillas para la obtención de cortes de microscopía óptica. En el texto se recogen sus aplicaciones.

a) Bicóncava en ambas caras Para cortar bloques de parafina blanda en el micrótomo de balanceo o de rotación.

b) Planocóncavas: Dentro de este grupo hay dos variantes de tipo A y B, según sea mayor o menor el grado de concavidad de la cara no plana. La de tipo A se emplea para cortar bloques de parafina en el micrótomo de deslizamiento, mientras que las de tipo B se utilizan para cortar bloques incluidos en celoidina.

c) Biplanas en cuña: También denominadas en cuña o de tipo C. Se emplean indistintamente para realizar cortes de criostato o cortes de parafina con el micrótomo de tipo Minot. De los cuatro, es el tipo más utilizado.

d) Biplana con faceta o chaflán: Llamada también con faceta o de tipo D. Se emplea sobre todo para cortar tejido congelado con el micrótomo de congelación (con gas carbónico), o cuando el material a cortar es muy duro.

Campana de Bioseguridad: Permite efectuar reacciones en las que se desprenden gases tóxicos. Para evacuarlos están provistas de un extractor. Existen otras más sofisticadas cuya función es proteger al hombre y al ambiente cuando se trabaja con

microorganismos patógenos. Este equipo es usado cada vez mas en múltiples áreas clínicas ( ejemplo : farmacia, unidades de alimentación, etc)

http://www.sld.cu/galerias/pdf/sitios/histologia/metodos.pdf

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/18704/1/HISTOLOGIA_P2.pdf

http://www.quirumed.com/es/laboratorio/histologia?limit=12&p=1