METODOS EN ENDOCRINOLOGIA

Métodos para la detección hormonal• Muestra Biológica

• Ensayo químicos

• Estructura

• Bioensayos

• Función

• Mecanismo

• Estructura

• Inmunoensayos

• Estructura

• Histología

• Síntesis

• Órgano blanco

• Análisis de receptores

• Órgano blanco

• Mecanismos

Métodos para la detección hormonal

• Determinación químicos

• Estructura química, secuencia

• Medición de composición

• Cromatografía.Separa ácidos nucleicos, proteínas, azúcares. Se puede correlacionar la presencia de un compuesto en un fluido con la actividad del tejido u órgano.

• Existen varias matrices que separan los componentes según carga, tamaño, insolubilidad en agua o afinidad de unión con la matriz (beads unidos a anticuerpos o receptores). Este tipo de cromatografía es muy útil para purificar proteínas u otras moléculas que estan presentes en muy baja concentración.

• HPLC High Performance Liquid Chromatografy. Pueden visualizarse proteínas, lípidos, ADN, RNA u otros compuestos como residuos de antibióticos en los tejidos

• Electroforesis. Ampliamente usada en separ proteínas o ácidos nucleicos

• Medición de concentración

• Preparación de curvas estandares que permiten comparar concentraciones conocidas con las de una muestra desconocida

HPLC

•Determinación Biológica

•Bioensayos

•Actividad biológica

•Clara asociación de la hormona y del efecto biológico que produce

•La reacción biológica debe ser dosis dependiente (curva dosis respuesta)

•El material de prueba debe ser homogeneo

Relaciones dosis-respuesta

•Determinación Biológica

•Ensayo de receptores

•Estudio de la unión de una molécula con su receptor

•No mide receptores sino que sitios de unión. Para asegurarse que ese sitio de unión corresponde a un receptor debe caracterizarse.

•Sirve como complemento a los bioensayos

Medición de receptores

• Uso de anticuerpos

• Anticuerpos acoplados a reactivos que dan algún tipo de señal (color, fluorescencia)

• Anticuerpos Monoclonales

• Anticuerpos Policlonales

• Radioinmunoensayo (RIA)

• IRMA

• ELISA

• Fluorescencia

• Quimioluminiscencia

• Sistema Biotina-Avidina

Determinaciones inmunológicas

Principios del RIA

• RIA desarrollados en el laboratorio

• Testosterona

• Progesterona

• Estradiol (Coat-A-Count, y con antisuero)

• Cortisol

• Insulina (anticuerpo de cobaya contra insulina humana) (Antisuero)

• LH (iodación)

Determinaciones inmunológicas

Enzyme linked immunoabsorbent assay

• Medición de PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotropin) mediante ELISA en el Laboratorio

IRMA

Determinaciones Histológicas

Torres et al., 2003