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Manual de muestreo fitopatológico Fertilab

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INTRODUCCIÓN

La Fitopatología es la ciencia que estudia las enfermedades de las plantas considerando los

agentes causales, su interacción con los hospederos, así como su sintomatología y medios

de control. El control o tratamiento de las enfermedades en las plantas resulta del

diagnóstico de la muestra de tejido vegetal afectado. Por lo tanto, el diagnóstico

fitopatológico se refiere a la determinación del agente causal de una enfermedad y es una

de las bases indispensables para lograr un control eficaz, ya que, permite consultar

información específica del patógeno en cuestión y planear las medidas de control

adecuadas. Algunas enfermedades pueden ser identificadas fácilmente basándose en la

experiencia del técnico y en las particularidades de los patógenos que los hacen

inconfundibles, pero varias de ellas se confunden con anomalías nutrimentales o con

síntomas de otros fitopatógenos, y entonces el diagnóstico requiere de varios procesos:

colecta o muestreo, aislamiento e identificación del patógeno.

El muestreo fitopatológico inicia con una observación precisa de las alteraciones en la

planta, el cual debe realizarse por el personal que ha observado el desarrollo del cultivo

desde su establecimiento en campo o invernadero. La información requerida del personal

encargado considera la distribución del daño, es decir, si todas o solo algunas de las plantas

presentan la sintomatología de la enfermedad. Por lo tanto, la distribución de una

enfermedad varía de acuerdo con las siguientes circunstancias:

✓ Plantas enfermas en todo el lote.

✓ Plantas enfermas en una zona específica del lote.

✓ Plantas enfermas intercaladas con plantas sanas en todo el lote.

✓ Plantas enfermas intercaladas con plantas sanas en una zona específica del lote

como: hileras, bordes de la plantación, partes más bajas o distribuidas al azar.

En el diagnóstico de las enfermedades fitopatológicas es importante ubicar los puntos de

infección o infestación de la planta, ya que desde estos se extiende la enfermedad a toda la

planta. Estos puntos de infección nos permiten determinar el origen del patógeno, así como

la forma y medio de su dispersión. Por lo tanto, el diagnostico fitopatológico depende

principalmente de un correcto muestreo o colecta del material enfermo, ya que la muestra

determinará las técnicas que se aplicaran para una identificación acertada del patógeno. La

importancia del análisis de muestras vegetales con síntomas de daño por algún patógeno y

su identificación radica en las pérdidas económicas que puedan causar al disminuir el

rendimiento final del cultivo.




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ASPECTOS PRINCIPALES DEL MUESTREO FITOPATOLÓGICO

¿Dónde muestrear?

El muestreo para análisis fitopatológico debe realizarse en una zona dónde los cultivos

presentan un crecimiento y desarrollo anormal, es decir, las plantas presentan daños físicos,

crecimiento lento o dejan de crecer, amarillamiento o ennegrecimiento, u otra

característica que no es propia del cultivo. Los patrones de distribución de las enfermedades

ocasionadas por patógenos en las plantas son:

✓ En huertos o en césped, estas zonas suelen ser circulares.

✓ En algunos cultivos el patrón de distribución es siguiendo las filas.

✓ Raramente se produce un daño generalizado en toda una parcela.

¿Cuándo muestrear?

Las muestras de plantas se deben colectar una vez que haya síntomas característicos de la

enfermedad. El muestreo debe ser dirigido a la zona afectada en la planta, y siempre deberá

muestrearse tejido sano y tejido infectado.

Las muestras de suelo pueden ser colectadas en cualquier época del año, aunque se debe

evitar el muestreo en suelos excesivamente secos o mojados. Cuando se hace rotación de

cultivos, el muestreo debe realizarse cuando aún está el cultivo anterior, para saber si se

debe desinfectar antes de plantar el cultivo del año siguiente.

¿Cómo muestrear?

✓ No se debe tomar muestras en lotes con plantas muy afectadas o muertas.

✓ Las muestras de suelo siempre deben tomarse en la zona alrededor de las raíces de

las plantas afectadas o con poco desarrollo. Asimismo, la profundidad de muestreo

dependerá de la profundidad radical del cultivo, es decir, la profundidad de

muestreo es a la altura de las raíces.

✓ En lotes con cultivo, el muestreo de suelo se hace recorriendo toda la parcela.

✓ Para el análisis de nematodos en el suelo, nunca se debe incluir en la muestra suelo

de la parte superficial, dónde la temperatura y condiciones de humedad limitan las

poblaciones de estos organismos.




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MUESTREO VEGETAL PARA ANÁLISIS FITOPATOLÓGICO

Las enfermedades o anomalías fitopatológicas se presentan en hojas, raíces y tallos,

principalmente. Estas enfermedades se detectan cuando las plantas tienen un desarrollo

anormal (brotes, órganos y crecimiento en general) y ciertos síntomas como: tejido seco

(muerto), lesiones, decoloraciones o mosaicos, pigmentaciones, manchas, pudriciones,

marchitamientos, agallas, grietas, tumores, etc. (Ver Figura 1). Por lo tanto, es conveniente

conocer el mayor número de características de la muestra vegetal colectada para lograr una

correcta identificación del patógeno.

Figura 1. Síntomas y su ubicación en la planta (Traducido y modificado de Agrios, 2005).




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El muestreo de tejido vegetal inicia con la ubicación de la parte dañada de la planta o

detectando los indicios del daño del patógeno que ayude al laboratorio a diagnosticar la

muestra. Se recomienda colectar una cantidad suficiente de muestra, partes vegetales con

el síntoma observado y partes asintomáticas o no enfermas. Por su parte, las infecciones

virales frecuentemente causan alteraciones macroscópicas en las hojas, conocidas como

mosaicos. Asimismo, los síntomas locales en las hojas como lesiones cloróticas o necróticas

de tamaño y tipos diferentes dependen del huésped. Por lo tanto, algunos aspectos que se

deben considerar al momento del muestreo son:

1. Las muestras deben ser representativas del problema fitopatológico que se observa

en campo.

2. Los órganos o partes de la planta colectados deben mostrar los síntomas

característicos de la enfermedad en diferentes estados o grados de desarrollo de la

enfermedad.

3. El muestreo del tejido vegetal debe realizarse cuando las plantas se encuentran

secas, es decir, sin presencia de humedad por lluvia o rocío para evitar el desarrollo

de hongos y bacterias.

4. Cuando la enfermedad de la planta se debe a la presencia de insectos o ácaros, la

muestra vegetal debe colectarse con el insecto/ácaro en sus diferentes grados de

desarrollo (larva, ninfa, adulto u otro). Los insectos/ácaros, vivos o muertos pueden

enviarse en un recipiente de cierre hermético (bolsa o tubo) en cantidades mayores

de 5. Si el insecto/ácaro, se encuentra en estado de larva o ninfa se recomienda

añadir un trozo de planta.

5. Después de realizar el muestreo es importante enviar la muestra inmediatamente

al laboratorio. En caso contrario, la parte vegetal y el patógeno muestreado se

deben guardar por un máximo de 2 días a temperatura de refrigeración. Asimismo,

la muestra no debe exponerse al sol y debe transportarse en una hielera a baja

temperatura o durante la noche.

6. Nunca se debe mezclar diferentes tipos de muestra en la misma bolsa, aunque

provengan de la misma planta o lote. Por ejemplo, se deben separar raíces con suelo

de la parte aérea, hojas separadas de ramas o tallos, frutos separados de hojas, etc.

7. Finalmente, es indispensable identificar correctamente la muestra antes de enviarse

al laboratorio, dentro y fuera del empaque, pero sin que tenga contacto con la

muestra. La etiqueta debe llenarse con lápiz de carbón o cera, evitando el uso de

tinta de lapicero. Se recomienda enviar la muestra en doble bolsa plástica y colocar

la etiqueta en medio de ellas.




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En el Cuadro 1 se menciona el manejo de la muestra con daño de algún patógeno o

enfermedad según el órgano dañado.

Cuadro 1. Manejo de la muestra vegetal para su envío al laboratorio considerando el tipo de

muestra.

Tipo de muestra Manejo para su envío

Plántula

Colectar la planta entera, es decir, parte aérea y raíces (con todo y

cepellón). Tomar de 15 a 20 plántulas completas, asegurando una

muestra vegetal con un peso aproximado de 100 a 150 g. Se

recomienda cavar alrededor de las plantas y retirarlas del suelo con

cuidado para no dañar las raíces.

Hojas, ramas, flores,

yemas, tallos

Colocar la muestra vegetal (en trozos o entera) en papel absorbente o

papel periódico no humedecido, dentro de bolsas dobles de plástico.

Evitar el uso de bolsa negra.

El material leñoso, como tallos de árboles frutales, deben ir partidos a

la mitad.

Frutos, tubérculos,

bulbos, etc.

Envolver la muestra sin humedad en la superficie en papel absorbente

seco o algodón que amortigüe los golpes y colocarla dentro de un

envase de cartón o bolsa de papel.

Las piñas de agave deben ir partidas a la mitad o enviar trozos de piña

envueltas en papel absorbente o periódico sin humedecer.

Semillas

Revolver homogéneamente las semillas y colocar una muestra en

bolsas de plástico. Cuando es semilla a granel, utilizar un colector

múltiple.

Raíces

Muestrear raíces con un poco de suelo. Colocar la muestra en bolsas

de papel y luego en una bolsa de plástico dentro de una caja de cartón.

Cuando se pueda, partirlas a la mitad.

Plantas en hidroponía

Las plantas deben ser retiradas del sistema hidropónico, dejando

escurrir y secar el exceso de solución nutritiva de las raíces. Se deberá

colectar 100-150 g de planta completa. Las plantas deben ser

colocadas en bolsa de papel o bolsa plástica perforados, debidamente

identificados

Plantas con cancros y

agallas

Colectar muestra fresca y colocarla sin humedad en bolsas de papel

grueso selladas herméticamente (no usar bolsas de plástico). Colocar

las ramas con cancros jóvenes y las raíces con agallas en papel

periódico no humedecido y en bolsas de plástico (evitar bolsas

negras). Siempre se debe separar las muestras de plantas sanas de las

enfermas.




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La muestra vegetal colectada debe conservarse en las mejores condiciones posibles ya que

el diagnóstico es casi imposible cuando las muestras están marchitas o en avanzado estado

de pudrición. Asimismo, cuando se presenta deformación de hojas, mosaico, aclaración de

venas, manchas anilladas, se deben colectar todos los estados representativos de la

enfermedad, enviando al menos 15 hojas de cada síntoma envuelto en papel toalla y con

bolsa plástica sellada.

Cuando por alguna circunstancia no se

puede colectar las raíces de las plantas

de interés, debemos colectar raíces de

malezas presentes en el lote (mencionar

este procedimiento en la etiqueta de la

muestra). La muestra de raíces debe

enviarse al laboratorio tan pronto como

se colecta en campo o en caso contrario,

mantener las muestras en ambiente

fresco o hielera de unicel (10-15ºC),

evitando la exposición de las muestras

al sol o temperaturas elevadas (Ver

Figura 2).

El mantenimiento de muestras frescas

es esencial para el diagnóstico de

hongos y virus. Además, deben

registrarse las labores culturales

recientes (especialmente aplicaciones

de plaguicidas y fertilizaciones). En el

suelo se pueden presentar raíces con

nodulaciones, decoloraciones, cancros,

etc., por lo que, se recomienda tomar

muestras de suelo y raíces con

diferentes grados de síntomas.

Figura 2. Pasos para el correcto muestreo de raíces

para un análisis fitopatológico: 1) Limpiar la

herramienta con la que se sacará la muestra; 2)

Obtener la muestra representativa del síntoma que

se quiere analizar; 3) Poner la muestra en bolsa

plástica, con papel periódico o papel toalla sin

humedecer y colocar la etiqueta con los datos

correspondientes a su identificación y 4) Poner las

muestras en una hielera para su envío al

laboratorio.




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MUESTREO DE SUELO PARA ANÁLISIS FITOPATOLÓGICO

La muestra de suelo para

análisis fitopatológico debe

tomarse descartando los

primeros 5 cm de suelo

superficial y hasta una

profundidad de 30 cm (Ver

Figura 3). En el caso de

pasto, césped y praderas, la

profundidad de muestreo

recomendada es de 10-15

cm, mientras que para

frutales (raíces profundas)

se recomienda tomar la

muestra de suelo a una

profundidad de 30 - 60 cm (Ver Figura 4).

El muestreo de suelo consiste en

colectar varias submuestras de suelo en

toda la superficie del lote para obtener

una muestra compuesta de 1 kg de

suelo y/o sustrato. Las submuestras

deben obtenerse en varios puntos

alrededor de las plantas enfermas y

mezclarse debidamente en una cubeta

de plástico. La muestra de suelo

homogeneizada debe colocarse en una

bolsa de plástico debidamente cerrada.

Durante el muestreo se debe caminar en zigzag y colectar la muestra de suelo junto con las

plantas que presenten síntomas de la enfermedad, evitando aquellas que se encuentran

con infecciones extremas (Ver Figura 5).

Figura 3. Profundidad de muestreo de suelo para un análisis

fitopatológico con pala (izquierda) y barrena (derecha).

Figura 4. Ejemplo de muestreo de suelo cuando se

encuentran plantas enfermas en la parcela.




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La muestra de suelo debe incluir toda la información

disponible para facilitar el diagnóstico como:

a. Cultivo anterior, cultivo actual y cultivo a

establecer.

b. Características del daño de la plaga o

enfermedad.

c. Avance de la enfermedad.

d. Temperatura media.

e. Humedad relativa

f. Características de suelo.

g. Prácticas de cultivo.

h. Productos químicos aplicados (herbicidas,

fertilizantes, fungicidas, etc.)

i. Otros (Clima, manejo cultural).

MUESTREO DE LÍQUIDOS PARA ANÁLISIS FITOPATOLÓGICO

En el caso de análisis fitopatológico de líquidos, la muestra debe ser siempre simple, es

decir, no se deben mezclar muestras, de tal modo que la muestra para el laboratorio sea la

colectada en cada punto de muestreo. En el Cuadro 3 se mencionan las cantidades de

muestra y algunas recomendaciones para un correcto muestreo.

Cuadro 3. Cantidades de muestra y recomendaciones de muestreo de líquidos para análisis

fitopatológico.

Muestra Cantidad Observaciones

Agua

Al menos

500 ml La muestra debe ser colocada en un recipiente de plástico (botellas de

agua o nuevas) y se debe evitar el uso de recipientes usados que

contenían bebidas azucaradas (refrescos, jugos, etc.). El recipiente debe

llenarse con el líquido sin dejar espacios con aire y taparlo

inmediatamente después de tomar la muestra.

Abono

líquido

Al menos

500 ml

Si la muestra de agua requerida es de un sistema de distribución, se abre el sistema, se deja

correr al menos 5 minutos (ya que el volumen próximo dentro del sistema de distribución

sufre corrosión) y se toma la muestra. Cuando la muestra procede de algún cuerpo de agua

como: ríos, arroyos, lagos, estanques, etc.; se debe muestrear lejos de las costas y a una

profundidad media, evitando hacerlo en sitios afectados por aportes accidentales de otros

Figura 5. Muestreo en “zig-zag” de

una parcela.




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cursos y descargas de líquidos industriales, pluviales o cloacales. Siempre se destapará el

recipiente y tomándolo del cuello, rápidamente será sumergido a una profundidad de 20

cm. Si hay corriente, la boca del recipiente se orientará en sentido contrario a ella. En caso

contrario, se moverá el recipiente en semicírculo. Una vez lleno, se levantará rápidamente

y se tapará de inmediato. Si el agua que se analizará proviene de un pozo excavado o fuente

similar, el procedimiento es el mismo que en el caso anterior. Se puede atar una pesa en la

parte externa del recipiente para facilitar el procedimiento.

En resumen, los criterios recomendados de la cantidad de muestras para un análisis

fitopatológico se presentan en el Cuadro 4. Estos criterios consideran la cantidad de

muestra por superficie que se desea analizar, no son restrictivos y pueden ser cantidades

aproximadas si no se pueden completar las recomendaciones.

Cuadro 4. Órgano de muestreo y cantidad de muestra para un análisis fitopatológico.

Análisis solicitado Tipo de muestra Cantidad y/o características

BACTERIAS

Suelo 0.5 - 1 kg.

Agua 100 - 500 ml.

Semillas de hortalizas 10 g (aprox. 400 semillas).

Tubérculo, Bulbo o grano 0.5 - 1 kg.

Planta

3 - 5 plantas completas en trozos o en su

caso, la parte de la planta con el síntoma

específico que se quiere analizar.

HONGOS

Agua 100 - 500 ml.

Semillas de hortalizas 10 g (aprox. 400 semillas).

Tubérculo, Bulbo o grano 0.5 - 1 kg.

Suelo 0.5 - 1 kg.

Planta

3 - 5 plantas completas en trozos o en su

caso, la parte de la planta con el síntoma

específico que se quiere analizar.

NEMÁTODOS Suelo 1 - 2 kg.

Agua 2 L

VIRUS Planta

No deshidratada.

Preferiblemente enviar tejido con la

manifestación de los síntomas.

Hojas o planta completa.




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GLOSARIO DE TÉRMINOS

Agalla: Hinchamiento o crecimiento excesivo que aparece en las plantas como resultado de

la infección por ciertos patógenos.

Ahogamiento: Destrucción de las plántulas cerca de la parte superficial del suelo, que se

caracteriza por la caída de ellas sobre el terreno.

Aislamiento: Separación de un patógeno a partir de su hospedante y su cultivo en un medio

nutritivo.

Amarillamiento: Enfermedad de las plantas que se caracteriza por atrofia y amarillamiento

de la planta hospedante.

Antracnosis: Enfermedad que se manifiesta como lesiones negras profundas de la hoja,

tallo o fruto, y que es causada por hongos que producen sus esporas asexuales en un

acervulo.

Cancro: Lesión necrótica y con frecuencia profunda que se produce en el tallo, ramas o

ramitas de una planta.

Clorosis: Amarillamiento de los tejidos normalmente verdes, debido a la destrucción de

clorofila o a la imposibilidad de sintetizarla.

Deficiencia nutricional: Situación de las plantas cuando sufren una disponibilidad

insuficiente de nutrimentos y expresan características anormales visibles específicas para

dicho elemento.

Diagnóstico: Acción de determinar la presencia o ausencia de plagas y enfermedades.

Enfermedad: Cualquier mal funcionamiento de las células y tejidos del hospedante, que

resulta de la irritación continúa por un agente patogénico o factor ambiental y que lleva al

desarrollo de síntomas.

Escoba de bruja: Crecimiento en forma de escoba o proliferación en masa causado por la

densa agrupación de ramas de las plantas leñosas.

Hiperplasia: Crecimiento excesivo de una planta debido a un aumento en su división celular.

Hipertrofia: Crecimiento excesivo de una planta debido a un alargamiento celular anormal.

Identificación: Acción y efecto de identificar, es decir, reconocer la identidad de algo o

alguien, marcando de este modo diferencias con otros.

Lesión: Daño sufrido por una planta debido al ataque de un animal o de un agente físico o

químico.

Lesión local: Mancha foliar localizada que produce un virus mediante inoculación mecánica.

Mancha foliar: Lesión limitada por sí misma sobre la hoja.

Manchado: Enfermedad que se caracteriza por la presencia de grandes manchas o pústulas

de forma irregular en hojas, retoños y tallos.

Marchitez: Pérdida de rigidez y caída de los órganos de la planta que por lo general se debe

a la falta de agua en su estructura.




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Mosaico: Síntoma de ciertas enfermedades virales de las plantas que se caracteriza por

zonas entremezcladas de coloración normal y de color amarillento o verde claro.

Muestreo: El muestreo es el proceso de seleccionar un conjunto de plantas de una

población con el fin de estudiarlos.

Necrosis: Muerto y decolorado.

Nematodos: Animales en forma de gusano, generalmente microscópicos y que viven como

saprofitos en el agua o suelo, o bien como parásitos de plantas y animales.

Patogenicidad: Capacidad que tiene un patógeno para producir enfermedad.

Patógeno: Entidad que causa enfermedad.

Parásito: Organismo que vive sobre o en otro organismo vivo (hospedante) y del cual

obtiene sus nutrientes.

Pudrición: Reblandecimiento, decoloración y con frecuencia desintegración de los tejidos

de una planta suculenta como resultado de infección bacteriana o fungosa.

Saprofito: Organismo que obtiene sus nutrientes a partir de la materia orgánica muerta.

Signo: Derivados del patógeno (partes o productos) que se observan sobre una planta

hospedante.

Síntoma: Reacciones o alteraciones internas y externas que sufre una planta como

resultado de su enfermedad.

Virus: Parásito obligado y submicroscópico compuesto por ácido nucleico y proteínas.

REFERENCIAS

Agrios, G. N., 2005. Plant Pathology. 5th ed. Elsevier Academic Press. Florida, USA. 290 p. Abilio O., J. A. 2005. Muestreo y análisis de suelos. Boletín técnico 17. Centro Nacional de Tecnología

Agropecuaria y Forestal. Ministerio de Agricultura y Ganadería. Cd. Arce, El Salvador. 31 p. Noling, J. W. 2001. Nematodes and their Management. En: Vegetable Production Handbook.

Chapter 4. University of Florida Ed. IFAS Extension 2009-2010. 25-34 pp. Piedra N., R. 2015. Guía de muestreo de nematodos fitoparásitos en cultivos agrícolas. Sector Agro-

alimentario del Instituto Nacional de Innovación y Transferencia en Tecnología Agropecuaria (INTA). San José, Costa Rica. 21 p.


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