Macromoléculas de la levadura

Introducción: La célula esta constituida por una variedad de macromoléculas indispensables para la realización de procesos metabólicos por lo tanto es de vital importancia su estudio para lo cual se ha diseñado la siguiente practica con el fin de identificar variedad de macromoléculas orgánicas presentes en la levadura así como también presencia de proteínas, ácidos nucleicos y glucógeno lo cual se logra mediante la experimentación conjunta.

CentrifugaciónLa centrifugación constituye el procedimiento

mas rápido, cómodo y limpio para separar un sólido en suspensión con un líquido. El fundamento es aplicar una cierta velocidad angular(hacer girar)a la suspensión, de forma que las partículas más pesadas se depositen en el fondo del recipiente(precipitado), mientras que las sustancias más ligeras quedan por encima(sobrenadante).

La velocidad de una centrifuga se expresa en revoluciones por minuto(r. p. m) y la fuerza centrifuga que genere se expresa como fuerza centrifuga relativa. Las unidades de la fcr se expresan como múltiplos de la gravedad(g). La relación entre rpm y fcr(g) viene dada por la siguiente formula:

Fcr = 1,12 10 n rn= Velocidad de rotación del rotor. Expresado en r. p. mr= Radio de la centrifuga en centímetros correspondiente a la distancia existente entre el centro del cabezal de la centrifuga y el fondo del porta tubos.

GlucógenoEl glucógeno (o glicógeno) es

un polisacárido de reserva energética formado por cadenas ramificadas de glucosa; es insoluble en agua, en la que forma dispersiones coloidales. Abunda en el hígado y en menor cantidad en los músculos, así como también en varios tejidos.

Obtención e identificación de Glucógeno.

Arena lavadaAgrega levadura

Triturar5 minutos

1.

2. Ácido tricloroacético10 ml

Macerar 3 minutos

3. Dejar que la arena se sedimente

Suspensión sobrenadante

Centrifuga 5 Minutos 1000g(3000 rpm aprox)

Sobrenadante

Glucógeno

Sedimento Ácidos nucleicos

2 volúmenes Alcohol etílicoAl 96% frio

Sedimento

4. Baño sobre hielo para uso posterior

Agitar

5. Sobrenadante

Baño de hielo5 minutos

Observar

Centrifuga 3 Minutos 1500g(5000 rpm aprox)

Eliminar

Sobrenadante

Sedimento

Agua destilada

1ml

6.

7.

Agua destilada1ml

(control negativo)

Sln de almidónAl 0.5% 1ml

Glucógeno(control positivo)

Muestra

Lugol 2-3 gotas Agitar Comparar y registrar

La química de los organismos vivos abarca principalmente a las proteínas de sus células. La mitad de materia solida de las células consiste en proteínas. Estas proteínas intervienen en el anabolismo y catabolismo de la célula, la síntesis de los tejidos del cuerpo, enzimas, ciertas hormonas y los componentes proteicos de la sangre. También actúan en los sistemas de transporte de los tejidos, movimiento del cuerpo y protección contra la invasión bacteriana.

Proteínas

Proteínas Tome sedimento de ácidos nucleicos y proteínas

Agregue 10mL de cloruro de sodio al 10%

Agite cuidadosamente

Caliente suspensión en baño maría por 10min

Deje enfriar y transfiera a un tubo de centrifuga

Centrifugue por 10min a 1.500g

Sedimento Sobrenadante

Proteínas Ácidos nucleicos

Transferir a otro tubo de ensayo y conservar en hielo

Re suspender en 2 mL de solución de cloruro de sodio 0,15M

Control positivo

En otro tubo coloque solución salina sola

Control negativo

Añada a cada tubo 1mL de sulfato cúprico 0.1M y 2mL de hidróxido de sodio 10M mezclar y observar

En un tubo solución salina (NaCl 0.15M) y 1ml de solución de caseína

Reactivo de BiuretLa producen los péptidos y las

proteínas, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret. Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre mas solución de proteína precipito una coloración violeta.

La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción

Ácidos nucleicosSon compuestos orgánicos de elevado peso

molecular, formados por carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y fósforo. Cumplen la importante función de sintetizar las proteínas específicas de las células y de almacenar, duplicar y transmitir los caracteres hereditarios. Los ácidos nucleicos, representados por el ADN (ácido desoxirribonucleico) y por el ARN (ácido ribonucleico), son macromoléculas formadas por la unión de moléculas más pequeñas llamadas nucleótidos.

Identificación de ácidos nucleicos:

Se toma la muestra de ácidos nucleicos conservada en hielo y se añade 2 volúmenes de alcohol al 96% frio, se agita y se mantiene sobre hielo por 5 minutos.

Se procede a centrifugar por 3 minutos a 1500g lo que equivale aproximadamente a 5000 r.p.m., se elimina el sobrenadante (parte superior clara de la mezcla después de ser centrifugada).

Se disuelve el sedimento en 2mL de NaCl 0.15M (muestra)

En otro tubo de ensayo se ponen 2mL de NaCl 0.15M (control negativo)

Tubo adicional 2mL de solución de ribosa al 0.5% (control positivo)

Agregar a cada tubo 3mL de reactivo de orcinol calentar en baño maría por 20min o hasta que aparezca un color verde intenso en el tubo de control y en la muestra

Observar y registrar

GRACIAS