Los medios de cultivoUno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de Cultivoy el crecimiento de los microorganismos es elCultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

El cultivo contara de 3 partes: Medio de cultivo: es un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos. Mtodo de cultivo: la tcnica empleada para desarrollar los organismos. Inoculo: son los microorganismos que se introducen en un medio de cultivo para que comiencen a crecer. Agar: es un agente solidificante de medios de cultivo, se utiliza cuando el medio de cultivo necesita estar en un estado diferente, para que el organismos se desarrolle como se desea.Utilizacin de los medios de cultivoDiagnstico clnico en medicina humana y veterinaria Deteccin de microorganismos patgenos a partir de muestras de fluidos, tejidos y excretas y sus toxinas causantes de enfermedades.

Industria farmacutica y biotecnolgica Cultivo masivo de microorganismos productores de metabolitos (protenas, factores de crecimiento, aminocidos, pptidos, antibiticos, etc.) Control de la calidad (control de proceso, materias primas, productos terminados, aguas, residuales y ambiente Industria alimenticia Cultivo masivo de microorganismos productores de sustancias nutritivas y alimentos (protenas y compuestos saborizantes entre otros) Obtencin de alimentos fermentados (yogurt, otros productos lcteos y alimenticios)

Industria alimenticia Cultivo masivo de microorganismos productores de sustancias nutritivas y alimentos (protenas y compuestos saborizantes entre otros) Obtencin de alimentos fermentados (yogurt, otros productos lcteos y alimenticios)

Otras industrias y sectores productivos (agricultura, qumica) Cultivo masivo de microorganismos (obtencin de polmeros, azcares y otros) Control de la calidad (control de proceso, materias primas, productos terminados y ambiente)

Control del medio ambiente Control de las aguas y fuentes de abasto Control ambiental (aire, suelos) Control de residuales

ClasificacinSe ha mostrado en que constan y en donde se utilizan, ahora hay que saber cmo clasificarlos, por lo cual se presentan las siguientes formas de clasificacin:Segn su origen:a) NATURALES:son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente.b) SINTTICOS:son los medios que contienen una composicin qumica definida cualitativa y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.c) SEMISINTTICOSson los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.Clasificacin por su utilizacin:1) Medios comunes:Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales.2) Medios de enriquecimiento:Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.3) Medios selectivos:Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica.4) Medios inhibidores:Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor.5) Medios diferenciales:Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies.6) Medios de identificacin:Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.7) Medios de multiplicacin:Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de estos medios.8) Medios de conservacin:Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el laboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases peridicos de placa a placa, b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.9) Medios de transporte:Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de Stuart-Amies,Cary-Blair, etc.

CLASIFICACIN: DE ACUERDO A SU ESTADO FSICO

LQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa SLIDOS: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningn elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en mediolquido". SEMISLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudi

MTODOS DE SIEMBRA:El mtodo de siembra a emplear depender de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxgeno, los mtodos de siembra ms empleados son los siguientes: Siembra por estras. Siembra por puncin. Siembra volumtrica. Siembra masiva.Siembra por estrasEste mtodo de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo slidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cua. (Slam)Instrumentos de siembra a emplear.Para la siembra por estra se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos ms adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra.Siembra por puncinComo es obvio, el instrumento de siembra a emplear ser la aguja de platino y el medio de cultivo slido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este mtodo, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.Siembra volumtricaEste mtodo de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo slidos o lquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduacin, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que ser sembrado.Siembra masivaCuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la esptula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la esptula por toda la superficie del medio de cultivo slido imprimiendo un movimiento en espiral. La siembra masiva tambin se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo lquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.MEDIOS DE CULTIVO COMUNES.Son los ms corrientemente utilizados, y aunque no vamos a enumerarlos todos, s son los ms conocidos en un laboratorio de Microbiologa.Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que no presentan exigencias particulares. No es diferencial.Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la investigacin de los diversos tipos de hemlisis (, gamma). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos.Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los microorganismos de las vas urinarias.Agar S.S.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales.Agar Hektoen: Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar SS. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de tres azcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder diferencial de este medio.C.P.S. ID3. : Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la identificacin de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualizacin del cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrn).