la flora amazÓnica: una herramienta promisoria para combatir bacterias oportunistas...
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LA FLORA AMAZÓNICA: UNA HERRAMIENTA PROMISORIA PARA
COMBATIR BACTERIAS OPORTUNISTAS
DROGORRESISTENTES
CIRNA
ALVARO TRESIERRA [email protected]
OBJETIVO
Determinar la actividad antibacteriana
in vitro de extractos etanólicos de la
corteza de plantas amazónicas frente a
cepas drogorresistentes
OBJETIVO
Determinar la actividad antibacteriana
in vitro de extractos etanólicos de la
corteza de plantas amazónicas frente a
cepas drogorresistentes
¿Fuente?
8
9
10
Determinar la prevalencia de
Staphylococcus aureus y Pseudomonas
aeruginosa en teclados y ratones de
computadoras del Hospital Iquitos
“César Garayar García”
TÉCNICA DEL HISOPADO SOBRE
SUPERFICIES
Caldo Salado (10 ml)Incubar a 37 ˚C por 24 h
Agar CetrimideIncubar a 37 ˚C x
24 h
Caldo Tripticasa de Soya (10 ml)Incubar a 37 ˚C por 24 h
Caldo Peptonado con 0.02% Cristal Violeta (10 ml)
Incubar a 37 ˚C por 24 h
Agar Baird ParkerIncubar a 37 ˚C x 24 h
Prueba: CATALASA (+)
Staphylococcus aureus
Coloración Gram: Gram (+)
Prueba: COAGULASA (+)
Pruebas:OX/FER GLUCOSA (+)PRODUCCIÓN INDOL (-)CRECIMIENTO 42˚ C (+)
Prueba: OXIDASA (+)
Pseudomonas aeruginosa
Coloración Gram: Gram (-)
Tabla 1: Porcentaje de computadoras analizadas contaminadas o no por las especies bacterianas en estudio
Tipo de computadora
N° %
Contaminada 26
37.6
No contaminada 43
62.4
TOTAL 69 100.0
Bacteria en estudio
Cepas aisladas
N° %
S. aureus 16 + 6* 68.7
P. aeruginosa 4 + 6* 31.3
TOTAL 32 100.0
Presencia de especies bacterianas en estudio en las computadoras contaminadas del Hospital Iquitos “Cesar Garayar García”
* Seis computadoras presentaron contaminación doble
Determinar los perfiles de resistencia antibiótica de
las cepas bacterianas
Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer
(citado por Panghal et al.,2011)
Porcentaje de resistencia y determinación de drogorresistencia en las diez cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas del hardware de computadoras
Familia Antibiótico AntibióticoCepa de P. aeruginosa % de Resist
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
CEFALOSPORINA Ceftazidima S S S S S R R R S R 40
CARBAPENEMS Imipenem R R S R R R R R R R 90Meropenem R R S R R R R R R R 90
MONOBACTAMS Aztreonam R R R R S R R R R R 90AMINOGLUCÓSIDOS Gentamicina R S S S S S S S S R 20
Amikacina R S S S S S S S S R 20QUINOLONAS Norfloxacina R R R S R R S S S R 60
Drogorresistencia + + + + + + + + + +
Análisis de los resistotipos en las diez cepas de P. aeruginosa
ResistotipoCepa de P. aeruginosa
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
SRRRRRR XSRRRSSR XSSSRSSR XSRRRSSS X XSRRSSSR XRRRRSSR XRRRRSSS X XRRRRRRR X
Porcentaje de resistencia y determinación de drogorresistencia en las veintidos cepas de Staphylococcus aureus aisladas del hardware de computadoras.
Familia antibió-
tico
Nom-bre
anti-biótico
Cepa de Staphylococcus aureus% Re-sist
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
PENICILI-NAS
Penici-lina
R R R R R R R R R R R R R R R R S R R R R R 95
Oxaci- lina
S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S 0
GLICOPÉP-TIDOS
Vanco-micina
S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S S S 5
AMINOGLU CÓSIDOS
Genta-micina
S S S R S R S S S S S S R S S S S S S S S S 14
FLUORO-QUINOLO-NAS
Norflo-xacina
S S S R S S S S S R S S R R R S R S S S S S 27
Ciprofloxacina
S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S 0
TETRACI- CLINAS
Tetraci-clina
S S R R S R R S S R S S R S S S S S S S S R 32
MACRÓLI-DOS
Eritro-micina
S S R S S S S R R R S R S R R S S R R S S R 45
Drogorre-sistencia
- - + + + + + + + + - + + + + - - + + - - +
Análisis de los resistotipos en las veintidos cepas de S.aureus.
Resisto- tipo
Cepa de S. aureus1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 2
122
RSSSSSSS x x x x x xRSSSSSRR x xRSSRRSRS x xRSRSSSSS xRSSRSSRS xRSSSSSRS xRSSSSSSR x x x x xRSSSRSRR xRSSSRSSR x xSSSSRSSS x
Evaluar la susceptibilidad de las cepas bacterianas drogorresistentes frente a
extractos vegetales.
Tabernaemontana maxima
Alchornea triplinervia
Annona muricataAverrhoa carambola
Brunfelsia grandiflora
Cedrela odorata
Plantas amazónicas evaluadas
Alchornea triplinervia “escobo”
Annona muricata “guanábana”
Averrhoa carambola “carambola”
Brunfelsia grandiflora “chiric sanango”
Caraipa grandifolia “aceite caspi”
Cedrela odorata “cedro”
Tabernaemontana heterophylla
T. macrocalix
T. markgrafiana
T. maxima
Extractos etanólicos de cortezas
Proporcionados por el Laboratorio de Investigación de Productos Naturales
Antiparasitarios de la Amazonía (LIPNAA).
SECADO MOLIENDA MACERACIÓN
CONCENTRACIÓN FILTRACIÓNEXTRACTOS
EVALUACION DE LA ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA
Solución stock del extracto 1g /ml
15 µl de la solución stock de cada extracto
Evaluar la actividad antibacteriana de los
extractos vegetales sobre las cepas bacterianas
Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer
(citado por Panghal et al.,2011)
Actividad de los extractos vegetales frente a las cepas de Pseudomonas aeruginosa
Annona muricata Averrhoa carambolaT. heterophyllaT. markgrafiana
Extracto de planta
Datos descriptivos de los halos de inhibición de los extractos contra P. aeruginosa (mm)
Promedio DS MedianaValor
MáximoValor
Mínimo
Alchornea triplinervia
12.6 3.55 12.25 18.5 8
Brunfelsia grandiflora
8.55 1.66 8 12 7
Caraipa grandifolia 9.7 1.67 10 12.5 7
Cedrela odorata 12.5 3.07 12.75 17 8
Tabernaemontana macrocalyx
7.34 0.44 6.95 8 7
T. maxima 7.8 0.56 7.32 11 0
Sin actividad
Actividad de los extractos vegetales frente a las cepas de Staphylococcus aureus
Extracto de planta
Datos descriptivos de los halos de inhibición de los extractos contra S. aureus (mm)
Promedio DS MedianaValor
MáximoValor
Mínimo
Alchornea triplinervia
17.92 2.95 18 23.5 13.5
Annona muricata 11.05 2.38 11 15 7
Averrhoa carambola
10.6 1.74 10 15 8
Brunfelsia grandiflora
10.9 2.87 11 18 7.5
Caraipa grandifolia 13.29 2.30 13 17.5 9.5
Cedrela odorata 16.7 3.13 16.5 24.5 13
Tabernaemontana heterophylla
17.66 1.28 17.9 22.3 15.7
T. maxima 23.3 1.76 23.41 25.3 22
T. markgrafiana 24.4 3.22 24.49 26.7 19.7T. macrocalyx Sin actividad
Determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y de la Concentración Bactericida Mínima (CBM) de los extractos vegetales activos frente a las cepas de P. aeruginosa y S. aureus
CIM CBM
Macrométodo de dilución en
caldo
< conc. cuyo subcultivo produce un número de UFC < al 0.1% del inóculo original.
EXTRACTOSPseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus
CIM (mg/ml)
CBM (mg/ml)
CIM (mg/ml)
CBM (mg/ml)
Cedrela odorata 15.62 125 3.91 7.81Alchornea triplinervia
62.5 250 3.91 15.62
Caraipa grandifolia 250 500 3.91 15.62
Averrhoa carambola S.A S.A 15.62 62.5
Annona muricata S.A S.A 31.25 125Brunfelsia grandiflora
125 250 62.5 250
Tabernaemontana macrocalyx
125 500 S.A S.A
T. heterophylla S.A S.A 31.25 125T. maxima 250 500 3.91 7.81
T. markgrafiana S.A S.A 3.91 7.81
CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (CIM) Y CONCENTRACIÓN BACTERICIDA MÍNIMA (CBM) DE LOS EXTRACTOS VEGETALES FRENTE A
LAS BACTERIAS EN ESTUDIO
S.A.: Sin Actividad
Screening fitoquímico
Presencia de metabolitos con posible actividad antibacteriana
FlavonasTriterpenosAlcaloidesCumarinas
AntocianinasAntraquinon
asSaponnasEsteroles
Alchornea triplinervia y Cedrela odorata, constituyen alternativas promisorias para
combatir a Pseudomonas aeruginosa drogorresistentes, tan igual como lo son
Tabernaemontana maxima y Tabernaemontana markgrafiana para
Staphylococcus aureus drogorresistentes.
AGRADECIMIENTOS
Al Centro de Investigaciones de Recursos Naturales de la Amazonia de la UNAP, por brindar el financiamiento al Proyecto de Investigación: SENSIBILIDAD A EXTRACTOS VEGETALES DE PATÓGENOS NOSOCOMIALES AISLADOS DEL HARDWARE DE COMPUTADORAS, CON ÉNFASIS EN BACTERIAS DROGORRESISTENTES.
A los ex tesistas: A los tesistas: Daniela Da Cunha Najar Betsabeth Trinidad Guzmán Esther García Satalay Emperatriz Morales Amaringo Ricardo Abadie Saénz Manuel Ruiz Panaifo Ronald Medina Olimar Edgard Valderrama Rojas Cecilia Barbarán Urresti, Priscilla del Àguila Guevara Manuela Ruiz Miranda Karla Laury Silva
Gavy Paredes Sánchez. Milca Eléspuru Shuña
Janina Tello Lozano