*DARWING JULIAN PLATA LEON

COD:09351018

(PEROXISET)

*PRUEBA DE

INMUNOPEROXIDASA

PER

OX

IDA

SA

enzima que cataliza la

formación de peróxido de hidrógeno,

altamente oxidante

*EN Q CONSISTE?

*En utilizar como marcadores enzimas capaces de hacer cambiar de color un sustrato incoloro.

*en la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo, que permite la identificación de una proteína (el antígeno), cuya presencia queremos demostrar, mediante su unión a un anticuerpo específico

VENTAJAS

permite una localización más precisa

de las reacciones, ya que la tinción es

permanente y estable

puede contrastarse y puede ser

evaluada con

microscopio de luz

El material estudiado

puede archivarse

por años sin pérdida de

la intensidad

de la reacción

Los anticuerpos monoclonale

s ha permitido

aumentar la especificida

d, sensibilidad y gama de

esta técnica

DESVENTAJASpresencia de reacción

inespecífica, especialmente cuando se

utilizan anticuerpos policlonales

algunos reactivos son

potencialmente carcinógenos y su manipulación debe

ser cuidadosa

material disponible

(fresco, congelado o

fijado en formalina)

requieren estandarización

precisa y estricto control de

calidad

antígenos a estudiar (de superficie o membrana,

citoplasmáticos o nucleares).

*ENZIMAS UTILIZADAS• peroxidasa

• fosfatasa alcalina• sustratos diaminobenzidina

COLOR PARDO

• aminoetilcarbazolCOLOR ROJO

• nitroazul de tetrazolio COLOR AZUL

Estos marcadores pueden unirse directamente al anticuerpo primario o bien indirectamente mediante otros anticuerpos o sustancias como biotina o proteína A.

*FUNDAMENTO DE LA PRUEBA

PRIMER PASO

El suero se pone en contacto con el

sustrato antigénico

Si hay Ac se unen al Ag

(complejo Ag-Ac)

SEGUNDO PASO

Se agrega un antigrama-globulina humana

marcada con peroxidasa

Si hay complejo esta

se unirá

TERCER PASO

Hay una reacción colorimétrica en presencia de un

cromógeno y agua oxigenada

Da un complejo insoluble y

estable visible al microscopio

óptico

Antigrama globulina

humana con peroxidasa

REACCION COLORIMETRI

CA

ANTIGENO

ANTICUERPO

COMPLEJO ANTIGENO-ANTICUERP

O

varias moléculas del anticuerpo secundario marcado pueden unirse a cada molécula del anticuerpo primario• el sitio donde está localizado el antígeno

presenta más moléculas del enzimaSe suelen emplear tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato o fijaciones suaves con formol e inclusión en parafinas de bajo punto de fusión• para no desnaturalizar el antígeno. Tras la

reacción enzimática los núcleos se contrastan con hematoxilina

*los puntos o células donde se localiza el antígeno aparecen de color marrón

ganglio linfático de rata

*ESPECTRO DE ANTICUERPOS DISPONIBLES

COMERCIALMENTE

* PRUEBA PARA ABORTOS POR RINOTRAQUEITIS INFECCIOSA

BOVINA

* IDENTIFICACIÓN DE MYCOPLASMA SPP EN LECHE

BOVINA *SE ANALIZARON 80 MUESTRAS DE LECHE INFECTADA DE FORMA

NATURAL POR DIFERENTES MYCOPLASMA SPP, UTILIZANDO LA PRUEBA DE INMUNOFL UORESCENCIA COMO ESTÁNDAR DE ORO. LA SENSIBILIDAD DE LA PRUEBA INSTRUMENTADA FUE DE SEIS UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS, SIN PRESENTARSE REACCIONES CRUZADAS CON LOS DIFERENTES ANTISUEROS, CON 100% DE SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD EPIDEMIOLÓGICA Y VALORES PREDICTIVOS, NO ENCONTRÁNDOSE DIFERENCIAS ESTADÍSTICAS SIGNIFICATIVAS (P > 0.05) ENTRE AMBAS TÉCNICAS. LA REPRODUCIBILIDAD DE LA PRUEBA DE INMUNOPEROXIDASA FUE ALTA, OBTENIENDO CUATRO VECES LOS MISMOS RESULTADOS; SE REALIZÓ EN MENOS TIEMPO QUE LA PRUEBA DE INMUNOFLUORESCENCIA, REQUIRIENDO SÓLO DE UN MICROSCOPIO SIMPLE PARA LEER LOS RESULTADOS Y UNA MENOR CANTIDAD DE ANTISUEROS Y CONJUGADOS. EN ESTE ESTUDIO LA PRUEBA DE INMUNOPEROXIDASA MOSTRÓ TENER CARACTERÍSTICAS DIAGNÓSTICAS SIMILARES A LA PRUEBA DE INMUNOFLUORESCENCIA, ES MÁS SENCILLA Y NO REQUIERE DE EQUIPO SOFISTICADO

GRACIAS