UNIVERSIDAD ANDINA

NSTOR CCERES VELSQUEZ

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CAP.: FARMACIA Y BIOQUMICA

ASIGNATURA: Microbiologa

DICENTE: MORALES CCARITA, Juan Richard

SEMESTRE ACADMICO: VII

MICROBIOLOGA La microbiologa es la rama de la biologa encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeos (del griego mikros "pequeo", bios, "vida" y - -loga, tratado, estudio, ciencia), tambin conocidos como microbios. Es la ciencia de la biologa dedicada a estudiar los organismos que son slo visibles a travs del microscopio: organismos procariotas y eucariotas simples. Son considerados microbios todos los seres vivos microscpicos, estos pueden estar constituidos por una sola clula (unicelulares), as como pequeos agregados celulares formados por clulas equivalentes (sin diferenciacin celular); estos pueden ser eucariotas (clulas con ncleo) tales como hongos y protistas, procariotas (clulas sin ncleo definido) como las bacterias]. Sin embargo la microbiologa tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patgenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos en manos de la parasitologa y otras categoras de la biologa.

MICROORGANISMO

Salmonella (Salmonella typhimurium), en rojo, en un cultivo de clulas humanas.

Un microorganismo, tambin llamado microbio, es un ser vivo que slo puede visualizarse con el microscopio. La ciencia que estudia a los microorganismos es la microbiologa. micro del griego (diminuto, pequeo) y bio del griego (vida) seres vivos diminutos. Son organismos dotados de individualidad que presentan, a diferencia de las plantas y los animales, una organizacin biolgica elemental. En su mayora son unicelulares, aunque en algunos casos se trate de organismos centicos compuestos por clulas multinucleadas, o incluso multicelulares.

LA ESTERILIZACIN en las ciencias de la salud (principalmente en medicina, en medicina veterinaria), en biologa y en qumica, la esterilizacin (microbiologa) es el proceso de eliminacin de toda forma de vida, incluidas las esporas. Se utiliza para eliminar la contaminacin microbiana de productos sanitarios, formas farmacuticas estriles, equipos de produccin de formas farmacuticas estriles, etc.

En medicina y en medicina veterinaria, esterilizacin (medicina) es el mtodo por el cual se hace infecundo y estril a un ser vivo;

CONTAMINACIN

La contaminacin es la alteracin nociva del estado natural de un medio como consecuencia de la introduccin de un agente totalmente ajeno a ese medio (contaminante), causando inestabilidad, desorden, dao o malestar en un ecosistema, en el medio fsico o en un ser vivo.[1] El contaminante puede ser una sustancia qumica, energa (como sonido, calor, o luz), o incluso genes. A veces el contaminante es una sustancia extraa, una forma de energa, o una sustancia natural.AISLAMIENTOEl aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).

Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las muestras ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades intrnsecas en el cultivo (microorganismos parsitos de otros), al desconocimiento de los requerimientos especficos de cultivo, y a la existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir (casos de sintrofa por ejemplo).

Se estima que en slo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 - 0,01 % de las bacterias marinas son cultivables.

Existen procedimientos de enriquecimiento del nmero de bacterias de ambientes naturales para facilitar su aislamiento. Uno de ellos es la Columna de Winogradski que crea un microcosmos para enriquecer el nmero de ciertos tipos de microorganismos presentes en ambientes naturales con objeto de facilitar su aislamiento.MEDIO DE CULTIVO

Una placa de agar -- un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las lneas y los puntos naranjas son colonias bacterianas.

Un medio de cultivo consiste en un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de virus, microorganismos, clulas o incluso pequeas plantas. Segn qu se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado slido, semislido y lquido. El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin...Los Virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares por eso necesitan de un medio que contenga clulas vivas.

INCUBACIN Cada laboratorio debe realizar una vigilancia de la calidad de los medios de cultivo que utiliza, tanto de los preparados en el propio laboratorio (apariencia, crecimiento/inhibicin, esterilidad) como de los que se adquieran comercialmente.

Temperatura

La mayora de los cultivos bacterianos se incuban a 35-37C

El aislamiento de Campylobacter spp. de heces requiere una temperatura de incubacin de 42C

La mayora de los cultivos para hongos se incuban a 30C

Atmsferas de incubacin

Aerobiosis

Atmsfera enriquecida con 5-7% de CO2

Atmsfera microaeroflica para el aislamiento de Campylobacter: 5% de O2, 10% CO2 y 85% de N2.

Atmsfera de anaerobiosis

El laboratorio debe solicitar al proveedor de medios de cultivo los certificados de los controles de calidad donde deben estar incluidas las caractersticas fsicas y qumicas que definen al medio de cultivo. Esos certificados deben conservarse en el laboratorio. Asimismo, se debern realizar controles de calidad a los medios adquiridos comercialmente. El propio laboratorio debe elegir tanto la periodicidad como la seleccin de los medios a los que realizar el control de calidad en funcin del tipo de medios que utilice, la variedad y los datos histricos de la conformidad de los controles realizados por el laboratorio con las caractersticas que el proveedor facilite: un medio estable y que no haya ocasionado problemas de crecimiento segn registros previos se debe controlar menos que uno que sea menos estable y haya ocasionado problemas en su uso. El laboratorio debe generar registros de este control de medios adquiridos de proveedores y conservar estos registros para poder evaluar los medios y reconsiderar permanentemente el control de calidad de los mismos. Como ejemplo de formato para el registro de control de medios adquiridos comercialmente se propone el formato del Control de medios preparados. Con este control no slo se evala la conformidad del laboratorio con los medios que adquiere ya preparados sino que tambin se evalan las condiciones de procesamiento, estufas y atmsferas utilizadas.

Para el control de los medios se deben utilizar preferentemente cepas de coleccin (ATCC, CECT u otras colecciones) pero en el caso de no tener acceso a estas cepas se podrn utilizar cepas aisladas en el propio laboratorio con caractersticas perfectamente definidas.

ANTIBITICO

En biologa, un antibitico (del griego - anti, "en contra" + - biotikos, "dado a la vida" ) es una sustancia qumica producida por un ser vivo o derivada sinttica de ella que mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles, generalmente bacterias. Los antibiticos se utilizan en medicina humana, animal u horticultura para tratar infecciones provocadas por grmenes. Normalmente los antibiticos presentan toxicidad selectiva, siendo muy superior para los organismos invasores que para los animales o los seres humanos que los hospedan, aunque ocasionalmente puede producirse una reaccin adversa a medicamento, como afectar a la flora bacteriana normal del organismo. Los antibiticos generalmente ayudan a las defensas de un individuo hasta que las respuestas locales sean suficientes para controlar la infeccin. Un antibitico es bacteriosttico si impide el crecimiento de los grmenes, y bactericida si los destruye, pudiendo generar tambin ambos efectos, segn los casos. RESISTENCIA BACTERIANALa resistencia bacteriana es un fenmeno creciente caracterizado por una refractariedad parcial o total de los microorganismos al efecto del antibitico generado principalmente por el uso indiscriminado e irracional de stos y no slo por la presin evolutiva que se ejerce en el uso teraputico.Tipos de resistencia

Natural o intrnseca. Es una propiedad especfica de las bacterias y su aparicin es anterior al uso de los antibiticos, como lo demuestra el aislamiento de bacterias resistentes a los antimicrobianos, de una edad estimada de 2000 aos encontradas en las profundidades de los glaciares de las regiones rticas de Canad. Adems, los microorganismos que producen antibiticos son por definicin resistentes.

En el caso de la resistencia natural todas las bacterias de la misma especie son resistentes a algunas familias de antibiticos y eso les permite tener ventajas competitivas con respecto a otras cepas y pueden sobrevivir en caso que se emplee ese antibitico. Adquirida. Constituye un problema en la clnica, se detectan pruebas de sensibilidad y se pone de manifiesto en los fracasos teraputicos en un paciente infectado con cepas de un microorganismo en otros tiempos sensibles.5La aparicin de la resistencia en una bacteria se produce a travs de mutaciones (cambios en la secuencia de bases de cromosoma) y por la trasmisin de material gentico extracromosmico procedente de otras bacterias.En el primer caso, la resistencia se trasmite de forma vertical de generacin en generacin. En el segundo, la trasferencia de genes se realiza horizontalmente a travs de plsmidos u otro material gentico movible como integrones y transposones; esto ltimo no solo permite la trasmisin a otras generaciones, sino tambin a otras especies bacterianas. De esta forma una bacteria puede adquirir la resistencia a uno o varios antibiticos sin necesidad de haber estado en contacto con estos.

FUNDAMENTACIN ANTIBIOGRAMA:

Son aquellos procedimientos que bajo condiciones especificas y estandarizadas determinan in vitro la susceptibilidad de una cepa bacteriana a varios antimicrobianos que son opciones de tratamiento para ese agente infeccioso. Por qu realizar un antibiograma? El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones teraputicas individuales. El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales. Hay pues un doble inters: Teraputico y epidemiolgico. Cundo realizar un antibiograma? Siempre que una toma bacteriolgica de finalidad dagnstica haya permitido el aislamiento de una bacteria considerada responsable de la infeccin. Establecer esta responsabilidad exige una colaboracin entre el bacterilogo y el clnico. En efecto, en ciertas circunstancias, el microbilogo no podr determinar con certeza que el aislamiento de una bacteria exige un antibiograma, sin los datos clnicos que le aporta el mdico. Por ejemplo, una bacteria no patgena puede ser responsable de la infeccin de un enfermo inmunodeprimido o en un lugar determinado del organismo. La presencia de signos clnicos puede ser tambin determinante para la realizacin de un antibiograma (por ejemplo: la infeccin urinaria con un nmero reducido de grmenes). Sensibilidad bacteriana a los antibiticos La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es la base de la medida de la sensiblidad de una bacteria a un determinado antibitico. La CIM se define como la menor concentracin de una gama de diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas. Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y mtodos automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes mtodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en funcin de su sensibilidad frente al antibitico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I) o Resistente (R) al antibitco. Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS: Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de un tratamiento a la doss habitual. Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento. Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posologa).

Los resultados obtenidos demuestran que E.coli es susceptible a las tetraciclinas. Las tetraciclinas son antibiticos bacteriostticos de amplio espectro que inhiben la sntesis proteica de la bacteria al unirse de forma reversible a la subunidad 30s del ribosoma, inhibiendo as la unin del aminoacil ARN de transferencia (ARNt) al complejo ribosoma 30s-ARNm. Las tetraciclinas, es decir, tetraciclina, doxiciclina, minociclina, disponen de actividad en el tratamiento de las infecciones causadas por especies pertenecientes a los gneros Chlamydia, Mycoplasma y Rickettsia, as como por algunas otras bacterias grampositivas y gramnegativas. Todas las tetraciclinas poseen un espectro de actividad semejante, diferencindose sobre todo de otros antibiticos por sus propiedades farmacocinticas (doxiciclina y minociclina se absorben con facilidad y presentan una semivida prolongada). La resistencia a las tetraciclinas puede ser consecuencia de una disminucin de la penetracin de los antibiticos en el interior de la bacteria, la expulsin activa del antibitico al exterior de la clula, la alteracin de la diana molecular en el ribosoma o la modificacin enzimtica del antibitico. Las mutaciones en el gen cromosmico que codifica la protena de la porina de la membrana externa, OmpE, puede dar lugar a la aparicin de resistencia de bajo nivel a las tetraciclinas y otros antibiticos. (p.ej., B-lactmicos, quinolonas, cloranfenicol). Se han identificado una seria de genes en diferentes bacterias que controlan la expulsin de las tetraciclinas al entorno extracelular de la bacteria. La resistencia a las tetraciclinas puede tambin ser consecuencia de la produccin de protenas semejantes a los factores de elongacin que protegen al ribosoma 30s. En este caso, el antibitico puede an unirse al ribosoma, pero no interrumpe la sntesis proteica.Indicaciones Bacterias gram positivas: Streptococcus, Diplococcus, Clostridium. Bacterias gram negativas: Neisseria, Brucellas, Haemophilus, Shigella, Escherichia coli, Bordetella, Klebsiella, Vibrio y Pasteteurella. Espiroquetas. Algunos protozoos: Entamoeba. Actinomyces. Rickettsia. Este espectro explica su utilizacin en las siguientes patologias, entre otras: Infecciones de la piel: Acn, roscea, Infecciones urogenitales: Gonococia, sfilis Infecciones gastrointestinales: Disentera, clera, amebiasis, lcera gstrica, infecciones periodontales. Infecciones respiratorias: Faringoamigdalitis, bronquitis y algunas formas de neumona atpica Otras infecciones: Fiebre recurrente, fiebre Q, tifus exantemtico, tifus endmico, actinomicosis, brucelosis. Hay que tener en cuenta que aunque in vitro su actividad es ms amplia, in vivo nos encontramos con otros muchos antibiticos que pueden resultar ms efectivos o con menos efectos adversos que las tetraciclinas, por lo que stas quedan relegadas a antibitico de segunda eleccin, cuando fallan los de primera eleccin.

PRUEBA DE SUCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA DE DIFUSION EN AGAR Se dice que los antibiticos presentan toxicidad selectiva porque interfieren con las funciones vitales de las bacterias sin afectar a las clulas del husped. El efecto desfavorable de los agentes fsicos y qumicos sobre las bacterias se debe a mecanismos muy variados y no del todo conocidos. Por su intensidad, cualquier agente se puede clasificar en bacteriosttico, cuando impide su multiplicacin (como es reversible, cuando cesa la causa se multiplica de nuevo); o bactericida, si el efecto es mortal e irreversible. No siempre ambos mecanismos son diferentes; la mayor parte de las veces, el que se alcance uno u otro efecto depende de la intensidad con la que se aplique el agente. Segn el mecanismo de accin y la estructura bacteriana sobre la que acten, los agentes fsicos y qumicos se clasifican en 3 grupos: Agentes que actan sobre la membrana citoplasmtica y la pared celular: existen sustancias que alteran el complejo parietal de la bacteria o dificultan su sntesis, como la lisozima; otras se combinan con los lpidos de la membrana y alteran sus mecanismos de transporte activo o su accin como barrera osmtica entre la bacteria y el medio externo. La membrana tiene una estructura bien caracterstica; algunas molculas de antibiticos poseen un extremo liposoluble y otro hidrosoluble; cuando esta molcula llega a la membrana se inserta entre la capa lipdica y la de protenas, produciendo una abertura entre estas capas conduciendo a la ruptura de la membrana. Otras sustancias desacoplan la fosforilacin oxidativa con un estmulo transitorio del consumo de oxgeno Agentes que actan sobre las protenas y enzimas: El mecanismo de la sntesis proteica, reviste importancia fundamental puesto que es as como la clula produce las sustancias indispensables para el mantenimiento de sus funciones vitales y para garantizar su reproduccin, cuando uno o ambos procesos son interferidos, el resultado no puede ser otro que la muerte de la clula o la detencin de su crecimiento: este resultado es el que se busca con el empleo de los antibiticos en las infecciones bacterianas. El efecto es mltiple: Coagulacin y desnaturalizacin de las protenas, con lo que el coloide citoplasmtico que alterado y los sistemas enzimticos, inactivados. Efecto txico sobre las enzimas. Formacin de compuestos con los radicales libres. Agentes que actan por alteracin del ncleo: algunos agentes tienen una especial tendencia a alterar el ncleo y los genes de las bacterias por combinarse con los grupos sulfhidrilos, las nucleoprotenas, como el formol, agentes alquilantes, o por interferencia en la replicacin del ADN.

COLONIA BACTERIANA

Una colonia de bacterias es un conjunto del mismo, serian bacterias que viven en "sociedad", por decirlo simplemente. Ahora bien, puede ser un cultivo de bacterias si lo cultiva un hombre, o al colonia s eproduce naturalmente simplemente por reproduccion de las mismas o agrupacion de ellas. Hay que tener en cuenta que para que estas se agrupen tienen que haber determinadas condiciones como por ejemplo alimento.Pictogramas Usados En El LaboratorioRecomendaciones generales. En los laboratorios de microbiologa, la sealizacin contribuye a indicar los posibles riesgos y la naturaleza de los mismos. existen distintos tipos de seales: Seales de advertencia

Tienen forma triangular, pictograma negro sobre fondo amarillo (el amarillo deber cubrir como mnimo el 50% de la superficie de la seal), y bordes negros.

INCLUDEPICTURE "http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/img-jpg/cap33_fig1parte2.jpg" \* MERGEFORMATINET

INCLUDEPICTURE "http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/img-jpg/cap33_fig1parte4.jpg" \* MERGEFORMATINET Como excepcin, el fondo de la seal sobre "materias nocivas o irritantes" ser de color naranja, en lugar de amarillo, para evitar confusiones con otras seales similares utilizadas para la regulacin del trfico por carretera.Seales de prohibicin

Tienen forma redonda, el pictograma es negro sobre fondo blanco, los bordes y banda transversal descendente, de izquierda a derecha, atravesando el pictograma a 45 respecto a la horizontal, sern de color rojo (este color deber cubrir, como mnimo, el 35% de la superficie de la seal).

Seales de obligacin

Son de forma redonda con pictograma blanco sobre fondo azul (el azul deber cubrir, como mnimo, el 50% de la superficie de la seal). No es habitual la utilizacin de este tipo de seales en los laboratorios de microbiologa.Seales relativas a los equipos de lucha contra incendios

Tienen forma rectangular o cuadrada, y el pictograma blanco sobre fondo rojo (el rojo deber cubrir, como mnimo, el 50% de la superficie de la seal).

Seales de salvamento o socorro

Deben ser de forma rectangular o cuadrada, con el pictograma blanco sobre fondo verde (el verde deber cubrir, como mnimo, el 50% de la superficie de la seal).

Otras seales

Otra sealizacin es aquella que permite identificar las tuberas por el color con que estn pintadas, en funcin del fluido por ellas transportado. Esta sealizacin se basa en la Nota Tcnica de Prevencin 556 (sealizacin de recipientes y tuberas: aplicaciones prcticas) que est basada en el Real Decreto 485/1997. Segn la NTP 556, las tuberas que transportan agua se deben de pintar de color verde, las de aire de color azul, las de gas de color amarillo y las de vaco de color gris.Recomendaciones especficas para los laboratorios de microbiologa clnica

- Todas las reas de trabajo del laboratorio de microbiologa estarn debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin (ver ejemplo a continuacin).

Riesgo biolgico Nivel de contencin III

- Las fuentes de calor (calentadores, termobloques, etc.), y principalmente en las que se alcanzan temperaturas elevadas, debern estar debidamente sealizadas para evitar quemaduras accidentales. - Todos los aparatos destinados a almacenamiento de reactivos debern estar debidamente sealizados con etiqueta de "riesgo biolgico", "acceso restringido", "medidas de proteccin obligatorias".

Riesgo biolgico Acceso restringido Medidas de proteccin obligatorias