INFORME DE LABORATORIO MICROBIOLOGIAPRACTICA 1PRESENTADO POR: Mara Nelcy Len Ramrez Cod:28271828 Diana Yaneth Villamizar Cod:1098623003 Diego Alexander Rodrguez Cod:1098626229 Diana santos Cod:90082650414 Blanca Luz Urrego Piedraita Cod:60351225

PRESENTADO A: Ludy Janeth Mendoza

Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD) Bucaramanga (Abril del 2009)

INFORME DE LABORATORIO N 1 MICROBIOLOGIA OBJETIVOS 1. Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio. 2. Aprender y utilizar los mtodos de esterilizacin disponibles en el laboratorio. 3. Conocer los materiales y equipos utilizados en el laboratorio de microbiologa. 5. Aplicar criterios disciplinares para la intervencin segura en ambientes de laboratorio. Cuestionario de entrada 1. Que es bioseguridad? Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biolgicos, fsicos o qumicos, estas normas de bioseguridad estn destinadas a reducir el riesgo de transmisin de microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infeccin en Servicios de Salud vinculadas a accidentes por exposicin a sangre y fluidos corporales. 2. Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa? Uso adecuado de materiales. Uso de dotacin: bata, cofia y gafas. No ingerir alimentos, bebidas, no fumar en el rea de laboratorio. Mantener el rea de trabajo organizada 3. Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud? Tener cuidado con los materiales inflamables como alcohol etlico evitando contacto con mechero. Manipular correctamente el mechero para evitar quemaduras Manipular cuidadosamente las sustancias qumicas evitando el contacto con los ojos, se recomienda el uso de gafas. Lavar muy bien las manos para evitar irritaciones por sustancias, en caso de sufrir de alergias utilizar guantes quirrgicos. Evitar distracciones puesto que en un descuido, se nos puede partir algn elemento ocasionando cortaduras.

4. Mencione las clases de esterilizacin, cuales son los agentes de esterilizacin con ms uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qu materiales se utilizan. 1. Calor seco: se efecta en estufas de aire seco u hornos Pasteur y se manejan temperaturas entre 160 180C, por un espacio de dos horas aproximadamente. Este mtodo se utiliza para esterilizar el material de vidrio generalmente: tubos, cajas de Petri, pipetas y erlenmeyers. No se debe emplear para esterilizar medios de cultivo o agua pues se evaporan hasta secarse. Previo al horneado el material de vidrio se recubre con papel Kraf y se sella con cinta indicadora de esterilidad, una vez realizado el proceso de esterilizacin se revisa la cinta la cual debe tornarse de color caf oscuro lo que indica una correcta esterilizacin. El calor seco tambin se utiliza para secar material de vidrio como tubos y pipetas, este material se deja en el horno por dos horas a 60C. Las lminas y laminillas se secan con un trapo suave. Los dems materiales se secan a temperatura ambiente. 2. Calor hmedo en autoclave: se utiliza para esterilizar medios de cultivo preparados, escobillones, gasas entre otros. Adicionalmente se tiene otra autoclave para descontaminar cultivos antes de ser desechados. La autoclave es un recipiente en el que se consigue exponer el material a esterilizar a temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias al aumento de la presin. El autoclave se opera a presin de 15 lb. Y a

121C. El tiempo de exposicin depende del material y volumen que se esterilice, pero en general esta comprendido entre 15 y 30 minutos. 3. Flameado: usado principalmente para asas, es otro mtodo de esterilizacin comn usado en el laboratorio. Consiste en poner el asa con la cual se va a hacer el cultivo, durante unos minutos en la llama del mechero. 4. Radiaciones Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nuclecos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos. Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos vacunas y alimentos 5. Filtracin Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter las muestras. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos

estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Existen tres tipos bsicos de filtros: -Filtros profundos o Filtros de profundidad: -Membranas filtrantes: -Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo)Tabla 1. Caractersticas tipo de Esterilizacin.

5. Establezca las diferencias entre esterilizacin y desinfeccin. La esterilizacin implica la destruccin de todos los microorganismos, incluyendo los esporos. La desinfeccin supone la destruccin de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfeccin no mata necesariamente a los esporos.

Tipo de Esterilizacin

Agente de esterilizacin

Temperatura de uso (si se aplica) 160- 180 C

Equipo utilizado

Material que se puede esterilizar por este mtodo.

Esterilizacin con calor seco.

Calor

Estufas de aire seco u Tubos, cajas de Petri, horno Pasteur pipetas y erlenmeyers.

Esterilizacin con calor hmedo.

Calor

121C

Autoclave

Cultivos preparados

Radiaciones

Energa(ondas 110 a 115 C magnticas)

Diafragnometro

Materiales termolbiles Como jeringas, sondas. Antibiticos, vacunas, alimentos

Filtracin

Presin Aspiracin

Filtros - Filtros profundos o Filtros de profundidad -Membranas filtrantes -Filtros de huella de nucleacin(Nucleoporo)

Lquidos y gases

En una primera parte se hizo nfasis en las normas de bioseguridad que se deben tener en cuenta en el laboratorio, estas son: NORMAS GENERALES: El acceso al laboratorio estar limitado solo al personal autorizado. No se debe pipetear con la boca. El personal que trabaje en el laboratorio debe cumplir a cabalidad las normas de bioseguridad. Toda rea debe estar marcada con la respectiva seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Al ingresar al laboratorio se debe tener en cuenta el debido porte de la bata manga larga, abotonada y limpia, as mismo una vez se ingrese se debe colocar los abrigos libros y dems objetos, en sitios adecuados para evitar un posible accidente y NUNCA sobre los bancos o mesones. Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la sesin de laboratorio para evitar la contaminacin por corrientes de aire. Al inicio y trmino de una prctica se debe limpiar la superficie de trabajo con una solucin desinfectante. El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado, durante el trabajo o el trmino del mismo. Lvese las manos a la hora de entrar y al trmino de cada sesin de trabajo, secndolos con toallas de papel.

El personal con cabello largo deber recogerlo para trabajar dentro del laboratorio. As como usar todos los implementos necesarios para la proteccin segn el nivel de riesgo biolgico. Durante la prctica no se deben guardar ni consumir alimentos y bebidas dentro del laboratorio. Se debe colocar un calzado adecuado para las prcticas en el laboratorio. Hable en tono bajo y evite al mximo el movimiento dentro del laboratorio. Emplee los equipos segn las instrucciones o los procedimientos operativos estandarizados, al igual que emplee los protocolos correspondientes a la practica. El trasporte de materiales o de muestras entre los laboratorios se realizara de manera tal que en caso de cadas no se produzca salpicadura. Todo personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto con materiales potencialmente infecciosos sin la debida proteccin. Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente el supervisor de laboratorio. Se usaran mascaras faciales si existe el riesgo de salpicaduras o aerosoles. Apagar los instrumentos elctricos antes de manipular las conexiones.

PASOS LLEVADOS A CABO EN LA PRCTICA: Una vez ya preparados, se ingresa al rea de laboratorio, el tutor nos da las instrucciones y recomendaciones necesarias para llevar a cabo la prctica. Muestra a cada equipo que elementos se usaran durante la prctica, a continuacin mostraremos algunos de los elementos utilizados en la prctica. Horno microondas para hongos. Se utiliza para esterilizar material de vidrio, por ejemplo, cajas de Petri, matraces, tubos de ensayo, pipetas a travs de circulacin de aire caliente (calor seco) a temperaturas que varan entre 120 y 180C por un lapso de tiempo de 20 minutos a 8 horas.

Cuenta colonias: Se utiliza para observar el nmero de colonias presentes en la muestra.

Figura 3.Cuenta Colonias.

a) b) Figura 1.Horno microondas para Hongos.

Horno microondas para bacterias Se afirma que el horno microondas es ideal para esterilizar los implementos de laboratorio, al igual que el horno para hongos, solo que este ataca las bacterias presentes.

Destilador de agua Permite la obtencin de agua destilada, es decir, agua a la que se le han eliminado iones e impurezas. Mediante el proceso de destilacin el agua es sometida al calor hasta su ebullicin para separar sus componentes lquidos, luego sus vapores son recogidos y condensados.

a) b) Figura 4. Desfibrilador de agua.

a) b) Figura 2.Hono microondas para Bacterias.

Microscopio El microscopio, de micro- (pequeo) y scopio (observar), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico. Que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refreccin.

a)

b)

c)Figura 6. Autoclave y olla de Presin.

Balanza: Este un instrumento indispensable en el libatorio para tomar pesos de los diferentes materiales o elementos utilizados en el laboratorio.a) Figura 5.Microscopio. b)

El autoclave u olla de presin: La autoclave es un recipiente utilizado para esterilizar: medios de cultivo, agua destilada, tierra etc. mediante calor hmedo. El material a esterilizar se expone a temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias al aumento de la presin. El vapor de agua difunde por smosis a travs de las esporas coagulando su protoplasma. Generalmente se esteriliza a temperaturas que van entre 107-126C por un tiempo de 520 minutos con presiones que varan entre 5 y 20 libras por pulgada cuadrada (p.s.i).

a) Figura 7.Balanza.

b)

Cocina elctrica: Esta es muy importante en el laboratorio puesto que requiere calentar sustancias en el momento de cualquier prctica.

a) b) Figura 8. Cocina Elctrica.

Incubadora: Permite obtener temperaturas de incubacin constante, en procesos como el cultivo de microorganismos y de tejidos, para determinaciones microbiolgicas. La limpieza y la desinfeccin, peridicas y sistemticas, son recomendables para reducir los riesgos derivados de la contaminacin accidental del personal del laboratorio.

que se utilizan en el laboratorio debe anularse la lmpara de la luz.

a) Figura 10.Nevera.

b)

a)

b)

Cmara de flujo laminar Es un receptculo con una nica cara libre (la frontal) que permite el acceso a su interior, donde se localiza la superficie de trabajo. Permite realizar, aislar, manipular cultivos en condiciones de esterilidad. La esterilidad de la zona de trabajo se consigue porque se hace circular a travs del interior de la cmara una corriente de aire que previamente ha sido microfiltrada o tratada con luz ultravioleta para eliminar todo agente contaminante.

c) Figura 9. Incubadora

Neveras Es necesario un adecuado mantenimiento, limpieza y desinfeccin para reducir los riesgos asociados a su utilizacin. Sin embargo, an en estas condiciones, hay que tener en cuenta lo siguiente: No deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por inhalacin, en recipientes que no estn convenientemente cerrados. No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables (ter etlico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de proteccin anti deflagracin. En los aparatos de tipo domstico

Figura11. Cmara de flujo Laminar.

Asas bacteriolgicas:

Las asas bacteriolgicas bsicamente son alambres unidos a un mango que permite manipularlas. El alambre puede ser de diferente material, (ferro nquel, nicromo, platino, etc.) y la forma (recta, curva, etc.,)

Las cajas de petri

Figura12.ASAS Bacteriolgicas.

Figura 15.Cajas de Petri.

Durante la prctica de laboratorio la tutora nos enseo todos los implementos que necesitaremos para las prcticas, como son: Pipetas

Asas de Hockey Asas rectas Isopos

a) Figura 13. Pipetas.

b)

Tubos de ensayo

a) b) Figura 14.Tubos de Ensayo.

Una vez familiarizados con los implementos, procedemos a desinfectarlos y lavarlos con jabn e hipoclorito de sodio, teniendo especial cuidado en no maltratar el material (partirlo). Despus de lavado el material se secan con papel absorbente el exterior de los implementos. Despus de desinfectados procedemos a envolverlos o a empacarlos con papel kraf, los tubos y los frascos se deben tapar la boca con tapones de algodn luego se sella con cinta indicadora de esterilidad o cinta de enmascarar. Se debe tener especial cuidado cuando se envuelven los frascos, los tubos de ensayo y las pipetas, dejando indicado con cinta la boca de estos para cuando sean destapados se evite contaminar. Las cajas de petri se empacan en grupos de cinco, se envuelven con papel kraft y se amarran con cinta de enmascarar.

Se procede a esterilizarlo en el Horno a temperatura de 160 - 180 C, esto se hace con la supervisin de la tutora marque y rotule adecuadamente los materiales, estos deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificacin del grupo de trabajo, el ensayo o experiencia realizada, la fecha. LABORATORIO 2 PREPARACION Y MANIPULACION DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS Aprender la presentacin manipulacin de los medios cultivo. y de

7.8 grs de PDA + 100 ml de caldo nutritivo. Se revuelve. 100 ml de caldo nutritivo. Se revuelve.

MATERIALES Frasco con medio de cultivo PDA. Frasco de Pires. Balanza. Papel Kraf. Plancha de calentamiento Elemeyer de 100ml. Cinta de indicadores de pH.

Se mide el pH. pH 3.4 se pone a hervir en la plancha de calentamiento. Se baja y se deja enfriar. Se pone a hervir en la olla a presin durante 15 minutos. Se saca y se deja enfriar. Se hecha en la caja de petri previamente marcadas. Se deja cuajar. Se cubre con cinta de enmascarar. Se lleva a la incubadora.

PROCEDIMIENTO PDA 39grs -------------1 litro Para preparar 200ml utilizamos 7.8grs.

Papel Kraf. Plancha de calentamiento. Elemeyer de 100ml.a) Figura 15.PDA b)

Cinta de indicadores de pH. En esta prctica encontramos medios de cultivos simples como son: Leche Sangre diluida Caldo de pollo Agar peptona Papa en trozos Los medios de cultivo mencionados cuales son selectivos para hongos.

Figura 16. PDA + Caldo nutritivo.

El pH para bacterias es de 7.5 El pH para hongos es de 5.0 En esta prctica preparamos

a) b) Figura 17. PDA agregado a cajas Petri. Tabla 2.Ejemplo anlisis medios de cultivo.

AGAR BACTERIOLOGICO MATERIALES Balanza.

Agar bacteriolgico Caldo nutritivo Se prepararon un tubo de cada muestra: 1 tubo de agar nutritivos. 2. tubo con caldo nutritivo. 4 cajas de agar nutritivo. 50ml de caldo nutritivo. 400ml de agar nutritivo. 20gr por litro de agar 1000ml por 4gr. PDA medio cultivo para Hongos para hacer 10 cajas con 200ml/39g por litro = 7.8 4gramos de agar / 200ml de agua destilada. El pH para el agar nutritivo es de pH=7. Caldo nutritivo inclinado 10ml en 6 tubos. El agar se llevo al pH=7. Para lograr esto se le agrego 4

gotas de hidrxido de sodio el caldo de papa se filtro.

Agar de Tripticasa de Soja (TSA) Composicin: Triptosa, 15g. Peptona, 5g. Extracto de levadura, 3g. Glucosa, 5g. Cloruro sdico, 5g. Agar, 15g. Agua destilada, 1000 ml.

Figura 18. Agra Bacteriolgico. a)

Caldo Nutriente Composicin: Extracto de carne, 3g Peptona, 5g. Agua destilada hasta 1000 ml

b)

Figura 20. Caldo de pollo (Caldo Nutritivo)

Figura 19.Tubos con Agar nutritivo y caldo nutritivo.

Solucin de lugol Iodo re sublimado, 1g. IK, 2g. Agua destilada hasta 300 ml

BIBLIOGRAFIA Doctora, Ludy Janeth Mendoza Curso completo contenido en lnea Microbiologa(Unad)

CONCLUSIONES Conocimos las normas de bioseguridad del laboratorio y la importancia de para realizar las practicas satisfactoriamente. Conocimos los diferentes elementos y materiales utilizados en el laboratorio de microbiologa. Aprendimos a desinfectar materiales de vidrio, manipular y a empacar material para ser esterilizado. Conocimos los diferentes mtodos de esterilizacin. Nos mostro la importancia que tienen los micro cultivos y sus diferentes compuestos. Aprendimos a preparar y manipular los medios de cultivo utilizados en la prctica del laboratorio.