guía de prácticas unfv.pdf

5/19/2018 Gu a de Pr cticas UNFV.pdf

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MANUAL DEPRCTICAS DE

HISTOTECNOLOGAEn la vejez la ciencia es para nosotros un cmodo refugio; y si no la

plantamos de jvenes no nos dar sombra cuando seremos viejos.

2011

Perteneciente a

..

LIMA - PER

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE TECNOLOGA MDICA

Escuela de Laboratorio y de Anatoma Patolgica


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Edicin de la gua de prctica

Cuarta edicin 2011 Profesor Eduardo Sedano GelvetProfesor Carlos Neira Montoya

La edicin de la presente gua de prctica, fue posible gracias a la experienciaacumulada de los docentes y colaboradores durante los ltimos aos.

Asignatura de Histotecnologa

Ao Acadmico 2011

1. Profesor responsable de la asignatura:Eduardo Eulogio Sedano Gelvet. Categora: Auxiliar. Clase: Tiempo parcial 12horas.

2. Profesores de la asignatura:Carlos Ricardo Neira Montoya. Categora: Auxiliar. Clase: Tiempo parcial 12horas.

Universidad Nacional Federico Villarreal.Facultad de Tecnologa Mdica.ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE LABORATORIO Y DE ANATOMAPATOLGICA.Jr. Ro Chepen 290, El Agustino, Lima-Per.Correo electrnico: [email protected]

[email protected]

2010 Derechos Reservados.

Prohibida la reproduccin parcial o total sin autorizacin escrita de los autores.

Nuestra constante misin es buscarnuevas tecnologas,..... nuevas formas de procedimientos.

Y avanzar osadamente, a donde no ha llegado ningn otro.......histotecnlogo

Eduardo Sedano G.


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CONTENIDO

Prologo Pg. 6

Modificaciones sugeridas Pg. 8

Declogo del estudiante Pg. 9

Test de estilos de aprendizaje Pg. 10

El proceso de estudio Pg. 13

Mapas conceptuales Pg. 15

Formato de desarrollo y de presentacin de un proyecto deInvestigacin Pg. 17

Departamento de patologa del Hospital de ApoyoMara Auxiliadora Pg. 21

Laboratorio de procedimientos histolgicos del departamentode patologa Pg. 23

Factores de riesgo ocupacional en el laboratorio deprocedimientos histolgicos Pg. 33

Medidas generales de seguridad Pg. 34

Clasificacin de materiales peligrosos Pg. 36

Procedimientos a seguir en caso de accidente Pg. 37

Recomendaciones de seguridad en caso de sismo Pg. 38

Un programa de garanta de la calidad Pg. 41

Eleccin de un mtodo histolgico o histoqumico Pg. 42

Mtodos de estudio en histologa Pg. 43

Pasos de las tcnicas microscpicas Pg. 44

Tabla de tejidos y fijadores Pg. 49

Deshidratacin e inclusin en parafina Pg. 50

Obtencin de los cortes Pg. 50


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Coloracin Pg. 51

Montaje Pg. 53

Recomendaciones tiles Pg. 53

Mtodo de coloracin de hematoxilina y eosina Pg. 55

Reaccin del cido perydico de Schiff (mtodo de P.A.S.) Pg. 57

Reaccin de P.A.S (para demostrar glucgeno) Pg. 60

Mtodo del carmn de Best (modificado por Lillie) Pg. 63Mtodo del hierro coloidal de Hale (mtodo modificado) Pg. 65

Mtodo del azul alciano (mtodo del alcian blue) Pg. 67

Coloracin metacromtica con azul de toluidina Pg. 69

Observacin metacromtica de glucosaminoglicanos cidoscon azul de toluidina Pg. 69

Mtodo de Feulgen (Feulgen-Rossenbeck) Pg. 70

Mtodo del verde de metilo-pironina(Unna-Pappenhein) Pg. 73

Mtodo del rojo Congo de Bennhold Pg. 75Mtodo de coloracin con Sudan III o IV Pg. 77

Mtodo de Sudn Black B (Sudan negro) Pg. 79

Mtodo de Perls (azul de Prusia, azul de Berln) Pg. 81

Mtodo de von Kossa Pg. 83

Mtodo de Masson Fontana Pg. 85

Panel de tamizado primario y secundario Pg. 87

Procedimiento del complejo streptavidina-biotina fosfatasaalcalina (mtodo del H.A.M.A) Pg. 90

Mtodo de coloracin con luxol fast blue para mitocondrias Pg. 96

Mtodo de hematoxilina frrica de Weigert para ergastoplasma Pg. 98

Mtodo de impregnacin argntica directa de Da Fano

para el aparato de Golgi Pg. 99


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Coloracin de van Gieson para fibras colgenas Pg. 101

Coloracin tricrmica de Masson Pg. 103

Impregnacin argntica de Gomori para de reticulina Pg. 106

Coloracin de Verhoeff para fibras elsticas Pg. 108

Coloracin de Giemsa (modificacin de Wolbach) Pg. 110

Mtodo de Schmorl para demostracin de lagunas yCanalculos seos Pg. 112

Coloracin de azul de toluidina para colorear sustanciafundamental de tejido cartilaginoso. Pg. 114

Mtodo de coloracin con luxol fast blue para bandas de mielina Pg. 115

Coloracin de Ziehl-Neelsen para microorganismoscido-alcohol resistentes. Pg. 117

Coloracin de Wayson para Helicobacter pylori Pg. 119

Impregnacin argntica de Warthin-Starry paraHelicobacter pylori Pg. 120

Impregnacin de nitrato de plata-metanamine de Gomori(aplicacin de Grocott para hongos) Pg. 122


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PROLOGO

Esta gua de prctica de Histoqumica dedicada al estudiante de Tecnologa Mdicaintenta exponer cada mtodo en forma sinttica y a la vez completa, suficiente en

extensin y con la profundidad necesaria.Presentar, un Test de Estilos de Aprendizaje porqu es preciso tener una idea

de como aprenden los alumnos para poder ayudarlos, luego de una introduccin de loque es el Departamento de Patologa y el Laboratorio de Procedimientos Histolgicos delmismo, las cinco etapas principales de las Tcnicas Histolgicas, que permiten laobtencin de preparaciones histolgicas permanentes (lminas) para el estudio almicroscopio ptico y, adems, Histoqumica; cada uno de estos dos ltimos tpicospresentar algunos de los mtodos ms comnmente utilizados en el estudio de clulas ytejidos. Los principios en que se basan estos mtodos sern explicados sumariamente a

fin de que se puedan evaluar debidamente los resultados con ellos obtenidos.Como es lgico suponer, lo que se desea es llevar al microscopio una preparacin

en que los tejidos ya sean normales o patolgicos estn perfectamente conservados,presentando la misma estructura y composicin qumica que posean cuando estabanvivos. Sin embargo, a pesar de las medidas adoptadas, este ideal no se alcanza,observndose en todas las preparaciones histolgicas ciertos artefactos consecuentes delprocesado que sufrieron.

Todas las caractersticas que presenta esta gua de prctica han sido elaboradasacorde con la experiencia acumulada durante 20 aos en la enseanza de pre-grado en

Tcnicas Histolgicas e Histoqumica, as como en la investigacin y en el trabajo diariorealizado en el Laboratorio de Procedimientos Histolgicos del Departamento dePatologa del Hospital de Apoyo "Mara Auxiliadora"; que sirven para transmitir destrezaseminentemente prcticas y aplicadas que permitan al alumno: 1) correlacionar elconocimiento histolgico con los mtodos que permiten su estudio, y 2) el conocimiento demtodos que posee actualmente la histologa, para aplicarlos y coadyuvar as, aldiagnstico histopatolgico.

Cabe mencionar, que esta gua de prctica est sujeta a las correcciones sugeridaspor colegas y alumnos.

Por ltimo, que sirvan estas lneas para agradecer a quienes contribuyeron ennuestro desarrollo en las Tcnicas Histolgicas, Histoqumica y en la docencia, porquenos ensearon que los conocimientos no tienen barreras profesionales.

A los doctores MARCOS COPAIRA BELTRN y CSAR EDUARDO MONTALVOARENAS nuestro eterno agradecimiento.

CARLOS RICARDO NEIRA MONTOYAEDUARDO EULOGIO SEDANO GELVET


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Esta gua de prctica ha tenido modificaciones sugeridas por:Interno T.M. JUAN AUQUI SULCAInterno T.M. LUIS CAPCHAAlumna de Biologa: NANCY ODILE CHANCO APARICIOInterno T.M. CESAR EDUARDO ROJAS NARVAEZInterno T.M. MOISS SALDAA OREJNInterno T.M. LUIS VALLEJOS SNCHEZInterno T.M. JAFFET VARGAS VITTORINOAlumno de T.M. EDUARDO MANUEL CORNEJO RUIZ.Doctor ALFREDO GUILLEN ONEGLIO

En todo tecnlogo mdico ha de haber una primavera de dudas, un verano dereposo, un otoo de conocimientos y un invierno de sabidur a.

Eduardo Sedano Gelvet


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REGULACIONES

INFORMACION GENERAL

Antes de cada sesin de trabajo se debe leer la gua de prctica y planificar el trabajo

cuidadosamente. No empezar el trabajo hasta haber recibido las instrucciones. La sesin de trabajo se

iniciar con las instrucciones del profesor de prcticas. Si la informacin del instructor o delmanual no estn claras, realice las preguntas adecuadas.

Anote las observaciones cuando las realice. El examen prctico incluir la informacin queel profesor de prcticas le brindar, la del manual y la de sus propias observaciones yconclusiones.

Responda y discuta las preguntas de la gua con su profesor de prctica, estas sernconsideradas en el examen prctico.

REGLAS DEL LABORATORIO

Debe usar un mandil blanco o chaqueta, limpios cuando este en el laboratorio. Este debeser lavado por lo menos una vez a la semana utilizando agua caliente y leja. No se permitirel ingreso o la permanencia de alumnos sin mandil o chaqueta.

Antes de empezar y despus de trabajar limpie la mesa del laboratorio y cada vez que seanecesario (derrame de material contaminado).

Coloque slo el material indispensable sobre las mesas de laboratorio. No colocar bolsas, nimochilas u otro material que no sea del curso.

Nunca utilice la boca para pipetear, el material puede ser txico o infeccioso.

Est PROHIBIDOcomer, fumar o aplicarse cosmticos en el laboratorio.

Lvese las manos con agua y jabn antes de retirarse del laboratorio. Colocar el material usado desechable en envases apropiados al terminar las prcticas,

siendo de responsabilidad del alumno N 1 correspondiente de acuerdo al cronograma.

Algunos de los reactivos con que se trabajan son peligrosos. Use guantes o mascarillasdescartables cuando sea necesario y siga las instrucciones del profesor de prcticas.

Reporte todos los accidentes o derrames, incluso los menores, al instructor. Estos reportesno sern tomados en cuenta para la nota pero son importantes para tomar medidas debioseguridad para todos y evitar la repeticin de los accidentes.

MATERIAL NECESARIO (para todas las prcticas)

El alumno debe contar con el siguiente material para el desarrollo de las prcticas: Gua de prcticas (obligatorio)

Desinfectantes: Alcohol 70%, fenol al 5%

Jabn lquido y toallas de papel

Material de escritorio: Marcador de tinta indeleble, lpiz de cera, caja de colores, papel kraft.

Material de limpieza: detergente, escobillas.

Material de laboratorio: lminas portaobjetos y cubreobjetos, asa de siembra y aguja decultivo.

Equipos: microscopio compuesto, estufa, balanza y refrigeradora.

Set de colorantes del mtodo de coloracin de hematoxilina eosina, agua destilada


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DECLOGO DEL ALUMNO

11LLoottiiccooccoommoopprriinncciippiioobbssiiccoo..

22EElloorrddeennyyllaalliimmppiieezzaa..

33LLaaiinntteeggrriiddaadd..

44

LL

aa

pp

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nn

ttuu

aa

lliidd

aa

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.

.

55LLaarreessppoonnssaabbiilliiddaadd..

66EEllddeesseeooddeessuuppeerraacciinn..

77EEllrreessppeettooaallaasslleeyyeessyylloossrreeggllaammeennttooss..88EEllrreessppeettooppoorreellddeerreecchhooddeelloossddeemmss..

99SSuuaammoorraallttrraabbaajjoo..

1100SSuu eessffuueerrzzoo ppoorr llaa eeccoonnoommaa yyaaccoommeettiimmiieennttoo..


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Test de Estilos de AprendizajePor favor, rodee con un crculo el nmero (del 1 a 6) que corresponde ms a

cmo usted se ve o cmo se describira usted:

1. Yo me describira comoimparcial (de mentalidadabierta)

1 2 3 4 5 6 Yo me describira comoexplcito (tajante)

2. Yo me describira comoreflexivo 1 2 3 4 5 6

Yo me describira comoorientado a la accin

3. Me gusta permanecerflexible

1 2 3 4 5 6 Me gusta ser especfico

4. Valoro la paciencia 1 2 3 4 5 6 Valoro lograr hacer cosas

5. Me gusta que las cosassean variadas y tengancolorido

1 2 3 4 5 6 Me gusta que las cosassean exactas y precisas

6. Yo me describira comoobservador

1 2 3 4 5 6 Yo me describira comoactivo

7. Tomo un enfoque creativo eimaginativo para resolverproblemas

1 2 3 4 5 6Tomo un enfoque precisoy calculado para resolverproblemas

8. Me siento bien cuandoentiendo las cosas 1 2 3 4 5 6

Me siento bien cuandologro un impacto en lascosas

9. Me gusta permanecerflexible (no ser tanespecfico)

1 2 3 4 5 6Me gusta ser lo mspreciso posible

10.Soy bueno mirando lascosas bajo diversasperspectivas

1 2 3 4 5 6Soy bueno lograndohacer cosas

11.Yo me describira comoreceptivo y complaciente 1 2 3 4 5 6

Yo me describira comoevaluativo y lgico

12.Me gusta mirar lo que pasaa mi alrededor 1 2 3 4 5 6

Me gusta ver losresultados de misacciones

13.Lucho por ser verstil 1 2 3 4 5 6 Lucho por ser preciso

14.Me considero reservado ylgico

1 2 3 4 5 6 Estoy preparado paraactuar


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Instrucciones.-Los items impares miden la dimensin EC/CA (Sentir/Pensar).Los items pares miden la dimensin EA/OR (Actuar/Observar). Por favor, sume lositems que correspondan a cada dimensin, tal como se indica a continuacin:

EC/CA (Sentir/Pensar)

Item 1 3 5 7 9 11 13 Total

Puntos

EA/OR (Actuar/Observar)

Item 2 4 6 8 10 12 14 Total

Puntos

Coloque el Total EC/AC (Sentir/Pensar) en el eje vertical de la figura acontinuacin. Despus coloque el Total EA/OR (Actuar/Observar) en el eje horizontal.Luego, coloque una cruz en el lugar de interseccin de los dos puntajes. Esta cruzreflejar su modo adaptativo.

EC- 7

8-- 9

10- -- 11

ABEJ A 12- - DELF N- 13

14- -

- 1516- -- 17

18- -- 19

20- -- 21

22-EA - 23 OR42 40 38 36 34 32 30 28 26 22 20 18 16 14 12 10 8

41 39 37 35 33 31 29 27 23 21 19 17 15 13 11 9 7- 26

27 -- 28

29 -- 3031 -

- 3233 -

- 3435 -

- 36CASTOR 37 - BHO

- 3839 -

- 4041 -

- 42CA


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El di agr ama a cont i nuaci n seal a l as f uer zas y debi l i dadesde cada est i l o de apr endi zaj e con notas par a mej or ar

Exper i enci a concr et aAcomodador (Abeja) ( Sent i r ) Divergente (Delfn

)

Fuer zas: Logr ar hacer l as cosas Fuer zas: Habi l i dades i magi nati vas. Li der azgo Comprender a l a gente.

Toma de r i esgos Reconocer pr obl emas. Tor ment a de i deas.

Debi l i dades: Mej or as t r i vi al es. Debi l i dades: Par al i zado por l asActi vi dad si n sent i do. al t er nat i vas.

No puede t omardeci si ones.

Rasgos t pi cos: Tr abaj o t ermi nado a Rasgos t pi cos: Tener i deas. t i empo. Reconocer probl emas yPl anes pr ct i cos. opor t uni dades. Di r i gi do a met as.

Par a desar r ol l ar sus habi l i dades Par a desar r ol l ar sus habi l i dadesdede apr endi zaj e acomodador, pr act i que: apr endi zaj e di ver gent e, pr acti que: *Compr omet er se con obj et i vos. *Ser sensi bl e a l os sent i mi ent os de*Buscar nuevas opor t uni dades. l a gent e. * I nf l ui r y di r i gi r a ot ros. *Ser sens i bl e a val ores. * I nvol ucr arse en f orma personal . *Escuchar con ment e abi er t a. *Tr at ar a gente. *Reuni r i nf or maci n.

*I magi nar se l as i mpl i caci ones desi t uaci ones i nci er t as.

Exper i ment aci n Obser vaci n

Act i va ( Act uar ) Ref l exi va ( Obser var )Convergente (Castor) Asimilador (Bho

)

Fuerzas: Sol uci n de probl emas. Fuerz as: Pl ani f i caci n.Tomar deci si ones. Cr eaci n de model os.Razonami ent o deduct i vo. Def i ni r pr obl emas.Def i ni r pr obl emas. Desar r ol l o de t eor as.

Debi l i dades: Resol ver el pr obl ema Debi l i dades: Cast i l l os en el ai r e. er r neo. Fal t a de apl i caci onesDeci si ones apr esuradas. pr ct i cas.

Rasgos t pi cos: Presenci a de f oco. Rasgos t pi cos: Capaz de apr enderPr obar l as i deas. de l os er r or es.

Pensami entos cent r ados Base sl i da par a elt rabaj o.Enf oque si st emti co.

Par a desar r ol l ar sus habi l i dades de Par a desar r ol l ar sus habi l i dades deapr endi zaj e conver gent e, pr act i que: apr endi zaj e asi mi l ador , pr act i que:*Cr ear nuevas f ormas de pensar y *Or gani zar i nf ormaci n.act uar. *Const r ui r model os concept ual es.

*Exper i mentar con nuevas i deas. *Pr obar t eor as e i deas. *Escoger l a mej or sol uci n. *Di sear experi ment os.*Est abl ecer met as. *Anal i zar dat os cuant i t at i vos. *Tomar deci si ones.

Concept ual i zaci n abst r act a(Pensar)


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EL PROCESO DEL ESTUDIO

Para concluir con los desagregados referidos al mtodo del estudio, debemos sealartanto cuanto secuencia el proceso del estudio:

1. Prepara y examina la temtica que ha de exponerse durante la clase inmediataposterior.

2. Estudia y analiza el o los temas de las materias que se expusieron en la claseanterior.

3. Busca uno o varios motivos que comprometan el estudio.

4. Precisa una nocin clara de los objetivos que debes lograr.

5. Empieza el mapa conceptual siguiente lo antes posible, a fin de repasar condetenimiento y en forma crtica la leccin anterior.

6. A travs de la prctica, descubre y determina qu te es mejor, si empiezas por latarea ms difcil o por la ms fcil cuando te encuentres frente a varios deberesde dificultad desigual.

7. Evala y valora diariamente el grado de importancia de los temas que te sonpresentados, a fin de dedicar tus mayores esfuerzos y fijar permanentementeaquellos que son vitales y fundamentales.

8. Comienza a trabajar tu mapa conceptual lo ms pronto posible.

9. Durante tu trabajo, desarrllalo intensamente y mantente concentrado.

10. Cuida que tu atencin no se desve o confunda cuando ests trabajando.

11. Trata de actuar t mismo sin pedir ayuda mientras no te sea imprescindible.

12. Elabora tus propios ejemplos concretos y con tus palabras sobre los temas,principios y reglas que analizas.

13. Subraya y resalta las ideas esenciales en tus libros o toma notas fichadas.

14. Haz un mapa conceptual a fin de dominar el material que se te presente extensoy complejo. Utiliza tu memoria en forma inteligente.

15. Acostmbrate a estudiar en forma razonada repasando mentalmente cadaprrafo, tan pronto lo hayas ledo.

16. Al encontrarte con trminos tcnicos, frmulas, definiciones, fechas y bosquejostrata de memorizarlas una vez que las hayas comprendido.

17. Si debes aprender algo de memoria es mejor leer en voz alta quesilenciosamente, y es mejor leer rpidamente que despacio.

18. Toma un descanso y deja divagar tu mente antes de empezar otra tarea,despus que hayas realizado un estudio intenso de un material difcil y

complicado.


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19. Aplica tus conocimientos en todo trabajo que puedas, a fin de reafirmarlos.

20. Toma apuntes y mantente activo durante tus clases a las que debieras asistir.

BLANCO Lourdes; CSPEDES Pablo: Metodologa del estudio. El trabajointelectual. En: Monografas.com, Newsletter #181,. Visto 25 de Noviembre de 2004.http ://www.monografias.com/trabajos15/trabajo-intelectual/trabajo-intelectual.shtml
http://www.monografias.com/trabajos15/trabajo-intelectual/trabajo-intelectual.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/trabajo-intelectual/trabajo-intelectual.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/trabajo-intelectual/trabajo-intelectual.shtml


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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE TECNOLOGA MDICA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE TECNOLOGA MDICA

LABORATORIO CLNICO Y DE ANATOMIA PATOLGICA

PROYECTO DE INVESTIGACIN

TEMA:

ALUMNO:

LIMA-PER

2010


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INDICE

CAPITULO I

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Pagina

1.1 Descripcin de la realidad

1.2 Delimitaciones y definicin del problema

1.2.1 Delimitaciones

a. Delimitacin temporal

b. Delimitacin espacial

c. Delimitacin social

d. Delimitacin conceptual

1.2.2 Definicin del problema

1.3 Planteamiento del problema

1.3.1 Problema principal

1.3.2 Problemas secundarios

1.4 Objetivos de la Investigacin

1.4.1 Objetivo principal

1.4.2 Objetivos especficos

1.5 Justificacin e importancia

1.6 Limitaciones


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CAPITULO II

MARCO TEORICO

2.1 Antecedentes de la Investigacin

2.2 Marco histrico

2.2.1 Sobre .........

2.2.2 Sobre ..........

2.3 Marco conceptual

2.3.1 Relacionado con ..........



2.4 Hiptesis de la Investigacin

2.4.1 Hiptesis general

2.4.2 Hiptesis especficas

2.5 Variables e indicadores

2.5.1 Variable independiente

2.5.2 Variable dependiente

2.6 Definicin de trminos


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CAPITULO III

METODOLOGIA

3.1 Tipo y Nivel de la Investigacin

3.1.1 Tipo de Investigacin

3.1.2 Nivel de Investigacin

3.2 Mtodo y Diseo de Investigacin

3.2.1 Mtodo

3.2.2 Diseo

3.3 Cobertura de Estudio

3.3.1 Poblacin

3.3.2 Muestra

3.4 Tcnicas e Instrumentacin3.5 Programa de Actividades y Presupuesto

3.5.1 Cronograma de Actividades

3.5.2 Presupuesto

Addendum


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DEPARTAMENTO DE PATOLOGA DEL HOSPITAL DE APOYO "MARAAUXILIADORA"

Defin icin del DepartamentoEl Departamento de Patologa, es el rgano operativo de lnea encargado de

brindar diagnstico patolgico integral de la ms alta calidad a la poblacin usuaria,mediante el estudio macroscpico y microscpico de las piezas quirrgicas, biopsias ynecropsias; y del estudio a nivel citolgico y citogentico de exudados, lquidos corporalesy clulas exfoliantes.

Esta integrado por Mdicos Especialistas, Tecnlogos Mdicos Especialistas,Tcnicos y Auxiliares de las Ciencias de la Salud, as como personal de ApoyoAdministrativo y de Servicio.

Posicin estructural y dependencia.El Departamento de Patologa, es un rgano de Lnea de los Servicios Intermedios

de Apoyo al Diagnstico del Hospital de Apoyo "Mara Auxiliadora", que depende en loadministrativo y funcional de.................. y en lo tcnico-normativo de .....

Principales funciones y atribuciones:a) Desarrollar actividades de Apoyo al Diagnstico para la proteccin,

recuperacin y rehabilitacin del paciente, en el contexto de la familia y sucomunidad.

b) Contribuir en la proteccin de la salud del usuario y de la comunidad atravs de programas de despistaje y prevencin de cncer.c) Brindar atencin y servicios con criterios de calidad y calidez a la poblacin

usuaria, en todos los sectores de trabajo del Departamento: Jefatura,Secretaria, Servicios, Laboratorio de Procedimientos Histolgicos, y enespecial el Servicio de Mortuorio y Necropsias.

d) Promover el desarrollo de los recursos humanos del Departamento dePatologa, destinados a lograr la calidad y competitividad en el desempeode sus funciones, mediante la implementacin de programas de

capacitacin y educacin contina, utilizando metodologa deproblematizacin y solucin de casos.

e) Promover y desarrollar la investigacin cientfica en los diferentes camposde la patologa y de la histotecnologa.

f) Brindar apoyo tcnico y de asesora especializada a los directivos de laInstitucin y a los establecimientos de menor complejidad, interactuandocon equipos multidisciplinarios.

g) Desarrollar actividades de docencia universitaria de pre y post grado enpatologa e histotecnologa, segn convenios establecidos con las

Universidades y las normas Institucionales vigentes.


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h) Otras funciones afines que le asigne la Institucin.

Ubicacin y reas fsicas del Departamento de Patologa.El Departamento de Patologa se encuentra ubicado en el primer piso al costado

del Servicio de Emergencia.Las reas fsicas con que cuenta el Departamento de Patologa son:- Oficina de la Jefatura del Departamento- Servicio de Citologa Exfoliativa- Servicio de Patologa Quirrgica- Servicio de Mortuorio y Necropsia- Laboratorio de Procedimientos Histolgicos.

Todo Departamento de Patologa debe contar con un manual de organizaciones y

funciones (MOF), Manual de Normas y Procedimientos (MNP), donde se especifica enforma detallada lo que debe hacer cada persona del Departamento, facilitndose el trabajoen equipo y con un Plan Operativo Anual. De igual forma debe existir un fluxograma en elcual se consigna en forma grfica la organizacin en relacin al movimiento de lasmuestras en el Departamento.

La organizacin del Departamento est conformada por: Jefe de Departamento,Jefe de Seccin, Patlogo Asistente, Jefe de Laboratorio ( Tecnlogo Mdico) que puedeser jefe de seccin en caso de que no se encuentre presente un patlogo; TecnlogoMdico Asistente, Bilogo; Tcnico y Auxiliar de laboratorio; empleado de servicio de

morgue y limpieza.

"El hombre encuentra a Dios detrs de cada puerta que la ciencia lograabrir."

Albert Einstein


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LABORATORIO DE PROCEDIMIENTOS HISTOLGICOS DEL DEPARTAMENTO

DE PATOLOGA

Definicin del Laboratorio de procedimientos histolgicos del departamento

de patologa.El Laboratorio de procedimientos Histolgicos del Departamento de Patologa, es el

rgano tecnolgico de lnea encargado de brindar el servicio de elaboracin de preparadoshistolgicos, histoqumicos e inmunohistoqumicos de la ms alta calidad al patlogo(usuario), mediante el procesamiento de las piezas quirrgicas, biopsias y necropsias porel mtodo de la parafina u obtenidas por congelacin.

Esta integrado por Tecnlogos Mdicos Especialistas, Tcnicos y Auxiliares de lasCiencias de la Salud, as como personal de Apoyo Administrativo y de Servicio.

Posicin estructural y dependencia.El Laboratorio de Procedimientos Histolgicos, es un rgano Tecnolgico de Lnea

de los Servicios Intermedios de Apoyo al Diagnstico Histopatolgico, que depende en loadministrativo y funcional del Departamento de Patologa y en lo tcnico-normativo delJefe de Laboratorio.

Principales funciones y atribuciones:a) Desarrollar actividades de Apoyo al Diagnstico Histopatolgico con la

finalidad de satisfacer las necesidades diagnsticas del patlogo.

b) Coadyuvar el diagnostico histopatolgico a travs de mtodos histolgicos,reacciones histoqumicas e inmunohistoqumicas.

c) Brindar el servicio de elaboracin de preparados histolgicos, histoqumicose inmunohistoqumicos con criterios de calidad y calidez al usuario.

d) Promover el desarrollo de los recursos humanos del Laboratorio deProcedimientos histolgicos, destinados a lograr la calidad y competitividaden el desempeo de sus funciones, mediante la implementacin deprogramas de capacitacin y educacin continua.

e) Promover y desarrollar la investigacin cientfica en los diferentes campos

de la histotecnologa.f) Brindar apoyo tcnico y de asesora especializada a los Laboratorios de

Procedimientos Histolgicos Perifricos.g) Desarrollar actividades de docencia universitaria de pre y post grado en

Histotecnologa, segn convenios establecidos con las Universidades y lasnormas Institucionales vigentes.

h) Otras funciones afines que le asigne la Institucin.


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Ubicacin y reas fsicas del Laboratorio de Procedimientos Histolgicos. El Laboratorio de Procedimientos Histolgicos se encuentra ubicado dentro del

Departamento de Patologa.Las reas fsicas con que cuenta el Laboratorio de Procedimientos Histolgicos

son: Tcnicas Histolgicas Histoqumica. Laboratorio de Inmunohistoqumica.

A continuacin mostramos un grfico en el que se refleja un modelo organizativopropio del Laboratorio de Procedimientos Histolgicos del Departamento de Patologa delHospital de Apoyo "Mara Auxiliadora":

"Nunca consideres el estudio como una obligacin sino como unaoportunidad para penetrar en el bello y maravillosos mundo del saber."

Albert Einstein


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+----------+ +-------------+ +------------------+|LABORATORIOS| |TAREAS ASIGNADAS| | MTODOS REALIZADOS |+----------+ +-------------+ +------------------+

Procedimiento Procesamiento de: Tecnicas histolgicas Histoqumicahistolgicos

Biopsias Hematoxilina-eosina Reaccin de P.A.SPiezas quirrgicas Tricromico de Masson Col.de alcian blue

Material de autopsias Impreg. de Gomori Hierro coloidal de HaleBiopsias por congelacin Color. de Verhoeef Col.metacromticaColoracin de Gram Col.de carmn BestCol.de Ziehl Neelsen Reaccin de FeulgenColoracin de Waysson Coloracin de sudanImpreg. argtca.de Grocott Reaccin de Von KossaColoracin de Wolbach Reaccin de Perls

Inmunohistoqumica Procesamiento de:

BiopsiasPiezas quirrgicasMaterial de autopsias Anticuerpos ligados a enzims: Mtodo de

Biopsias por congelacin inmunofosfatasa alcalina.para estudio con suerospoliclonales y anticuerposmonoclonales.


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Del Jefe del Laboratorio Denominacin del cargo:

Jefe del Laboratorio de Procedimientos Histolgicos.

Naturaleza del trabajo:Encargado de dirigir eficaz y eficientemente la planificacin, organizacin,control y mejora, de las actividades y desempeo del Laboratorio deProcedimientos Histolgicos; orientados al logro de la misin asignada y el cabalcumplimiento de los objetivos y metas establecidas por el Departamento y laInstitucin.

El Jefe del Laboratorio de Procedimientos Histolgicos, dependeadministrativa y funcionalmente del Jefe del Departamento de Patologa, ejerceautoridad sobre los Tecnlogos Mdicos, personal profesional, Internos de

Tecnologa Mdica, personal tcnico y auxiliar asignado al Laboratorio; as comosobre el personal que desarrolla funciones administrativas.

Principales funciones y responsabilidades:1. Coordinar efectiva y permanentemente con el Jefe del Departamento de

Patologa la planificacin, organizacin, control y mejora de las actividadesdel Laboratorio.

2. Dirigir la organizacin y funcionamiento del Laboratorio de ProcedimientosHistolgicos, en concordancia a las necesidades y expectativas de los

usuarios; as como el cumplimiento de los objetivos del Departamento y lasmetas operativas del Laboratorio.

3. Cumplir y hacer cumplir las normas, disposiciones, directivas y manualesvigentes del Departamento y de la Institucin.

4. Cumplir y hacer cumplir las normas, manuales y procedimientos vigentes deBioseguridad en el Laboratorio.

5. Participar activamente en la formulacin del Plan Operativo y el Plan deCapacitacin Anual del Laboratorio.

6. Implementar y dirigir la ejecucin del Programa Total de Control de Calidad.

7. Coordinar efectiva y permanentemente con los Tecnlogos MdicosAsistentes, Tcnicos y Auxiliares la planificacin, organizacin, control ymejora de las actividades del Laboratorio, segn competencias yresponsabilidades del personal.

8. Supervisar, monitorear y evaluar las actividades, tareas, procedimientos,resultados y tendencias del Laboratorio.

9. Realizar y participar en el desarrollo de actividades de Docencia eInvestigacin programadas por el Departamento, los Servicios o elLaboratorio.

10. Otras funciones afines que le sean encargadas por el Jefe del


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Departamento de Patologa.

Perfi l del cargoPara ocupar el cargo de Jefe de Laboratorio de Procedimientos Histolgicos,

los requisitos mnimos son:- Ser Tecnlogo Mdico, Especialidad Laboratorio Clnico y de Anatoma

Patolgica.- Estar debidamente registrado en el Colegio Tecnlogo Mdico del Per.- Tener Grado Acadmico de Magster o estudios de Maestra.- Tener experiencia mnima de 5 aos en Laboratorio de Procedimientos

Histolgicos.- Tener capacitacin en sistemas de informtica bsica.

Rgimen laboralTecnlogo Mdico nombrado.

Del Tecnlogo Mdico Denominacin del cargo:

Tecnlogo Mdico Asistente.

Funciones y responsabilidades:

Tcnicas: 1. Es responsable de la pieza quirrgica, biopsia o muestras de necropsias

desde su entrada al Laboratorio de Tcnicas Histolgicas hasta obtener elpreparado histolgico (lmina) en un lapso de 24-48 horas, adems deverificar que las solicitudes anatomopatolgicas tengan todos los datosrequeridos.

2. Es responsable del control de calidad de las lminas histolgicas,verificando siempre que el nmero de cortes corresponda a la descripcin

hecha en el estudio macroscpico.3. Es responsable de los procedimientos histolgicos, histoqumicos e

inmunohistoqumicos.4. Es responsable de la preparacin y del control de calidad de colorantes

y reactivos, para los procedimientos nombrados en el punto 4.5. Es responsable de implementar procedimientos histolgicos, e

histoqumicos eficaces y eficientes para coadyuvar el diagnstico.6. Responsable de la preparacin de piezas para museo y de material

didctico (microfotografas y slide).

7. Responsable de los equipos, materiales, reactivos y colorantes depositados


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en el almacn del servicio.8. Es responsable de evaluar el trabajo de su personal a cargo (tcnico y

auxiliar) en quien puede designar funciones bajo su responsabilidad.

Administrativas: 1. Cumplir y hacer cumplir en el Laboratorio los reglamentos, normas y

procedimientos vigentes en el Hospital.2. Cumplir y hacer cumplir en el Laboratorio las normas y procedimientos

vigentes de bioseguridad.3. Poner a consideracin del Jefe de Laboratorio las necesidades de personal,

equipos, materiales y reactivos del Laboratorio de ProcedimientosHistolgicos.

4. Colaborar y coordinar con el Jefe del Laboratorio en la organizacin,

funcionamiento del Laboratorio de Procedimientos Histolgicos y ademsen la confeccin de normas que permitan mejorar el trabajo.

5. Colaborar con el Jefe del Laboratorio en la elaboracin del Plan Estratgico.6. Cuidar que las instalaciones, mobiliarios, equipos y materiales se conserven

en buen estado.7. Informar al Jefe del Laboratorio de los problemas que se susciten por

indisciplina, irresponsabilidad o deficiencia del personal a cargo.

Docentes:

1. Participar activamente en el proceso de enseanza-aprendizaje.2. Organizar y/o participar en reuniones cientficas con las diferentes

secciones de Laboratorio Central, de Emergencia y el de la U.C.I.3. Asistir y/o participar en cursos y congresos nacionales e internacionales.4. Participar activamente en los programas de capacitacin y formacin

profesional.5. Capacitar peridicamente al personal a cargo.

Investigacin:

1. Realizar investigacin, participar en los proyectos que tengan propsito deefectuarlos y alentar esta actividad.

2. Presentar cuando menos un trabajo cientfico cada 2 aos.

Perfi l del cargoPara ocupar el cargo de Tecnlogo Mdico Asistente, los requisitos mnimos

son:- Ser Tecnlogo Mdico, Especialidad Laboratorio Clnico y de Anatoma

Patolgica.- Estar debidamente registrado en el Colegio Tecnlogo Mdico del Per.


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- Tener cursos o capacitacin en Laboratorio de Procedimientos Histolgicoso en Histotecnologa.

- Tener capacitacin en sistemas de informtica bsica.

Rgimen laboral: Tecnlogo Mdico nombrado o contratado.

Atender a los pacientes que vienen al laboratorio de procedimientos histolgicosno es un trabajo ni una obligacin, sino algo que

Eduardo Sedano G. y Ricardo Neira M.

yo debo hacer.


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EQUIPOS DE UN LABORATORIO DE HISTOTECNOLOGA

En un laboratorio de procedimientos histolgicos, es necesaria la utilizacin de ciertosinstrumentos para llevar a cabo su normal funcionamiento. Los instrumentos ms

comunes en un laboratorio de procedimientos histolgicos son: micrtomo, microscopio,estufa, refrigeradora, bao Mara, balanza, potencimetro.

EL MICROSCOPIO Y SUS PARTES

El microscopio, es el instrumento ms importante utilizado por los histotecnlogos, delos cuidados y correcto uso dependern el xito de las observaciones. Es funcin delmicroscopio hacer visible aquellas cosas tan pequeas que el ojo humano no puedehacerlo, est compuesto de un sistema de lentes de suficiente magnificacin y poderde resolucin que aquellos elementos que estn muy juntos entre s, se puedandistinguir separados dando una imagen clara y detallada cuando se utiliza suficienteiluminacin.

El aumento total de un microscopio se determina multiplicando el aumento queproporciona el ocular por el aumento que proporciona el objetivo.

Parte mecnica esta constituida por: Soporte, Cuerpo con el revlver porta-objetivos,Platina, Reguladores de enfoque: tornillos macromtrico y micromtrico.

Parte ptica, constituida por: oculares, con diferentes aumentos 5X, 10X o 15X,puede ser monocular o binocular, Objetivos secos, bajo poder 10X, alto poder 45X,Objetivo de inmersin de gran definicin 96X 100X

Sistema de iluminacin, constituido por: condensador, diafragma, Fuente deiluminacin interna o externa con un espejo plano/cncavo.

INDIQUE LAS PARTE DEL MICROSCOPIO


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Centro de inclusin

Centro de enfriamiento Afilador de cuchilla

Microtomo de rotacin tipo Minott

Microscopio ptico

Bao de flotacin


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Refri eradora Estufa

Microondas

Cocinilla elctrica

Microondas

Criostato

Procesador automtico de tejidos


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FACTORES DE RIESGO OCUPACIONAL EN EL LABORATORIO DEPROCEDIMIENTOS HISTOLGICOS

Qumicos:1. Colorantes:a. Naturales: Hematoxilina, carmnb. Artificiales: Escarlata de biebrich, eosina

2. Reactivos:a. cidos: cido clorhdrico, cido ntrico, cido sulfricob. Alcalis: Hidrxido de sodio, hidrxido de amonioc. Solventes orgnicos: Xilol, alcohol, metanold. Gaseosos: Formaldehdo, amoniaco

e. Sales: Nitrato de plata

Fsicos: a. Mecnicos:b. Campos electromagnticos:c. Temperaturas extremas:d. Electricidad

Biolgicos:a. Parsitos:b. Bacterias: Mycobacterium tuberculosisc. Virus: HIV, hepatitis Bd. Hongos:

Ergonmicos:

Psicosocial:a. Relaciones interpersonalesb. Estrs

c. Madures emocional


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MEDIDAS GENERALES DE SEGURIDAD

En la manipulacin de productos qumicos deberan observarse siempre las medidasde seguridad descritas a continuacin, incluso en el caso que en la etiqueta del

producto qumico no haya ninguna caracterizacin de sustancia peligrosa. En todos los trabajos llevar gafas protectoras y si es posible guantes protectores. Pipetear y medir los volmenes de sustancias voltiles o de cidos bajo una

campana extractora y protegido con una mascara antigases, como mnimorealizarlo en locales bien ventilados.

Evitar en cualquier caso el contacto con la piel, ojos y mucosas. Lavar con agua fra abundantemente y de forma inmediata las salpicaduras

sobre la piel, lavar con polietilenglicol las sustancias lipfilicas. No utilizar nuncadisolventes orgnicos debido al peligro de reabsorcin.

Los ojos que hayan entrado en contacto con sustancias custicas se lavan conun chorro suave de agua ( con una ducha especial para ojos) poniendo a lapersona afectada en posicin horizontal y protegiendo el ojo no afectado. Abrirampliamente los prpados y mover el ojo daado en todas direcciones. Acontinuacin consultar inmediatamente al oculista indicando la sustanciacustica.

Quitarse inmediatamente las prendas de vestir que estn impregnadas de lasustancia corrosiva.

En caso de accidente o de malestar consultar inmediatamente al mdico. No comer, beber fumar en el laboratorio de procedimientos histolgicos. Proteccin preventiva del trabajo en el caso de sustancias y preparaciones

cancergenas y mutgenas.

El primer deber que tenemos como persona y como profesional es para con laverdad, ya sea verdad cientfica, histrica o fi losfica.

Eduardo Sedano Gelvet y Carlos Neira Montoya


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RECOMENDACIONES DE SEGURIDAD EN CASO DE SISMO

Todos debemos estar prevenidos y entrenados frente a la ocurrencia de undesastre natural, y saber cual debe ser nuestra participacin para protegernos, proteger a

nuestra familia, a nuestros compaeros o a nuestros pacientes.Por eso es importante que participemos solidaria y activamente en cumplir lasnormas establecidas por el comit de defensa civil nacional, y podamos apreciar cual sernuestro accionar y como coordinar con nuestros compaeros, la conducta a desarrollarfrente a un siniestro.

Las siguientes son recomendaciones que el personal de salud, el pblico engeneral y usted seor alumno deben de seguir en caso de desastres naturales(terremotos), de tal forma que se evitara la mayor cantidad de daos en usted y los que losrodean.

Qu hacer antes de un sismo?:1. Prepare un plan de proteccin y seguridad con tus compaeros de seccin, crea

una conciencia de preparacin,2. Cuando ingrese al Departamento de Patologa, localice las zonas de seguridad

sealizadas, as como tambin cuales son las salidas y escaleras de emergenciaque tiene el Departamento.

3. En el Laboratorio de Procedimientos histolgicos identifica que zonas correnpeligro,

4. Reconoce las zonas de seguridad que deben estar sealizadas, generalmentejunto a las columnas y vigas de construccin, debajo del marco de la puerta yalejado de las ventanas o puertas de vidrio.

5. Verifica que objetos pesados no estn colocados encima de muebles cuya cadapueda ocasionar daos.

6. Si hay balones de oxgeno, estos deben estar en un ambiente donde no puedancaerse y de preferencia sujetos a las paredes por bridas.

7. Reconoce los lugares de la llave de luz, donde puede cortarse el suministro,igualmente donde esta el ducto que contiene las llaves de agua del servicio.

8. Elabora una ruta de salida, reconociendo las vas que puedan llevarte a un lugarseguro, en cada piso hay tres escaleras de salida que deben estar libres o cuyas

llaves deben de estar disponibles. Las zonas ms seguras de cada piso seencuentran en el pasillo entre los ascensores.

9. Ubica donde estn los extintores y como se usan.10. En el hogar, deben de tener cerca de la salida y en lugar visible, una radio porttil,

pilas o bateras, linterna, galonera de agua y mantas. Todo esto en una bolsa quepueda ser transportada en forma rpida.

Qu hacer durante el sismo?:1. Cuando se inicie algn desastre, mantenga la calma, solo con eso habr

conseguido mucho, y tendr ms oportunidad para asegurar su integridad.2. Recuerde que cuando se inicia un desastre, se debe de proceder a desconectar


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todos los artefactos elctricos que se encuentren encendidos, tambin si fuera elcaso desconectar las conexiones de gas.

3. Conserva la calma, ubcate en un lugar seguro: colquese debajo de las sealesde seguridad o de las columnas del edificio.

4. Protgete de los objetos pesados5. Proceda a alejarse de las ventanas, por los vidrios que puedan caer,6. Colcate debajo de mesas, escritorios o camas fuertes, zonas seguras son los

encuentros de columnas y vigas, no salgas del edificio.7. Durante el sismo los ascensores y escaleras son sumamente peligrosos. Por

ningn caso use los ascensores, ya que estos posiblemente no funcionaran, y sepueden convertir en una trampa.

8. Si el movimiento persiste proceda a dirigirse hacia las escaleras de maneraordenada, manteniendo siempre la calma.

9. El personal de salud, debe de proceder a realizar el apoyo de los pacientes que

pueden valerse por si mismo para la evacuacin, y realizar el apoyo del transporteen los pacientes que no lo pueden hacer.

10. La evacuacin del local, debe de realizarse en forma ordenada, recuerde que si elpnico se apodera de usted perder una gran oportunidad de ponerse a salvo.

11. Cuando este fuera del local, dirjase a lugares abiertos, o aquellos que estndebidamente sealizados, haga un crculo y mantenga la calma.

12. Recuerde que sus familiares donde estn si siguen estas mismasrecomendaciones estarn a salvo, de tal forma que cuando se inicie algn desastrePIENSE EN SU SEGURIDAD Y EN LA DE LOS QUE ESTN A SU ALREDEDOR,ya que en ese momento no podr hacer nada efectivo por sus familiares que seencuentren lejos de usted.

Qu hacer despus del sismo?1. Luego de pasado el desastre, ayude a las brigadas de rescate, y piense que

pueden existir replicas del sismo, as que no ingrese a locales con peligro decaerse.

2. Si te encuentras atrapado llama o haz ruido para recibir ayuda, en caso contrariocalma a los dems. Preprate para temblores secundarios o rplicas que ocurrenluego del sismo mayor.

3. Haz una rpida inspeccin inicial por si hay incendios, escape de gas, heridos ogente atrapada, establece las prioridades de acuerdo a las circunstancias,

4. Si hubiese fuego trata de controlarlo, debes saber donde estn los extintores ycomo usarlos, de no ser posible ayuda a los heridos y pacientes a salir,abandonando rpidamente el edificio por rutas seguras, que ya conoces.

5. No tocar cables, desconecta el sistema elctrico de tu seccin, ya sabes dondeesta la llave.

6. No abras puertas de armarios o reposteros ya que los objetos te pueden caerencima.

7. Presta atencin prioritariamente a los que ms lo necesitan, impedidos fsicos,nios, ancianos.


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8. Organiza las evacuaciones de pacientes y personal, as como la reanimacin,clasificacin y atencin de heridos.

Es importante leer con detenimiento estas recomendaciones y prepararnos para

participar. No olvidemos que esto puede ocurrir en cualquier momento y a cualquier hora,debiendo todos participar con responsabilidad y solidaridad.

Todo ser viviente proviene de un huevo (Omne vivum ex ovo)William Harvey Fisilogo ingls (1578-1657)


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UN PROGRAMA DE GARANTIA DE LA CALIDAD

Para obtener los mejores resultados posibles en los preparados histolgicos, unprograma de garanta de la calidad deber incluir distintos aspectos del funcionamiento

adecuado del laboratorio de procedimientos histolgicos del departamento de patologa.Un programa de este tipo debe tener tres sistemas, que se resumen a continuacin:

1. Sistema de Mejoramiento continuo de la calidad

A. Creacin de crculos de calidadB. Eleccin del mtodo histolgico, histoqumico o inmunohistoqumico.C. Desarrollo de un manual de procedimientos estndarD. Programas de entrenamiento y actualizacin permanente para el personal del

laboratorio de procedimientos histolgicos del Departamento de Patologa.

E. Recepcin adecuada de la muestra y de las solicitudes de estudioanatomopatolgico.

2. Sistema de control de calidad interno

A. Adquisicin de equipos, de productos qumicos y colorantes de calidad para ellaboratorio.

B. Procedimientos para la deteccin de errores, tales como lmina problema, lminapatrn, lmina testigo, lmina blanco y sueros negativos en caso de mtodosinmunohistoqumicos.

C. Mantenimiento preventivo de instrumentos y equipos.D. Decisiones a tomar cuando se presentan resultados fuera de control.

3. Sistema de control de calidad externo.

4. Documentacin de la ejecucin y resultados del programa de garanta decalidad.


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ELECCIN DE UN MTODO HISTOLGICO O HISTOQUMICO

Para implementar un mtodo histolgico o histoqumico, es necesario que seestandarice al mximo posible, es cuestin de probar los mtodos ms asequibles a

nuestra realidad para determinar el que tenga precisin en condiciones ptimas ynormales de trabajo. A continuacin representamos los diversos factores que influyen enla seleccin de un mtodo:

Interferencias

Costo de materiales Cantidad de personal

Desembolso de capital Exactitud

Flexibilidad Utilidades

Colegas Decisin final Precisin

Linealidad Entrenamiento

Lminas/hora Reparaciones

Espacio requerido Tipo de mtodo

Velocidad del procedimiento Indicaciones del fabricante

Todos estos factores se pueden resumir en los siguientes:1. Debe ser tcnicamente simple y de buen rendimiento.2. Los reactivos deben ser inicuos para el operador.3. Debe ser de bajo costo.4. Debe ser sensible, es decir, que tenga capacidad para detectar cantidades

pequeas de la muestra o sustancia que se quiere demostrar.5. Debe tener precisin.

6. Debe tener exactitud.7. Debe ser rpido.

Estos siete factores son los ms importantes para la eleccin de un mtodo "ideal".

REFERENCIA:SNCHEZ DE ROMERO, Doris.: TCNICAS INSTRUMENTALES DEUSO MS FRECUENTES EN EL LABORATORIO CLNICO Y DE INVESTIGACIN.

Imprenta IMPOFFOT L.T. Lima-Per, 1992. pp 39-40


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PASOS DE LAS TCNICAS MICROSCPICAS

Los pasos de las tcnicas microscpicas para obtener un preparado histolgicopermanente (lminas) son:

1. Toma de la muestra.2. Fijacin.3. Inclusin.4. Microtoma.5. Coloracin.

1. TOMA DE LA MUESTRA

OBTENCIN DE LA PIEZA

El material a utilizar puede ser extrado de los diversos animales delaboratorio, o bien puede tratarse de material humano. Entre los animales deobservacin se eligen aquellos que por su semejanza con el ser humanopueden sustituirlo sin grandes diferencias, y cuya obtencin y crianza puedeser fcilmente efectuada en el laboratorio.

- Muerte del animal: podemos producirla valindonos de un traumatismobrusco, o por la intoxicacin a causa de una dosis exagerada de narctico.

Fases en la obtencin de material animal:

- Extraccin de los rganos:conociendo la anatoma del animal, debemosdirigirnos directamente a los rganos que nos interesan estudiar. En el casode que estos sean varios, es conveniente extraer primero los que msfcilmente se descomponen, estos son el pncreas y la porcin inferior deltubo digestivo.

- Reduccin a piezas: teniendo en cuenta que para el tamao de las piezasdebemos considerar muy especialmente las cualidades del fijador a usar,hablaremos de este asunto cuando tratemos la fijacin.Una condicin indispensable para la buena confeccin de preparaciones es el

hacer correctamente la toma de tejidos. Para ello hay que observar lo siguiente: eltejido debe ser removido del conejo y colocado en el fijador lo ms rpido que seaposible. La velocidad es esencial. Hay que tener el equipo de diseccin listo y a lamano. Planificar antes; tener las soluciones preparadas antes de matar al conejo.Tener la suficiente cantidad de fijador de modo que cada pieza de tejido quedecubierta por lo menos con una cantidad de lquido cerca a 10 veces su propiovolumen (cerca de 100,00 mL de cada fijador). Marcar muy bien todos losrecipientes (o cpsulas, si se usan) con lpiz o tinta indeleble.El conejo debe ser muerto tan rpido como humanamente posible. Colocarlo en un

recipiente grande con una tapa ajustada dentro de la cual se habr colocado antes


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papel toalla empapada con ter o cloroformo. Poner una toalla seca encima de lasotras para prevenir que el conejo entre en contacto con estos lquidos. Tan prontocomo el conejo deje de respirar, cortar y sacarle la mdula espinal justo debajo dela cabeza. Si Ud. no esta familiarizado con la anatoma interna del ratn, debe

trabajar con un compaero que pueda disecar al animal rpidamente. Poner elcuerpo de espaldas en una base de madera, estirar sus miembros y clavar pies ymanos sobre la base. Humedecer la piel a lo largo de la lnea ventral con agua.Pinzar la piel del abdomen con frceps. Cortar a travs de la piel y de los msculosabdominales con unas tijeras. Con la punta de las tijeras hacer un corte longitudinalanterior a lo largo de la lnea ventral media, hacia y a travs de la parrilla costal.Conservar la punta de las tijeras cerca de los msculos abdominales para prevenirel cortar accidentalmente los rganos abdominales.Las clulas germinales y las clulas con alto contenido enzimtico degeneran

notoriamente rpido con la muerte. Por lo tanto es necesario disecar los tejidos enel orden siguiente:

a. Hgado. Cortar piezas no mayores de 5 mm de dimetro del borde del hgado.Enjuagar rpidamente estas con solucin salina (cloruro de sodio al 0.7%) ycolocar cada uno en su propio fijador.

b. Duodeno. Retirar el hgado a un lado, jalar el estmago y cortar el duodenolongitudinalmente en piezas de no ms de 3 mm de largo. Enjugarlas rpidamenteen la solucin salina. Limpiar gentilmente el lumen a chorro con una pipeta llena desolucin salina y colocar cada pieza en su propio fijador.

c. Testculos. Rasgar los sacos escrotales con un par de tijeras. Remover lostestculos completos y dejarlos caer directamente en el fijador. Este no es elmomento de darse cuenta que uno mato a un conejo hembra.

d. Corazn. Retirar el corazn, cortarlo por la mitad longitudinalmente y enjugarlovigorosamente con solucin salina para retirar los cogulos de sangre. Colocarcada pieza en su propio fijador.

Cuando corten los tejidos manipularlos cuidadosamente. No pincharlos o daarloscon la pinza. Cortarlos con una navaja de afeitar o con unas tijeras filudas. Permitir

que solo herramientas de acero inoxidable entren en contacto con los fijadores abase de cloruro de mercurio, pues son muy corrosivos. Ningn tejido debe tener undimetro mayor de 5 mm Cuando el testculo ha sido endurecido ligeramente por elfijador (cerca de 5 minutos), rebanarlo cuidadosamente con una navaja de afeitarfiluda. El testculo es un tejido sumamente blando y se quiebra fcilmente.El etiquetar cada tejido es muy importante debido a la necesidad de identificarlosdurante los muchos pasos. Etiquetar cada envase con el nombre del tejido y elfijador usado. Conservar los tejidos por separado en viales marcados. Tejidos quevan a ser lavados luego con agua corriente deben ser puestos en paquetes o encpsulas disponibles comercialmente. Cuando mucho, mientras ms tejidos van a


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ser procesados se necesitan gran cantidad de envases adecuados. Frascos decomida de beb son disponibles, tienen tapas rosca resistentes a cidos y sondescartables (especialmente los recipientes que contienen soluciones de cloruro demercurio. Instrumentos y material de vidrio no deben entrar en contacto con el

tejido viviente.

El hombre no es sujeto de experimentacin, esta verdad indiscutible hace queslo en casos excepcionales se pueda obtener material humano en condicionesde ser estudiado histolgicamente. De tres fuentes puede provenir el materialhumano: las necropsias, las biopsias y las piezas operadas. De stas, slo laprimera puede darnos material normal; las dos ltimas proporcionarn tejidospatolgicos.

Obtencin de material humano:

- Necropsias: son las piezas que se obtienen de un cadver. Para histologanormal es necesario que se trate de un cadver fresco y que no haya sidoatacado por ninguna lesin, por lo menos el rgano que se quiere estudiar.

- Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con elobjeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnstico histopatolgico.

- Piezas operadas: los tejidos que han sido extrados de las intervencionesquirrgicas, generalmente tumores u rganos inflamados, tambin puedendarnos material de investigacin pero, como en el caso anterior, slo servirnpara anatoma patolgica.

2. FIJACINA fin de evitar la destruccin de las clulas por sus propias enzimas (autlisis), opor bacterias, los tejidos separados del cuerpo de un animal (especimenes) debenser fijados, inmediatamente despus de ser cortados. Este tratamientodenominado fijacin tiene por finalidad endurecer los tejidos, volvindolos msresistentes para las etapas subsiguientes de las tcnicas microscpicas.

PREPARACIN DE SOLUCIONES FIJADORAS

Procedimiento general para preparar una solucin fijadora:1. Identificar las sustancias qumicas a emplearse teniendo en cuenta su peso

molecular o peso formula, densidad, peso especfico, grado de pureza, presenciade contaminantes, ndices de solubilidad, reacciones y su bioseguridad en sumanejo.

2. Realizar los clculos matemticos, encontrando los pesos o volmenes necesariospara su preparacin.

3. Contar con el material y equipo necesario para pesar como esptulas, vasijas,

balanza con sensibilidad adecuada.


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4. Tener el material volumtrico necesario a usar como fiolas, pipetas, probetas, etc.Verificar su limpieza y resistencia.

5. Preparar la solucin agregando cantidades crecientes del soluto ya medido sobreuna parte del volumen total (1/3 a ) con agitacin constante. Concluir la

preparacin enrazando con el solvente en una fiola de volumen adecuado.6. Las soluciones pueden guardarse en frascos de plsticos o de vidrio, este ultimo de

preferencia de color caramelo. Las tapas pueden ser de rosca o esmeriladas, nousar tapas de presin por la peligrosidad que originan cuando se destapan lassoluciones fijadoras, ni tapas de metal por la oxidacin y corrosin que sufren.

7. Las soluciones fijadoras una vez preparadas, deben ser apropiadamenteidentificados y las etiquetas deben contener la siguiente informacin:a. Nombre del fijador.b. Concentracin de la solucin fijadora.

c. Requerimiento de almacenamiento (medio ambiente o refrigeracin).d. Iniciales de la persona que preparo la solucin fijadora.e. Fecha de preparacin.f. Expectativa de duracin y fecha de expiracin.g. Peligros potenciales de la solucin fijadora.h. pH si se trata de una solucin fijadora bufferada.

Prctica

Se encargara a cada dos alumnos la preparacin de las siguientes soluciones fijadoras:

Fijador simple

Solucin de formol al 10%Formol comercial al 37-40% 1 vol.Agua corriente 9 vol.

Fijadores compuestos o mezclas fijadoras

Lquido de ZenkerDicloruro de mercurio 5.0 gDicromato de potasio 2.5 gAgua corriente 100.0 mLcido actico glacial 5.0 mL

Despus que los tejidos son fijados en Zenker, es necesario eliminar el precipitadode mercurio tratando los cortes, primero, con lugol y posteriormente, con tiosulfato de

sodio.


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Lquido de BouinSolucin acuosa de cido pcrico saturada 15 vol.Formol comercial al 37-40% 5 vol.

cido actico glacial 1 vol.

Lquido de RegaudDicromato de potasio al 3% 80.0 mLFormol comercial al 37-40% 20.0 mL

Liquido de Da FanoNitrato de cobalto 1,0 gAgua destilada 100,0 mL

Formol comercial 15,0 mL

Para lo cual tendrn que realizar los clculos respectivos, teniendo en cuenta elvolumen indicado por sus profesores adems, de la informacin tcnica inscrita en losreactivos

Lo peor no es cometer un error, sino tratar de justif icarlo, en vez de aprovecharlocomo aviso providencial de nuestra ligereza o ignorancia.

Santiago Ramn y Cajal


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Tabla de tejidos y fijadores

(Anotar el nmero de piezas de tejido que ponga en cada fijador)

rgano Lquido deZenker

Lquido de

Bouin

Lquido de

Regaud

Lquido de

DaFano

Formol al

10%

Cerebro

Cerebelo

Corazn

Aorta

TiroidesPulmn

Hgado

Bazo

Pncreas

Rin

Glndula adrenal

Prstata

Testculo

Lengua

Esfago

Estmago

Intestino delgado

Intestino grueso

Glndula partida

Glndula sublingual

Glndula submaxilar


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DESHIDRATACIN E INCLUSIN EN PARAFINA

Las piezas al ser retiradas del fijador, o despus de haberlas lavado, estnembebidas en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lotanto, en primer lugar, debemos deshidratar los tejidos sumergindolos enlquidos anhidros, vidos de agua. Para evitar alteraciones provocadas por unadeshidratacin brusca, se aconseja proceder escalonadamente utilizando,preferentemente, alcohol etlico de graduacin creciente.

Deshidratacin

Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente, xilol otoluol (este ltimo es el que nosotros utilizamos). Al agregar el toluol, no debeaparecer ninguna turbidez. Si se pone blanco-lechoso es que la deshidratacinno ha sido bien lograda y debemos repetir el bao de alcohol absoluto

cerciorndonos que realmente lo sea: una gota de alcohol agregada a unos mlde toluol no debe enturbiarlo.

Impregnacin por un disolvente de la parafina (aclaracin)

Se sumergen las piezas en parafina (56-58 de punto de fusin), mantenidalquida en la estufa a no ms de 62C. Despus de 1 a 2 horas se renueva laparafina.

Penetracin de la parafina

En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se vierte la parafinafundida, del mismo punto de fusin de la que ha servido para la penetracin. Secolocan las piezas orientndolas y luego se pone el molde en heladera.

Inclusin definitiva o formacin del bloque

A los 15-30 minutos la parafina se habr solidificado completamente, recortamoslos bloques en forma de pirmide cuadrangular truncada, lo adherimos a untaquito de madera mediante una esptula calentada con la llama de un mecheroy ya podemos realizar los cortes con el micrtomo.

OBTENCIN DE CORTES

El objeto de la inclusin que hemos descripto anteriormente es hacer posible la

reduccin del tejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir elpaso de la luz para examinarlo al microscopio. Los micrtomos son instrumentosde gran precisin que nos proporcionan cortes delgados parejos y de espesorgraduable. Los cortes ms corrientes son los de 4-6 micrones.

Consideraremos cuatro tipos de micrtomos: el de deslizamiento, el tipo Minot, elde congelacin, y el cristato o critomo.

- Tipo deslizamiento: en este caso la pieza queda fija mientras la cuchilla sedesliza por unas guas especiales merced a un soporte al que se sujeta lacuchilla con unos tornillos.


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- Tipo Minot: en este caso la cuchilla queda fija y es la pieza la que se deslizasujeta a una platina, sta se desliza verticalmente cuando se hace girar unamanivela. Permite obtener cortes seriados en forma de cinta.

- Tipo congelacin: se parece al de deslizamiento, pero la cuchilla o navaja, en

lugar de deslizarse, gira sobre un eje. Por otra parte, el aparato se caracterizapor tener un sistema de congelacin colocado debajo de la platina que utiliza laexpansin brusca del anhdrido carbnico contenido en un cilindro con el cual secomunica.

- Cristato: consta de un micrtomo tipo Minot incluido en una cmara decongelacin. El volante de inercia que controla la realizacin del cortepermanece en el exterior, mientras que la cuchilla y el mecanismo de avanceestn situados dentro de la cmara fra (normalmente a -20 C). Pese a ladisposicin horizontal de la cuchilla, la obtencin de secciones seriadas esposible gracias a la existencia de un sistema anti-enrollamiento que obliga al

corte a deslizarse sobre la superficie de la cuchilla. En los modelos msmodernos es posible optar por el corte manual o motorizado, as como enfriarrpidamente la muestra a -60 C gracias a la existencia de una placa decongelacin instantnea. Frente al micrtomo convencional de congelacin, elcristato posee la gran ventaja de permitir la obtencin de cortes mucho msdelgados (por lo general de 4 m y, en manos experimentadas, hasta 2 m).

Los cortes de parafina se extienden, al obtenerlos del micrtomo, en agua tibiacontenida en un cristalizador. En ese mismo agua se introducen portaobjetos,previamente desengrasados, cubiertos con una capa de adhesivo de Mayer y,con la ayuda de una aguja histolgica, se colocan los cortes sobre el

portaobjetos y a continuacin se lo levanta.COLORACIN

Luego de realizado el corte, se procede a rehidratarlo para permitir su coloracin.

Colorantes:reciben esta denominacin las sustancias que pueden conferir colora otros cuerpos.

Coloracin:es el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una sustanciacolorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado alpreparar la solucin colorante.

Segn su origense clasifican en:

Clasificacin de los colorantes:

COLORANTES NATURALES:

- Animales(carmn)

- Vegetales(hematoxilina, orcena, azafrn)


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COLORANTES ARTIFICIALES O SINTTICOS (COLORES DE ANILINA):

- cidos:sales cuya base es incolora y su cido es coloreado (eosina oeosinato de sodio). Son colorantes citoplasmticos.

- Bsicos:sales cuya base es coloreada y el cido es incoloro (azul demetileno o clorhidrato de azul de metileno). Son colorantes nucleares.

- Neutros:sales en las que tanto el cido como la base son coloreados.Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro.

- Indiferentes:no forman sales. Tien aquellas sustancias que tienen unpoder disolvente superior al del lquido que ha servido para preparar lasolucin colorante (Sudn lll, rojo escarlata).

Por otro lado, las coloracionespueden ser:

- Ortocromticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solucincolorante empleada.

- Metacromticas: una sustancia o un componente celular se tie con uncolor diferente al del colorante empleado.

- Coloracin directa:existe una verdadera afinidad entre el colorante y elobjeto.

Mtodos de coloracin:

- Coloracin indirecta: requiere la intervencin de intermediarios o

mordientes para que la coloracin tenga lugar.- Coloracin progresiva:se hace actuar el colorante hasta que llegue a su

punto ptimo.

- Coloracin regresiva:se realiza primero una sobrecoloracin y luego seelimina el resto del colorante por medio de diferenciadores. A esteproceso se lo denomina diferenciacin.

- Coloracin simple: se colorean solamente algunos elementos delpreparado (ncleo, fibras elsticas, etc.).

- Coloracin combinada:se tien los elementos nucleares y citoplasmticosrecurrindose, generalmente, al empleo sucesivo de colores bsicos ycidos que contrastan por sus colores.

- Coloracin panptica: es una coloracin combinada realizadasucesivamente por colorantes neutros (May-Grnwald-Giemsa).

- Coloracin pancrmica: en un solo bao colorante actan todos loscolorantes neutros que se necesiten.

HEMATOXILINA:

Colorantes ms utilizados en histologa humana:


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- Es una materia prima para elaborar un colorante.

- Para ser utilizada debe ser oxidada previamente. Los agentes oxidantespueden ser: el aire (varios meses de exposicin) u oxidantes artificiales(xido de mercurio, permanganato de potasio, dicromato potsico, etc.)

- Es un colorante directo, pero en la prctica se lo utiliza en forma de lacashematoxilnicas (se utiliza alumbre de potasio o de sodio como mordientepara preparar la solucin colorante), comportndose en este caso comoun colorante indirecto.

EOSINA:

- Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixantnicoshalogenados con tres grupos arilo).

- Presenta autofluorescencia espontnea.

- Se la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohlicas.

Para colorear se emplea generalmente una batera de coloracin.

MONTAJE

Luego de la coloracin, se deshidrata el corte y se procede a la aclaracin ymontaje definitivo, dado que nos hemos propuesto hacer un preparado encondiciones de ser observado y protegido del ambiente para evitar su deterioro.

La deshidratacin se realiza con alcoholes de graduaciones crecientes.

La aclaracin se realiza con xilol o carboxilol. El objetivo de este paso esimpregnar el corte con un disolvente del Blsamo de Canad, que al mismotiempo le confiere un ndice de refraccin semejante al del vidrio.

Para el montaje se limpia el portaobjeto alrededor del corte y se deposita sobreel mismo una gota de Blsamo de Canad disuelto en xilol y se cubre con uncubreobjeto.

Se deja secar unas horas antes de su observacin al microscopio.

RECOMENDACIONES TILES

- Las tcnicas histolgicas pertenecen al tipo denominado "tcnicascontrarreloj". Si Ud. est apurado no las empiece, djelas para cuando sutrabajo le permita dedicarse solo a esa actividad.

- Mantenga su laboratorio en orden, con todos los elementos de vidrio queva a utilizar perfectamente limpios.

- Rotule todos los frascos inmediatamente luego de preparar cualquiersolucin.

- Guarde siempre las soluciones en frascos de color caramelo.


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- Mantenga los recipientes que contienen xilol, toluol y alcohol 100 siempretapados.

- Nunca coloque xilol o toluol en recipientes plsticos porque resultanatacados por estas sustancias.

- Si debe trabajar con cidos hgalo bajo campana. Si se derraman osalpican la piel, lave inmediatamente con abundante agua conbicarbonato de sodio.

- Cuando coloree prepare primero todas las soluciones, solo despuscomience con los pasajes del material.

- Si debe realizar simultneamente varios procesos de inclusin,confeccione planillas de tiempos para cada uno de los materiales. Estoevitar confusiones.

- Controle cuidadosamente los tiempos establecidos para cada tcnica. Esmuy importante respetarlos para obtener resultados satisfactorios.

- Antes de iniciar cualquier tcnica, primero lala atentamente. Prepare elmaterial de vidrio necesario, rena los reactivos y colorantes, haga lasdiluciones, determine los tiempos, y despus comience el proceso.

- Tenga mucha paciencia y voluntad. Sea perseverante, si durante lasprimeras experiencias sus resultados no son lo que Ud. esperaba,verifique cada paso y repita tantas veces como sea necesario.

REFERENCIA:http://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/modtecni.htm
http://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/modtecni.htmhttp://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/modtecni.htmhttp://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/modtecni.htmhttp://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/modtecni.htm


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MTODO DE COLORACIN DE HEMATOXILINA Y EOSINA

FIJACIN:Puede usarse cualquier fijador.

MICROTOMIA:Cortar secciones de parafina de 3 a 4 micrmetros de grosor. Cortarsecciones en el crostato o en el micrtomo de congelacin de 6 a 7 micrmetros degrosor.

SOLUCIONES:

Solucin colorante de hematoxi lina de Harris o hemalumbre de Harris Hematoxilina (C.I. 75290) 5,0 gSulfato doble de aluminio y potasio o sulfato doble de aluminio y amonio 100,0 g

Agua corriente 1000,0 mLOxido mercrico rojo o amarillo 2,0 g

Disolver el alumbre (sulfato doble) en el agua con ayuda del calor. Luego agregarla hematoxilina. Mezclar. Llevar la mezcla a ebullicin tan rpido como sea posible,luego sacarla del calor y adicionar el xido mercrico. Recalentar la mezcla, hasta quetenga un color prpura oscuro, cerca de 1 minuto. Luego retirar del calor y enfriarrpidamente. La solucin est lista para ser usada.

Solucin de alcohol cido al 1%Alcohol al 70% c.s.p. 100,0 mLcido clorhdrico 1,0 mL

Solucin de agua amoniacal al 3Agua corriente c.s.p 1000,0 mLAmonaco o hidrxido amnico 3,0 mL

Solucin stock de eosina acuosa al 1%

Eosina amarilla (C.I. 45380) 10,0 gAgua corriente 1000,0 mLDisolver y adicionar:cido actico glacial 2,0 mL

Solucin colorante de trabajo de eosinaSolucin stock de eosina acuosa al 1% 1 vol.Alcohol al 80% 3 vol.Adicionar 0,5 mL de cido actico glacial por cada 100,0 mL de solucin colorante.


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PROCEDIMIENTO:1. Desparafinar los cortes en el xilol 1 durante 5 minutos.2. Desparafinar los cortes en el xilol 2 durante 5 minutos.3. Tratar los cortes en alcohol absoluto 1 durante 5 minutos.

4. Tratar los cortes en alcohol absoluto 2 durante 5 minutos.5. Tratar los cortes en el alcohol corriente 1 durante 5 minutos.6. Tratar los cortes en el alcohol corriente 2 durante 5 minutos.7. Si las secciones fueron fijadas con algn fijador mercurial, desenkerizar.8. Lavar en agua corriente durante 5 minutos.9. Colorear con la hematoxilina de Harris durante 5 minutos.10. Lavar en agua corriente durante 2 minutos.11. Sumergir los cortes, rpidamente, 3 veces en el alcohol cido al 1%.12. Lavar inmediatamente con agua corriente.

13. Sumergir los cortes, rpidamente 3 veces en solucin de agua amoniacal al 1%.14. Lavar inmediatamente con agua corriente y verificar si los ncleos estn bien

teidos observando al microscopio.15. Colorear con la solucin de trabajo de eosina, durante 4 minutos.16. Lavar en agua corriente durante 2 minutos.17. Tratar los cortes, rpidamente 5 veces en el alcohol corriente 1.18. Tratar los cortes, rpidamente 5 veces en el alcohol corriente 2.19. Tratar los cortes en el alcohol absoluto 1 durante 5 minutos.20. Tratar los cortes en el alcohol absoluto 2 durante 5 minutos.

21. Tratar los cortes en el xilol 1 durante 5 minutos.22. Tratar los cortes en el xilol 2 durante 5 minutos.23. Montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS: Las estructuras basfilas se observan de color azul y las estructuraseosinfilas de color rosado.

REFERENCIA: Mallory, F.B.: Pathological Technique, Philadelphia, W.B. Saunders

Company, 1942, p 86.


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REACCIN DEL CIDO PERYDICO DE SCHIFF (MTODO DE P.A.S)

OBJETIVO: Determinar sustancias P.A.S. positivas

FIJACIN: Los tejidos fijados en formol dan buenos resultados, as mismo aquellos quehan sido fijados en lquidos a base de cido pcrico o alcohol.

MICROTOMA: Hacer cortes en parafina de 5 micrmetros de grosor. De la muestra objetode estudio se harn dos lminas, una de ellas seguir el procedimiento completo (lminaproblema) y la otra (la lmina blanco), no seguir el paso de la oxidacin.Simultneamente se correr una lmina patrn para conocer la validez de la prueba, paraeste ltimo se puede usar un corte de duodeno.

FUNDAMENTO: La reaccin de P.A.S. tiene dos pasos fundamentales; el primeroconsiste en la formacin de grupos aldehdos, esto se logra gracias a la accin oxidantedel cido perydico que actan rompiendo y oxidando los grupos alfa glicol. El segundopaso consiste en la deteccin de los grupos aldehdos usando el reactivo de Schiff.

REACTIVOS:Solucin de cido clorhdrico 1N

cido clorhdrico concentrado de peso especfico 1,19 8,35 mLAgua destilada c.s.p. 100,00 mL

Reactivo de SchiffFucsina bsica (C.I. 42510) 0,5 gcido Clorhdrico 1N 10,0 mLMetabisulfito de sodio o de potasio disulfito de sodio o de potasio 0,5 gAgua destilada 100,00 mLCarbn activado 0,25 g

Disolver la fucsina bsica en el agua destilada caliente. Llevar a punto de ebullicin.Enfriar y agregar el disulfito de sodio y agitar la mezcla; luego aadir el cido clorhdrico

1N y agitar constantemente por espacio de 20 minutos. Dejar en la oscuridad en frascohermticamente cerrado hasta el da siguiente. Despus de este tiempo la solucin haadquirido una ligera coloracin amarillenta, se recomienda entonces aadir el carbnactivado y agitar. Finalmente se filtra y se guarda en frascos color caramelo y de cierrehermtico.

Solucin acuosa de cido perydico al 0.5%Cristales de cido peridico 0,5 gAgua destilada c.s.p 100,0 mL


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Solucin de agua sulfurosa (opcional)Metabisulfito de sodio o de potasio al 10% 5,0 mLcido clorhdrico 1 N 5,0 mL

Esta mezcla es utilizable mientras tiene olor a anhdrido sulfuroso, en caso contrario

deber desecharse.

Solucin colorante de Hematoxilina de Harris.

PROCEDIMIENTO:1. Desparafinar e hidratar las secciones hasta agua corriente.2. Tratar la lmina problema y el patrn con cido perydico durante 10 minutos; la

lmina blanco se dejar en agua corriente por el mismo tiempo.3. Lavar con agua destilada.

4. Tratar con el reactivo de Schiff de 5 a 10 minutos.5. Lavar con agua sulfurosa por 3 cambios de 2 minutos cada uno, o con chorros de

agua destilada por 1 minuto.6. Colocar en hematoxilina de Harris durante 2 minutos7. Lavar en agua corriente.3. Deshidratar rpidamente4. Aclarar y montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS: Sustancias P.A.S. positivas de color rojo magenta, ncleos de color azul.

OBSERVACIONES: Los lugares con reaccin positiva en la muestra problema, debern ser negativos

en la muestra blanco. La muestra blanco deber ser totalmente negativa a la reaccin, si hubiera alguna

positividad esta se debe a grupos aldehdos propios del tejido, y esto no debeconsiderarse como reaccin P.A.S. positiva.

PRECAUCIONES:

El reactivo de Schiff debe ser cuidadosamente preparado y reunir una serie decaractersticas que permitan confiar en los resultados obtenidos. La base de este reactivoes el Clorhidrato de p-rosanilina, que es un componente de la fucsina bsica, la cual debeser de la mejor calidad. Dentro de las recomendaciones tenemos:

a) Evitar la disolucin (ni an con agua destilada) ya que ello lleva comoconsecuencia la ruptura del equilibrio inico del reactivo.

b) Debe evitarse la prdida del anhdrido sulfuroso, por esta razn el reactivo sealmacena en frascos pequeos completamente llenos y hermticamentecerrados, conservndolos en refrigeracin cuando no estn en uso.

c) Evitar la aireacin excesiva al tener los frascos del reactivo destapados o


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agitndolos innecesariamente.d) Cuando el reactivo va a ser usado debe sacarse con anticipacin del

refrigerador para que tome la Temperatura del medio ambiente, debe evitarsela elevacin de la temperatura por medios artificiales.

e) La recoloracin espontnea o la presencia de precipitados en el reactivo sonsignos suficientes para desecharlo.

f) Si despus de la preparacin del reactivo este conserva un color rosado, estoes debido a que la p-rosanilina usada no es de buena calidad.

g) El reactivo de Schiff se prueba tomando una alcuota de l, al que se leadiciona unas gotas de formol se formar entonces una solucin de color rojoprpura.

APLICACIONES: Dentro de las sustancias P.A.S. positivas tenemos las siguientes:

Glucgeno, reticulina, mucina, membrana basal, glucoclix, glndulas mucosas. Tambinson positivas a esta reaccin el Histoplasma capsulatum, Criptococcus neoformans,Cndida albicans, entre otros.

REFERENCIA: Mac Manus, J.F.A.: Stain Technology, 23: 99, 1948 (AFIP Modificado).


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REACCIN DE P.A.S.

OBJETIVO: Demostrar la presencia de glucgeno

FIJACIN: Para el estudio ordinario del glucgeno, los mejores fijadores son: el cidoactico - alcohol- formol (5-85-10), el de lquido de Bouin y el alcohol etlico.

MICROTOMA: Se pueden obtener secciones por congelacin de tejido fresco, los cualesdebern ser fijados en cualquiera de las soluciones mencionadas durante 5-10 minutos.

Los cortes en parafina sern de 4 micrmetros. De la muestra problema se correrndos lminas una de las cuales sufrir previamente digestin con amilasa salival (lminatestigo).

FUNDAMENTO: La reaccin de P.A.S. tiene dos pasos fundamentales; el primeroconsiste en la formacin de grupos aldehdos, esto se logra gracias a la accin oxidantedel cido perydico que actan rompiendo y oxidando los grupos alfa glicol. El segundopaso consiste en la deteccin de los grupos aldehdos usando el reactivo de Schiff.

REACTIVOS:Solucin de cido clorhdrico 1N

cido clorhdrico concentrado de peso especfico 1,19 8,35 mLAgua destilada c.s.p. 100,00 mL

Reactivo de SchiffFucsina bsica (C.I. 42510) 0,5 gcido Clorhdrico 1N 10,0 mLMetabisulfito de sodio o de potasio disulfito de sodio o de potasio 0,5 gAgua destilada 100,00 mLCarbn activado 0,25 g

Disolver la fucsina bsica en el agua destilada caliente. Llevar a punto de ebullicin.Enfriar y agregar el disulfito de sodio y agitar la mezcla; luego aadir el cido clorhdrico

1N y agitar constantemente por espacio de 20 minutos. Dejar en la oscuridad en frascohermticamente cerrado hasta el da siguiente. Despus de este tiempo la solucin haadquirido una ligera coloracin amarillenta, se recomienda entonces aadir el carbnactivado y agitar. Finalmente se filtra y se guarda en frascos color caramelo y de cierrehermtico.

Solucin acuosa de cido perydico al 0.5%Cristales de cido peridico 0,5 gAgua destilada c.s.p 100,0 mL


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Solucin de agua sulfurosa (opcional)Metabisulfito de sodio o de potasio al 10% 5,0 mLcido clorhdrico 1 N 5,0 mL

Esta mezcla es utilizable mientras tiene olor a anhdrido sulfuroso, en caso contrario

deber desecharse.


PROCEDIMIENTO:1. Desparafinar e hidratar hasta agua corriente.2. La lmina testigo se somete a la digestin salival, en estufa a 37 C durante 15

minutos. La saliva debe ser abundante y se evitar que ella se seque sobre el portaobjetos (colocar la lmina en cmara hmeda). La lmina problema, patrn y la

lmina blanco se dejar en agua corriente por el mismo tiempo.3. Lavar en agua corriente.4. Tratar la lmina problema, patrn y la lmina testigo con cido perydico durante

10 minutos, mientras que la lmina blanco se dejar en agua corriente por elmismo tiempo.

5. Lavar todas las lminas con agua destilada.6. Tratar todas las lminas con el reactivo de Schiff de 5 a 10 minutos.7. Lavar con agua sulfurosa por 3 cambios de 2 minutos cada uno o con agua

destilada por 3 a 5 minutos.

8. Colocar en hematoxilina de Harris durante 2 minutos9. Lavar en agua corriente.5. Deshidratar rpidamente, aclarar y montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS: Las sustancias que dan reaccin P.A.S. positiva en la lmina problema yque dan reaccin negativa en la lmina con digestin salival (lmina testigo) correspondenal glucgeno; aquellas sustancias que mantienen positividad en esta ltima lmina nocorresponden a glucgeno, ncleos de color azul.

Lmina roblema r obl emaLmina test i o


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OBSERVACIONES: Una reaccin histoqumica de rutina muy til es la reaccin del cidoperydico - Schiff (P.A.S. del ingls periodic acid- Schiff) para glucgeno.

Esta reaccin como ya se vio es fcil de llevar a cabo y de interpretar, aunque deberecordarse que se pierde glucgeno en tejidos pobremente preservados y que est

aumentado en las clulas que rodean reas de necrosis.

REFERENCIA: Mac Manus, J.F.A.: Stain Technology, 23: 99, 1948 (AFIP Modificado).


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MTODO DEL CARMN DE BEST (Modificado por Lill ie)

OBJETIVO: Demostrar la presencia de glucgeno

FIJACIN: Para el estudio ordinario del glucgeno, los mejores fijadores son: el cidoactico - alcohol- formol (5-85-10), el de lquido de Bouin y el alcohol etlico.

MICROTOMA: Se pueden obtener secciones por congelacin de tejido fresco, los cualesdebern ser fijados en cualquiera de las soluciones mencionadas durante 5-10 minutos.

Los cortes en parafina sern de 4 micrmetros. De la muestra problema secorrern dos lminas una de las cuales sufrir previamente digestin con amilasa salival(lmina testigo) y la otra no (lmina problema)..

FUNDAMENTO: Es un mtodo de coloracin emprico.

SOLUCIONES:Solucin stock de Carmn de Best

Carbonato de potasio 1,0 gCarmn (C.I. 75470) 2,0 gCloruro de potasio 5,0 gAgua corriente 60,0 mL

Mezclar los componentes en un beaker, hervir suave y con cuidado durante 5minutos (evitar la formacin de espuma. Enfriar y adicionar 20 ml de amonacoconcentrado de peso especfico 0.88 20 mL de hidrxido de amonio). La solucin puedeconservarse durante 3 meses en refrigeracin.

Solucin de trabajo de Carmn de BestSolucin madre filtrada recientemente 2 volAmonaco concentrado o hidrxido de amonio 3 volMetanol 3 vol

El metanol se agrega lentamente y con agitacin constante. Esta solucin dura de 2a 3 semanas.

Solucin diferenciadoraEtanol absoluto 4 vol.Metanol 2 volAgua destilada 5 vol



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PROCEDIMIENTO:1. Desparafinar e hidratar hasta agua corriente.2. Teir con Hematoxilina de Harris durante 15 minutos.3. Lavar en agua corriente y luego en agua destilada.

4. Colocar en la solucin de trabajo de Carmn de Best durante 20 minutos. Agitarconstantemente.

5. Sacudir y transferir directamente a la solucin diferenciadora, 2 cambios.6. Deshidratar rpidamente7. Aclarar y montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS: El glucgeno se observa de color rojo; la lmina sometida a digestin conamilasa salival no debe presentar coloracin positiva, ncleos de color azul.

OBSERVACIONES: Las amebas se tien bien en los cortes, sobresaliendo por su brillantecoloracin de los tejidos circundantes.

REFERENCIA:Mallory, F. B.: Pathological Technica, Philadelphia, W. B. Saunders Co.,

1942, p 127.


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MTODO DEL HIERRO COLOIDAL DE HALE (mtodo modificado)

OBJETIVO: Demostrar la presencia de glucosaminoglicanos cidos.

FIJACIN: Es preferible el uso de fijadores a base de dicromatos y los metlicos (como elsubacetato de plomo). Tambin se obtiene buenos resultados con formol en solucinsalina, formol neutro y formol - alcohol.

MICROTOMA: Cortar secciones de parafina de 4 micrmetros de grosor. Deber correrseuna lmina patrn que bien puede ser traquea, y dos secciones del tejido problema uno delos cuales no ser sometido a la solucin de hierro coloidal (lmina blanco).

FUNDAMENTO: Los grupos aninicos de los glucosaminoglicanos cidos en particular los

radicales sulfatos (-SO4) y carboxilo (-COOH), poseen una gran afinidad por los ionesmetlicos; esta propiedad se utiliza para fijar el hierro, el cual se encuentra bajo la formade hierro coloidal. Este hierro ligado as, es posteriormente reconocido por el mtodo dePerls (azul de Prusia).

REACTIVOS:Solucin acuosa de cloruro frrico al 10%

Cloruro frrico 5,0 gAgua destilada c.s.p. 100,0 mL

Solucin s

guía de prácticas unfv.pdf

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