guÍa de laboratorio clÍnico

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UNIVERSIDAD CÉSAR VALLEJO FILIAL PIURA ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO SEMESTRE ACADÉMICO 2011-I

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Manual utilizado en las actividades académicas de la escuela de Medicina UCV Piura

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Page 1: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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UNIVERSIDAD CÉSAR VALLEJO

– FILIAL PIURA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

SEMESTRE ACADÉMICO 2011-I

Page 2: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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INDICE

COMPETENCIA 1

Competencia del currículo profesional………………………………………………. 1

Criterio………………………………………………………………………………………………. 1

CAPITULO I : HEMATOLOGÍA. …………………………………………………………………………… 2 - 12

Hemograma completo…………………………………………………………………… 3

Recuento de reticulocitos…………………………………………………………………… 9

Velocidad de eritrosedimentación…………………………………………………….. 10

Tiempo de sangría………………………………………………………………………………. 11

Tiempo de coagulación (Método de Lee y White)………………………………… 12

CAPÍTULO II : INMUNOLOGÍA……………………………………………………………………………. 13 - 22

Prueba rápida de Reagina (RPR) ………………………………………………………….. 14

Detección de anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana

(prueba rápida) ………………………………………………………………………………… 16

Antígenos febriles……………………………………………………………………………..… 18

Determinación y tipificación de grupo sanguíneo………………………………… 20

Prueba de embarazo (en orina)………………………………………………………….. 21

CAPÍTULO III : COPROLOGÍA………………………………………………………………………………. 23 -26

Examen completo de heces…………………………………………………………………. 24

Examen de reacción inflamatoria en heces…………………………………………. 26

CAPÍTULO IV : MICROBIOLOGÍA……………………………………………………………………… 27 - 30

Preparación de extendido de muestra y Coloración Gram……………………. 28

Examen de secreción vaginal - Coloración Gram………………………………….. 30

CULTIVOS BIOLÓGICOS …………………………………………….……………………………… 31-43

Cultivo de secreción faríngea…………………………………………………………….. 32

Cultivo de secreción vaginal………………………………………….…………………… 34

Cultivo de sarro dentario…………………………………….……………………………… 35

Page 3: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Cultivo de orina (Urocultivo) ………………………………….………………………… 37

Cultivo de heces (Coprocultivo) ………………………………………………………… 39

Antibiograma………………………………………….……………………………………….. 41

Cultivo de hongos………………………………………….………………………………….. 42

Examen de raspado de piel (KOH) ………………………………………..…….…… 43

CAPÍTULO V : PARASITOLOGÍA ………………………………………….……………………………… 44 - 46

Diagnóstico microscópico de malaria - gota gruesa y extendido fino…… 45

CAPÍTULO VI : UROANÁLISIS………………………………………….………………………………… 47 -49

Examen completo de orina………………………………………….…………………….. 48

CAPÍTULO VII : QUÍMICA CLÍNICA………………………………………….…………………………… 50 - 65

Determinación de colesterol total………………….…………………………………… 51

Determinación de creatinina………………………………….…………………………… 53

Determinación de fosfatasa alcalina………………………………………………….. 55

Determinación de glucosa………………………………………….………………………… 57

Determinación de transaminasas (TGO - AST) …….……………………………… 60

Determinación de transaminasas (TGP - ALT) …………………….……………… 62

Determinación de urea………………………………………………………………………… 64

ANEXOS.

TABLA DE VALORES DE REFERENCIA………………………………………….……………………………. 66

Page 4: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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COMPETENCIA DEL CURRICULO PROFESIONAL

Establece el diagnóstico, tratamiento y pronóstico del paciente a través de la historia clínica

con información clara y relevante.

CRITERIO

Propone, interpreta y argumenta, con claridad, calidad y solidez la evidencia diagnóstica del

caso problema con fundamento científico.

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HEMATOLOGÍA

Page 6: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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HEMOGRAMA COMPLETO (1ra etapa: Conteo de Glóbulos Rojos y Blancos) DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Recuento de Glóbulos Rojos y Blancos con fórmula diferencial. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 20 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - “hemograma completo”.

http://www.cun.es – “Leucemia mieloide crónica”, “Leucemia”.

http://es.calameo.com – “eritrocito”, “glóbulo rojo”, “eritrocitos”. INFORMACIÓN ADICIONAL

http://wma.comb.es/esp/googlewma.htm - “eritrocitos”, “valores normales de hemoglobina”, glóbulos rojos”, “anemia “

http://www.tuotromedico.com/ – “anemia”, “leucocitos”, “eritrocitos”

www.lifespan.org – “glóbulos rojos”, “glóbulos blancos”, “morfología de leucocitos”

http://www.who.int/en/- “anemia”, “policitemia”.

http://www.fisterra.com - “Leucocitosis”, “Leucopenia”, “Leucemia”

MUESTRA REQUERIDA: Sangre venosa tomada directamente en tubos o capilares heparinizados. MATERIAL:

Pipeta de glóbulos blancos (De Thoma) o pipeta automática (de 0 a 100 ml).

Diluyente de glóbulos blancos: Solución de Turk al 1%.

Contador manual (Sólo si fuera necesario).

Papel filtro.

Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma) o pipeta automática (de 0-100 ml).

Diluyente de glóbulos rojos: Cloruro de Sodio al 0,9% (ver anexo).

Diluyente de Hayem.

Contador manual (sólo si fuera necesario).

EQUIPOS:

Microscopio. Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).

RECUENTO LEUCOCITARIO (glóbulos blancos) Procedimiento

Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, proceda a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.

Introduzca la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorba hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).

Tape ambos extremos y proceda a mezclar manualmente o en un rotador automático por 2 ó 3 minutos.

Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.

Agite la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña de esta solución en la cámara.

Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.

Enfoque con objetivo de 10X y cuente en 4 cuadrados grandes angulares. Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 ml (0,02 ml) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 ml de solución de Turk (aquí tenemos una dilución 1:20).

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La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la figura. Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos, adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior. Resultados Nº de leucocitos x mm3 = Leucocitos contados en 4 campos Altura x dilución x área Reemplazando = Leucocitos contados en 4 campos 1/10 x 1/20 x 4 = Leucocitos contados en 4 campos 4/200 = X/1 = Nº leucocitos contados x 50 200 Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el líquido de dilución, por lo tanto pueden observarse al realizar el recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente fórmula: Cálculo: La concentración del número de normoblastos (por litro) es:

Número de normoblatos contados x concentración o número de leucocitos

100 + Nº de normoblastos contados Ejemplo: Si se cuentan 50 normoblastos y la concentración del número de leucocitos es 16 x 109/l, la concentración del número de normoblastos será:

50 x 16 = 5,3 x 109/l 100 + 50

y la concentración de leucocitos corregida será: 16 - 5,3 = 10,7 x 109/l En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se expresan por milímetro cúbico. En tales unidades el cálculo correspondiente al ejemplo que se ha dado sería:

50 x 16 000 = 5300 / mm3 100 + 50

Recuento corregido de glóbulos blancos o leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 / mm3 RECUENTO DE ERITROCITOS (glóbulos rojos) Procedimiento

Mezcle la sangre obtenida con el anticoagulante o tome sangre capilar.

Llene la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100. Limpie la punta con gasa o papel absorbente.

Introduzca la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem) y llene de líquido de dilución hasta la marca de 101.

Colóquese en un rotador automático o hacer rotar manualmente de 2 a 3 minutos.

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Agite bien la pipeta y descarte 3 a 4 gotas del tallo, luego coloque una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.

Haga el recuento con objetivo de 40X. Se puede realizar con la pipeta automática, se toma 20 ml (0,02ml) de sangre total con anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 ml de solución de Hayem (aquí se tiene una dilución de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5 minutos y se procede a cargar la cámara con la misma pipeta usando un nuevo tip. El inconveniente aquí es el gasto de reactivo (4 ml) pero las medidas son más exactas.

Deje en reposo por 3 minutos.

Enfoque la cuadrícula a 10X, luego con el objetivo de 40X cuente sobre el cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).

En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado pequeño de recuento y no se consideran los correspondientes a los límites inferior y derecho. Se hace el recuento en los puntos ABCD y E y se sigue los mismos parámetros del recuento de leucocitos.

Resultados Nº de hematíes x mm3 = Hematíes contados en 5 cuadrados pequeños Altura x dilución X área Reemplazando = Hematíes contados en 5 cuadrados pequeños 1/10 x 1/200 x 1/5 = Hematíes contados en 5 cuadrados pequeños 1/10 000 = Hematíes contados x 10 000

HEMOGRAMA COMPLETO (2da etapa: Determinación de hematocrito y hemoglobina) DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Cálculo de hemoglobina y hematocrito. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 20 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - “hemograma completo”,

http://www.cun.es – “Leucemia mieloide crónica”, “Leucemia”.

http://es.calameo.com – “eritrocito”, “glóbulo rojo”, “eritrocitos”. INFORMACIÓN ADICIONAL

http://wma.comb.es/esp/googlewma.htm - “eritrocitos”, “valores normales de hemoglobina”, glóbulos rojos”, “anemia “

http://www.tuotromedico.com/ – “anemia”, “leucocitos”, “eritrocitos”

www.lifespan.org – “hematocrito”, “glóbulos rojos”, “glóbulos blancos”, “morfología de leucocitos”

http://www.fisterra.com - “Leucocitosis”, “Leucopenia”, “Leucemia”

Page 9: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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MUESTRA REQUERIDA: Sangre venosa tomada directamente en tubos o capilares heparinizados. MATERIAL:

Tubo de Wintrobe graduado de 0 - 100 mm.

Pipetas Pasteur o pipetas de transferencia.

Tapón de goma.

Tubos de ensayo

Celdas de espectrofotómetro

Pipetas de 20 ul

Pipetas de 5 ml

Solución de hidróxido de amonio de 0,4 g/l

EQUIPO:

Micro centrífuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 12,000 rpm.

Centrifuga con una fuerza de 4000-5000 rpm.

Espectrofotómetro

Micropipeta.

DETERMINACIÓN DEL VOLUMEN GLOBULAR (Hematocrito) - Método de Wintrobe PROCEDIMIENTO

Llene la sangre extraída con anticoagulante con una pipeta Pasteur, comenzando

desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo

cuidado de no provocar espuma.

Tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación.

Centrifugar a 3000 rpm por 30 minutos. DETERMINACIÓN DEL VOLUMEN GLOBULAR (Microhematocrito) - Método de Centrifugación PROCEDIMIENTO:

Tome la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del dedo, o utilice capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante de Wintrobe o EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70% - 80% del capilar.

Ocluya (tape) un extremo del capilar con plastilina.

Coloque el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrífuga de microhematocrito, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma.

Centrifugue por 5 minutos entre 10 000 - 12 000 rpm. Uso de la escala

Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la línea horizontal correspondiente al cero.

Desplace el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el número 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos continúe sobre la línea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posición vertical.

La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicará la fracción de volumen de éstos. Leer siempre en la dirección de la numeración ascendente cuantos ml. de empacados de eritrocitos tiene la muestra. FORMA DE REPORTE: Se reporta el volumen de eritrocitos empacados en porcentaje del volumen total. RELACION HEMATOCRITO – HEMOGLOBINA: Hb: Hto . 3.0 - 3.3 DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA - Método determinación de oxihemoglobina PROCEDIMIENTO: Tome la muestra en tubo de ensayo con EDTA o heparina, agite suavemente hasta homogenizar. Pipetee 2,5 ml de hidróxido de amonio en un tubo de ensayo. Aspire 20 ul de sangre total con micropipeta y limpie bien la punta con papel absorbente.

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Vierta el contenido de sangre en el tubo y agite varias veces por inversión. Espere 5 minutos para que se produzca la hemolisis total y el paso de hemoglobina a oxihemoglobina. Lea las muestras, blanco (NH3OH), patrón a una absorvancia de 540 nm

CÁLCULO DE LA CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA: Hemoglobina (g/l)= Absorvancia (muestra) x Concentración del patrón (g/l) x F Absorvancia (patrón) Donde: F = factor de dilución (125) El patrón consiste en una muestra de sangre con EDTA-K cuya concentración de hemoglobina se ha determinado con anterioridad.

HEMOGRAMA COMPLETO (3ra etapa: Fórmula Leucocitaria y Rto. de Plaquetas)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Cálculo de Fórmula Leucocitaria y Recuento de Plaquetas. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 20 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

www.lifespan.org – “plaquetas”, “glóbulos rojos”, “glóbulos blancos”, “morfología de leucocitos”.

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - “conteo de plaquetas”, “hemograma completo”,

http://www.tuotromedico.com/indice_analisis.htm - “plaquetas”, “glóbulos blancos” INFORMACIÓN ADICIONAL

http://wma.comb.es/esp/googlewma.htm - “eritrocitos”, “valores normales de hemoglobina”, glóbulos rojos”, “anemia”, “hemograma”.

http://www.tuotromedico.com/ – “anemia”, “leucocitos”, “eritrocitos”

http://www.fisterra.com - “Leucocitosis”, “Leucopenia”, “Leucemia”

http://www.cun.es – “Leucemia mieloide crónica”, “Leucemia”.

MUESTRA REQUERIDA: Sangre venosa tomada directamente en tubos o capilares heparinizados. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Laminas portaobjeto ♣ Papel limpia lentes.

♣ Aceite de inmersión. ♣ Mechero de alcohol

EQUIPO:

♣ Contómetro. ♣ Microscopio

♣ Colorante Wright.

FORMULA LEUCOCITARIA: PROCEDIMIENTO:

♣ Realice un frotis sanguíneo en lamina portaobjeto ♣ Fije la muestra secándola al calor del mechero y dejándola a temperatura ambiente por 15 min. ♣ Colorea la muestra de sangre fijada en lámina cubriendo con colorante Wright por 5 min. ♣ Luego lave con agua corriente y deje secar. ♣ Observar con el objetivo 40X. ♣ Colocar una gota de aceite de inmersión en la lámina coloreada. ♣ Observar con el objetivo 100X. ♣ Examine la morfología de cada leucocito , para lo cual debe reconocer las diferencias entre neutrófilo

segmentado, neutrófilo abastonado, eosinófilos, basófilo, linfocito y monocito, ♣ Registre con el contador cada tipo de leucocito que observe hasta que haya contado 100 leucocitos ♣ Se determinan los porcentajes de cada uno de ellos para realizar la comparación.

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RECUENTO DE PLAQUETAS (Método indirecto) PROCEDIMIENTO:

♣ Coloque la lámina coloreada con colorante Wright en la platina del microscopio. ♣ Observe con el objetivo 40X. ♣ Coloque una gota de aceite de inmersión en la lámina coloreada. ♣ Observe con el objetivo 100X. ♣ Cuente las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos deben contener

aproximadamente 100 glóbulos rojos). FUENTES DE ERROR:

♣ Hacer el conteo en los márgenes del frotis. ♣ Aceite de inmersión de mala calidad o contaminado. ♣ No comparar el recuento indirecto con el directo.

FORMA DE REPORTE: Calcular el número de plaquetas de la siguiente forma:

No. Plaquetas observadas X No. Glóbulos Rojos mm³ Estimado de plaquetas mm³ = -----------------------------------------------------------------

1,000

Hematocrito + 5% del Hematócrito No. Glóbulos Rojos mm³ = -----------------------------------------------------

100,000

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RECUENTO DE RETICULOCITOS

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Conteo y cálculo de los reticulocitos. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://es.calameo.com – “reticulocitos”.

http://www.tuotromedico.com/ – “hematimetría”, “leucocitos”, “eritrocitos”

HEALTH ON THE NET FOUNDATION (HONcode seach) – “reticulocitos”, “hematíe joven”, “hematíe

inmaduro”, “recuento de reticulocitos”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

http://wma.comb.es/esp/googlewma.htm - “conteo de reticulocitos”, “anemia”.

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “reticulocitos”, “conteo de reticulocitos”,

“recuento de reticulocitos”, “glóbulo rojo inmaduro”.

MUESTRA: Sangre venosa con EDTA o sangre capilar. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tubos de 12 x 75 mm. ♣ Capilares. ♣ Láminas portaobjeto en buen estado.

♣ Gradilla para tubos. ♣ Guantes descartables. ♣ Azul de cresil brillante.

EQUIPO:

♣ Microscopio. ♣ Baño de María o estufa a 37° C.

♣ Contómetro manual.

PROCEDIMIENTO:

♣ Vierta un capilar lleno de azul cresil brillante y dos capilares llenos de sangre en un tubo 12x75 mm. ♣ Mezcle bien e incube a 37°C o a temperatura ambiente durante 15 minutos. ♣ Prepare frotis de la mezcla de la forma usual, deje secar. ♣ Lea al microscopio con objetivo de inmersión. ♣ Cuente 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos observados.

FORMA DE REPORTE: Se reportan los reticulocitos por cada 100 eritrocitos observados. Cálculo:

Total de reticulocitos observados en 10 campos

% Reticulocitos = -----------------------------------------------------------------

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VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIÓN

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Lectura de la distancia, determinación y reporte de la velocidad de la eritrosedimentación. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 60 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “sedimentación globular”

HONcode seach - Health On the Net Foundation (http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) –

velocidad de eritrosedimentación”, “velocidad globular”, “eritrosedimentación”,

INFORMACIÓN ADICIONAL

EVIDENCE IN HEALTH AND SOCIAL CARE (http://www.evidence.nhs.uk/default.aspx) –“velocidad de

sedimentación”

http://wma.comb.es/esp/googlewma.htm - “eritrosedimentación”.

http://www.tuotromedico.com/ – “eritrosedimentación”.

MUESTRA REQUERIDA: 3 ml de Sangre venosa con EDTA. MATERIALES:

♣ Agujas Wintrobe. ♣ Tubos Wintrobe.

♣ Soporte para tubos de sedimentación. ♣ Guantes descartables

EQUIPO: ♣ Reloj marcador.

PROCEDIMIENTO:

♣ Mezcle la muestra de sangre. ♣ Llene un tubo de Wintrobe hasta la señal cero, introduciendo cuidadosamente la aguja de Wintrobe

adaptada a una jeringa, conteniendo la sangre hasta el fondo del tubo, cuide de que no formen burbujas. ♣ Coloque en el soporte, en posición perfectamente vertical durante 1 hora. ♣ A la hora exacta, lea de arriba hacia abajo el valor numérico en mm, midiendo la distancia que hay entre el

punto más bajo del menisco de la superficie y el límite superior del sedimento de glóbulos rojos; los mm, leídos corresponden a la velocidad de sedimentación por hora.

Toda eritrosedimentación con hematocrito menor de 40%, se corregirá usando la tabla de corrección de la manera siguiente:

♣ Lleve los valores de hematocrito y sedimentación a la tabla de corrección. ♣ Tome el punto dónde se interceptan ambos, este punto caerá sobre una de las líneas curvas de dicha tabla,

la que deberá seguir hacia la derecha y abajo, hasta el punto de intercepción con la línea negra más gruesa, que corresponde al valor de hematocrito de 40%.

♣ Lea a la derecha de la tabla el valor de eritrosedimentación corregida, este valor es el que se deberá reportar.

FORMA DE REPORTE: Velocidad de eritrosedimentación se expresa en milímetros por hora (mm/h).

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TIEMPO DE SANGRÍA DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Medición y reporte del tiempo de sangría ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 20 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “tiempo de sangría”, “tiempo de

protrombina”, “tiempo de tromboplastina”,

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “tiempo de sangría”, “sangría”

http://www.scielo.cl/pdf/rcp/v56n3/art07.pdf

INFORMACIÓN ADICIONAL

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) – “protrombina”

GREENWICH HOSPITAL (http://www.greenhosp.org/) -

TEXAS HEART INSTITUTE (http://texasheart.org/Research/) – “sangre”

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE ( http://www.scielo.cl/ ) – “tiempo de sangría”, “tiempo de

protrombina”, “sangría”.

MUESTRA: Sangre capilar del dedo o del lóbulo de la oreja. MATERIALES:

♣ Lanceta descartable estéril. ♣ Papel filtro.

♣ Torundas de algodón humedecidas con alcohol.

♣ Guantes descartables.

EQUIPO: ♣ Cronómetro.

PROCEDIMIENTO: ♣ Lávese y séquese las manos; en seguida colóquese los guantes. ♣ Explique al paciente el procedimiento que le va a realizar. ♣ Desinfecte cuidadosamente el área de punción. ♣ Puncione el dedo índice a modo que corte transversalmente la dirección de las huellas digitales o el lóbulo de la

oreja. ♣ Seque con el papel filtro cada medio minuto hasta que cese el sangrado. ♣ Realice el secado en forma descendente o circular sin tocar la piel. ♣ Anote el tiempo desde que punciona hasta que cesa el sangrado y reporte. FORMA DE REPORTE: Reportar el tiempo de sangrado en minutos y segundos.

Page 15: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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TIEMPO DE COAGULACIÓN - MÉTODO DE LEE Y WHITE

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte del tiempo de coagulación. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.tuotromedico.com/ - “coagulación”, “trombocitos”, “tiempo de coagulación”.

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/)- “tiempo de coagulación”

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “coagulation time”

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.org/php/index.php?lang=es ) – “tiempo

de sangría”

MUESTRA: Sangre venosa. MATERIALES:

♣ Jeringas descartables. ♣ Tubos 12x75mm. ♣ Torundas de algodón. ♣ Gradillas para tubos.

♣ Alcohol etílico al 70%. ♣ Torniquete. ♣ Guantes descartables.

EQUIPO:

♣ Baño María a 37°C. ♣ Reloj marcador.

♣ Termómetro.

PROCEDIMIENTOS:

♣ Lávese y séquese las manos y colocarse los guantes. ♣ Identifique el tubo de acuerdo a la solicitud. ♣ Explique al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar. ♣ Desinfecte cuidadosamente el área de punción. ♣ Obtenga sangre venosa con una jeringa descartable y estéril. ♣ Ponga en marcha el cronómetro en el momento en que la sangre penetre en la jeringa. ♣ Vierta cuidadosamente 1 cc de sangre en 3 tubos y manténgalos en baño María a 37ºC. ♣ Invierta, cada medio minuto (sin agitar), los 3 tubos hasta que cada uno pueda voltearse sin que se

vierta su contenido. ♣ Tome el tiempo de coagulación de cada uno de los tubos y luego saque un promedio de los tres.

FORMA DE REPORTE: El tiempo de coagulación se reporta en minutos.

Page 16: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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INMUNOLOGÍA

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PRUEBA RÁPIDA DE REAGINA (Método RPR) DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia y cantidad de Treponema pallidium ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 20 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) –

http://www.umm.edu/esp_ency/index/index.htm - “prueba rapida de reagina”, “reagina”

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “prueba rápida de reagina”,

“reagina”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “prueba rapida de reagina”, “reagina”

MUESTRA REQUERIDA: 5ml de sangre sin anticoagulante de preferencia tomada en ayunas (para obtener de 2 a 3 ml de suero). MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tarjeta o lámina en círculos de 18 mm. ♣ Dispensadores de 50 ul. ♣ Tapadera plástica para formar cámara

húmeda. ♣ Frasco plástico con aguja calibrada para

depositar 16ul. ♣ Antígeno: cardiolipina, lecitina, colesterol y

partículas de carbón. ♣ Agua destilada.

♣ Papel toalla. ♣ Aplicadores de madera. ♣ Solución salina al 0.85%. ♣ Puntas plásticas. ♣ Marcador de vidrio. ♣ Tubos 12x75 mm. ♣ Gradilla para tubos. ♣ Guantes descartables.

EQUIPO:

♣ Reloj marcador. ♣ Rotador serológico de 100 rpm.

♣ Macrocentrífuga. ♣ Micropipeta automática regulable.

PROCEDIMIENTO: Prueba cualitativa:

♣ Centrifugue la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos. ♣ Separe los sueros del paquete globular. ♣ Identifique los sueros y círculos de la tarjeta o lámina de reacción. ♣ Deposite en cada círculo de la tarjeta ó lámina, 50 ul. de los sueros en estudio y controles positivo y

negativo, manteniendo el dispensador verticalmente para que el volumen sea exacto. ♣ Extienda el suero sobre la superficie del círculo con el extremo opuesto del dispensador. ♣ Homogenice el antígeno y depositar una gota (equivalente a 16 ul) sobre el suero. ♣ Coloque la tarjeta en el rotador serológico y cubrirla con la cámara húmeda. ♣ Rote durante 8 minutos a 100 rpm. ♣ Inclinando la lámina de adelante hacia atrás, observe a simple vista con buena iluminación agregados

bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo. Si la prueba cualitativa presenta aglutinación debe hacerse la prueba semicuantitativa.

Page 18: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Prueba semicuantitativa:

♣ En cinco círculos ponga con el dispensador una gota (50 μl) de solución salina 0.85 %, (no extender). ♣ Deposite con el dispensador en el primer círculo 50 μl de suero, mezclar aspirando y expeliendo 3 a 6

veces, evitando la formación de burbujas. ♣ A partir de esta mezcla que constituye la dilución 1:2 prosiga las diluciones seriadas, en base 2

mezclando y pasando sucesivamente de un círculo a otro 50 μl; descarte los 50 μl de la última dilución.

De esta manera se obtienen las diluciones siguientes:

Círculos 1 2 3 4 5

Diluciones 1 : 2 1 : 4 1 : 8 1 : 16 1 : 32

♣ Extienda las gotas por la superficie del círculo, utilizando un mezclador e iniciando por la dilución más alta.

♣ Coloque en cada círculo una gota (16 μl) de antígeno bien homogenizado, no agitar violentamente. ♣ Coloque las placas en un rotador y cubrirlas con la tapadera ♣ Rote durante 8 minutos a 100 rpm. ♣ Inclinando la lámina de adelante hacia atrás, observe a simple vista con buena iluminación agregados

bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo. Si la prueba semicuantitativa de una reacción es de 1:32 debe hacerse la prueba cuantitativa.

Prueba cuantitativa:

♣ En un tubo coloque 1.5 ml de solución salina al 0.85 % y 0.1 ml de suero. (Esta constituye una dilución 1:16).

♣ A partir de la dilución 1:16 haga diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un círculo a otro 50 μl. Descarte los 50 μl de la última dilución y se obtendrán las siguientes diluciones:

Círculos 6 7 8 9 10

Diluciones 1 : 32 1 : 64 1 : 128 1 : 256 1 : 512

FORMA DE REPORTE:

♣ Resultado No Reactivo: aspecto liso de la suspensión, la cual aparece sin agregados. ♣ Resultado Reactivo débil: Se observa reacción en la prueba cualitativa y no aparecen agregados

visibles en todas las diluciones semicuantitativas. ♣ Resultado Reactivo: agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo. ♣ En las pruebas semicuantitativa y cuantitativa, si el resultado es Reactivo debe reportarse la última

dilución en la que se observa reacción.

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DETECCIÓN DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (Prueba rápida)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Lectura de la lámina de reacción y reporte de la coloración. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE ( http://www.scielo.org ) – “prueba de VIH”, “virus VIH”.

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/)-

http://www.umm.edu/esp_ency/index/index.htm - “HIV test”, “HIV”, “prueba de VIH”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “pruebas de VIH”, “virus VIH”.

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “HIV test”, “HIV”

MUESTRA REQUERIDA: Suero, plasma y sangre completa. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tubos de ensayo 12 x 75 mm. ♣ Tubos de ensayo 13 x 100 mm. ♣ Gradilla para tubos. ♣ Puntas plásticas. ♣ Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta

transfer. ♣ Aplicadores de madera.

♣ Marcador de vidrio. ♣ Guantes descartables. ♣ Papel toalla. ♣ Protocolo de trabajo. ♣ Tiras reactivas sensibilizadas con

antígeno VIH 1 y VIH 2.

EQUIPO:

♣ Macrocentrífuga. ♣ Pipeta automática de volumen variable.

♣ Reloj marcador.

PROCEDIMIENTO:

♣ Centrifugue la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos. ♣ Separe los sueros del paquete globular. ♣ Lleve a temperatura ambiente las tiras reactivas a utilizar. ♣ Prepare el protocolo de trabajo. ♣ Corte la línea de puntos de la bolsa para retirar las tiras reactivas. ♣ Retire el plástico de protección de cada tira. ♣ Identifique las tiras reactivas a utilizar. ♣ Dispense 50 μl de suero con una pipeta automática sobre la superficie absorbente. (señalada con una

flecha) ♣ Espere un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos. ♣ Lea el resultado. ♣ Observe el área de reacción.

FORMA DE REPORTE: REACTIVO:

♣ Presenta barra roja en las dos ventanas del área de reacción, tanto la del paciente con la ventana del control.

Page 20: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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INDETERMINADO: ♣ Presenta barra tenue en la ventana del área de reacción del paciente y barra roja en la ventana del

control. NO REACTIVO A LA FECHA:

♣ Presenta barra roja solamente en la ventana de control y no presenta barra roja en la ventana del resultado del paciente.

REACCIÓN NO VÁLIDA:

♣ No aparece ninguna barra roja ni en la ventana de control ni en la ventana del paciente, esta prueba debe repetirse.

♣ No aparece ninguna barra roja en la ventana de control pero sí en la ventana del paciente, esta prueba debe repetirse.

Page 21: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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ANTÍGENOS FEBRILES

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia y cantidad de los antígenos somático “O”, flagelar “H”, paratyphico “A”, paratyphico “B”, somático O X 19 y somático Brucella abortus. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE ( http://www.scielo.org ) – “fiebre”, “antígenos febriles”,

“antígenos Brucella”, “antígenos Salmonella”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “antígenos febriles”, “antígenos

Salmonella”, “antígenos Brucella”

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “antigenos febriles”, “antígenos salmonella”,

“antígenos Brucella”, “antígenos Rickettsia”

MUESTRA REQUERIDA: Suero sanguíneo. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tubos de ensayo 12 x 75 mm. ♣ Tubos de ensayo 13 x 100 mm. ♣ Gradilla para tubos. ♣ Puntas plásticas. ♣ Lámina de reacción. ♣ Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta

transfer. ♣ Aplicadores de madera. ♣ Marcador de vidrio. ♣ Guantes descartables.

♣ Papel toalla. ♣ Solución salina al 0.85%. ♣ Antígeno somático “O”. ♣ Antígeno flagelar “H”. ♣ Antígeno paratyphico “A”. ♣ Antígeno paratyphico “B”. ♣ Antígeno somático O X 19. ♣ Antígeno somático Brucella abortus. ♣ Control negativo y control positivo.

EQUIPO:

♣ Macrocentrífuga. ♣ Reloj marcador.

♣ Pipetas automáticas.

PROCEDIMIENTO:

♣ Centrifugue la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos. ♣ Separe los sueros del paquete globular. ♣ Lleve los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.

Prueba cualitativa:

♣ Mezcle las suspensiones cuidadosamente antes de su uso. ♣ Coloque una gota de muestra en los 6 círculos y una gota de cada control positivo y negativo en su

respectivo círculo. ♣ Coloque sobre cada muestra o control una gota de reactivo. ♣ Mezcle con palillos descartables por separado y esparcir el líquido sobre el área completa de cada

círculo.

Page 22: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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♣ Coloque la lámina en un rotador a 100 rpm durante 1 minuto. ♣ Lea los resultados bajo luz artificial inmediatamente. ♣ Examine macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación.

Prueba semicuantitativa:

♣ En caso de que obtenga resultados positivos hacer determinación semicuantitativa en lámina: ♣ Coloque en seis tubos 100 μl. de solución salina 0.85% y adicionar en el primer tubo 100 μl de muestra. ♣ Haga diluciones seriadas en base a 2 en los siguientes tubos, de modo de obtener las siguientes

diluciones: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y 1:64. ♣ Continúe el procedimiento como se describe en la prueba cualitativa, empleando cada dilución como

muestra. ♣ Lea los resultados bajo luz artificial inmediatamente. ♣ Examine macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. ♣ Reporte la última dilución en la que se observe aglutinación.

FORMA DE REPORTE:

♣ POSITIVO: Cuando se observa aglutinación macroscópica y reportar última dilución en la que se

observa aglutinación. ♣ NEGATIVO: Cuando no se observa aglutinación.

Page 23: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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GRUPO SANGUÍNEO - PRUEBA DIRECTA EN TUBO

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte del grupo y factor sanguíneo. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “tiempo de sangría”, “tiempo de

protrombina”, “tiempo de tromboplastina”,

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “tiempo de sangría”, “sangría”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) – “protrombina”

TEXAS HEART INSTITUTE (http://texasheart.org/Research/) – “sangre”

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “tiempo de sangría”, “tiempo de

protrombina”, “sangría”.

MUESTRA REQUERIDA: 1 ml de Sangre completa con o sin anticoagulante. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tubos de ensayo 12 x 75 mm. ♣ Gradilla para tubos. ♣ Puntas plásticas. ♣ Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta

transfer. ♣ Aplicadores de madera. ♣ Frasco lavador.

♣ Marcador de vidrio. ♣ Guantes descartables. ♣ Papel toalla. ♣ Solución salina 0.85%. ♣ Antisuero “A”. ♣ Antisuero “B”. ♣ Antisuero RH (anti-D).

EQUIPO:

♣ Macrocentrífuga. ♣ Reloj marcador.

♣ Pipetas automáticas. ♣ Lámpara para lectura de aglutinación.

PROCEDIMIENTO:

♣ Identifique previamente los tubos. ♣ Deposite 2-3 gotas de sangre en un tubo. ♣ Realice 3 veces el lavado de células de la siguiente manera:

a) Agregue 1 ml de solución salina 0.85%. b) Mezcle y llene con solución salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes. c) Centrifugue por 2 minutos a 3400 rpm. d) Descarte toda la solución salina quedando en el fondo un paquete de glóbulos rojos.

♣ Prepare una suspensión al 5%, colocando una gota de los glóbulos rojos lavados y 19 gotas de solución salina y mezclar.

♣ Rotule 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada uno agregar una gota de glóbulos rojos al 5%.

♣ Deposite los antisueros respectivos: a) Tubo A antisuero A. b) Tubo B antisuero B. c) Tubo Rh antisuero D.

♣ Centrifugue 15 segundos a 3400 rpm. ♣ Lea la presencia o ausencia de aglutinación agitando suavemente los tubos.

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PRUEBA DE EMBARAZO (ORINA)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia/ausencia de HCG Beta ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 20 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “Prueba de embarazo”, “Test de embarazo”,

“Prueba de embarazo-orina”, “Test de embarazo- orina”.

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “Prueba de embarazo”, “Test de

embarazo”, “Prueba de embarazo-orina”, “Test de embarazo- orina”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

GALENICOM (http://www.galenicom.com/es) – “Prueba de embarazo”, “Test de embarazo”, “Prueba

de embarazo-orina”, “Test de embarazo- orina”.

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/)– “Prueba de embarazo”, “Test

de embarazo”, “Prueba de embarazo-orina”, “Test de embarazo- orina”.

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “Prueba de embarazo”, “Test de

embarazo”, “Prueba de embarazo-orina”, “Test de embarazo- orina”.

MUESTRA REQUERIDA: Orina, se recomienda utilizar la orina de la primera hora de la mañana, ya que generalmente contiene mayor concentración de hormona. Muestras de orina: estable 48 horas a 2-8°C o 3 meses a -20°C. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tarjetas o láminas de reacción. ♣ Papel toalla. ♣ Marcador de vidrio. ♣ Dispensadores plásticos. ♣ Tubos cónicos. ♣ Guantes descartables. ♣ Gradilla para tubos. ♣ Suspensión de partículas de látex con

anticuerpo monoclonal

♣ Anti-hormona gonadotropina coriónica humana.

♣ Control positivo: orina humana con una concentración conocida de hormona gonadotropina coriónica.

♣ Control negativo: suero animal sin presencia de hormona gonadotropina coriónica.

EQUIPO:

♣ Macrocentrífuga. ♣ Lámpara de luz.

♣ Reloj marcador.

PROCEDIMIENTO: La muestra de orina que presente turbidez debe centrifugarse antes de iniciar la prueba.

♣ Lleve a temperatura ambiente los reactivos y las muestras. ♣ Identifique correctamente lámina o tarjeta. ♣ Sobre cada círculo de lámina o tarjeta deposite 100 μl de muestras a analizar e incluya un control

Positivo y un negativo por cada tiraje. ♣ Homogenice suavemente el reactivo de Látex antes de usar. ♣ Deposite una gota de reactivo de Látex sobre cada una de las muestras y los controles. ♣ Mezcle con el extremo opuesto del dispensador, procurando extender la suspensión por toda la

superficie interior del círculo. ♣ Emplee un dispensador distinto para cada muestra.

Page 25: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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♣ Coloque la tarjeta o lámina sobre un agitador rotatorio de 80 - 100 rpm durante 2 minutos. ♣ Examine macroscópicamente bajo una fuente de luz la presencia o ausencia de aglutinación

inmediatamente después de retirar del agitador. FORMA DE REPORTE: REACCIÓN DIRECTA:

♣ POSITIVA: Formación aglutinación. ♣ NEGATIVA A LA FECHA: No se observa aglutinación.

REACCIÓN INDIRECTA:

♣ POSITIVA: No se observa aglutinación. ♣ NEGATIVA A LA FECHA: Formación de aglutinación.

Consultar siempre el inserto provisto por la casa comercial.

Page 26: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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COPROLOGÍA

Page 27: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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EXAMEN COMPLETO DE HECES DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia/ausencia de parásitos, leucocitos, eritrocitos, levaduras, restos alimenticios y de grasas. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) - “heces”, “examen de heces”,

“evaluación de heces”, heces con sangre”, “color de las heces”.

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “examen físico de heces”, “examen

microscópico de heces”, “examen macroscópico de heces”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

GREENWICH HOSPITAL (http://www.greenhosp.org/) – “heces”, “heces fecales”.

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) – “examen de heces”,

“muestra de heces”, “heces”, “heces con sangre”.

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “heces”. “análisis de heces”.

“examen de heces”. “heces fecales”.

BIBLIOTECA VIRTUAL EN SALUD (BVS-ESPAÑA) (http://bvs.isciii.es) – “heces”,

MUESTRA REQUERIDA: 5 g de heces recién emitidas, instruir al paciente que colecte en el frasco la porción de muestra que evidencia el daño intestinal (mucus, sangre, parásitos). No son recomendables las muestras obtenidas con laxantes o enemas.

MATERIALES:

Frascos plásticos de boca ancha y tapón de rosca con capacidad para 2 onzas.

Aplicadores de madera.

Guantes descartables.

Marcador de vidrio.

Papel limpia lente.

Láminas porta objeto.

Laminillas cubre objeto.

Lápiz marcador de vidrio.

Solución salina 0.85%.

Solución de Lugol para heces.

EQUIPO:

Microscopio PROCEDIMIENTO:

Observe el color de la muestra.

Observe la consistencia de la muestra.

Utilice un aplicador de madera para buscar la presencia de mucus en la muestra.

Observe la presencia de restos alimenticios en la muestra.

Anote los hallazgos. FORMA DE REPORTE:

COLOR : Café, amarillo, verde, rojo, acólico (blanco), negro.

CONSISTENCIA : Dura, blanda, pastosa y líquida.

PRESENCIA DE MUCUS : Negativo o Positivo.

RESTOS ALIMENTICIOS : Escasos, moderados o abundantes.

Page 28: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Valores de referencia:

COLOR : Café.

CONSISTENCIA : Pastosa a blanda.

PRESENCIA DE MUCUS : No debe observarse.

RESTOS ALIMENTICIOS : Escasos. Examen microscópico de heces

PROCEDIMIENTO:

Identifique la lámina porta objeto.

Coloque en un extremo de la lámina portaobjeto una gota de solución salina al 0.85%.

Seleccione la parte más representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay presencia de estos).

Agregue con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsione.

Cubra la preparación con una laminilla cubreobjeto, colocándola en ángulo de 45° sobre el borde de la preparación y bajándolo con cuidado a fin de que no queden burbujas entre el cubre y el porta objeto.

Coloque en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir el procedimiento anterior.

Observe en forma sistemática al microscopio, con el objetivo 10X y luego con el 40X.

Reporte todo lo observado. Con solución salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural y con lugol se visualizan las estructuras internas, núcleos y vacuolas. FORMA DE REPORTE:

PARÁSITOS: Anotar el nombre del género y especie, así como su estado evolutivo.

LEUCOCITOS: Reportar el número de leucocitos por campo.

ERITROCITOS: Reportar el número de eritrocitos por campo.

RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.

LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes.

RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.

Valores de referencia:

PARÁSITOS : No se deben observar.

LEUCOCITOS : No se deben observar.

ERITROCITOS : No se deben observar.

RESTOS ALIMENTICIOS : de escasos a moderados.

LEVADURAS : No se deben observar.

RESTOS DE GRASA : Reportar de moderado a abundante.

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REACCION INFLAMATORIA EN HECES DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia/ausencia y cantidad de leucocitos. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “heces”, “reacción inflamatoria

en heces”, “inflamación en heces”, “reacción en heces”.

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) - “heces”, “reacción inflamatoria

en heces”, “inflamación en heces”, “reacción en heces”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “heces”, “reacción inflamatoria en heces”,

“inflamación en heces”, “reacción en heces”.

MUESTRA REQUERIDA: 5 g de heces frescas y líquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la muestra. MATERIALES Y REACTIVOS:

Lámina portaobjeto.

Aplicadores de madera.

Aceite de inmersión.

Papel filtro.

Embudo.

Bandeja o soporte de coloración.

Colorante de azul metileno 0.1%.

Guantes descartables.

Marcador de vidrio.

Papel toalla.

Fósforos.

Papel limpia lente. EQUIPO:

Contador diferencial de células. Microscopio y mechero. PROCEDIMIENTO:

Filtre el colorante antes de utilizar.

Identifique el portaobjeto a utilizar.

Realice el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lámina.

Deje secar a temperatura ambiente.

Fije al calor pasándolo rápidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma horizontal.

Cubra la lámina con azul de metileno de 30 a 60 segundos.

Elimine el azul de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinándolo hacia delante, y lave dejando caer una corriente de agua a baja presión sobre la parte en que no hay extendido, la que escurrirá suavemente sobre la película.

Deje secar a temperatura ambiente.

Observe al microscopio con objetivo de inmersión 100X.

Cuente 100 células blancas o leucocitos, diferenciando los polimorfonucleares de los mononucleares. FORMA DE REPORTE: Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayor porcentaje. Polimorfonucleares por ciento. Mononucleares por ciento. Interpretación:

Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origen bacteriano.

Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral.

Page 30: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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MICROBIOLOGÍA

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PREPARACIÓN DE UN EXTENDIDO DE MUESTRA – COLORACIÓN GRAM DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia/ausencia de bacterias y su morfología. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) – “frotis”, “frotis bucal”,

“frotis de sangre”.

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “frotis”, “preparación de frotis”,

“tinción gram”, “gram”, coloración gram”

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “tinción de gram”, “gram positivo”, “gram

negativo”, “frotis”

EVIDENCE IN HEALTH AND SOCIAL CARE (http://www.evidence.nhs.uk/default.aspx) – “gram

positive”, “gram negative”.

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “tinción de gram”, “gram

positivas”, “gram negativas”, “gram”, “frotis”,

MUESTRA REQUERIDA: Pus, esputo, orina y secreciones. Frotis de la muestra a analizar correctamente identificado.

MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Asa bacteriológica o aplicador de madera. ♣ Lámina portaobjeto. ♣ Marcador de vidrio. ♣ Papel toalla. ♣ Gasa. ♣ Fósforos. ♣ Aceite de inmersión. ♣ Papel filtro.

♣ Embudo. ♣ Bandeja o soporte de coloración. ♣ Guantes descartables. ♣ Papel limpia lente. ♣ Cristal violeta ♣ Lugol o solución de Yodo para Gram. ♣ Alcohol Acetona. ♣ Safranina.

EQUIPO:

♣ Mechero. ♣ Reloj marcador.

♣ Microscopio.

PROCEDIMIENTO: ♣ Identifique la lámina porta objeto. ♣ Extienda en el centro de una lámina portaobjeto una porción de la muestra con asa o aplicador de

madera en forma de capa fina, trazando una espiral del centro a la periferia. ♣ Deje secar completamente al aire libre. ♣ Fije al calor. ♣ Fije al calor pasándolo rápidamente sobre la llama de un mechero, tres veces en forma horizontal con

la muestra hacia arriba. ♣ Deje enfriar. ♣ Aplique la coloración que corresponda, según agente a investigar.

Page 32: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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COLORACIÓN DE GRAM PROCEDIMIENTO:

♣ Filtre los colorantes antes de utilizar. ♣ Coloque los frotis a colorear en la bandeja o soporte de coloración. ♣ Cubra el frotis completamente con Cristal Violeta, durante un minuto. ♣ Enjuague con agua corriente y escurrir. ♣ Cubra el frotis completamente con Lugol o solución de Yodo para Gram durante un minuto. ♣ Enjuague con agua corriente y escurrir. ♣ Aplique alcohol acetona gota a gota hasta que no salga Cristal Violeta. ♣ Enjuague con agua corriente y escurrir. ♣ Cubra el frotis con Safranina. ♣ Dejar reposar por 30 segundos. ♣ Enjuague suavemente con agua corriente. ♣ Deje secar al aire libre. ♣ Observe al microscopio con lente de inmersión 100X.

Grampositiva falsa:

♣ Colorante de Cristal Violeta que presenta sedimentos. ♣ Remoción incompleta del Lugol. ♣ Decoloración insuficiente del frotis. ♣ Tiempo prolongado con Safranina.

Gramnegativa falsa:

♣ Tiempo insuficiente con Lugol. ♣ Tiempo prolongado con alcohol Acetona o lavado incompleto.

FORMA DE REPORTE:

♣ Reporte morfología bacteriana observada (iniciar con las más frecuente) indicando la agrupación y la cantidad.

♣ Reporte, si lo hubiere, la presencia de polimorfonucleares y/o linfocitos. Indicar la presencia y cantidad de levaduras o micelios y células epiteliales.

Page 33: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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EXAMEN DE SECRECIÓN VAGINAL - DIRECTO Y COLORACION GRAM

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia/ausencia de Lactobacilos, mobiluncos, o gardnerella. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 30 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) –

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “secreción vaginal”, “flujo vaginal”,

“infección vaginal”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “secreción vaginal”, “flujo vaginal”, “flujo vaginal fétido”, “vaginosis”, “vaginitis”.

MUESTRA REQUERIDA: Secreción vaginal, tomada con un hisopo estéril y colocada en un tubo con 2 ml de solución salina estéril 0. 85%. MATERIALES Y REACTIVOS:

♣ Tubos de vidrio 16 x 150 mm. ♣ Gradilla para tubos. ♣ Lámina portaobjeto. ♣ Hisopos estériles. ♣ Marcador de vidrio.

♣ Papel toalla. ♣ Guantes descartables. ♣ Gasa. ♣ Aceite de inmersión. ♣ Solución salina estéril 0.85%.

EQUIPO:

♣ Microscopio. PROCEDIMIENTO:

♣ Identifique la lámina portaobjeto. ♣ Proceda a la elaboración de frotis y coloración de Gram. ♣ Observe en el microscopio con objetivo de inmersión 100x, la presencia de Lactobacilos, mobiluncos, o

gardnerella. ♣ Reporte lo observado.

FORMA DE REPORTE: Reportar de la forma siguiente: FLORA NORMAL: Cuando se observan sólo bacilos grampositivos (Lactobacilos). FLORA VAGINAL ALTERADA: Cuando se observa predominio de bacilos grampositivos y escasos bacilos gramnegativos. VAGINOSIS BACTERIANA POSIBLEMENTE POR GARDNERELLA VAGINALIS: Cuando se observan escasos o ningún bacilo grampositivo y predominio de bacilos gramnegativos rectos, extra e intracelulares. VAGINOSIS BACTERIANA POSIBLEMENTE POR MOBILUNCUS: Cuando se observan escasos o ningún bacilo grampositivo y predominio de bacilos gramnegativos curvos.

Page 34: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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CULTIVOS BIOLÓGICOS

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CULTIVO DE SECRECIÓN FARINGEA

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Obtención, Siembra, aislamiento, conteo e identicación de bacterias de la zona faríngea. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ Faringitis estreptocócica:

kidsheath.org/…/infecciones/strep_throat_esp.html.

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article 000639 htm.

MINISTERIO DE EDUCACIÓN – GOBIERNO DE ESPAÑA http://www.educacion.es/portada.html

Cultivo faríngeo: frotis faríngeo kidshealth.org/PageManager.jsp?lic=69&...&cat_id=20261

MATERIALES:

Placas petri.

Asas bacteriológicas.

Medios de cultivo (Agar Mac Conkey, Agar Manitol Salado, Agar Sangre.)

Hisopo estéril.

Baja lenguas.

Algodón.

tubos para prueba bioquímica 13 X 100.

Solución salina fisiológica estéril al 0.85%.

Mechero Bunsen.

Estufa.

Parafilm.

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-Pidale al paciente que habra la boca, afirme la lengua del paciente haciendo presión con un baja lengua,

luego con la mano derecha agarre el hisopo estéril, introduscalo dentro de la cavidad oral hasta llegar a la

faringe frote en forma circular el hisopo en la faringe, evitando que toque otras zonas como la úvula, la lengua

y la cavidad bucal.

3.-Deposite los hisopos dentro de los tubos de ensayo conteniendo 5ml de solución salina fisiológica estéril al

0.85%.

4.-Lleve la muestra a la mesa de trabajo de laboratorio.

Siembra y Aislamiento de la muestra.

1.-Rotule las placas donde se hará la siembra con nombre, fecha, tipo de muestra del paciente.

2.-Prende el mechero para crear un espacio estéril

3.-Coje el asa bacteriológica y tomar de los tubos con la muestra y realice la siembra a manera de estría, en

placas con Agar Mac Conkey, Manitol salado, Agar sangre.

4.-Lleve las placas a la estufa e incube de 18 -24 horas a 37ºC.

5.-Pasado el período de incubación, verifique el crecimiento o no crecimiento del microorganismo.

Page 36: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

36

6.-Reporte las características de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde, constancia) de cada placa y

la actividad hemolítica.

Conteo e identificación de bacterias.

1.-Seleccione una colonia del Agar Mac Conkey y replicar (resembrar) en medios de diferenciación

bioquímica.(tsi, urea, lía,).

2.-Para conocer el número de microorganismos, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica por 100 si

usa asa bacteriológica de 0,01 ml ò por 1000 si se usa asa bacteriológica de 0,001 ml.

Page 37: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

37

CULTIVO DE SECRECIÓN VAGINAL.

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Obtención, Siembra, aislamiento, conteo e identicación de bacterias de la zona vaginal. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS - http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/

www.nlm.nih.gov/.../spanish/ency/esp_imagepages17139.htm - “cultivo endocervical”.

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/vaginaldiseases.html www.youngwomenshealth.org/spbac.html. - “Vaginosis bacteriaa”.

MATERIALES:

Placas petri.

Asas bacteriológicas.

Medios de cultivo (Agar Mac Conkey, Agar Manitol Salado, Agar Sangre.)

Hisopo estéril.

Tubos para prueba bioquímica 13 X 100.

Solución salina fisiológica estéril al0. 85%.

Algodón.

Parafilm.

Mechero Bunsen.

Estufa.

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-Indique al paciente que se coloque en posición ginecológica, introducir un espéculo en la cavidad vaginal, con un hisopo estéril tomar la muestra frotando suavemente.

3.-Deposite los hisopos dentro de los tubos de ensayo conteniendo 5ml de solución salina fisiológica estéril al 0.85%.

4.-Lleve la muestra a la mesa de trabajo de laboratorio

Aislamiento y siembra de la muestra.

1.-Rotule las placas donde se hará la siembra con nombre, fecha, tipo de muestra del paciente.

2.-Prenda el mechero para crear un espacio estéril

3.-Coja el asa bacteriológica y tomar de los tubos con la muestra y realice la siembra a manera de estría, en placas con Agar Mac Conkey, Manitol salado, Agar sangre.

4.-Lleve las placas a la estufa e incube de 18 -24 horas a 37ºC.

5.-Pasado el período de incubación, verifique el crecimiento o no crecimiento del microorganismo.

6.-Reporte las características de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde, constancia)de cada placa y la actividad hemolítica.

Conteo e identificación de bacterias.

1.-Seleccione una colonia del Agar Mac Conkey y replicar (resembrar) en medios de diferenciación bioquímica.(tsi, urea, lía,).

2.-Para conocer el número de microorganismos, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica por 100 si usa asa bacteriológica de 0,01 ml ò por 1000 si se usa asa bacteriológica de 0,001 ml.

Page 38: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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CULTIVO DE SARRO DENTARIO

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Obtención, Siembra, aislamiento, conteo e identicación de bacterias en sarro dentario. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - Caries dental

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001055.htm

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html

Caries en el diente: Bacterias www.caries.info/causas.htm

INFORMACIÓN ADICIONAL

http://www.portalesmedicos.com/ - Streptococcus mutans

icrobewiki.kenyon.edu/.../Streptococcus_mutans

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER http://www.umm.edu/

Caries dental www.umm.edu/esp_ency/article/001055.htm

MATERIALES:

Placas petri.

Asas bacteriológicas.

Medios de cultivo (Agar Mac Conkey, Agar Manitol Salado, Agar Sangre.)

Hisopo estéril y/o Mondadientes.

Baja lenguas.

Tubos para prueba bioquímica 13 X 100.

Solución salina fisiológica estéril al 0.85%.

Mechero Bunsen.

Estufa.

Algodón.

Parafilm.

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-Pidale al paciente que habra la boca, introduzca el hisopo y/o mondadientes dentro de la cavidad oral

frote en forma circular el hisopo y/o mondadientes sobre los dientes, evitando que toque otras zonas como

la lengua y la cavidad bucal.

3.-Deposite el hisopo y/o mondadientes dentro de los tubos de ensayo conteniendo 5ml de solución salina

fisiológica estéril al 0.85%.

4.-Lleve la muestra a la mesa de trabajo de laboratorio.

Aislamiento y siembra de la muestra.

1.-Rotule las placas donde se hará la siembra con nombre, fecha, tipo de muestra del paciente.

2.-Prende el mechero para crear un espacio estéril

3.-Coja el asa bacteriológica y tomar de los tubos con la muestra y realice la siembra a manera de estría, en

placas con Agar Mac Conkey, Manitol salado, Agar sangre.

Page 39: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

39

4.-Lleve las placas a la estufa e incube de 18 -24 horas a 37ºC.

5.-Pasado el período de incubación, verifique el crecimiento o no crecimiento del microorganismo.

6.-Reporte las características de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde, constancia)

de cada placa y la actividad hemolítica.

Identificación y Conteo de Microorganismos.

1.-Seleccione una colonia del Agar Mac Conkey y replicar (resembrar) en medios de diferenciación

bioquímica. (tsi, urea, lía,).

2.-Para conocer el número de microorganismos, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica por 100

si usa asa bacteriológica de 0,01 ml ò por 1000 si se usa asa bacteriológica de 0,001 ml.

Page 40: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

40

CULTIVO DE ORINA (UROCULTIVO)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Obtención, Siembra, aislamiento, conteo e identicacion de bacterias en orina. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS - http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/

muestra de orina: Urocultivo. www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003751.htm

infección urinaria en adultos

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000521.htm

análisis de sensibilidad www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003741.htm

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION -

http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html

Infección Urinaria www.pediatraldia.cl/que_es_inf_urinaria.htm

MATERIALES:

Placas petri.

Asas bacteriológicas.

Medios de cultivo (Agar Mac Conkey, Muller Hinton)

Tubos para prueba bioquímica 13 X 100.

Mechero Bunsen.

Estufa.

Tira reactiva.

Parafilm.

Algodón.

Frasco estéril (herméticamente cerrado).

Jabón.

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-Pidale al paciente que recolecte una muestra de orina, siguiendo el siguiente procedimiento: realice la

asepsia de genitales externos del paciente con jabón, eliminar el primer chorro de orina, recolectar el chorro

intermedio evitando recolectar el ultimo chorro; cerrar herméticamente el frasco para evitar su

contaminación.

3.-Lleve la muestra a la mesa de trabajo de laboratorio.

Aislamiento y siembra de la muestra.

1.-Rotule las placas donde se hará la siembra con nombre, fecha, tipo de muestra del paciente.

2.-Prenda el mechero para crear un espacio estéril

3.-Coja el asa bacteriológica y tomar el frasco con la muestra y realice la siembra a manera de estría, en

placas con Agar Mac Conkey, Manitol salado, Agar sangre.

4.-Lleve las placas a la estufa e incube de 18 -24 horas a 37ºC.

Page 41: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

41

5.-Pasado el período de incubación, verifique el crecimiento o no crecimiento del microorganismo.

6.-Reporte las características de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde, constancia)de cada

placa y la actividad hemolítica.

Identificación y Conteo de Microorganismos.

1.-Seleccione una colonia del Agar Mac Conkey y replicar(resembrar) en medios de diferenciación

bioquímica.(tsi, urea, lía,).

2.-Para conocer el número de microorganismos, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica por 100

si usa asa bacteriológica de 0,01 ml ò por 1000 si se usa asa bacteriológica de 0,001 ml.

Page 42: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

42

CULTIVO DE HECES (COPROCULTIVO)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : : Obtención, Siembra, aislamiento, conteo e identicacion de bacterias en heces. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - coprocultivo -

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003758.htm

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE BIBLIOTECA VIRTUAL EN SALUD (BVS-ESPAÑA)

http://bvs.isciii.es/E/index.php - coprocultivo

INFORMACIÓN ADICIONAL

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/

Gastroenteritis bacteriana

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000254.htm

Shigelosis coprocultivo

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000295.htm

MATERIALES:

Placas petri.

Asas bacteriológicas.

Medios de cultivo (Agar Mac Conkey, Muller Hinton)

Medio de enriquecimiento (caldo nutritivo).

tubos para prueba bioquímica 13 X 100.

Mechero Bunsen.

Estufa.

Parafilm.

Algodón.

Frasco estéril (herméticamente cerrado).

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-Pidale al paciente que recolecte una muestra de heces de aproximadamente 5gr, el frasco debe estar

herméticamente cerrado para evitar su contaminación.

3.-Lleve la muestra a la mesa de trabajo de laboratorio.

Aislamiento y siembra de la muestra.

1.-Prenda el mechero para crear un espacio estéril

2.-Con un hisopo estéril tome una pequeña parte de la muestra de heces y colóquela en el tubo que contiene

caldo nutritivo para su enriquecimiento.

3.-Incube por 12 a 18 horas a 37 ºC.

3.-Despuès del tiempo de incubación coja el asa bacteriológica y tome el tubo con la muestra ya enriquecida

y realice la siembra a manera de estría, en placas con Agar Mac Conkey, Manitol salado, Agar sangre.

4.-Lleve las placas a la estufa e incube de 18 -24 horas a 37ºC.

Page 43: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

43

5.-Pasado el período de incubación, verifique el crecimiento o no crecimiento del microorganismo.

6.-Reporte las características de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde, constancia) de cada

placa y la actividad hemolítica.

Identificación y Conteo de Microorganismos.

1.-Seleccione una colonia del Agar Mac Conkey y replicar (resembrar) en medios de diferenciación

bioquímica.(tsi, urea, lía).

2.-Para conocer el número de microorganismos, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica por 100

si usa asa bacteriológica de 0,01 ml ò por 1000 si se usa asa bacteriológica de 0,001 ml.

Page 44: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

44

ANTIBIOGRAMA

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Siembra de bacterias y sensibilidad a diferentes antibióticos. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/antibiotics.html - Antibiotics.

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html Resistencia bacteriana

INFORMACIÓN ADICIONAL

www.sld.cu/.../139_-enfermedades_infecciosas_y_resistencia_bacteriana_en

_una_unidad_de_cuidados_intensivos_pediatricos.pdf

Métodos estandarizados para la determinación de la.

www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/...LevelI/CIM_ATB_ANIMALES.pdf - sensibilidad bacteriana

MATERIALES

Cepa bacteriana

Medios de cultivo (placas con Agar Muller

Hinton).

Hisopos estériles.

Pinzas.

Discos de Sensibilidad. (Penicilina, ampicilina, clindamicina, cefalotina, cefatoxine, ceftriaxone,

gentamicina, amikacina, estreptomicina, novobiocina, amoxicilina.)

PROCEDIMIENTO:

1.-Prepare el inoculo, sembrando la cepa problema en tubos con solución salina al 0.85% haciendo la

solución con la técnica de Macfarland.

2.- Introducir un hisopo estéril en el tubo con el tubo con el cultivo bacteriano humedeciéndolo

completamente. Restregar el hisopo por las paredes del tubo con la finalidad de eliminar el exceso de del

cultivo. Sembrar la cepa cubriendo toda la superficie de la placa de Agar Mueller Hinton.

3.- Deje secar la superficie del medio durante 5 minutos a 37ºc .

Luego coloque los discos de sensibilidad con ayuda de una pinza estéril manteniendo una distancia de 2 cm

entre cada disco, presionar ligeramente.

4.- Incubar las placas a 37ºc durante 24 horas .

5.-Hacer la lectura midiendo los halos de inhibición formados e interpretados.

Page 45: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

45

CULTIVO DE HONGOS

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Obtención, Siembra, aislamiento, identicación de hongos patógenos de la zona con lesión ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html

Infecciones micóticas - www.prematuros.cl/webnoviembre05/.../piel/infecciones_micoticas.htm

MATERIALES:

Placas petri.

Asas bacteriológicas.

Medios de cultivo (Agar Sabouraud).

Bisturí estéril.

Algodón.

Solución salina fisiológica estéril al 0.85%.

Mechero Bunsen.

Estufa.

Parafilm.

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-identifique la zona lesionada; con ayuda de un bisturí estéril tome la muestra (escamas de piel, pelos,

uñas, etc.) haciendo un raspado evitando que toque otras zonas.

3.-coloque la muestra en una placa petri estéril.

4.-Lleve la muestra a la mesa de trabajo de laboratorio.

Siembra y aislamiento de la muestra.

1.-Rotule las placas donde se hará la siembra con nombre, fecha, tipo de muestra del paciente.

2.-Prenda el mechero para crear un espacio estéril

3.-Coja el asa bacteriológica y tome la muestra y realice la siembra, en placas con Agar Sabouraud.

4.-Lleve las placas a la estufa e incube por 7 días a temperatura de 37ºC.

5.-Pasado el período de incubación, verifique el crecimiento o no crecimiento del microorganismo.

6.-Reporte las características de las colonias (forma, tamaño, color, aspecto, borde.)

Page 46: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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EXAMEN DE RASPADO DE PIEL. (KOH)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : observación de las estructuras micóticas. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/

examen de hidróxido de potasio en lesión de piel

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003761.htm

INFORMACIÓN ADICIONAL

MINISTERIO DE EDUCACIÓN – GOBIERNO DE ESPAÑA http://www.educacion.es/portada.html micosis

superficiales. www.affairesjs.com/micosis_superficiales.htm

MATERIALES:

Tubos para prueba bioquímica 13 X 100.

Mechero Bunsen.

Estufa.

Parafilm.

Algodón.

Frasco estéril (herméticamente cerrado

Bisturí o lanceta estériles.

Lámina porta objeto

Laminilla cubre objeto.

Microscopio.

Solución salina al 0.85%.

Hidróxido de Potasio (KOH)

PROCEDIMIENTO:

Obtención de la muestra:

1.-Informe al paciente sobre el procedimiento que se va a realizar.

2.-Identifique la zona más apropiada para el raspado.

3.-Con la ayuda de un bisturí o una lanceta estéril haga un raspado en la zona lesionada, depositándolo en

una placa petri.

4.-Tome un portaobjetos y poner una pequeña parte de la muestra y agréguele una gota de Solución salina

al 0.85% y colocarle encima una laminilla cubre objeto.

5.-Llevar la lámina porta objeto con la muestra al microscopio y observar, empezando con el objetivo de 10X

para ver un amplio panorama, luego observar con el objetivo de 40X.

6.-Luego tome otra parte de la muestra y póngala sobre una lámina porta objeto y agregue 1 gota de KOH,

deje reposar por 5minutos,luego cubra con una laminilla cubre objetos.

7.-Observe en el microscopio empezando con el objetivo de 10X y luego con el objetivo de 40X.

8.-Informe lo que observa.

Page 47: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

47

PARASITOLOGÍA

Page 48: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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DIAGNÓSTICO MICROSCÓPICO DE LA MALARIA - GOTA GRUESA DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y Reporte de presencia/ausencia de Plasmodium sp. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 35 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

www.patient.co.uk – “malaria”

www.vdh.virginia.gov – “malaria”, plasmodium”.

MEDLINE PLUS - http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - “malaria”,

“paludismo”,“plasmodium”,

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html. - “Plasmodium”, “Malaria“

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER - http://www.umm.edu/ - “malaria”

MUESTRA: Sangre periférica del dedo y/o sangre venosa recién tomada. De preferencia son las mejores muestras. Se recomienda preparar en un mismo portaobjetos la gota gruesa y el extendido fino, y colorearlos simultáneamente utilizando la coloración de Giemsa. MATERIALES:

♣ Bloque de madera o plástico con hendiduras para secar porta-objetos

♣ Recipiente o plato cóncavo para colorear ♣ Porta-objetos limpios y libres de grasa ♣ Lanceta, algodón (o gasa) y alcohol al

70%

♣ Plumón marcador. ♣ Agua destilada ♣ Solución Giemsa. ♣ Solución de Wright ♣ Contador manual

PROCEDIMIENTO: Preparación de la Gota Gruesa

1. Limpie el porta objetos y mantengalo libre de grasa que interfiera con la adhesión de la sangre al porta-objetos. 2. Frote enérgicamente la yema del dedo del paciente (se prefiere el dedo anular de la mano izquierda, talón en caso de niños pequeños o lóbulo de la oreja) con algodón humedecido con alcohol al 70%. Secar con algodón seco. El dedo se sostiene enérgicamente y se pincha en forma rápida. La primera gota de sangre se seca con algodón seco. 3. Se utilizan dos porta-objetos. En el centro de uno de ellos deposite la gota de sangre que se obtiene por presión leve en el dedo. Sobre la superficie de trabajo y usando la esquina del segundo porta-objetos extienda la sangre de manera que forme un rectángulo de grosor uniforme. 4. Deje secar la muestra y si es posible, intensifique el proceso de secado agregando calor. 5. Coloque el porta-objetos en una gradilla de coloración, agregar solución Giemsa a la muestra hasta que recubra toda la lámina, eliminando las burbujas. Coloree durante 8 minutos.

Page 49: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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6. El exceso de colorante se lava sumergiendo con delicadeza el porta-objetos en un recipiente con agua corriente. Sí el agua corriente no es de buena calidad, utilizar agua destilada. 7. La muestra se puede secar con aire o calor moderado. Observe con aceite de inmersión.

INTERPRETACIÓN: Parásitos: Se deben observar tres componentes en todos los estadios, excepto en los anillos los cuales no contienen pigmento: el citoplasma azul, la cromatina rojo/morado, y los gránulos amarillo-café del pigmento malárico. Considerar la apariencia de los parásitos (gota gruesa y extendido fino). Estadios presentes Gota gruesa. Grosor: de 10 a 20 leucocitos por campo de inmersión. Coloración: fondo de la muestra debe ser claro; restos de eritrocitos, azul; plaquetas y leucocitos, como descritos para el extendido fino. CÁLCULO DE LA PARASITEMIA: Este es un cálculo semicuantitativo. Se asumen concentraciones constantes de los eritrocitos (5, 000,000/ul de sangre) y de los leucocitos (8,000/ul); en ocasiones se podrá contar con el conteo real de células del paciente. Se cuentan y se informan los conteos de estadios asexuales y sexuales (gametocitos) de forma independiente. Los eritrocitos infectados por más de un parásito se cuentan como uno. Usar un contador manual. Gota gruesa: Se cuentan leucocitos y parásitos simultáneamente. El conteo se detiene cuando se cuentan 100 leucocitos y se han identificado 10 parásitos, o más. En el caso de haber identificado menos de 10 parásitos el conteo se detiene al alcanzar 500 leucocitos (por supuesto, si un campo se está aún examinando cuando se alcanzó cualquiera de estas cifras, se debe terminar de examinarlo). Se aplica entonces la fórmula: parásitos contados X 8,000 Ieucocitos dividido por) leucocitos contados y el resultado se redondea a los dos dígitos primeros (16 = 16, 168 = 160, 1685 = 1600). Ejemplo: Si se contaron 82 parásitos y 100 leucocitos, 82 X 8,000/100= 6,560- 6,500 parásitos/ul de sangre. SISTEMA DE CRUCES: 1) Método más simple aplicado a la gota gruesa (OMS): + = 1-10 parásitos/100 campos + + = 11 -100 parásitos/100 campos + + + = 1-10 parásitos/campo + + + + = más de 10 parásitos/campo 2) Otro sistema de cruces que permite mayor número de categorías: 1 - 4 0 =1 - 40 parásitos en 100 campos 1/2 + = 41-60 parásitos en 100 campos + = 60-100 parásitos en campos + + = 2-20 parásitos por campo + + + = > 20 parásitos por campo + + + + = incontables por campo

Page 50: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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UROANÁLISIS

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EXAMEN COMPLETO DE ORINA DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte del color, aspecto y pH, así como la presencia/ausencia y cantidad de leucocitos, eritrocitos, nitritos, proteínas, glucosa, cuerpos cetónicos, urobilinógeno, bilirrubina, sangre/hemoglobina. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 40 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “examen de orina”, “examen

citológico de orina”, “análisis de orina”

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “Exámen de orina”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

EVIDENCE IN HEALTH AND SOCIAL CARE (http://www.evidence.nhs.uk/default.aspx) – “orina

completa”, “urolitiasis”.

GREENWICH HOSPITAL - http://www.greenhosp.org/ - “Exámen de orina”

MUESTRA REQUERIDA: 30 ml de orina de chorro intermedio, recomendable la primera micción de la mañana. MATERIALES:

Frascos plásticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 ml

Bolsa pediátrica recolectora de orina.

Papel toalla.

Marcador de vidrio.

Guantes descartables.

Tiras reactivas.

Tubos de ensayo 12 X 75mm.

Plumón marcador.

Láminas (porta objeto).

Láminas (cubre objeto).

EQUIPO:

Reloj marcador.

Macrocentrífuga.

Microscopio.

EXAMEN FÍSICO : PROCEDIMIENTO:

Limpie cuidadosamente los genitales

Descarte el inicio y el final de la micción; recolecte la orina de la porción intermedia. (En el caso de la mujer separar los labios genitales).

Deposite la muestra de orina en un frasco plástico, transparente, limpio, de boca ancha con tapón de rosca y capacidad de 30 a 40 ml

Tape el frasco inmediatamente.

Verificar que el frasco esté bien identificado y completamente tapado.

Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo.

Observar color y aspecto.

Anotar lo observado.

Centrifugar por 5 min. a 3500rpm.

Observar en el microscopio con objetivo de 40X.

Descartar el líquido sobrenadante.

Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano.

Colocar una gota de sedimento entre una lámina portaobjeto y un cubreobjeto.

Page 52: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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FORMA DE REPORTE: Valores de referencia:

COLOR : Amarillo.

ASPECTO: Limpia. EXAMEN QUÍMICO : Determinar las sustancias químicas presentes en una muestra de orina, así como su densidad y pH, a través de las zonas de reacción presentes en una tira reactiva. Los cambios de color que aparecen después de dos ó más minutos carecen de importancia diagnóstica. FORMA DE REPORTE:

pH : de 5 a 9.

DENSIDAD : de 1.000 a 1.030.

LEUCOCITOS : 0 a 500 Leucocitos por μl.

NITRITOS : Positivo ó Negativo.

PROTEÍNA : 0 a 1000 mg por dL.

GLUCOSA : 0 - 1000 mg por Dl

CUERPOS CETÓNICOS : de una cruz a tres cruces.

UROBILINÓGENO : de <1 a 12 mg por dl.

BILIRRUBINA : de una cruz a tres cruces.

SANGRE/HEMOGLOBINA : de 0 a 250 eritrocitos por μl Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportará como negativo.

EXAMEN MICROSCÓPICO: FORMA DE REPORTE:

CÉLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS Y REDONDAS: reportar escasas, moderadas o abundantes.

GLÓBULOS ROJOS: Reportar el número estimado por campo.

LEUCOCITOS: Reportar el número estimado por campo.

CILINDROS: se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros: hialinos, granulosos finos y gruesos, leucocitarios, hemáticos, grasos y céreos. Reportar el número de cilindros observados por campo.

FILAMENTOS MUCOIDES: reportar escasos, moderados o abundantes.

CRISTALES: se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales: oxalatos de calcio, acido úrico, uratos amorfos, fosfatos amorfos, fosfatos triples, urato de amonio, leucina, cistina y tirosina. Reportar en la forma siguiente: escasos, moderados o abundantes.

LEVADURAS: Reportar escasos, moderada y abundantes.

PARÁSITOS: Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis, Phitirus pubis, huevos y quistes de parásitos por contaminación con heces.

BACTERIAS: Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes, solamente cuando se observen más de 10 leucocitos por campo.

Valores de referencia:

CÉLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS: Escasas a moderadas.

CÉLULAS EPITELIALES REDONDAS: No deben observarse.

GLÓBULOS ROJOS: No deben observarse.

LEUCOCITOS: .0-5 por campo.

CILINDROS: No deben observarse.

FILAMENTOS MUCOIDES: No deben observarse.

CRISTALES: Podrían observarse oxalatos, uratos y fosfatos amorfos de escasa a moderada cantidad.

LEVADURAS: No deben observarse.

PARÁSITOS: No deben observarse.

BACTERIAS: Escasas o no presentes.

Page 53: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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QUÍMICA CLÍNICA

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DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Reporte de los niveles de colesterol total en la sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 40 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “Colesterol”, “ Que es el

colesterol”, “tipos de colesterol”, “determinación de colesterol”

MINISTERIO DE EDUCACIÓN – GOBIERNO DE ESPAÑA (http://www.educacion.es/portada.html) –

“Colesterol”, “Tipos de colesterol”, “Que es el colesterol”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “Colesterol”, “ Que es el colesterol”, “tipos de

colesterol”, “determinación de colesterol”

GALENICOM (http://www.galenicom.com/es) – “colesterol”.

GREENWICH HOSPITAL (http://www.greenhosp.org/) – “colesterol”, “colesterol total”.

MATERIALES:

Guantes descartables no estériles

Tubos de ensayo 16 x 100 mm

Puntas de pipeta 10-50 ul

Puntas de pipeta 50-200 ul

Puntas de pipeta 200-1000 ul

Puntas de pipeta 1000-5000 ul EQUIPOS:

Centrífuga

Espectrofotómetro

Baño María

Reloj marcador

Pipetas automáticas 10-50 ul

Pipetas automáticas 50-200 ul

Pipetas automáticas 200-1000 ul

Pipetas automáticas 1000-5000 ul. METÓDICA DE DETERMINACIÓN: Metódica enzimática colorimétrica (CHOD-POD) El colesterol es determinado por la hidrólisis y oxidación enzimática. El indicador quinonamine es formado de peróxido de hidrógeno y 4 amino antipirina con la presencia de fenol y peroxidasa. Colesterolester + H2O CHE colesterol- ácido graso

—>

Colesterol + O2 CHO colesteno 3-ona + H2O ——>

H2O2 + aminoantipirina + fenol POD quinonamino + 4 H2O ——>

Procedimiento Seguir las instrucciones del Laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras. Notas sobre la metódica: Linealidad La metódica es lineal hasta 800.0 mg/dl.

Page 55: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Sensibilidad La metódica tiene una sensibilidad de 3.0 mg/dl. Especificidad La metódica es específica para colesterol. Interferencias Suero ictérico con bilirrubina > 25.0 mg/dl. Hemólisis hemoglobina > 7.0 g/l. Lipemia: triglicéridos > 2500.0 mg/dl. Ácido ascórbico, algunos anticoagulantes (oxalato, citrato, fluoruro) pueden interferir y dar resultados falsamente bajos. Criterio de validación

Controlar los parámetros del metabolismo lipídico (triglicéridos, colesterol HDL, VLDL, apolipoproteínas).

Controlar parámetros del metabolismo glucídico, de la funcionalidad del riñón, funcionalidad del hígado (GGT en alcoholismo) y la funcionalidad tiroidea.

Modo de escribir los resultados El colesterol se escribe sin cifra decimal.

Page 56: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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DETERMINACIÓN DE CREATININA

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de los niveles de creatinina en la sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 60 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “creatinina”, “creatinina sérica”,

“depuración de creatinina”.

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “creatinina en orina”, “creatinina”, “niveles

de creatinina”, “producción de creatinina”, “creatinina en sangre”.

EVIDENCE IN HEALTH AND SOCIAL CARE (http://www.evidence.nhs.uk/default.aspx) – “creatinina”,

“valores de creatinina”, “niveles de creatinina”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

GREENWICH HOSPITAL (http://www.greenhosp.org/) – “creatinina”

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) – “creatinina”, “creatinina

sérica”, “pruebas de creatinina”.

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “creatinina”, “metabolism de la

creatinina”

METÓDICAS DE DETERMINACIÓN: Método físico Absorción de la creatinina sobre la resina a cambio iónico y medir la absorbancia a 235 nm. Método cinético enzimático El método enzimático colorimétrico consiste en la medida del color desarrollado con el reactivo de Jaffe, antes y después de una reacción con la enzima específica, la creatincinasa; esta enzima transforma la creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina. Método colorimétrico y procedimiento analítico Además de la determinación de la creatinina con una técnica de punto final, más frecuentemente se utiliza una técnica cinética en la cual la creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un complejo coloreado rojo-naranja; la diferencia de absorción durante el tiempo de conversión es directamente proporcional a la concentración de creatinina en la muestra. Creatinina + ácido pícrico ———> creatinina picrato (complejo) MATERIALES:

Guantes descartables no estériles

Tubos de ensayo 16 x 100 mm

Puntas de pipeta 10-50 ul

Puntas de pipeta 50-200 ul

Puntas de pipeta 200-1000 ul

Puntas de pipeta 1000-5000 ul EQUIPOS:

Centrífuga

Espectrofotómetro

Baño María

Reloj marcador

Pipetas automáticas 10-50 ul

Pipetas automáticas 50-200 ul

Pipetas automáticas 200-1000 ul

Pipetas automáticas 1000-5000 ul

Page 57: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Procedimiento Seguir las instrucciones del laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras. Verificar el resultado:

Si el valor de la creatinina es ≥ 7.0 mg/dl, repetir la medida.

Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar.

Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra utilizando un control patológico.

Con valores de creatinina ≥ de 25.0 mg/dl, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con solución fisiológica y con un control patológico.

Si la confrontación del valor concentrado está sobrepuesto al suero diluido y el control está dentro el rango establecido, se puede entregar el resultado.

Si el suero diluido no está en relación con el suero concentrado, diluir la muestra 1:3 con solución fisiológica, siempre usando el control patológico.

Notas sobre la metódica: Linealidad Es lineal hasta 25.0 mg/dl. Sensibilidad Su sensibilidad es 0.1 mg/dl. Especificidad La metódica es específica para la creatinina. Las muestras de suero tienen proteínas que pueden reaccionar no específicamente con el método Jaffe; es necesario corregir el valor de 0.3 mg/dl para lograr valores más correctos. Interferencias Las interferencias más significativas son: Hemólisis: con Hb ≥ 10.0 g/l. Ictérico: bilirrubina ≥ 40.0 mg/dl. Lipemia: triglicéridos ≥ 2000.0 mg/dl. Acetona ≥ 50.0 mg/dl. Algunos antibióticos, como las cefalosporinas, pueden dar valores falsamente elevados. Criterios de validación Confrontar parámetros de funcionalidad renal (urea, potasio, proteínas, densidad urinaria). Confrontar parámetros de equilibrio electrolíticos (sodio, potasio, cloro). Controlar sexo y edad del paciente y también eventual estado de embarazo. Controlar parámetros del metabolismo muscular (CPK, mioglobulina). Modo de escribir los resultados La creatinina se escribe con una cifra decimal. Comunicación de riesgo Se tiene que comunicar inmediatamente con valores ≥ 6.0 mg/dl.

Page 58: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de los niveles de fosfatasa alcalina en la sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 40 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/) – “fosfatasa”, “fosfatasa

alcalina”, “fosfatasa alcalina leucocítica”, “examen de fosfatasa”.

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

(http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html) – “fosfatasa”, “fosfatasa alcalina”,

“isoenzimas de la fosfatasa”, “fosfatasa alcalina en suero”.

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER (http://www.umm.edu/) – “fosfatasa”, “fosfatasa

alcalina” “isoenzimas de la fosfatasa”

INFORMACIÓN ADICIONAL

SCIENTIFIC ELECTRONIC LIBRARY ONLINE (http://www.scielo.cl/) – “fosfatasa”, “fosfatasa alcalina”,

“niveles de fosfatasa alcalina”,“niveles elevados de fosfatasa”.

BIBLIOTECA VIRTUAL EN SALUD (BVS-ESPAÑA) (http://bvs.isciii.es)

METÓDICA DE DETERMINACIÓN: Metódica colorimétrica cinética optimizada El sustrato p-nitrofenilfosfato es hidrolizado por la enzima, produciendo p-nitrofenol y ácido fosfórico. La reacción se interrumpe con hidróxido de sodio que convierte el p-nitrofenol en ión paranitrofenilato. p-nitrofenilfosfato + H2O ALP p-nitrofenol + fosfato

——> <——

MATERIALES:

Guantes descartables no estériles

Tubos de ensayo 16 x 100 mm

Puntas de pipeta 10-50 ul

Puntas de pipeta 50-200 ul

Puntas de pipeta 200-1000 ul

Puntas de pipeta 1000-5000 ul EQUIPOS:

Centrífuga

Espectrofotómetro

Baño María

Reloj marcador

Pipetas automáticas 10-50 ul

Pipetas automáticas 50-200 ul

Pipetas automáticas 200-1000 ul

Pipetas automáticas 1000-5000 ul

Procedimiento Seguir las instrucciones del laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras. Notas sobre la metódica: Linealidad La metódica de la fosfatasa alcalina es lineal hasta 2000.0 U/L.

Page 59: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Sensibilidad La sensibilidad de la metódica es de 5.0 UL. Especificidad La metódica es específica para la fosfatasa alcalina. Interferencias Las interferencias más significativas son: Hemólisis: con Hb ≥ 2.0 g/l (porque la fosfatasa alcalina se encuentra en los glóbulos rojos). Ictericia: con bilirrubina ≥ 60.0 mg/dl. Lipemia: con triglicéridos ≥ 2000.0 mg/dl. La presencia de oxalato, citrato y EDTA puede disminuir la actividad de la fosfatasa alcalina por la pérdida de iones de magnesio. Criterios de validación

Controlar la edad del paciente.

Confrontar con funcionalidad del hígado (transaminasa, TP, colinesterasa).

Confrontar con parámetros de estasis biliares (bilirrubina, GGT).

Confrontar con parámetros del metabolismo óseo: (calcio, fósforo).

Confrontar el valor del magnesio.

Controlar eventual estado tóxico (alcoholismo).

Controlar los parámetros de hepatitis. Modo de escribir los resultados La fosfatasa alcalina se escribe sin cifra decimal.

Page 60: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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EXAMEN DE GLUCOSA

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Reporte de los niveles de glucosa en sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 40 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

GREENWICH HOSPITAL - http://www.greenhosp.org/ - “glucosa”, “glucosa en sangre”,

“hipoglucemia”, “hiperglucemia”, “anemia”, “diabetes”.

TEXAS HEART INSTITUTE - http://texasheart.org/Research/ - “glucose”, “diabetes”, “diabetes

sacarina”, “diabetes mellitus”

UNIVERSITY OF MARYLAND MEDICAL CENTER - http://www.umm.edu/ - “diabetes mellitus”.

INFORMACIÓN ADICIONAL

PORTALES MÉDICOS - http://www.portalesmedicos.com/ - “Diabetes mellitus”.

http://www.netdoctor.es/ - “glucosa en sangre”, “diabetes”, “diabetes infantil”, “hipoglucemia”,

“diabetes tipo I”, “diabetes tipo II”.

Modalidad de solicitud Emergencia y rutina. Preparación del paciente Ayuno desde 6-8 horas. Para particulares indicaciones, puede preverse una alimentación particular antes de la toma de muestra. Modalidad de la toma de muestra Ninguna particularidad. Evitar estrés, ya que puede comportase como una falsa hiperglucemia por una descarga de adrenalina. Transporte Transportar a temperatura ambiente. Conservación La estabilidad de la glucosa en las muestras es influenciada por la temperatura de conservación, desde la contaminación de bacterias y, en modo particular, por la glicólisis. Centrifugar y separar lo más pronto el suero de la parte celular. La toma de muestra se puede conservar por 8 horas a temperatura ambiente de 20-25oC y por 3 días a 2-4oC. Muestra Idoneidad de la muestra: identificación y cantidad. Centrifugación Poner el tubo de ensayo en la centrífuga de modo balanceado, poner el reloj 5 minutos y centrifugar por 3,000 r.p.m. Verificar la idoneidad del suero o plasma: hemólisis, ictericia, presencia de coágulos, filamentos de fibrina, turbidez. METÓDICAS DE DETERMINACIÓN: Método colorimétrico La glucosa en solución ácida por ácido acético se condensa con o-toluidina, con formación de un complejo de color, que se puede medir fotométricamente.

Page 61: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Método enzimático GOD-POD y procedimiento analítico La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico y peróxido de hidrógeno, lo cual se valora mediante la reacción de Trinder, dando lugar a una quinona coloreada.

Glucosa + O2 + H2O GOD --> H2O2 + Gluconato

2H2O2 + fenol + 4-AF POD -> Quinona + 4 H2O MATERIALES:

Guantes descartables no estériles

Tubos de ensayo 16 x 100 mm

Puntas de pipeta 10-50 ul

Puntas de pipeta 50-200 ul

Puntas de pipeta 200-1000 ul

Puntas de pipeta 1000-5000 ul EQUIPOS:

Centrífuga.

Espectrofotómetro

Baño María

Reloj marcador

Pipetas automáticas 10-50 ul

Pipetas automáticas 50-200 ul

Pipetas automáticas 200-1000 ul

Pipetas automáticas 1000-5000 ul

Procedimiento Siga las instrucciones del laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras. Verificar el resultado:

Si el valor de la glucosa es < 50.0 mg/dl y ≥ 350. mg/dl, repetir la medida.

Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar.

Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra utilizando un control patológico.

Con valores de glucosa ≥ de 450.0 mg/dl, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con solución fisiológica y con un control patológico.

Si la confrontación del valor concentrado está sobrepuesto al suero diluido y el control está dentro el rango establecido, se puede entregar el resultado.

Si el suero diluido no está en relación con el suero concentrado, diluir la muestra 1:3 con solución fisiológica, siempre usando el control patológico.

Notas sobre la metódica Linealidad La metódica de glucosa es lineal hasta 450.0 mg/dl. Sensibilidad La sensibilidad de la metódica es de 2.0 mg/dl. Especificidad La metódica es específica para la glucosa. Interferencias Las interferencias más significativas son: Hemólisis: con Hb ≥ 8.0 g/l. Ictericia: con bilirrubina ≥ 36.0 mg/dl. Lipemia: con triglicéridos ≥ 430.0 mg/dl. Algunas hormonas, el ácido ascórbico, todas las sustancias reducientes pueden dar valor bajo de glucosa. La hormona adrenalina, algunas drogas y los derivados de las anfetaminas pueden dar valor alto de glucosa.

Page 62: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Criterios de validación

Controlar primeramente el examen de orina para eventual presencia de glucosa y/o cuerpos cetónicos.

Controlar parámetros del metabolismo glucósido (hemoglobina glicosilada, insulinemia).

Controlar eventual parámetros de funcionalidad tiroidea y suprarrenal.

Controlar parámetros del metabolismo lipídico y el valor del ácido úrico.

Controlar electrolitos (sodio, potasio, cloro, magnesio).

Confrontar con analitos de funcionalidad hepática. Modo de escribir los resultados La glucosa se escribe sin cifra decimal. Comunicación de riesgo Se tiene que comunicar inmediatamente con valores inferiores a 50.0 mg/dl y superiores a 500.0 mg/dl.

Page 63: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

63

DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA (TGO-AST)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de los niveles de transaminasa (TGO) en la sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 75 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

MEDLINE PLUS - http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - “Transaminasa en sangre” –

“aspartatoaminotransferasa” ( www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003472.htm )

MINISTERIO DE EDUCACIÓN – GOBIERNO DE ESPAÑA

http://www.educacion.es/portada.html - “Transaminasas en sangre”.

www.tadforo.com/transaminasas-t41179.html

INFORMACIÓN ADICIONAL

HONCODE SEACH - HEALTH ON THE NET FOUNDATION

http://www.hon.ch/HONcode/Search/search.html -

“Aminotransferasa elevadas en pacientes asintomáticos - www.intra Transaminasa

GOT.med.net/sitios/gastrovirtual/1_aminoelev.pdf

www.tuotromedico.com/temas/transaminasa_got.htm - Transaminasa GOT.

Preparación del paciente Ayuno en rutina. Transporte Transportar a temperatura ambiente. Conservación Centrifugación y separación del suero; la toma de muestra se puede conservar por 1 día a temperatura ambiente de 20-25oC, 7 días a + 4oC, 1 año congelada. Verificación de la muestra Verificar que el registro de la toma de muestra esté correcto. Muestra Idoneidad de la muestra: identificación y cantidad. Centrifugación Poner el tubo de ensayo en la centrífuga de modo balanceado, por un tiempo de 5 min. y centrifugar a 3000 r.p.m. Verificar la idoneidad del suero o plasma: ictericia, hemólisis, lipemia, presencia de coágulos, filamentos de fibrina, turbidez. METÓDICAS DE DETERMINACIÓN: La enzima aspartato aminotransferasa (AST) o glutámico - oxalacética (TGO) cataliza la transferencia del grupo amino del aspartato al cetoglutarato, formando oxalacetato y Glutamato. La concentración catalítica se determina empleando la reacción acoplada de la malato deshidrogenasa (MDH), a partir de la velocidad de desaparición del NADH. Aspartato + α cetoglutarato AST oxalacetato + Glutamato

Oxalacetato + NADH + H+ MDH Malato + NAD+

Page 64: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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MATERIALES:

Guantes descartables no estériles

Tubos de ensayo 16 x 100 mm

Puntas de pipeta 10-50 ul

Puntas de pipeta 50-200 ul

Puntas de pipeta 200-1000 ul

Puntas de pipeta 1000-5000 ul. EQUIPOS:

Centrífuga

Espectrofotómetro

Baño María

Reloj marcador

Pipetas automáticas 10-50 ul

Pipetas automáticas 50-200 ul

Pipetas automáticas 200-1000 ul

Pipetas automáticas 1000-5000 ul Procedimiento Siga las instrucciones del laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras. Verificar el resultado

Si el valor de la AST es ≥ 300.0 U/L, repetir la medida.

Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar.

Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra utilizando un control patológico.

Con valores de AST ≥ de 800 U/L, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con solución fisiológica y con un control patológico.

Si la confrontación del valor concentrado está sobrepuesto al suero diluido y el control está dentro el rango establecido, se puede entregar el resultado.

Si el suero diluido no está en relación con el suero concentrado, diluir la muestra 1:4, 1:8 con solución fisiológica, siempre usando el control patológico.

Notas sobre la metódica Linealidad La metódica de AST es lineal hasta 800.0 U/L. Sensibilidad La sensibilidad de la metódica es de 4.0 U/L. Especificidad La metódica es específica para la AST. Interferencias Las interferencias más significativas son: Hemólisis: con Hb ≥ 6.0 g/l. Ictericia: con bilirrubina ≥ 60.0 mg/dl. Lipemia: con triglicéridos ≥ 1000.0 mg/dl. Muchos fármacos (cefalosporinas, cloranfenicol, rifampicina, isoniazide, alfametildopa) pueden dar valores elevados. Criterios de validación

Controlar el valor de otras enzimas de los parámetros cardíacos (CPK, mioglobina, CK-MB, CK–MB masa, troponina).

Confrontar con analitos de funcionalidad hepática (ALT, GGT, TP, colinesterasa, electroforesis de proteína, parámetros de hepatitis A, B, C).

Controlar eventual estado tóxico (alcoholemia, colinesterasa).

Confrontar con pruebas de funcionalidad musculares (CPK, aldosas). Modo de escribir los resultados La AST se escribe sin cifra decimal. Comunicación de riesgo Se tiene que comunicar inmediatamente con valores superior a 300.0 U/L.

Page 65: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA (TGP-ALT)

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de los niveles de transaminasa (TGP) en la sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 75 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ - ALT

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003473.htm

Conservación Centrifugación y separación del suero; la toma de muestra se puede conservar por 1 día a temperatura ambiente de 20-25oC, 7 días a + 4oC y 1 año congelada. Verificación de la muestra Verificar que el registro de la toma de muestra esté correcto. Muestra Idoneidad de la muestra: identificación y cantidad. Centrifugación Poner el tubo de ensayo en la centrífuga de modo balanceado, poner el reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 r.p.m. METÓDICA DE DETERMINACIÓN: La enzima Alanina aminotransferasa (ALT) o transaminasa glutámica pirúvica (TGP) cataliza la transferencia del grupo amino de la Alanina al cetoglutarato, formando Piruvato y Glutamato. La concentración catalítica se determina empleando la reacción acoplada de la lactato deshidrogenasa (LDH), a partir de la velocidad de desaparición del NADH. Alanina + α cetoglutarato ALT Piruvato + Glutamato

—> Piruvato + NADH + H+ LDH Lactato + NAD+

--—> MATERIALES:

♣ Guantes descartables no estériles ♣ Tubos de ensayo 16 x 100 mm

♣ Puntas de pipeta 10-500ul

EQUIPOS:

♣ Centrífuga ♣ Espectrofotómetro ♣ Baño María

♣ Reloj marcador ♣ Pipetas automáticas 50-200 ul ♣ Pipetas automáticas 200-1000 ul

Procedimiento Siga las instrucciones del laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras. Verificar el resultado

Si el valor de la ALT es ≥ 300.0 U/L, repetir la medida.

Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar.

Page 66: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra, utilizando un control patológico.

Con valores de ALT ≥ de 600 U/L, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con solución fisiológica y con un control patológico.

Si la confrontación del valor concentrado está sobrepuesto al suero diluido y el control está dentro el rango establecido, se puede entregar el resultado.

Si el suero diluido no está en relación con el suero concentrado, diluir la muestra 1:4, 1:8 con solución fisiológica, siempre usando el control patológico.

Notas sobre la metódica: Linealidad La metódica de ALT es lineal hasta 600.0 U/L. Sensibilidad La sensibilidad de la metódica es de 4.0 U/L. Especificidad La metódica es específica para la ALT. Interferencias Las interferencias más significativas son: Hemólisis: con Hb ≥ 6.0 g/l. Ictericia: con bilirrubina ≥ 60.0 mg/dl. Lipemia: con triglicéridos ≥ 1000.0 mg/dl. Muchos fármacos (cefalosporinas, cloranfenicol, rifampicina, isoniazide, alfametildopa) pueden dar valor elevado. Modo de escribir los resultados La ALT se escribe sin cifra decimal. Comunicación de riesgo Se tiene que comunicar inmediatamente con valores superiores a 300.0 U/L.

Page 67: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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DETERMINACIÓN DE UREA

DOCENTE: EVIDENCIA DE HACER : Determinación y reporte de la presencia/ausencia y los niveles de urea en la sangre. ESTUDIANTE: EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. TIEMPO ESTIMADO: 45 minutos. SELECCIÓN Y BÚSQUEDA DE LA INFORMACIÓN:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ BUN: Nitrógeno ureico

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003474

Transporte Transportar a temperatura ambiente. Conservación Centrifugar y separar el suero; la toma de muestra se puede conservar por 1 día a temperatura ambiente, de 20-25oC 7 días a + 4oC y 1 año congelada. Muestra Idoneidad de la muestra: identificación y cantidad. Centrifugación Poner el tubo de ensayo en la centrífuga de modo balanceado, poner el reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 r.p.m. METÓDICAS DE DETERMINACIÓN: Método de diacetilmonosina La urea reacciona a temperaturas altas en presencia de ácido fosfórico con la diacetilmonosina, con formación de un producto coloreado en amarillo. La reacción es catalizada por iones férricos. Método de Berthelot La enzima ureasa reacciona sobre la urea, transformándola en iones de amonio. Después, el amonio se hace reaccionar en medio alcalino con fenol y hipoclorito, formándose azul de indofenol, cuya intensidad de color es proporcional a la concentración de urea. Urea + H2O ureasa 2 NH4 + CO2

———> NH4 + salicilato + NaClO nitroprusiato indofenol MATERIALES:

♣ Guantes descartables no estériles ♣ Tubos de ensayo 16 x 100 mm ♣ Puntas de pipeta 10

♣ Puntas de pipeta 50-200 ul

EQUIPOS: ♣ Centrífuga ♣ Espectrofotómetro ♣ Baño María ♣ Reloj marcador

♣ Pipetas automáticas 10-50 ul ♣ Pipetas automáticas 50-500 ul

Procedimiento Siga las instrucciones del laboratorio fabricante. Control de Calidad Se deberán usar sueros, control normal y patológico, en las mismas condiciones que las muestras.

Page 68: GUÍA DE LABORATORIO CLÍNICO

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Verificar el resultado

Si el valor de la urea ≥ 150.0 mg/dl, repetir la medida.

Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar.

Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra utilizando un control patológico.

Con valores de urea ≥ de 400 mg/dl, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con solución fisiológica y con un control patológico.

Si la confrontación del valor concentrado está sobrepuesto al suero diluido y el control está dentro el rango establecido, se puede entregar el resultado.

Si el suero diluido no está en relación con el suero concentrado, diluir la muestra 1:3 con solución fisiológica, siempre usando el control patológico.

Notas sobre la metódica: Linealidad La metódica de urea es lineal hasta 400.0 mg/dl. Sensibilidad La sensibilidad de la metódica es de 5.0 mg/dl. Especificidad La metódica es específica para la urea. Interferencias Las interferencias más significativas son: Hemólisis: con Hb ≥ 10.0 g/l Ictericia: con bilirrubina ≥ 60.0 mg/dl Lipemia: con triglicéridos ≥ 2000.0 mg/dl Criterios de validación

Confrontar los parámetros de la funcionalidad del riñón (creatinina, aclaramiento de la creatinina, proteínas urinarias, densidad urinaria).

Confrontar parámetros del equilibrio electrolítico (sodio, potasio, cloro).

Confrontar parámetros de funcionalidad hepática (AST, ALT, GGT).

Controlar parámetros metabólicos (glucosa, acido úrico).

Controlar los parámetros del metabolismo lipídico (colesterol, HDL, LDL, apolipoproteínas).

Controlar eventual estado de embarazo.

Confrontar con funcionalidad sobrerenal. Modo de escribir los resultados La urea se escribe sin cifra decimal.

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TABLA DE VALORES DE

REFERENCIA

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HEMATOLOGÍA

HEMOGRAMA COMPLETO1

FORMULA LEUCOCITARIA PORCENTUAL1

FÓRMULA LEUCOCITARIA PROPORCIÓN RELATIVA (%) VALORES ABSOLUTOS

(mm3) Neutrófilos 55 -65% 4 000 – 7 000 Linfocitos 25 -35% 1500 – 3 000 Eosinófilos 0,5 – 4% 50 – 400 Monocitos 3 – 8% 200 – 800 Basófilos 0,5 – 1% 50 -100

VALORES NORMALES DE LEUCOCITOS POR GRUPOS DE EDAD1

GRUPOS DE EDAD

LEUCOCITOS

RECIÉN NACIDO 1 – 4 AÑOS 10 AÑOS ADULTOS Neutrófilos 5 500 – 6 500 3 600 – 4 800 4 500 – 5 500 4 000 – 7 00 Eosinófilos 200 – 400 200 – 500 200 - 500 50 – 400 Basófilos 0 - 100 0 – 100 0 – 100 50 – 100 Linfocitos 3 000 – 3 500 4 400 – 5 400 3 800 – 4 500 1 500 – 3 000 Monocitos 300 – 600 300 - 600 300 - 600 200 - 800

VALORES NORMALES DE ERITROCITOS POR GRUPOS DE EDAD1

GRUPOS DE EDAD MILLONES DE

ERITROCITOS/mm3 Mujeres 4,0 – 5,0 Varones 4,5 – 5,5 Niños de 4 años 4,2 – 5,2 Niños de 1 – 6

meses

3,8 – 5,2 Recién Nacidos 5,0 – 6,0

VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO POR GRUPOS DE EDAD1

GRUPOS DE EDAD HEMATOCRITO Varones 40 - 50% Mujeres 37 - 42% Niños de 5 años 38 - 44% Lactantes de 3

meses

35 - 40% Recién Nacidos 50 - 58%

VALORES NORMALES DE HEMOGLOBINA1

GRUPOS DE EDAD HEMOGLOBINA (gramos/100 ml) Niños al nacer 13,6 - 19,6 Niños de 1 año 11,3 -13,0 Niños de 10 a 12 años 11,5 - 14,8 Mujeres no embarazadas 11,5 - 14,5 Varones adultos 13,0 - 16,0

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN DE ERITROCITOS1

Los valores normales de Westergren son1:

SEXO 1 HORA 2 HORAS Varón 3 - 5 mm 7 - 15 mm Mujer 4 - 7 mm 12 - 17 mm

Los valores normales de Wintrobe son1:

SEXO LÍMITE PROMEDIO Varón 0 - 7 mm 4 mm Mujer 0 - 15 mm 10 mm Niños 1 - 15 mm 5 mm

VALORES NORMALES DE RETICULOCITOS1

GRUPOS DE EDAD VALOR NORMAL PORCENTUAL (%) Varones 0,5 – 1,5 Mujeres 0,5 – 2,5 Niños 0,5 – 4 Lactantes 2 – 5

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TIEMPO DE SANGRÍA1

Por el Método de Duke es de: 1 a 5 minutos TIEMPO DE COAGULACIÓN1

Por el MÉTODO DE LEE Y WHITE son de: 5 a 12 minutos

BIOQUÍMICA SANGUÍNEA

GLUCOSA2, 3

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Adultos y niños 60.0 - 110.0 mg/dl Neonatos > de 6 horas 40.0 - 60.0 mg/dl Neonatos > de 5 días 50.0 - 80.0 mg/dl Adultos (Ayuno de 8 horas) 70-110 mg/dl Glucosa Post Prandial (2 horas) Menor de 140 mg/dl

HEMOGLOBINA GLICOSILADA: CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IONICO3

Se precisan niveles no diabéticos entre 4.0- 6.3 % DESHIDROGENASA LÁCTICA2

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Adultos 230-460 U/l Niños 250-580 U/L

COLESTEROL TOTAL3

VALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS Deseable ó Aceptable Menor de 200 mg/dl Moderadamente alto 200-239 mg/dl Alto ó elevado Mayor o igual a 240

mg/dl TRIGLICÉRIDOS3

VALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS Deseable ó Aceptable Menor de 150

mg/dl Moderadamente alto 150-199 mg/dl Alto ó elevado 200-499 mg/dl Muy alto ó muy elevado Mayor o igual a 500

mg/dl

COLESTEROL HDL2, 3

VALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS

Deseable 40-60 mg/dl

Varón: > 55.0 mg/dl Mujer: > 65.0 mg/dl

Protectivo Mayor de 60 mg/dl

COLESTEROL LDL3

VALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS Deseable Menor a 130 mg/dl Riesgo Moderado a Elevado 130-189 mg/dl Riesgo muy elevado Mayores o iguales a 190 mg/dl

UREA2

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Adultos Hasta 50.0 mg/dl Neonatos, hasta 6 meses Hasta 42.0 mg/dl Niños Hasta 48.0 mg/dl

CREATININA2

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Hombres Hasta 1.3 mg/dl Mujeres Hasta 1.1 mg/dl Neonatos o niños Hasta 0.7 mg/dl

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PROTEINAS TOTALES2

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Adultos 6.6-8.7 g/dl Prematuros 3.6-6.0 g/dl Neonatos 4.6-7.0 g/dl Niños 6.0-8.0 g/dl

ALBÚMINA2

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Adulto 3.4 - 4.8 g/dl Neonatos hasta 4 días 2.8 - 5.4 g/dl Niños 3.8 - 5.4 g/dl

Orina de 24 horas: 2.3 g/24 horas AMILASA2

VALOR DE REFERENCIA Menor a 220 U/I

BILIRRUBINA TOTAL2

Valor de referencia: Hasta 1.0 mg/dl.

GRUPOS DE EDAD VALOR DE REFERENCIA Prematuros de 2-4 días Hasta 10.0 mg/dl. Neonatos de 24 horas Hasta 4.0 mg/dl. Neonatos de 48 horas Hasta 9.0 mg/dl. Neonatos al quinto día Hasta 13.5 mg/dl.

BILIRRUBINA DIRECTA2

Valor de referencia: Hasta 0.3 mg/dl. BILIRRUBINA INDIRECTA2

Valor de referencia: Hasta 0.7 mg/dl. CREATINA CINASA (CK)2

GRUPOS VALOR DE

REFERENCIA Mujer Hasta 167.0 U/L Varón Hasta 190.0 U/L

CREATINA CINASA (CK) MB2

VALOR DE REFERENCIA Hasta 24.0 U/L Inferior al 6.0% del CPK total.

CREATININA3

MUESTRA VALOR DE REFERENCIA Suero 0.8-1.4 mg/dl Orina 900-1500 mg/dl

TRANSAMINASAS (TGO-AST) (TGP-ALT)3

TRANSAMINASAS VARONES MUJERES ALT/TGP Hasta 41 U/l Hasta 31 U/l AST/TGO Hasta 38 U/l Hasta 32 U/l

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FOSFATASA ALCALINA2

GRUPOS DE EDAD VALORES DE REFERENCIA Varones hasta 279.0 U/L Mujeres hasta 240.0 U/L Neonatos inferior 600.0 U/L Niños de 6 días a 1 año inferior 1100 U/L Niños de 2- 7 años hasta 650.0 U/L Niños de 7-12 años hasta 720.0 U/L

FOSFATASA ACIDA2

VALOR DE REFERENCIA Hasta 10.0 U/L

GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA

GRUPOS VALORES DE REFERENCIA Varones Hasta 50.0 U/L Mujeres Hasta 36.0 U/L

ÁCIDO ÚRICO2

GRUPOS VALORES DE REFERENCIA VARONES 3.4-7.0 mg/dl MUJERES 2.4-5.7 mg/dl

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ELECTROLITOS SÉRICOS

ELECTROLITOS VALOR DE REFERENCIA CLORO2 95-110 mEq/l POTASIO1, 2 3.7-5.5 mEq/l SODIO1, 2 132.0 – 148.0 mEq/l MAGNESIO2

Neonatos de 2-4 días 1.4-2.2 mg/dl Niños de 5-6 meses 1.7-2.3 mg/dl

Niños 6-12 años 1.7-2.1 mg/dl Adultos 1.5-2.5 mg/dl

HIERRO2

Varón 60-158 ug/dl Mujer 37-145 ug/dl

CALCIO2

Neonato de edad hasta 10 días 8.6-10.2 mg/dl Neonatos niños de 10 días hasta 2 años 7.6-10.4 mg/dl

Niños de 2 hasta 12 años de edad 9.0-11.0 mg/dl Adultos 8.8-11.0 mg/dl

FÓSFORO

INORGÁNICO2

Niños Hasta 6.5 mg/dl Adulto Hasta 4.5 mg/dl

BIBLIOGRAFÍA

1. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BÁSICOS DE LABORATORIO CLÍNICO. MINISTERIO DE SALUD - 2003. PERÚ. 2. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO EN BIOQUÍMICA CLÍNICA Y CONTROL DE CALIDAD. MANAGUA-

NICARAGUA 2004. PROGRAMA DE MODERNIZACIÓN DEL SECTOR SALUD. 3. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO BIOQUIMICO. SEGÚN NORMA

INTERNACIONAL ISO/FDIS 15189:2000. MINISTERIO DE SALUD - LIMA-PERU 2003.