fundamentos inmunohemato-logía
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PRINCIPIOS BÁSICOS EN PRINCIPIOS BÁSICOS EN INMUHEMATOLOGÍAINMUHEMATOLOGÍA
ELIZABETH RODRIGUEZ HELIZABETH RODRIGUEZ HDocente Banco de SangreDocente Banco de Sangre
UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA CUNDINAMARCA
20122012
INMUNOHEMATOLOGÍAINMUNOHEMATOLOGÍA Corresponde al capítulo de la Hematología que Corresponde al capítulo de la Hematología que
estudia y se ocupa de los procesos inmunes estudia y se ocupa de los procesos inmunes relacionados con las células sanguíneasrelacionados con las células sanguíneas
Estos procesos están producidos por anticuerpos Estos procesos están producidos por anticuerpos (Acs) que reaccionan con antígenos (Ags) (Acs) que reaccionan con antígenos (Ags) presentes en la membrana de las células presentes en la membrana de las células sanguíneassanguíneas
Los anticuerpos son inmunoglobulinas: Las de Los anticuerpos son inmunoglobulinas: Las de tipo IgG e IgM son las más habitualestipo IgG e IgM son las más habituales
Los antígenos son estructuras de la membrana Los antígenos son estructuras de la membrana (proteínas, glúcidos, lípidos o combinaciones de (proteínas, glúcidos, lípidos o combinaciones de ellos) con capacidad inmunogénica: capaces de ellos) con capacidad inmunogénica: capaces de desencadenar una respuesta inmune.desencadenar una respuesta inmune.
INMUNOHEMATOLOGÍAINMUNOHEMATOLOGÍA Los Ags y los Acs son los grandes protagonistas de IH y de Los Ags y los Acs son los grandes protagonistas de IH y de
los estudios inmunohematológicos realizados para el los estudios inmunohematológicos realizados para el diagnóstico de los procesos inmunes de la sangre basados diagnóstico de los procesos inmunes de la sangre basados en la evidencia de la reacción Ag-Ac en la evidencia de la reacción Ag-Ac
INMUNOHEMATOLOGÍA- ANTÍGENOSINMUNOHEMATOLOGÍA- ANTÍGENOS
La parte del Ag que reacciona con el Ac es el determinante La parte del Ag que reacciona con el Ac es el determinante antigénico o epítopoantigénico o epítopo
Cada Ag esta constituído por un número variable de Cada Ag esta constituído por un número variable de epítoposepítopos
INMUNOHEMATOLGÍA -ANTÍGENOSINMUNOHEMATOLGÍA -ANTÍGENOS
UBICACIÓN EN LAS CÉLULAS SANGUÍNEASUBICACIÓN EN LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS
Hematíes: Antígenos eritrocitariosHematíes: Antígenos eritrocitarios Plaquetas: Antígenos plaquetariosPlaquetas: Antígenos plaquetarios Granulocitos: Antígenos granulocitariosGranulocitos: Antígenos granulocitarios
AGRUPACIÓN Y CLASIFICACION ANTIGENOS ERITROCITARIOS AGRUPACIÓN Y CLASIFICACION ANTIGENOS ERITROCITARIOS (ISBT) (ISBT)
Grupos Sanguíneos: serie (001-023) Total 23Grupos Sanguíneos: serie (001-023) Total 23 Antígenos de Alta Incidencia : serie 900 . Total Aprox 12 Antígenos de Alta Incidencia : serie 900 . Total Aprox 12 Antígenos de Baja incidencia: serie 700. Total Aprox 36Antígenos de Baja incidencia: serie 700. Total Aprox 36 Colecciones: serie 200. Total Aprox 5Colecciones: serie 200. Total Aprox 5
HEMOAGLUTINACION- ANTICUERPOSHEMOAGLUTINACION- ANTICUERPOS Los anticuerpos son proteínas plasmáticas que se producen Los anticuerpos son proteínas plasmáticas que se producen
en respuesta a un antígenoen respuesta a un antígeno Al realizar un proteínograma se observa aparecen varias Al realizar un proteínograma se observa aparecen varias
bandas, con 2 grandes fracciones correspondientes a la bandas, con 2 grandes fracciones correspondientes a la albúmina y a la globulinas ( ạ1,a2,B1,B2 y albúmina y a la globulinas ( ạ1,a2,B1,B2 y ΥΥ ) )
Los anticuerpos se sitúan en la región Los anticuerpos se sitúan en la región ΥΥ,, y por su relación y por su relación con la inmunidad se denominan Inmunoglobulinas (Ig)con la inmunidad se denominan Inmunoglobulinas (Ig)
IMPORTANCIA CLÍNICA DE LOS ANTICUERPOSIMPORTANCIA CLÍNICA DE LOS ANTICUERPOS
Los anticuerpos más en Los anticuerpos más en transfusión e IH son los de transfusión e IH son los de clase IgG ,e IgM y clase IgG ,e IgM y excepcionalmente IgA.excepcionalmente IgA.
Los anticuerpos IgG son Los anticuerpos IgG son “incompletos” porque no “incompletos” porque no son capaces de aglutinar son capaces de aglutinar espontáneamente a los espontáneamente a los hematíes.hematíes.
Los anticuerpos de clase Los anticuerpos de clase IgM son “completos” o IgM son “completos” o aglutinantes porque son aglutinantes porque son capaces de aglutinar capaces de aglutinar espontáneamente a los espontáneamente a los hematíeshematíes
CLASIFICACIÓN DE LOS ANTICUERPOS CLASIFICACIÓN DE LOS ANTICUERPOS SEGÚN SU ORIGENSEGÚN SU ORIGEN
NATURALESNATURALES: Aparecen sin estimulación : Aparecen sin estimulación detectable, la mayoría son IgM o mezclas dedetectable, la mayoría son IgM o mezclas de
IgG + IgM:IgG + IgM:
RegularesRegulares: aparecen siempre que se carece del : aparecen siempre que se carece del antígeno correspondiente (ABO).antígeno correspondiente (ABO).
IrregularesIrregulares: No siempre aparecen cuando se : No siempre aparecen cuando se carece del antígeno (P, Le, E ….).carece del antígeno (P, Le, E ….).
- INMUNESINMUNES: Se detectan después de un estímulo : Se detectan después de un estímulo antigénico ( transfusión, embarazo) son casi antigénico ( transfusión, embarazo) son casi siempre de tipo IgG . siempre de tipo IgG .
- También son Acs También son Acs irregularesirregulares
CLASIFICACIÓN DE LOS ANTICUERPOS SEGÚN CLASIFICACIÓN DE LOS ANTICUERPOS SEGÚN EL ANTÍGENO CONTRA EL QUE VAN DIRIGIDOSEL ANTÍGENO CONTRA EL QUE VAN DIRIGIDOS
• ALOANTICUERPO:ALOANTICUERPO: Dirigido Dirigido contra un antígeno contra un antígeno extraño de la misma extraño de la misma especie, no presente en la especie, no presente en la persona que lo produce.persona que lo produce.
- Los anticuerpos dirigidos Los anticuerpos dirigidos contra los ags contra los ags eritrocitarios eritrocitarios
Ej: anti Rh (D) en un Ej: anti Rh (D) en un individuo Rh (D) negativo.individuo Rh (D) negativo.
AUTOANTICUERPOAUTOANTICUERPO: : dirigidos contra un Ag dirigidos contra un Ag propiopropio
- Responsables de los Responsables de los procesos autoinmunesprocesos autoinmunes
REGLA BÁSICA EN EL DIAGNÓSTICO REGLA BÁSICA EN EL DIAGNÓSTICO INMUNOHEMATOLÓGICOINMUNOHEMATOLÓGICO
La detección de un aloanticuerpo en el suero de La detección de un aloanticuerpo en el suero de un paciente exige, siempre que sea factible, la un paciente exige, siempre que sea factible, la confirmación la ausencia del correspondiente Ag.confirmación la ausencia del correspondiente Ag.
-Por ej: Un receptor de sangre portador de un anticuerpo -Por ej: Un receptor de sangre portador de un anticuerpo
anti- Kell debe ser de fenotipo Kell (-) anti- Kell debe ser de fenotipo Kell (-)
Pruebas:Pruebas:
1° se investigará la presencia del anticuerpo en el suero:1° se investigará la presencia del anticuerpo en el suero:
Suero problema +hematíes conocidos Kell(+) y Kell(-)Suero problema +hematíes conocidos Kell(+) y Kell(-)
2° se comprobará la ausencia del Ag Kell en el receptor:2° se comprobará la ausencia del Ag Kell en el receptor:
Anticuerpos conocido (anti –Kell) + hematíes del receptorAnticuerpos conocido (anti –Kell) + hematíes del receptor
TÉCNICAS SEROLÓGICASTÉCNICAS SEROLÓGICASAGLUTINACIÓNAGLUTINACIÓN
Corresponde al agrupado de hematíes que se Corresponde al agrupado de hematíes que se forma cuando las moléculas de acs se unen a los forma cuando las moléculas de acs se unen a los determinantes antigénicos Ag(s) de múltiples determinantes antigénicos Ag(s) de múltiples células adyacentes,células adyacentes,
- Algunas moléculas son capaces de unirse a los Algunas moléculas son capaces de unirse a los Ag(s) y de interaccionar con otras moléculas Ag(s) y de interaccionar con otras moléculas induciendo a la aglutinación final –Ig (M)induciendo a la aglutinación final –Ig (M)
- Otras moléculas solo se unen a su antígeno pero Otras moléculas solo se unen a su antígeno pero no son capaces de hacerlo con sus vecinas por no son capaces de hacerlo con sus vecinas por consiguiente no producen la aglutinación Ig(G).consiguiente no producen la aglutinación Ig(G).
TECNICAS SEROLÓGICAS: AGLUTINACIÓNTECNICAS SEROLÓGICAS: AGLUTINACIÓN
La aglutinación es un proceso La aglutinación es un proceso químico reversible que se químico reversible que se produce en dos fases:produce en dos fases:
- Fase de sensibilización- Fase de sensibilización : unión : unión del Ac con el Ag.del Ac con el Ag.
- Fase de AglutinaciónFase de Aglutinación: : Formación de puentes entre Formación de puentes entre las células sensibilizadas las células sensibilizadas hasta construir la red que hasta construir la red que conducen a la aglutinación.conducen a la aglutinación.
Son muchos los factores que Son muchos los factores que inciden en estas dos fases y inciden en estas dos fases y que podemos manipular, para que podemos manipular, para aumentar, o disminuir la aumentar, o disminuir la aglutinaciónaglutinación
FACTORES QUE AFECTAN LA FACTORES QUE AFECTAN LA SENSIBILIZACIÓNSENSIBILIZACIÓN
TemperaturaTemperatura pH.pH. Tiempo de incubación.Tiempo de incubación. Tipo de Anticuerpo: clase de IgTipo de Anticuerpo: clase de Ig Proporción Ag-AcProporción Ag-Ac Constante afinidad del AnticuerpoConstante afinidad del Anticuerpo
FACTORES QUE AFECTAN LA SENSIBILIZACIÓNFACTORES QUE AFECTAN LA SENSIBILIZACIÓN
• 1-Temperatura:1-Temperatura:-Los anticuerpos Ig G reaccionan -Los anticuerpos Ig G reaccionan
en forma óptima a 37°C en forma óptima a 37°C (“calientes”).(“calientes”).
-Los anticuerpos Ig M-Los anticuerpos Ig MReaccionan en forma óptima a Reaccionan en forma óptima a
4°C o a TA.(“fríos)4°C o a TA.(“fríos)• 2-pH:2-pH:-El pH óptimo de la reacción está -El pH óptimo de la reacción está
entre 6,9 y 7.2entre 6,9 y 7.2
• 3-Tiempo de Incubación:3-Tiempo de Incubación:- El estado de equilibrio de la - El estado de equilibrio de la
reacción sin potenciadores reacción sin potenciadores esta entre 15-60 minutos esta entre 15-60 minutos
4- Tipo de Anticuerpo:4- Tipo de Anticuerpo:-Ig M: aglutinante en solución -Ig M: aglutinante en solución
salina.salina.-Ig G: no aglutina , habrá que -Ig G: no aglutina , habrá que
potenciar la aglutinación.potenciar la aglutinación.
5- Proporción de Antígenos y 5- Proporción de Antígenos y AnticuerposAnticuerpos..
- Tiene que haber una proporción Tiene que haber una proporción entre el número de moléculasentre el número de moléculas de Acs y el de determinantes de Acs y el de determinantes antigénicos.antigénicos.
6- Constante de Afinidad del 6- Constante de Afinidad del AnticuerpoAnticuerpo
- A mayor afinidad del anticuerpo A mayor afinidad del anticuerpo mayor velocidad de asociación y mayor velocidad de asociación y más lenta la disociaciónmás lenta la disociación
FACTORES QUE AFECTAN A LA FASE DE FACTORES QUE AFECTAN A LA FASE DE AGLUTINACIÓNAGLUTINACIÓN
1- 1- Intensidad Iónica del Medio (Potencial Z)Intensidad Iónica del Medio (Potencial Z) - El Potencial Z es la diferencia del potencial entre el hematíes - El Potencial Z es la diferencia del potencial entre el hematíes
cargado negativamente y la nube de cargas positivas del mediocargado negativamente y la nube de cargas positivas del medio
- Es el responsable de la fuerza de repulsión de los hematíes- Es el responsable de la fuerza de repulsión de los hematíes 2- 2- El tipo de Ac.El tipo de Ac.
- Los IgM siempre aglutinan- Los IgM siempre aglutinan
- Los IgG ocasionalmente (Según localización del epítopo del Ag)- Los IgG ocasionalmente (Según localización del epítopo del Ag)
POTENCIADORES DE LA REACCION Ag-ACPOTENCIADORES DE LA REACCION Ag-AC
SOLUCIONES DE BAJA FUERZA IÓNICA (LISS) - Aceleran la fase de sensibilización al disminuir la carga negativa. - Suelen requerir de una sustancia no iónica para eviatar la hemólisis (Glicina).
- ALBÚMINA - Reduce la repulsión entre las células (Potencial Z), favoreciendo la aglutinación - Hace posible que anticuercos IgG sean capaces de unir hematíes adyacentes
ENZIMAS -Bromelina, tripsina, papaína, ficina, pronasa y neuromidasa - Reducen la carga negativa, hacen aglutinantes Ac de tipo IgG - Mejoran el acceso a los determinantes antigénicos
MOLECULAS CARGADAS POSITIVAMENTE - Son Polímeros que aportan un exceso de carga positiva: Polybrene, Sulfato de
protamuina,,poli-L-lisina,que pueden producir una aglutinación espontanea. - Pueden producir falsos positivos
PEG -Es un polímero soluble que potencia la reacción Ag.Ac, eliminando el agua que hay
alrededor de los hematíes. - Ütil para la detección de Ac de tipo IgG
TEST DE ANTIGLOBULINA HUMANATEST DE ANTIGLOBULINA HUMANATEST DE “COOMBS”TEST DE “COOMBS”
En 1945 Coombs y Mourant y Race diseñaron una técnicaEn 1945 Coombs y Mourant y Race diseñaron una técnica
Para poner en evidencia los Ac que no eran capaces de Para poner en evidencia los Ac que no eran capaces de aglutinar directamente a los hematíes (IgG).aglutinar directamente a los hematíes (IgG).
1- La base esta en utilizar un suero anti-Inmunoglobulina o 1- La base esta en utilizar un suero anti-Inmunoglobulina o anti Complemento (suero antiglobulina) que actúa como un anti Complemento (suero antiglobulina) que actúa como un puente de enlace entre los Ac fijados.puente de enlace entre los Ac fijados.
2- Originalmente se empleo para demostrar anticuerpos Rh(D)2- Originalmente se empleo para demostrar anticuerpos Rh(D)
incompletos o no aglutinantes (IgG) en el suero.incompletos o no aglutinantes (IgG) en el suero.
3- Posteriormente ,para detectar la sensibilización in vivo por 3- Posteriormente ,para detectar la sensibilización in vivo por anticuerpos o factores de complemento (autoanticuerpos) anticuerpos o factores de complemento (autoanticuerpos) en pacientes que padecen de anemias hemolíticas inmunesen pacientes que padecen de anemias hemolíticas inmunes
¿Cómo se obtiene la Antiglobulina?¿Cómo se obtiene la Antiglobulina?
TEST DE ANTIGLOBULINATEST DE ANTIGLOBULINAPRUEBA DIRECTA-PADPRUEBA DIRECTA-PAD
TEST DE ANTIGLOBULINA TEST DE ANTIGLOBULINA TEST INDIRECTO -PAITEST INDIRECTO -PAI
Indicaciones:-Detección e Identificación de Acs-Pruebas de Compatibilidad-Pretransfusional-Tipificación de Ags eritrocitarios que no son visualizados por aglutinación directa
Sensibilización : reacción Ag-AcSensibilización : reacción Ag-Ac
EL suero de antiglobulina se une al fragmento Fc EL suero de antiglobulina se une al fragmento Fc de los Acs IgGde los Acs IgG
El suero antiglobulina actúa como puente entre los Acs IgGEl suero antiglobulina actúa como puente entre los Acs IgGfavoreciendo la aglutinaciónfavoreciendo la aglutinación
Aglutinación finalAglutinación final
Métodos para observar la aglutinaciónMétodos para observar la aglutinación
LA TÉCNICA EN TUBOLA TÉCNICA EN TUBO: Es la técnica estándar.: Es la técnica estándar.
- - VentajasVentajas: Se pueden añadir aditivos .Permite la manipulación. La : Se pueden añadir aditivos .Permite la manipulación. La hemólisis es visiblehemólisis es visible
- - Desventajas;Desventajas; La aglutinación es inestable .Requiere experiencia en La aglutinación es inestable .Requiere experiencia en la manipulación y lectura cuidadosala manipulación y lectura cuidadosa
MICROPLACAMICROPLACA
Método .Porta-objetosMétodo .Porta-objetos
Métodos para observar la aglutinaciónMétodos para observar la aglutinación
Aglutinación en columna /Tarjeta.Aglutinación en columna /Tarjeta.
la columna contiene gel, microesferas. Utiliza aditivos de tipo Liss, la columna contiene gel, microesferas. Utiliza aditivos de tipo Liss, para potenciar la reacción Ag-Ac y reduce el tiempo de incubación para potenciar la reacción Ag-Ac y reduce el tiempo de incubación La reacción es semipermanente, puede evaluarse horas, días La reacción es semipermanente, puede evaluarse horas, días después.después.
VENTAJAS:VENTAJAS: Entrenamiento mínimo y poca manipulación, Entrenamiento mínimo y poca manipulación, Se requiere pocos reactivosSe requiere pocos reactivosDESVENTAJAS DESVENTAJAS : Se requiere equipamento: Se requiere equipamentoMuy sensibleMuy sensible
LECTURA EN LECTURA EN MICROCOLUMNA GELMICROCOLUMNA GEL44++
33++
22++
11++
WW HH DPDP--
SISTEMA ABOSISTEMA ABOFUNDAMENTOS BIOQUIIMICOS, FUNDAMENTOS BIOQUIIMICOS, MOLECULARES Y GENETICOS DE MOLECULARES Y GENETICOS DE
LOS ANTIGENOSLOS ANTIGENOS
SISTEMA ABOSISTEMA ABOFUNDAMENTOS BIOQUIIMICOS, FUNDAMENTOS BIOQUIIMICOS, MOLECULARES Y GENETICOS DE MOLECULARES Y GENETICOS DE
LOS ANTIGENOSLOS ANTIGENOS
Persona 1Persona 1
++22 personas (incluyendo la 22 personas (incluyendo la suya y de sus colaboradores)suya y de sus colaboradores)
Separó el suero y los Separó el suero y los glóbulos rojos de la glóbulos rojos de la sangre total.sangre total. Mezcló cada suero con los diferentes Mezcló cada suero con los diferentes
glóbulos rojos y tabulaba los glóbulos rojos y tabulaba los
resultadosresultados..
Persona 2Persona 2Resultado 1Resultado 1AglutinaciónAglutinación
Resultado 2Resultado 2
++ =
Experimento de LandsteinerExperimento de Landsteiner
SISTEMA ABO (001 ISBT)SISTEMA ABO (001 ISBT)
El sistema ABO es el más importante de los sistemas de grupos sanguíneos, es un sistema tisular de histocompatibilidad.
Sus antígenos están presentes en todas las células del organismo, líquidos biológicos como el plasma sanguíneo, la saliva y el líquido pericárdico, en la forma de glicoproteínas solubles.
Los Ag H son las moléculas precursoras a partir Los Ag H son las moléculas precursoras a partir de las cuales se sintetizan los Ag A y B.de las cuales se sintetizan los Ag A y B.
Los Ag ABO se encuentran en moléculas de Los Ag ABO se encuentran en moléculas de
carbohidratos relacionadas.carbohidratos relacionadas.
Los antígenos resultan de la acción de Los antígenos resultan de la acción de glucosiltrasferasas específicas que agregan glucosiltrasferasas específicas que agregan glúcidos en forma secuencial en puntos de glúcidos en forma secuencial en puntos de cadenas cortas de carbohidratos (oligosacáridos).cadenas cortas de carbohidratos (oligosacáridos).
GENERALIDADESGENERALIDADES
GENERALIDADESGENERALIDADES
Los productos primarios son enzimas llamadas“Glicosiltransferasas”,
Las glicosiltransferasas ABO transportan los azúcares ABO y los insertan en las cadenas glucídicas de glicoproteínas y glicolípidos que ya contengan el antígeno H como substrato para las enzimas.
los antígenos ABO son productos secundarios de los alelos ABO.
Los antígenos ABO son representados por puntos de polimorfismo en cadenas complejas de glúcidos ubicados en glicoproteínas membranarias y solubles ,principalmente, en glicolípidos membranarios
GENERALIDADESGENERALIDADES El gen El gen ABOABO se extiende por se extiende por
18 kb (quilobases) de DNA 18 kb (quilobases) de DNA gengenóómico en el cromosoma mico en el cromosoma 9 (9q34), presentando en su 9 (9q34), presentando en su estructura 7 exones.estructura 7 exones.
Cambios de bases de Cambios de bases de nuclenucleóótidos en los exones 6 tidos en los exones 6 y 7 crean una diversidad de y 7 crean una diversidad de alelos alelos ABOABO, que a su vez, , que a su vez, producen producen glicosiltransferasas con glicosiltransferasas con diferentes especificidades y diferentes especificidades y capacidades variables de capacidades variables de transporte del aztransporte del azúúcar car especespecíífico.fico.
los fenotipos comunes ABO los fenotipos comunes ABO (A1, A2, B, A1B, A2B y O) (A1, A2, B, A1B, A2B y O) producidos por los alelos producidos por los alelos comunes correspondientes comunes correspondientes ((A1, A2, B A1, A2, B y y OO))
los fenotipos denominados los fenotipos denominados raros (A3, Aend, Ax, Am, raros (A3, Aend, Ax, Am, Ay, Ael, B3, Bx, Bm, Bel, Ay, Ael, B3, Bx, Bm, Bel, B(A) y cis-AB) producidos B(A) y cis-AB) producidos por los alelos raros por los alelos raros correspondientes (correspondientes (A3, A3, Aend, Ax, Am, Ay, Ael, B3, Aend, Ax, Am, Ay, Ael, B3, Bx, Bm, Bel, B(A) Bx, Bm, Bel, B(A) yy cis-AB cis-AB).).
GENES QUE CONTROLAN LA APARICIÓN Y GENES QUE CONTROLAN LA APARICIÓN Y UBICACIÓN DE LOS AGS A Y B.UBICACIÓN DE LOS AGS A Y B.
HhHh SeSeABOABO
Se localizan en el locus ABO Se localizan en el locus ABO del del cromosoma 9cromosoma 9
Genes A y BGenes A y B codifican las codifican las glucosiltrasnferasas glucosiltrasnferasas que producen los que producen los Ags A y B.Ags A y B.
Gen OGen O no codifica no codifica ninguna enzima ninguna enzima funcional.funcional.
Ligado al Ligado al cromosoma cromosoma 1919
Ligado al Ligado al cromosoma 19cromosoma 19
Gen H Gen H produce una produce una glucosiltrasnferasa que glucosiltrasnferasa que actúa a nivel celular actúa a nivel celular para formar los Ags para formar los Ags sobre los que se sobre los que se construyen construyen los Ags.los Ags. A A y B.y B.
Gen Se Gen Se es el es el responsable directo de responsable directo de la expresión del Ag. H la expresión del Ag. H e indirecto de los Ags. e indirecto de los Ags. A y B en las A y B en las glucoproteínas de las glucoproteínas de las secreciones epiteliales. secreciones epiteliales.
Sustancia precursora
Antigeno H Antigeno A Antigeno B
L-FUCOSA
N-ACETIL-GLUCOSAMINA
D-GALACTOSA
N-ACETIL-GALACTOSAMINA
ANTÍGENOSANTÍGENOSANTÍGENOSANTÍGENOS
FUC
GAL
GAL
GEN H
L-FUCOSIL-TRANSFERASA
GalNAc
N-Acetilgalactosaminil transferasa
ANTÍGENO A
FUC
GAL
GAL
GEN H
L-FUCOSIL-TRANSFERASA
D-Galactosil transferasa
ANTÍGENO B
Gal
SISTEMA ABO. UCMC 2010
En eritrocitos de En eritrocitos de lactanteslactantes predominan los predominan los oligosacoligosacááridos lineales con un solo extremo para la ridos lineales con un solo extremo para la fijacifijacióón de los gln de los glúúcidos H y mas tarde los A y/o Bcidos H y mas tarde los A y/o B
En adultos En adultos abundan oligosacabundan oligosacááridos ramificados ridos ramificados proporcionando cadenas oligosacproporcionando cadenas oligosacááridas adicionales ridas adicionales para la conversipara la conversióón a Ag H y luego a A y B n a Ag H y luego a A y B
Glúcido inmunodominante A
Glúcido inmunodominante B
Cadenas de oligosacaridos en cadenas ramificadas y lineales respectivamente
DIFERENCIAS DE ACTIVIDAD DIFERENCIAS DE ACTIVIDAD A,B,H SEGÚN LA EDADA,B,H SEGÚN LA EDAD
ANTIGENOS Y ANTICUERPOS SISTEMA ABOANTIGENOS Y ANTICUERPOS SISTEMA ABO
GrupoGrupo SubgrupSubgrupoo
Antígenos en Antígenos en los G,rojoslos G,rojos
Anticuerpos en el Anticuerpos en el suerosuero
OO -- H*H* Anti-AAnti-A
Anti- A1Anti- A1
Anti -BAnti -B
Anti -A,B ɫAnti -A,B ɫ
AA A1A1
A2A2 A+A1A+A1
AAAnti-B ‡Anti-B ‡
BB - -
BB Anti-AAnti-A
Anti-A1Anti-A1
ABAB A1BA1B
A2BA2BA+A1+BA+A1+B
A+BA+BNinguno ‡Ninguno ‡
* Las células O tienen gran cantidad de Ag H , y las A1B la menor * Las células O tienen gran cantidad de Ag H , y las A1B la menor concentración, ɫ inseparable su reacción, ‡ del 1-8% de los concentración, ɫ inseparable su reacción, ‡ del 1-8% de los individuos A2 poseen Anti-A1 y del 22-35% de los individuos A2Bindividuos A2 poseen Anti-A1 y del 22-35% de los individuos A2B
Anti- HI ocasionalmente lo poseen individuos A1 y A1BAnti- HI ocasionalmente lo poseen individuos A1 y A1B
CARACTERÍSTICAS DE CARACTERÍSTICAS DE LOS ANTICUERPOSLOS ANTICUERPOS
CARACTERÍSTICAS DE CARACTERÍSTICAS DE LOS ANTICUERPOSLOS ANTICUERPOS
SINTESIS DE SINTESIS DE ANTICUERPOSANTICUERPOS
La síntesis de anticuerpos aumenta conforme avanza la edad, y en las etapas tardías de la vida, declina.
Las personas de edad avanzada poseen concentraciones de anti - A y anti - B más bajas que los adultos jóvenes
SISTEMA ABO. UCMC 2010
MOMENTO DE APARICIÓNMOMENTO DE APARICIÓN
• los anticuerpos Anti-A y Anti-B se detectan en el suero después de los primeros meses de vida.
•En ocasiones algunos lactantes los producen desde el momento del nacimiento, pero la mayor parte de los presentes en sangre de cordón es de origen materno.
CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS
Los sueros de algunas personas hemolizan los eritrocitos ABO incompatibles a temperaturas inferiores a 37oC.
Cuando el sobrenadante del suero es rosado o rojo o el sedimento celular es escaso o nulo, cabe pensar en hemólisis por anticuerpos ABO.
La hemólisis debe interpretarse como resultado positivo.
0
CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS
ACS ABOACS ABO Las dos clases de
inmunoglobulinas aglutinan los glóbulos rojos en forma preferencial a temperatura ambiente (20-24oC) o menos y activan el complemento a 37oC
Su capacidad lítica se manifiesta cuando las pruebas incluyen una fase de incubación a 37oC.
REACTIVIDAD DE LOS REACTIVIDAD DE LOS ANTICUERPOS ANTI-A Y ANTI-B ANTICUERPOS ANTI-A Y ANTI-B
Inmunoglobulinas Anti- A
Inmunoglobulinas Anti- B
Predominante en individuos del grupo
B
Predominante en individuos del grupo
A
Son IgM
- IgG
Inmunoglobulinas Anti- A y Anti-B
Inmunoglobulinas Anti-A, B
Predominante en individuos del grupo
O
Son IgG
SISTEMA ABO. UCMC 2010
PRINCIPALESPRINCIPALES GRUPOS Y SUBGRUPOSGRUPOS Y SUBGRUPOS ABO
PRINCIPALESPRINCIPALES GRUPOS Y SUBGRUPOSGRUPOS Y SUBGRUPOS ABO
• El fenotipo ABO de un individuo se determina comúnmente por las reacciones de aglutinación de sus glóbulos rojos con los antisueros Anti-A, Anti-B y Anti-AB.
• Al probar muestras de sangre de adultos, se puede obtener la confirmación del grupo sanguíneo ABO por la reacción del suero del individuo con las suspensiones de glóbulos rojos testigo A y B (contraprueba).
DETERMINACIÓN FENOTIPO ABODETERMINACIÓN FENOTIPO ABO
MÉTODOS TIPIFICACIÓN ABOMÉTODOS TIPIFICACIÓN ABO
PORTAOBJETOSPORTAOBJETOS
MICROPLACASMICROPLACAS
TUBOSTUBOS
GELGEL
MICROCOLUMNAMICROCOLUMNA
ADSORCIADSORCIÓÓN-ELUCIN-ELUCIÓÓN.**N.**
* T* TÉÉCNICAS ESPECIALES**CNICAS ESPECIALES**
PRUEBAS PARA LA TIPIFICACION ABOPRUEBAS PARA LA TIPIFICACION ABO
• DIRECTAS O ERITROCITARIASDIRECTAS O ERITROCITARIAS• Utilizan Acs anti-A y anti-B para determinar la Utilizan Acs anti-A y anti-B para determinar la
presencia o ausencia de Ag. presencia o ausencia de Ag. • El antusuero anti-A,B es opcional .El antusuero anti-A,B es opcional .• Siempre se debe incluir el control control salino para Siempre se debe incluir el control control salino para
validar la pruebavalidar la prueba• SEROLOGICASSEROLOGICAS• Emplean GR AEmplean GR A11 y B como reactivos para detectar y B como reactivos para detectar
anti-A y anti-B en el suero. Los GR A2 y O son anti-A y anti-B en el suero. Los GR A2 y O son opcionalesopcionales
* * Es indispensable la realizaciEs indispensable la realizacióón y correlacin y correlacióón de las n de las dos pruebas para la Interpretacidos pruebas para la Interpretacióón del grupo n del grupo sangusanguííneo ABOneo ABO..
DETERMINACION FENOTIPO DETERMINACION FENOTIPO ABOABO
FENOTIPFENOTIPOO
GENOTIPGENOTIPOO(S) (S) POSIBLESPOSIBLES
PRUEBA DIRECTAPRUEBA DIRECTA PRUEBA PRUEBA INVERSAINVERSA
anti-Aanti-A anti-Banti-B Anti-Anti-A,BA,B
CONTR CONTR SALINOSALINO
GRAGRA11
GRA2GRA2 GRBGRB GRGROO
OO O/OO/O 00 00 00 00 4+4+ 4+4+ 4+4+ 00
AA A/A A/OA/A A/O 4+4+ 00 4+4+ 00 00 00 4+4+ 00
BB B/B B/OB/B B/O 00 4+4+ 4+4+ 00 4+4+ 4+4+ 00 00
ABAB A/BA/B 4+4+ 4+4+ 4+4+ 00 00 00 00 00
OhOh h/hh/h 00 00 00 00 4+4+ 4+4+ 4+4+ 4+4+
SUBGRUPOS DEL SISTEMA ABOSUBGRUPOS DEL SISTEMA ABO
Fenotipos que difieren en la concentración de Ag en los GR
y la saliva de los secretores.
Producto de glucotransferasas menos efectivas.Los Subgrupos del A son
más comunes que los del B y AB.
Los dos principales subgrupos del A:
A1 y A2
La ClasificaciLa Clasificacióón de los Subgrupos n de los Subgrupos A dA déébilesbiles
A A1
Aglutinación de los GRCon anti-A y Lectina anti-A1.
A,B
Aglutinación de los GRCon anti-A, B.
Aglutinación de los GRCon lLectina anti-H.
H
Presencia o ausencia de Anti-A1 en el suero.
La presencia de sustanciasA y H en la saliva de los Secretores.
SISTEMA ABO. UCMC
SUBGRUPOS DEL SISTEMA ABOSUBGRUPOS DEL SISTEMA ABO
Fenotipos que difieren en la concentración de Ag en los GR
y la saliva de los secretores.
Producto de glucotransferasas menos efectivas.Los Subgrupos del A son
más comunes que los del B y AB.
Los dos principales subgrupos del A:
A1 y A2
Prueba que utiliza lectina obtenidade las semillas de Dolichos biflorus. anti-A1 ,o extraída de la Habichuela
Reacciona como anti-A1. Aglutina el 80% de los eritrocitos A y AB, el 20 % restante de los A y AB no son aglutinados A1
A1BA2
A2B
C .
Los anti-A1 reaccionan a temperaturas inferiores a 37º C.. Los que son activos a 37°C, revisten de importancia clínica.
El suero del 1-8% de los individuos A2 y el 22-35% de los A2B posee anticuerpos antiA1,se presentan como alo anticuerpos.
Menor número de puntos antigénicos A eritrocitarios. Incremento del antígeno H.
IMPORTANCIA EN MEDICINA TRANSFUSIONAL
Aint A3 Ax Am Ael
Rx menos con Los anti-A1.Mas con los Anti-H que losA2.
Cuantificación De Los anti-A1
No en presencia De anti-A de Personas del grupoB.Si con anti-A, B De las del grupoO.
No aglutinaciónCon anti-A o Anti-B de Ningún origen.
Técnica de Absorción yElucion
SISTEMA ABO. UCMC 2010
SUBGRUPOS BSUBGRUPOS B
Los estudios de diferenciaciLos estudios de diferenciacióón son similares a los n son similares a los empleados en el grupo A.empleados en el grupo A.
. B. B
. B. B33 : contiene sustancia B la saliva : contiene sustancia B la saliva
BBxx : aglutinaci : aglutinacióón dn déébil, saliva sustancia B que bil, saliva sustancia B que inhibe actividad anti-Binhibe actividad anti-B
B m B m Bh (OhB)Bh (OhB)
SISTEMA ABO. UCMC
Molecular basis associated with variant B Molecular basis associated with variant B transferasestransferases33
((ABO*B101 ABO*B101 taken as the reference allele sequence)taken as the reference allele sequence)Phenotype Nucleotide change Amino acid changePhenotype Nucleotide change Amino acid change
B3 1054CT Arg352TrpB3 1054CT Arg352Trp Bx 871GA Asp291AsnBx 871GA Asp291Asn Bel 641TG Met214ArgBel 641TG Met214Arg Bel 669GT Glu223AspBel 669GT Glu223Asp Bw 873CG Asp291GluBw 873CG Asp291Glu Bw 721CT Arg241TrpBw 721CT Arg241Trp Bw 548AG Asp183GlyBw 548AG Asp183Gly Bw 539GA Arg180HisBw 539GA Arg180His Bw 1036AG Lys346GluBw 1036AG Lys346Glu Bw 1055GA Arg352GlnBw 1055GA Arg352Gln Bw 863TG Met288ArgBw 863TG Met288Arg Silent mutations are not noted.Silent mutations are not noted. For more alleles and details, see For more alleles and details, see
http://www.bioc.aecom.yu.edu/bgmut/http://www.bioc.aecom.yu.edu/bgmut/ index.htm.index.htm.
# sitios Antigénicos x10# sitios Antigénicos x106 6 por G rojo por G rojo
A sitesA sites† 0.83 † 0.83 A1 adults 0.81–1.17 A1 adults 0.81–1.17 A1 adults 0.85 A1 adults 0.85 newborn 0.25–0.37 newborn 0.25–0.37 A2 adults 0.24–0.29 A2 adults 0.24–0.29 A2 adults 0.24 A2 adults 0.24 newborn 0.14 newborn 0.14 A1B adults 0.46–0.85 A1B adults 0.46–0.85 newborn 0.22 newborn 0.22 A2B adults 0.14 A2B adults 0.14 B sitesB sites††B adults 0.75 B adults 0.75 newborn 0.2–0.32 newborn 0.2–0.32 A1B adults 0.43 A1B adults 0.43 H sitesH sitesO adults 1.7 O adults 1.7 newborn 0.325 newborn 0.325 A, B, AB newborn 0.07A, B, AB newborn 0.07
COMPATIBILIDAD COMPATIBILIDAD TRANSFUSIONALTRANSFUSIONAL
ORDEN DE SELECCIÓN DE ORDEN DE SELECCIÓN DE GRUPO TRANSFUSIÓN DE G. GRUPO TRANSFUSIÓN DE G.
ROJOSROJOS
GRUPO GRUPO ABOABO
RECEPTORRECEPTOR
COMPONENTE DE GRUPO ABOCOMPONENTE DE GRUPO ABO1° 1° ElecciónElección
2 ° E lección2 ° E lección 3° Elección3° Elección 4° Elección4° Elección
ABAB ABAB AA BB OO
AA AA OO
BB BB OO
OO OO
ORDEN DE SELECCIÓN DE ORDEN DE SELECCIÓN DE GRUPO TRANSFUSIÓN DE GRUPO TRANSFUSIÓN DE
PLASMAPLASMA
(Los grupos sanguíneos en paréntesis representan (Los grupos sanguíneos en paréntesis representan elecciones con plasma incompatible en el orden de elecciones con plasma incompatible en el orden de “menos incompatible”)“menos incompatible”)
GRUPO GRUPO ABOABO
RECEPTORRECEPTOR
COMPONENTE DE GRUPO ABOCOMPONENTE DE GRUPO ABO1° 1° ElecciónElección
2 ° E lección2 ° E lección 3° Elección3° Elección 4° Elección4° Elección
ABAB ABAB (A)(A) (B)(B) (O)(O)
AA AA ABAB (B)(B) (0)(0)
BB BB ABAB (A)(A) (0)(0)
OO OO AA BB ABAB
COMPATIBILIDAD ABO ENCOMPATIBILIDAD ABO ENTRANS FUSIÓN DE PLAQUETASTRANS FUSIÓN DE PLAQUETAS La superficie de las plaquetas exhibe antígenos ABO:La superficie de las plaquetas exhibe antígenos ABO: Recuperación de Plaquetas A en un receptor O es meno, Recuperación de Plaquetas A en un receptor O es meno,
dado que aunque no reviste un significado clínico dado que aunque no reviste un significado clínico importante, la transfusión de plasma ABO incompatible importante, la transfusión de plasma ABO incompatible presente en los componentes plaquetarios también podría presente en los componentes plaquetarios también podría reducir el recuento plaquetario postransfusionalreducir el recuento plaquetario postransfusional
La hemólisis no es frecuente pero a menudo la PAD resulta La hemólisis no es frecuente pero a menudo la PAD resulta positiva , implicando más costos de investigación serológicapositiva , implicando más costos de investigación serológica
Estudios retrospectivos muestran que la sobrevida de los Estudios retrospectivos muestran que la sobrevida de los transplantes hermatopoyéticos, fue reducida en pacientes transplantes hermatopoyéticos, fue reducida en pacientes que recibieron transfusiones de plasma incompatiblesque recibieron transfusiones de plasma incompatibles
COMPATIBILIDAD ABO ENCOMPATIBILIDAD ABO ENTRANS FUSIÓN DE PLAQUETASTRANS FUSIÓN DE PLAQUETAS
ES PRUDENTE EMPLEAR PLAQUETAS ABO ES PRUDENTE EMPLEAR PLAQUETAS ABO COMPATIBLES, EN PACIENTES QUE REQUIEREN COMPATIBLES, EN PACIENTES QUE REQUIEREN DE MÚLTIPLES TRANSFUSIONES, SIN EMBARGO DE MÚLTIPLES TRANSFUSIONES, SIN EMBARGO LAS TRANSFUSIONES DE URGENCIA NO DEBEN LAS TRANSFUSIONES DE URGENCIA NO DEBEN POSTERGADAS POR NO TENER UNIDADES ABO POSTERGADAS POR NO TENER UNIDADES ABO COMPATIBLECOMPATIBLE
EN LACTANTES SE ACONSEJA EVITAR LA EN LACTANTES SE ACONSEJA EVITAR LA TRANSFUSIÓN DE PLASMA INCOMPATIBLE CON TRANSFUSIÓN DE PLASMA INCOMPATIBLE CON SUS GLÓBUOS ROJOS SI NO SE DISPONE SUS GLÓBUOS ROJOS SI NO SE DISPONE UNIDADES ABO COMPATIBLES SE PUEDE UTILIZAR UNIDADES ABO COMPATIBLES SE PUEDE UTILIZAR MÉTODO DE REDUCCIÓN DE PLASMAMÉTODO DE REDUCCIÓN DE PLASMA
COMPATIBILIDAD Rh EN PLAQUETASCOMPATIBILIDAD Rh EN PLAQUETAS
LOS ANTÍGENOS D NO SON DETECTABLES EN LOS ANTÍGENOS D NO SON DETECTABLES EN PLAQUETASPLAQUETAS
LA SOBREVIDADES DE PLAQUETAS “D” LA SOBREVIDADES DE PLAQUETAS “D” POSITIVAS EN RECEPTORES “D” NEGATIVAS ES POSITIVAS EN RECEPTORES “D” NEGATIVAS ES NORMALNORMAL
LAS PLAQUETAS CONTIENEN PEQUEÑAS LAS PLAQUETAS CONTIENEN PEQUEÑAS CANTIDADES DE G ROJOS Y LOS INDIVIDUOS Rh CANTIDADES DE G ROJOS Y LOS INDIVIDUOS Rh NEGATIVOS PODRÍAN ALOINMUNIZARCENEGATIVOS PODRÍAN ALOINMUNIZARCE
LA TRANSFUSIONES DE UNIDADES DE PLAQUETAS LA TRANSFUSIONES DE UNIDADES DE PLAQUETAS Rh POSITIVAS DEBEN EVITARSE EN MUJERES “ D” Rh POSITIVAS DEBEN EVITARSE EN MUJERES “ D” NEGATIVAS EN EDAD DE CONCEBIR Y CABE LA NEGATIVAS EN EDAD DE CONCEBIR Y CABE LA POSIBILDAD DE LA ADMINISTRACIÓN DE IG RhPOSIBILDAD DE LA ADMINISTRACIÓN DE IG Rh
