FISH en el diagnostico

diferencial de las lesiones

melanociticas

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Maria Garrido Hopital Universitario 12 de Octubre

- La mayoría de los melanomas se pueden distinguir fácilmente de los

nevus en el examen histopatológico.

- Sin embargo, hay muchos tipos de nevus melanocíticos que

histopatológicamente simulan melanomas y variantes de melanomas

que se asemejan a los nevus.

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Tumor Spitzoide atipico 3

Los nevus y los melanomas se diferencian en la presencia o ausencia de

aberraciones cromosómicas:

los melanomas muestran patrones recurrentes de aberraciones con pérdidas del

6q, 8p, 9p, and 10q y ganancias en 1q, 6p, 7, 8q, 17q, and 20q

los nevus no suelen tener alteraciones detectables por CGH, excepto un 20% de

nevus de Spitz con un incremento aislado del cromosoma 11p.

ANTECEDENTE: FISH PARA EL DIAGNÓSTICO DE LESIONES MELANOCÍTICAS

Esta observación ha permitido el desarrollo de técnicas basadas en FISH aplicables a tejido en

parafina para el DD entre nevus y melanomas.

Bastian BC et al. Am J Pathol 2003; 163: 1765-1770

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SELECCION DE SONDAS DE FISH

Las 14 bandas cromosómicas con mayor sensibilidad se seleccionaron para ser evaluados por

FISH. Siempre que sea posible las sondas se dirigen a los genes con relevancia en el cáncer.

Los cambios en los números de copias de ADN (CGH) fueron analizadas para determinar la

combinación de aberraciones cromosómicas que proporcionaba la más alta sensibilidad y

especificidad para distinguir entre nevus y melanoma.

Am J Surg Pathol 2009;33:1146-1156

Las combinaciones de sondas con los más altos valores de AUC fueron 3 sondas

dirigidas cromosoma 6 en el brazo corto (6p25), centrómero (CEP6), y el brazo largo

(6q23) en combinación con una sonda para el cromosoma 11q13.

6 Receiver Operator Characteristic (ROC) Curve

COMBINACION DE SONDAS DE FISH

Am J Surg Pathol 2009;33:1146-1156

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Criterios positivos: >29% núcleos con>2 señales 6p25 >38% núcleos con>2 señales 11q13 >55% núcleos con mas señales 6p25>CEP6 >40% núcleos con señales 6q23<CEP6

CRITERIOS POSITIVOS DE FISH

Sensibilidad 86.7% Especificidad 95.4%

Ejemplo de un caso positivo de FISH con el 1° conjunto de sondas:

6p25 en rojo (RREB), 6q23 en oro (MYB), 11q13 en verde (CCND1) y control de la sonda CEP6 en aqua.

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- ganancia de 11q13 (señal verde)

31.1% (criterio negativo).

- la ganancia de las señales para

6p25 (señal roja) 88.9% (criterio

positivo).

- Perdida relativa del 38% para 6q23

(oro) (criterio negativo)

Ejemplo de un caso positivo de FISH

con el 1

conjunto de sondas:

NEVUS GANGLIONAR VS MELANOMA METASTASICO

* No todos los melanocitos en los ganglios linfáticos indican metástasis incluso si se

encuentran en la cuenca de drenaje de un paciente con melanoma.

* El diagnóstico de la metástasis de melanoma es inequívoca en casos con:

-borramiento de la arquitectura de los ganglios

-Afectación masiva del parénquima

-células con pleomorfismo y con mitosis.

* Cuando la participación se limita a pequeños grupos de células, que no expresan

alteraciones citológicas marcadas, el diagnóstico se convierte en un reto.

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Caso 1, varon de 64 años de edad, con afectacion de ganglios linfáticos (A, B) procedente de un

melanoma primario de 1 mm de espesor (C, D). Aumento de número de copias de 11q13 (CCND1)

por FISH

Caso 30: Mujer de 69 años con un melanoma primario 0,9 mm en el dorso del pie

derecho (D) y ganglio linfático centinela femoral (C).

El FISH muestra alto número de copias de 11q13 (señales verdes) y 6p25 (señales

rojas).

NEOPLASIAS MELANOCITICAS CON MELANOCITOSIS PAGETOIDE

Melanocitosis Pagetoide también puede ser una característica en nevus de Spitz,

acrales, traumatizados, o después de la exposición al sol, además de en melanomas.

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Caso 21 carecía de consenso de los jueces

(A). Existe una irregular de melanocitos

grandes suprabasales.

B. Fue FISH +:aumento de copias (11q13).

C, Re-escisión mostró un melanoma in situ

ASSESSMENT OF COPY NUMBER STATUS OF CHROMOSOMES 6 AND 11 IN

PRIMARY MELANOMAS BY FISH PROVIDES INDEPENDENT PROGNOSTIC

INFORMATION

Jeffrey P. North, MD1,3, John T. Vetto, MD2, Kevin P. White, MD1, Clifton R. White

Jr., MD1, Boris C. Bastian, MD3.

FISH EN EL PRONOSTICO DEL MELANOMA

Los pacientes cuyo melanoma fue FISH+ tenían un riesgo significativamente mayor

de desarrollar metástasis (OR 4,11, p = 0,02) o morir de melanoma (OR 7,0, p =

0,04) en comparación con los FISH-

Disease Specific Survival p=0.02 Disease free survival, p=0.04 14

Estudiar los casos ambiguos de lesiones melanocíticas con la sonda de FISH comercial de melanoma

Diseñar una nueva combinación de sondas de FISH para intentar mejorar la sensibilidad del test

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COMBINACION DE SONDAS DE FISH

• El 1

panel de sondas FISH ha demostrado una sensibilidad del 75% -86% y

una especificidad del 94% -96%.

• La heterogeneidad en las aberraciones cromosómicas entre los diferentes

subtipos de melanomas es responsable de la mayor parte de los casos de falsos

negativos

• Estos resultados llevan al desarrollo de una nueva combinación de sondas que

detecta cuatro loci en cuatro cromosomas diferentes, 6p25 (RREB), 11q13

(CCND1), 9p21 (p16) y 8q24 (MYC) para mejorar el rendimiento de la 1

prueba

FISH.

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A B

C D

E F

Ejemplo de un caso positivo de FISH con el 2 conjunto de sondas:

Aumento del número de señales verdes (11q13) (81.7%) y azul (8q24) (38.3%) La sonda del cromosoma 9p21 (oro) muestra deleción homocigota en la mayoría de las células del melanoma (86.7%). Señales para 6p25 (señal roja) con ganancia en 16.7%

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Criterios:

% núcleos con>2 señales RREB >29%

% núcleos con>2 señales CCND1 >29%

% núcleos con>2 señales MYC >29%

% núcleos con<1 señales p16 >29%

219 casos analizados con la combinación 2:

Sensibilidad 83.5%

Especificidad 94,2%

244 analizados con la combinación 1 y/o 2:

Sensibilidad 90.2%

Especificidad 91,4%

CRITERIOS POSITIVOS DE FISH PARA EL 2˚ CONJUNTO DE SONDAS

La información de supervivencia fue

obtenida en 130 de los 133 pacientes con

melanoma, y la media de tiempo de

seguimiento fue de 52,2 meses.

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La información de recaída fue obtenida en

124 de los pacientes durante una media de

seguimiento de 27,3 meses.

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1. La técnica de FISH con el Kit comercial de Abbott para distinguir melanoma de

nevus tiene una sensibilidad del 86.7% y una especificidad del 95.4% y puede

resultar de gran ayuda en los casos ambiguos

2. El desarrollo de un segundo grupo de sondas diseñadas por nosotros en

combinación con el kit comercial ya existente en el mercado aumenta la

sensibilidad del 81.9% al 90.2%

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