“efecto antibacteriano del extracto hidroetanÓlico de
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
ESTOMATOLOGIA
TESIS
“EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO
HIDROETANÓLICO DE PROSOPIS PALLIDA
(ALGARROBO) SOBRE ENTEROCOCCUS
FAECALIS-PRUEBA PILOTO IN VITRO”
PARA OPTAR TÍTULO PROFESIONAL DE
CIRUJANO DENTISTA
Autores:
Bach. Arrascue Rivasplata Brayan
https://orcid.org/0000-0002-0570-7721
Bach. Torres Mestanza Irvin
https://orcid.org/0000-0002-9103-8498
Asesor:
Mg. C.D Juan Pablo Portocarrero Mondragon
https://orcid.org/0000-0001-5459-8034
Línea de Investigación:
CIENCIAS DE LA VIDA Y CUIDADO DE LA SALUD
HUMANA
Pimentel – Perú
2020
i
EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO
HIDROETANÓLICO DE PROSOPIS PALLIDA
(ALGARROBO) SOBRE ENTEROCOCCUS FAECALIS-
PRUEBA PILOTO IN VITRO
Aprobación del Jurado
APROBACIÓN DEL TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
Mg. C.D PORTOCARRERO MONDRAGÓN
JUAN PABLO
ASESOR METODOLÓGICO
Mg. C.D VALENZUELA RAMOS
MARISEL ROXANA
PRESIDENTE DE JURADO
Mg. C.D LA SERNA SOLARI
PAOLA BEATRIZ
SECRETARIO DE JURADO
Mg. C.D ESPINOZA PLAZA
JOSÉ JOSÉ
VOCAL DE JURADO
ii
Dedicatoria
Primero quisiera dedicarlo a Dios porque con el todo y sin el nada, porque gracias
a él yo eh podido llegar hasta esta instancia con salud y tranquilidad porque gracias a su
guía estoy cumpliendo mis objetivos y sobre todo porque ha estado conmigo en mis
buenos y peores momentos siendo un apoyo incondicional.
A mi madre Fabiola Rivasplata Suarez quien ha sido parte muy importante en mi
crecimiento y desarrollo profesional porque gracias a su guía yo soy quien soy, porque a
pesar de las adversidades ella siempre estuvo ahí brindándome so apoyo incondicional.
A mi hermana Rosy Zapata Rivasplata como no dedicarle a ella si ha sido gracias
a su apoyo que yo estoy logrando mis objetivos que sin ser su rol a sido muy importante
en mi vida.
A mis hermanas y familiares que aportaron cada uno un granito de arena para que
este sueño se haga realidad.
iii
Agradecimiento.
En estas líneas quiero agradecer profundamente y sinceramente a todas y cada
una las personas que estuvieron presentes en mis victorias, derrotas y que gracias a su
apoyo incondicional estoy culminando una etapa de las muchas en mi carrera profesional.
A mi asesor especialista CD. Dr. Juan Pablo Portocarrero Mondragon por ser una
ayuda presente y constante, por compartir conocimientos necesarios para la elaboración
de este trabajo y a Dios mediante.
iv
Resumen
El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto antibacteriano in vitro
del extracto Hidroetanólico del Prosopis Pallida cuyo nombre común es algarrobo frente
a Enterococcus faecalis. Método y diseño: La muestra la conformaron 9 observaciones,
las cueles se distribuyeron en 3 grupos de 3 placas Petri cada uno, en cada placa se colocó
el porcentaje de concentración de estudio, frente a dos controles: Gold estándar
(Clorhexidina al 0.12%), concentración de extracto (Etanol) y un control negativo. Diseño
y tipo: Esta investigación presenta un diseño Experimental, pues se caracteriza por la
valoración del efecto de una o más intervenciones, habitualmente de forma comparativa
con otra intervención, o un placebo; y el carácter prospectivo, de la recolección de los
datos y el seguimiento de los grupos en estudio puesto que se pretende determinar la causa
y efecto. Resultados: según los resultados obtenidos de acuerdo a la prueba estadística
utilizada de Pearson se comprueba de que la significancia de 0.88 lo que demanda una
respuesta positiva al efecto antibacterinao. Se concluye que la CMI de los extractos de
Prosopis Pallida, sobre Enterococcus faecalis, es la de 700 µg/m. mientras que la CMB
de los extractos de Prosopis pallida sobre Enterococcus faecalis, es de 700 µg/mL.
Palabras clave: Efecto Antibacteriano, extracto, Enterococcus faecalis.
v
Abstract
The objective of the present study was to determine the in vitro antibacterial effect
of the Hydrotanolic extract of Prosopis Pallida, whose common name is carob against
Enterococcus faecalis. Method and design: The sample was made up of 9 observations,
the necks were distributed in 3 groups of 3 Petri dishes each, the percentage of study
concentration was placed in each plate, compared to two controls: Gold standard
(Chlorhexidine 0.12%) , extract concentration (Ethanol) and a negative control. Design
and type: This research presents an Experimental design, since it is characterized by the
evaluation of the effect of one or more interventions, usually in a comparative way with
another intervention, or a placebo; and the prospective nature of data collection and
monitoring of the study groups since it is intended to determine the cause and effect.
Results: according to the results obtained according to the statistical test used by Pearson,
it is verified that the significance of 0.88 requires a positive response to the antibacterial
effect. It is concluded that the MIC of the extracts of Prosopis Pallida, on Enterococcus
faecalis, is that of 700 µg / m. while the WBC of the extracts of Prosopis pallida on
Enterococcus faecalis, is 700 µg / mL.
Keywords: Antibacterial Effect, extract, Enterococcus faecalis
vi
INDICE
Índice
Aprobación del Jurado ........................................................................................................i
Dedicatoria ......................................................................................................................... ii
Agradecimiento. ................................................................................................................ iii
Resumen ............................................................................................................................ iv
Abstract.............................................................................................................................. v
Índice ................................................................................................................................ vi
I. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................... 8
1.1. REALIDAD PROBLEMÁTICA ............................................................................. 8
1.2. ANTECEDENTES DE ESTUDIO ....................................................................... 9
1.3. TEORÍAS RELACIONADAS DEL TEMA ...................................................... 12
1.3.1. Efecto antibacteriano ................................................................................. 12
1.3.2. Caracterización fitoquímica ....................................................................... 12
1.3.3. Técnicas para obtener principios bioactivos de vegetales ............................ 13
1.3.4. Fracaso en el tratamiento de conductos, el rol del Enterococcus Faecalis. .. 14
1.3.5. Microbiología periodontal .......................................................................... 15
1.3.6. Enterococcus faecalis .................................................................................. 16
1.3.7. Prosopis pallida .......................................................................................... 18
1.3.8. Técnicas microbiológicas ............................................................................ 18
1.4. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ............................................................... 19
1.5. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL ESTUDIO .................................... 19
1.6. HIPÓTESIS ....................................................................................................... 20
1.7. OBJETIVOS ..................................................................................................... 20
1.7.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................. 20
1.7.2 OBJETIVO ESPECÍFICO ......................................................................... 20
II. MATERIAL Y MÉTODOS ...................................................................................... 21
II.1. TIPO Y DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN ........................................................ 21
II.2. POBLACIÓN Y MUESTRA ............................................................................. 21
II.2.1. POBLACIÓN ................................................................................................. 21
II.2.2. MUESTRA..................................................................................................... 21
II.3. VARIABLES, OPERACIONALIZACIÓN ........................................................ 22
II.4. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS, VALIDEZ
Y CONFIABILIDAD. ................................................................................................... 24
II.5. PROCEDIMIENTOS DE ANÁLISIS DE DATOS ............................................ 25
II.6. CRITERIOS ÉTICOS ....................................................................................... 25
vii
II.7. CRITERIOS DE RIGOR CIENTÍFICOS ......................................................... 26
III. RESULTADOS ..................................................................................................... 26
III.1. RESULTADOS EN TABLAS Y FIGURAS ................................................... 26
III.2. DISCUSIÓN DE RESULTADOS ................................................................... 28
IV. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ...................................................... 30
IV.1. CONCLUSIONES. ......................................................................................... 30
IV.2. RECOMENDACIONES ................................................................................ 30
REFERENCIAS ............................................................................................................... 30
ANEXOS .......................................................................................................................... 33
Anexo 01 ....................................................................................................................... 33
Anexo 02 ....................................................................................................................... 34
Anexo 03 ....................................................................................................................... 35
8
I. INTRODUCCIÓN
1.1. REALIDAD PROBLEMÁTICA
De manera creciente es que se establecen las bacterias a nivel oral desde el
nacimiento del ser humano. Un promedio de 700 especies de bacterias que se encuentran
en diferentes partes que conforman la cavidad bucal aquí tenemos al margen gingival
dental, mucosa bucal la saliva y el dorso de la lengua 1.
En la cámara pulpar encontramos un tejido pulpar el cual es estéril dicho tejido se
encuentra alejado del exterior para evitar que microorganismos invadan su interior, dicha
cámara pupar presenta un barrera que la conforman el esmalte y el cemento, para evitar
que dicha cámara se contamine con microbios, si esta barrera fuese vencida el complejo
pulpo dentinario quedara expuesto a la cavidad bucal lo que ocasionaría una entrada por
la cual la colonización de microorganismos será fácil, en su consecuencia se producirá
una inflación 2.
En tanto nuestra región así como el país y tambien mundial las enfermedades
presentes a nivel bucal tales como periodontitis y caries dental estas se consideran las con
más frecuencia. Dichas enfermedades son causadas por bacterias las cuales se organizan
y asientan en las diferentes estructuras dentales ya sea gingival o por debajo del margen.
Las enfermedades más comunes a nivel periodontal son gingivitis y la periodontitis dichas
enfermedades infecciosas podrían modificarse por unos que otros factores ya sean
ambientales y sistémicos. Si la periodontitis no se trata puede originar con el tiempo una
disminución del ligamento periodontal, hueso alveolar y posterior a ello el ligamento
epitelial realiza una migración, lo que ocasiona la aparición de bolsas periodontales,
dichas bolsas clínicamente son características de la periodontitis y dicha bolsa presenta
las características habituales para que bacterias periodontopatogenas se desarrollen. Hoy
se conoce que los agentes patógenos de la periodontitis son Aggregatibacter
actinomycetemcomitans y Enterococcus faecalis.3
Investigaciones realizadas tanto actuales como antiguas revelan las diferentes
complicaciones que ocasionarían las infecciones a nivel del tejido periodontal en ciertas
enfermedades de las cuales las más mencionadas son enfermedades relacionadas al
sistema cardiaco, infecciones respiratorias y también se incluye a la diabetes, estas
9
enfermedades afectan significativamente la salud general del individuo. Si lo que se
quiere es evitar afecciones a nivel oral como caries y demás un procedimiento eficiente
sería la realización de un destartraje que viene a ser la eliminación mecánica de una
lámina que se forma en las caras de los. Sin embargo, si se añada el uso de enjuagues
orales conocidos como colutorios estos contribuirían aminorar que se forme biofilm en
los dientes. Como otra medida a los padecimientos que sufren todas las personas a nivel
mundial an surgido nuevos métodos y se han reforzado algunos tratamientos donde se
usan las plantas que presentan unas propiedades curativas. En el auge de la actualidad por
buscar alternativas ha surgido la posibilidad de usar alternativas diferentes enfocadas en
productos naturales los cuales son enfocados para aliviar dolor y también tratar eliminar
aquellos males infecciosos que alteran la integridad de humanos, siendo razón para que
los investigadores centren sus estudios en medicina alterna. Podemos decir que queda
plasmado en los diferentes estudios que las plantas presentan efectividad antibiótica y
analgésica, y por ser natureles y dichos procedimientos no suelen tener reacciones
adversas, estos estudios son avalados por la Organización Mundial de la Salud (OMS)
pues ellos fomenta el uso de recursos naturales incluyendo ahí a las plantas y todas sus
partes 4.
Los nuevos procedimientos para actividades biológicas son validados con
inestigacones no solo de ahora sino desde hace tiempo, donde se pretende encontrar
propiedades que pueden servir a la humanidad; la ciencia hoy quiere brindar información
certera acerca de los principios activos los cuales se estudiaron y luego de pruebas se
demostró su acción.5
1.2. ANTECEDENTES DE ESTUDIO
Fiestas et al. 6 en el 2018. En Lima-Perú pretendieron evaluar el extracto
hidroalcoholico del Llantén. El fin de este estudio fue hallar propiedades antibacterianas
frente al Streptococcus pyogenes, toda la investigacion fue in vitro. Realizaron la
cromatografía dicho procedimiento fue necesario para poder utilizar el extracto
Hidroalcohólico. Se decidió usar la cepa de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. Para
analizar su efcto antibacteriano se usó el método de difusión en agar (Método de Kirby-
Bauer). Se usaron concentraciones de 50, 75 y 100 por ciento, llegando a la conclusión
los resultados más alentadores en cuanto a la medición de los halos de inhibición presento
la concentración de 100 por ciento en cada uno de los instantes en tiempo cotejado al
10
control positivo. Se demostró en las condiciones experimentales realizadas que tanto el
75% como el 100% del extracto Hidroalcohólico presentó propiedades antibacterianas
sumando a ello influyen en Estreptococos pyogenes.
Un estudio realizado por Cargua R 7 en el 2018. En Abato-Ecuador. Este trabajo
tuvo como fin realizar una estudio que demuestre si existe actividad anti fúngica in vitro
del extracto etanólico y aceite esencial del llantén todo el estudio se hizo frente a cepas
de Candida albicans utilizando difusión de disco en agar dicha técnica es la más usada en
este tipo de estudios. Para este estudio se usaron cuatro concentraciones del extracto 25%,
50%, 75% y 100%, para este estudio se usó un control positivo que fue alcohol absoluto
y ketoconazol como antifúngico. Al analizar las medidas de halos inhibitorios luego de
24 horas donde se tuvo incubada y preservada la muestra. Se demostró que los extractos
etanólicos de llanten son anti fúngicos frente a las cepas de Candida albicans, mientras
que muestras etanólicas al 25%, 50% y alcohol absoluto se evidencia que dichos
porcentajes carecen de actividad alguna. Entonces se dice que la actividad antifúngica
aumenta proporcionalmente a la concentración del extracto.
Por otro lado Alvarado F 8 en el 2017 en Piura, realizó el estudio similar pero con
otra planta natural y en bacterias, estudio el cual es experimental, esta investigación
determinará la actividad antibacteriana del extracto alcohólico del Algarrobo,
enfrentándolo a la cepas de la bacteria E. Faecalis, en este estudio usaron muestras que
van desde 10 hasta 100 µg/mL, también decidieron usar control positivo que fue
clorhexidina al 2% y negativo al 80%.
También usaron el método de microdilución en caldo para encontrar la propiedad
CMI (Concentración Mínima Inhibidora) como tambien CMB (Concentración Mínima
Bactericida). Al realizar este estudio se hizo en concentraciones menores de 10µg/mL
para ambos casos. Entonces concluye que el extracto alcohólico del Algarrobo frente a E.
faecalis, si tiene actividad antibacteriana en 80 y 90 µg/mL dichos resultados fueron
similares a la clorhexidina al 2% pues el halo de inhibición estuvo en el mismo rango en
ambas pruebas.
Consecuentemente Cárdenas 5 en el 2017.Lima-Perú en su investigación la cual
como objetivo pretende demostrar la actividad antioxidante y antimicrobiana de una
11
muestra etanólica de algarrobo. Los procedimientos fueron experimentales que valoró si
dicha muestra presenta características antimicrobianas y si también serían antioxidantes
de una muestra etanólica del algarrobo. Para este estudio se apoyaron en el método Folin–
Ciocalteu, también se apoyaron en la difusión en agar, para la CMI microdilución
colorimétrico dicho método se hizo en microplaca. De acuerdo a las pruebas se indicaron
que la muestra efectiva media fue de 456,75 µg/mL; 392,15 y 309,10 µg/mL. Entonces
concluye de que la muestra etanólica del algarrobo exactamente de las hojas evidenció
actividad antimicrobiana frente al S. aureus.
Estudio similar pero con otro tipo de planta natural fue realizado por Borja 9 en el
año 2017. En Quito-Ecuador. Este estudio se dio experimentalmente el cual tuvo como
fin demostrar el efecto inhibitorio de la muestra de manzanilla a través de un estudio in
vitro, la muestra de Plantago major y la mezcla de manzanilla y Plantago major frente la
cepa de Enterococcus faecalis. Fueron ocupados treinta (30) cultivos bacterianos,
poniendo dentro de las placas petri discos embebidos blancos estériles de todos los
extractos, se decidió la clorhexidina al 0,12% como control positivo y el agua destilada
como control negativo. Los resultados fueron alentadores ya que se evidencio efecto
positivo frente a los tres extractos de Enterococcus faecalis; entonces encontró una
elevada acción inhibitoria en el diametro de sus halos de inhibición, arrojando promedio
16,57 mm de la efectividad de la muestra de manzanilla y plátano, un 10,20 mm presento
la muestra de manzanilla y de plátano obtuvo 12,47 mm.
Leandro et al 10 en el 2016. En Trujillo-Perú realizaron un estudio experimental,
donde pretendieron investigar el potencial de la muestra hidroalcohólica de hojas de C.
trapezifolia, para ver si surgen algún efecto en aquellos agentes causantes de enfermedaes
a nivel bucal como caries, periodontitis apical, y también ver si existe alguna citotoxicidad
o mutagenicidad de C. trapezifolia para una aplicación posterior. Luego de las pruebas se
evidencio que sobre las bacterias evaluadas, la CIM y la CMB de CET presentaron
variaciones que van desde 100 y 400 μg ml. El ensayo que se hizo evidenció que existe
una alta propiedad bactericida contra Enterococcus faecalis (ATCC 29312) y
Peptostreptococcus micros luego de las 72 horas. La planta usada no permitió la
formación de biopelícula de Enterococcus faecalis y Peptostreptococcus micros en un
50% promedio. Entonces al usar de muestras estandarizados y seguras puede ser una
12
estrategia hoy en día muy importante la fabricación y desarrollo de nuevos productos que
complementen el cuidado bucal.
Sandoval et al 11 en el 2016. En Trujillo-Perú, realizaron una investigación que
tuvo como fin de realizar un estudio para evidenciar si hay o no una actividad
antibacteriano in vitro de alcaloides totales, dicho estudio se enfocó en las hojas del
algarrobo y se afrentaron a S. Aureus y E. Coli. En este estudio se hizo aglomeraciones
totales de 2.5, 5 y 10 µg/mL diluidos en dimetilsulfóxido y se usó un control de
cloranfenicol. Después de las pruebas realizadas en este estudio se concluye que las
muestras de 2.5, 5 y 10 µg/mL de las muestras extraídas de hojas secas del algarrobo,
demuestran una actividad antibacteriana in vitro en relación a S. Aureus. Y E. Coli.
1.3. TEORÍAS RELACIONADAS DEL TEMA
1.3.1. Efecto antibacteriano
Según diferentes estudios se considera al efecto antibacteriano a las propiedades
o cualidades encontradas en una sustancia para eliminar o en todo caso evitar la
propagación de microorganismos, hoy en día se sabe que el efecto antimicrobiano se
encuentra en algunos fármacos y otros compuestos químicos. Las sustancias con
propiedades antibacterianas actúan de diferentes formas en microorganismos tenemos:
actuar en la membrana celular para que permita el paso del agente al interior, En la pared
celular para evitar que el microorganismo crezca, también a nivel del ADN de dicho
microorganismo para debilitar la estructura y a nivel de ribosomas lo que se quiere hacer
es que el microorganismo no pueda realizar la función que lo mantiene con vida que es la
sintonización de proteínas. 8
1.3.2. Caracterización fitoquímica
Viene a ser un proceso donde se dan métodos detectores para encontrar los grupos
químicos que forman vegetales o que lo conforman, este proceso se caracteriza por
extraer solventes y dichos se usaran para posterior aplicación en pruebas cuantitativas
estas mismas ayudaran a diferenciar la existencia de flavonoides, alcaloides, saponinas,
taninos, y más. Se ejecuta en varios métodos: elección de la parte vegetal, caracterización
botánica de las muestras analizadas, separación, también se realiza del elemento vegetal
características y descripciones de propiedades. Este último proceso se ejecuta cuando se
tienen las condiciones controladas, con el fin de impedir crisis químicas de ciertos
13
elementos.12 Caracterización fitoquímica cualitativa Esta clase viene a ser un proceso
que tiene el fin de encontrar aquellos diversos metabolismos considerados secundarios
encontrados en las plantas, si nos referimos al aspecto cualitativo este toma la extracción
por medio de solventes orgánicos los cuales tienen diferentes polaridades y pueden ser
aplicadas pruebas de coloraciones. Por otro lado tenemos pruebas cualitativas estas
pueden realizarse con el fin de diferenciar los elementos de metabolismos secundarios en
verduras mediante evidencias como: evidencia de ebullición que hecho de saponinas,
alergia de ciertos flavonoides usando substancia de Shinoda, la hipersensibilidad de
taninos con confitura-cloruro de sodio, etc.13 Caracterización fitoquímica cuantitativa
Esta se usa con el fin de agrupación de metabolitos secundarios y
evaluar el rendimiento de procedimientos volumétricos y espectrofométricos.13
1.3.3. Técnicas para obtener principios bioactivos de vegetales
Maceración Es un proceso donde una sustancia que ha sido secada como también
molida se junta con agentes disolvente, dicho proceso se realiza en temperaturas
ambientales, se deja la unión de estas sustancias reposar en el transcurso de
un tiempo preciso (normalmente 3 a 10 días.) después de la duración requerida para la
maceración, el extracto es decantado y lo que queda del vegetal se pasa a eliminar. Es
recomendable llevar a cabo una segunda extracción. Las Moléculas bioactivas se
consideran comestibles y favorecen la funcionalidad corporal del sujeto o para
lograr bajar un peligro de patología. Estas moléculas se tienen la posibilidad
diferenciadora es decir se dividen en fenoles (carotenoides y limonoides están dentro),
los tioles (se encuentran en vegetales que son del género crucífero) y por último los
terpenos (que en su estructura presentan a flavonoides y subgrupos.
Se tiene como intención esencial el estudio y a su vez la sintetización de las
partículas consideradas buenas y bioactivas ya que se realiza un análisis y caracterización
de la actividad biológica de los nutrientes o en todo caso aquellos elementos alimenticios
que generen un cambio para bien en la salud de los individuos. Los elementos
considerados bioactivos tienen la posibilidad contener moléculas con principios activos
que se usan en fármacos y que dichas partículas activas son propias del elemento o en
todo caso sintetizado o libre por medio del organismo.14 Metabolitos secundarios, estos
metabolitos se producen en las plantas, y pasan a formar la barrera que protege a la planta
de alguna invasión a su interior ya sea por microorganismo, insectos y herbívoros. Estos
14
metabolitos secundarios confieren y dan características biológicas a las plantas un
característica de estos metabolitos es que mientras más expuesta a perjuicios haya sido
esxpuesta la planta mayor será la producción de estos. Tenemos a los terpenos,
flavonoides, alcaloides, ácidos polifenolicos. 15 Metabolismos primarios, vienen a ser
aquellos que se generan normalmente y son fundamentales ya que ayudan a la obtención
de energía participan en la morfogénesis y por último en la reproducción por ello son
considerados muy importantes para la vida.
En terapéutica no se utilizan tanto. Con excepciones cada vez más recurrentes.
Como por ejemplo en procesos que intervienen en la degradación de hidratos de carbono,
período de Krebs y glicólisis, estos procesos liberan energía que es utilizada por los
organismos. 16
1.3.4. Fracaso en el tratamiento de conductos, el rol del Enterococcus Faecalis.
Si hablamos del género Enterococcus este es del tipo cocáceas, considerado Gram
positivas, esta bacteria es anaerobia facultativa; en la cavidad oral se encuentran de
manera normal sin causar alguna infección, también se ubica en tracto genital femenino
y gastrointestinal humano. Además, se sabe que hoy son asociadas al fracaso del
tratamiento endodóntico y también suelen estar presentes en afecciones sistémicas, ya sea
a nivel del tracto urinario, es muy común encontrarlas en infecciones de heridas
quirúrgicas y endocarditis bacteriana. Luego de varios estudios se ha determinado que
estas bacterias presentan resistencia de alto nivel a los agentes antimicrobianos y tienen
varios factores virulentos tales como sustancias de agregación, proteínas superficiales,
gelatinasa, estan presentes en la formación de superóxido extracelular, polisacáridos
capsulares y es determinante cuando se habla de resistencia antibiótica.
Si hablamos de potenciales patógenos humanos lo Enterococcus son reconocidos
como tal, ya que son la causa del 12% de infecciones a nivel hospitalario. De todas las
especies de Enterococcus, la más frecuentemente viene a ser Enterococcus faecalis. Hoy
se sabe que a nivel de canales radiculares donde el tratamiento de endodoncia ha fallado
la presencia frecuente de Enterococcus faecalis es porque es es considerado un patógeno
oportunista ya que su persistencia en los canales radiculares viene a ser una complicación
terapéutica significativa. Ya instalada la bacteria en el sistema de canales, esta tiene que
atravesar varios desafíos para que esta pueda persistir, un desafío es que tiene que
15
soportar la acción de los agentes antimicrobianos que se usan en el procedimiento
endodóntico otro desafío es que tendrá que resistir a la falta de nutrientes que los canales
limpios presentan o en toda caso estén ya obturados. Entonces las posibles causas que
llevan a encontrar dicha bacteria en dientes que requieren retratamiento, tenemos dos
opciones: la primera es que el Enterococcus faecalis tiene habilidad para agruparse y
crecer consecuentemente pasa a infectar los túbulos dentinarios, haciendo que su
extirpación mecánica y química sea difícil por el poco acceso que tenemos a los túbulos,
añadiendo que el diámetro no permite ingresar con facilidad a estas estructuras
anatómicas, junto con la propiedad que tienen las bacterias de juntarse al colágeno
haciendo aún más difícil su eliminación. También tenemos que una posible causa es una
resistencia al hidróxido de calcio, esta medicación es la que se usa con mayor frecuencia
en el interior del sistema de conductos radiculares cuando se realiza el procedimiento
endodóntico, lo que permitiría estar en estado quiescente a estos microorganismos.
La capacidad que tiene el Enterococcus faecalis de mantenerse quiescente se
atribuye a que resiste el elevado pH que presenta el hidróxido de calcio medicamento que
se usa en la medicación intraconduco dicho medicamento sue estar en los conductos por
al menos 7 días. La resistencia que estos microorganismos presentan puede estar
influenciada por los efectos de taponamiento que la dentina presenta, ya que el aumento
de pH no se puede lograr dentro de los túbulos dentinarios, ya que en su interior esta
bacteria puede habitar. Por otro lado la investigación que se hace acerca de la resistencia
de Enterococcus faecalis al hidróxido de calcio, señala que a nivel genético esta bacteria
presenta genes ya diseñados para resistir, también el funcionamiento de una bomba de
protones, todo ello son características que la hacen resistente a este fenómeno. 17
1.3.5. Microbiología periodontal
A nivel de la infección que se da por bacterias que son consideradas dañinas para
el periodonto ya sea a nivel de tejidos de custodia y sustento de la pieza dental lo que
origina que con el tiempo se observen signos clínicos tanto hinchazón tisular como
también anomalías de la salud normal periodontales. Hoy en día sabemos que el ente
etiológico causal de la mayor parte de las periodontitis y gingivitis viene a ser la placa
bacteriana más conocida como biopelícula también tenemos mecanismos que
fueron extensamente estudiados para determinar lo que ocasionan a estos tejidos. De esta
16
forma, la elaboración proteolíticas de enzimas, que las hacen las bacterias que se
encuentran en la placa puede producir complicaciones directamente al tejido ya que el
sistema inmune aun no se activa y por ende no va a frenar la infección, por ello es la más
responsable del riguroso inconveniente que se puede ver en esta clase de anomalías de la
salud. Más allá de los enormes cambios que se hacen todo el tiempo para abarcar su
etiopatogenia, se sabe que la principal causa de perdida dental sigue siendo
patología periodontal ; más allá de la cantidad considerable de
estudios completados sobre esto, todavía quedan varios puntos por conocer con respecto
al rol que bacterias y los cambios en la respuesta inmune, los cuales nos permitirían
conocer las principales causas de dicha afeccion.17 En el siglo XX, con el avance de
técnicas particulares que permiten identificar bacterias brindaron cambios grandes a la
ciencia moderna. Al principio se detalló el rol que cumplen a nivel de dieta, posterior a
ello se realizaron investigaciones con respecto a microflora específica y actualmente se
está enfocando en los causantes de virulencia y la relación que pudiesen tener con
aquellos fenómenos inmunológicos características principales de la patología. A nivel
oral se logró aislar 400 especies caracterizadas. Dichas especies se consideran patógenas
halladas en el sitio dichas tienen la posibilidad de encontrarse con menor número en
lugares donde el periodonto se encuentra sano clinicamente. Un sin número de
microorganismos prácticamente imposibles de aislar y posterior a ello realizar un cultivo
en el laboratorio. Se han realizado estudios epidemiológicos con respecto a bacterias
encontradas en diferentes estadios de la patología periodontal difieren entre ellos
mismos.17
1.3.6. Enterococcus faecalis
Estuvieron reconocidos como aparentes patógenos en seres humanos, actualmente
empezó a originar enfermedades sustanciales de procedencia nosocomial. Estas bacterias
tienen la facultad de alcanzar los diversos factores la cual les da solides contra los
antibióticos, poder para diseminarse y subsistir en hospitales, dificultando a gran escala
los tratamientos. Inicialmente la cepa clínica fue designada como: Micrococcus
zymogenes, posteriormente se la llamo Streptoccus faecalis subespecie Zymogenes, en la
actualidad es acreditado como Enterococcus faecalis. Esta cepa tiene la facultad de
ocasionar enfermedad grabe en conejos y roedores como el ratón, manifestando su
potencial letal en ambientes idóneos. Un Enterococcus es una bacteria gram positiva
17
equipada por cocos asociados en parejas o cadenas cortas. No siempre suelen ser a-
hemolíticos o mostrar hemólisis al desarrollarse en agar sangre. De acuerdo con la
clasificación de Lancefield, corresponden al grupo D. Se tiene que ser muy cauteloso para
distinguir las dos especies más comunes, porque cada una muestra diferente reacción al
antibiótico, todo esto para detectar el tratamiento eficaz para la especie en específico,
causante de la enfermedad a la persona.
Según las muestras clínicas presentan apariencia diplocócicas, con cadena corta o
larga, asimismo se podría dar el caso de localizar células solas. Inicialmente se le catalogo
estreptococos porque dos géneros tienen microorganismos que presentan características
morfológicas y fenotípicas, debajo de las cuales la reacción negativa más habitual es la
catalasa. Los Enterococcus se unieron como genero diferente a los estreptococos, pues
después de estudios hibridadores de DNA posterior a realizar la secuencia del RNA, se
manifestó las discrepancias de los dos grupos de bacterias. Contrario a la mayor fracción
estreptococos, la proliferación de enterococos en ambientes de alto temple (46°) y la
elevada acumulación de cloruro de sodio, la esculina es hidrolizada en representación de
sales biliares a (40%). Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium estas especies en
específico son las más comunes y responsables de infecciones, también se encuentran
especies como Enterococcus avium, Enterococcus durans, Enterococcus gallinarum y
Enterococcus casseliflavus causantes de enfermedades como ITU, endocarditis,
meningitis, etc.
Según la patogenia, la infección en un paciente podría originarse de su misma
flora, o por contagio del entorno hospitalario. La forma más común de contagio en
pacientes es al entrar en contacto con las manos del personal sanitario. Cualquier tipo de
intervención quirúrgica o instrumentalización ocasiona vulnerabilidad en las barreras
mucosas fisiológicas, asimismo la utilización de antibióticos con quinolonas o con
cefalosporina ocasionan inestabilidad ecológica, mostrando un papel patógeno.
Comprobándose la existencia molecular bacteriana de toxicidad sistémica, de inhibición
del crecimiento de otras especies, de adherencia y de perjuicio tisular que acredita las
distintas manifestaciones clínicas y la patogenicidad.
Dichos microorganismos se adhieren a la célula de los tejidos intestinales del ser
humano mediante la adhesina de superficie y secretan enzimas con actividad hemolítica
y proteolítica. Las bacterias no están aptas de eludir la exterminación por intermedio de
las células fagociticas.18
18
1.3.7. Prosopis pallida
Nombre común: Algarrobo
Nombre Botánico: Garroba, Huaranca, huaranci, tacco, thacco
Distribución y ecología Se distribuye a nivel mundial. En países sudamericanos
esencialmente en Colombia, ecuador, Perú. Árbol silvestre, hoy en día esta planta se
desarrolla en países como Brasil, Bolivia, África, Sudáfrica, Puerto Rico, Pakistán,
Australia, india, Hawái. Esta especie destaca en tierras peruanas, de consumo
fundamental en la gastronomía de dicho país. Dentro de las características vegetativas del
prosopis pallida (algarrobo), muestra tallo áspero y grueso. Se desarrolla en terrenos
infértiles con carencia de humedad. Planta que no es resistente a los cambios repentinos
de temple, frente a vigorosas corrientes de aire su estructura suele ser quebradiza.19
Morfología La altura máxima registrada de un algarrobo es de 8 a 20 metros. EL tallo
puede llegar a medir 80cm y 2 metros ancho, irregular, muchas veces tiene espinas,
presenta una coloración entre negro y grisáceo, interiormente es de color rojo y blanco,
con aroma a barniz. En esta especie es normal que presente una copa que tiene forma de
sombrilla que logra medir 15 m de diámetro. Sus hojas son de pequeño tamaño y poseen
de 6 a 8 folículos ovales, de coloración parduzca por atrás y por delatante color verde. Su
flor presenta corola con pétalos individuales, cáliz acampanado y de color amarillento,
las longitudes de sus frutos son de 10 a 30 cm, 1 a 1.5 y 5 a 9 mm de grosor y ancho
respectivamente. Son de forma ovoide y aplanadas con una coloración, presentan de 20 a
30 por fruto. Sus dos raíces muy bien marcadas hacen que la planta tenga los nutrientes
que el árbol requiere. 19 Aspectos medicinales Nuestros antepasados utilizaban el
algarrobo de muchas formas debido al metabolitos primarios (carbohidratos y proteínas)
y secundarios (de utilidad en la preparación de bebidas energéticas, complejos de
vitamina B). Mediante el procesamiento del fruto del algarrobo se obtiene la algarrobina,
de apariencia viscosa, es de uso medicinal porque ayuda a la formación de calcio en los
huesos, regula el sistema digestivo, sistema nervioso, ayuda a mantener el nivel de
hemoglobina ideal, contribuye con la regeneración de cabello y atenúa molestias en la
etapa menopausia. 20
1.3.8. Técnicas microbiológicas
Método de difusión de discos considerado específico, Este es el que afirma la
entereza o la reducción de organismos microscópicos mediante la inserción de fármacos
infiltrados en los discos. Quiere decir que se coloca en dicha placa de agar antes cultivado
19
con el organismo a prueba, cada disco de papel filtro usado tiene que contener los líquidos
que harán frente a dicho organismo de prueba. Al ingresar el disco al recipiente de
contenido agar se formará una gradiente de concentración. Al concluir las 18 a 24 horas
de incubación los discos presentaran o no la formación de un halo de coloración clara que
indica el déficit de crecimiento bacteriano. Este método es fácil de practicar y económico.
21
1.3.8.1. Concentración mínima inhibidora (CMI)
Impide que las bacterias crezcan en situaciones normales luego de 1 día de
incubación a 37°C. Para la obtención del éxito se ejecuta a través del método de dilución.
Todo esto en concentración menor de la sustancia antibacteriana (μg/mL). 22
1.3.8.2.) Concentración mínima bactericida (CMB)
Precisa la exterminación del 99,9% a más de sustancia microbiana estudiados
luego de 1 día de incubación a 37°C en concentración mínimas de contenido
antimicrobiano. 22
1.4. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Existe efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de prosopis pallida
(algarrobo) sobre Enterococcus faecalis?
1.5. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL ESTUDIO
Con el pasar del tiempo la medicina natural es empleada como tratamiento
alternativo antes de la utilización de un fármaco, la medicina natural no es aprovechada
en su totalidad por la odontología pese a que el Perú tiene una amplia variedad de flora
como la Prosopis pallida (Algarrobo). Asimismo, puesto que los microorganismos
muestran más fortaleza frente a los fármacos actualmente se debería escoger otro tipo
tratamientos. Enterococcus Faecalis hoy en día es una de las bacterias que ocasionan el
fiasco post endodontico. El causante fundamental de que los tratamientos endodonticos
fallen esto se debe a que no se ha eliminado completamente tejido pulpar o en todo caso
persistan microorganismos en los conductos radiculares. Las bacterias pueden subsistir
incluso luego de realizar procedimientos mecánicos o incluso pueden asentarse en los
conductos radiculares por medio de filtración que se da a nivel de la corona esto ocurre
en los dientes cuyas raíces han sido tratadas. Diferentes investigaciones revelan que en
los canales radiculares con tratamiento endodóntico la microbiota presente de raíces es
diferente a la que comúnmente encontramos en los dientes que no presentan tratamientos
20
de conductos. Si analizamos el tema de microorganismos, las investigaciones señalan
frecuentemente las bacterias más encontradas en tratamientos intervenidos en primera,
como también aquellos que presentan recidiva infecciosa, estarán limitados a una
variedad determinada de agentes microbianos, predominando especies cuya
características son Gram positivas anaerobias facultativas, uno de estos agentes es el E.
faecalis. Dicho microorganismo ha sido aislada en dos versiones en el interior del sistema
de canales radiculares y en lesiones periapicales. Esta bacteria se encontró también en
dientes infectados sin que estos hayan sido tratados previamente con algún tratamiento
de conductos, sin embargo donde con mayor frecuencia se presenta es en dientes con
recidiva infecciosa, es decir, aquellos dientes donde ocurrio un fracaso al realizar
procedimiento endodontico.
1.6. HIPÓTESIS
H1: Si existe un efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de prosopis
pallida (algarrobo) sobre Enterococcus faecalis
H0: No existe un efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de prosopis
pallida (algarrobo) sobre Enterococcus faecalis
1.7. OBJETIVOS
1.7.1. OBJETIVO GENERAL
Determinar el efecto antibacteriano in vitro del extracto Hidroetanólico del Prosopis
Pallida (algarrobo) frente a Enterococcus faecalis
1.7.2 OBJETIVO ESPECÍFICO
• Determinar la Concentración Mínima Inhibidora (CMI) de los extractos
hidroetanólicos de Prosopis Pallida (Algarrobo), sobre Enterococcus faecalis
ATCC 29312. A concentraciones de 700,800,900 µg/mL
• Determinar la Concentración Mínima Bactericida (CMB) de los extractos
hidroetanólicos de Prosopis pallida (Algarrobo) sobre Enterococcus faecalis
ATCC 29312. A concentraciones de 700,800,900 µg/Ml
21
II. MATERIAL Y MÉTODOS
II.1. TIPO Y DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
II.1.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN
Con respecto al tema que se abarcó, esta investigación es de tipo cuantitativa
porque para la obtención de resultados se necesita el uso de herramientas informáticas,
estadísticas y matemáticas. Ya que con el propósito de encontrar las posibles relaciones
estadísticas de dos variables y determinar matemáticamente su relación.24
II.1.2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
Y en cuanto a la función del tiempo esta investigación se considera transversal ya
que tiene como fin analizar las variables en un tiempo determinado es decir en un solo
momento.24
Conforme con la preparación de planificación de la recolección de los datos es de
tipo prospectivo ya que los datos y resultados obtenidos se van recogiendo conforme van
sucediendo. 24
II.2. POBLACIÓN Y MUESTRA
II.2.1. POBLACIÓN
Corteza de la planta Prosopis pallida (Algarrobo)
Cultivos puros de cepas: Enterococcus faecalis ATCC 29312.
II.2.2. MUESTRA
28 placas Petri con cultivo de Enterococcus faecalis.
Extracto etanólico de plantas Prosopis pallida (Algarrobo)
Suspensión microbiana de Enterococcus faecalis.
Para hallar la cantidad de replicados usamos una fórmula estadística que se aplica
cuando se realizan investigaciones experimentales donde se pretende determinar la
cantidad minima de observaciones, duplicados y repeticiones.
22
6,9089 =0,90 − 0,902 ∗ 0,842 + 1,4 ∗ 1,962
0.902
Dónde:
n = Número mínimo de muestras.
Zα = Valor correspondiente al nivel de confianza
Zβ = Valor correspondiente al poder estadístico
W = Rendimiento mínimo esperado
Reemplazando la ecuación se obtuvo que el número mínimo de replicados a realizar es
10.
II.3. VARIABLES, OPERACIONALIZACIÓN
23
VARIABLES DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
DIMENSIÓ
N
INDICADORES Tipo de
Variable Escala de
Medición
Dependiente:
Efecto
antimicrobiano in
vitro sobre
Enterococcus
faecalis
Incapacidad de la
Enterococcus
faecalis para
desarrollar medios
de cultivo frente a
sustancias
antimicrobiana
Crecimiento o
inhibición de la
Enterococcus
faecalis en medios
de cultivo
Crecimiento
Bacteriano
Halo de inhibición en
mm.
CMI (< 18 mm.)
CMB (≥ 18mm.)
Cuantitativa Razón
Independiente:
Extractos
hidroetanólicos
de Prosopis
pallida
Conjunto de
principios
bioactivos
obtenidos de
Prosopis pallida
Producto obtenido
por maceración
etanólico de
Prosopis pallida
Concentracio
nes de
extractos en
µg/mL
700,800,900 µg/mL Cuantitativa Razón
24
II.4. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS,
VALIDEZ Y CONFIABILIDAD.
II.4.1. RECOLECCIÓN DE LA CORTEZA DE PROSOPIS PALLIDA
Se envió una solicitud al laboratorio Santa Beatriz (anexo 01) para utilizar las
instalaciones y realizar la prueba piloto de dicho estudio, también se recolectó un pedazo
de corteza de la planta medicinal algarrobo a utilizar en esta investigación dicha corteza
se mantuvo a temperatura ambiente y fuera de algún agente contaminante.
II.4.2. TÉCNICAS (ANEXO 02)
II.4.2.1. OBTENCIÓN DEL EXTRACTOS HIDROETANÓLICO DE LA
PLANTA MEDICINAL A UTILIZAR
El componente principal fue un pedazo de corteza la cual fue conservada a
temperatura ambiente. Para la extracción del extracto vegetal se utilizó la siguiente
metodología. Para el lavado y desinfectado de la corteza del algarrobo a evaluar fue
lavada y para eliminar cualquier agente microbiano pasmos a ponerle alcohol de 70º
posterior a ello se prosiguió a ponerlo en estufa a 35 °C con el fin de secar la muestra
esto se realizó por 48 horas, con el fin de quitar toda la humedad. Luego del
procedimiento anterior seleccionamos 900 g. de corteza la cual depositamos en frasco de
vidrio, luego de ello añadimos una mezcla hidroalcohólica la cual consiste en 80 partes
de etanol/20agua esta sustancia es con alcohol absoluto, esperamos aproximadamente una
semana para que se dé el proceso de maceración, mientras ocurre este proceso agitamos
dicha mezcla. Una vez ocurrido el proceso pasmos a filtrar tres veces la muestra, al inicio
se realizó con papel filtro Whatman N°41, luego de la primera filtración, la segunda fue
con papel filtro Whatman N° 2 y para finalizar el proceso de filtración se hizo con papel
Whatman N° 1. Luego del proceso filtrador obtuvimos 600 ml de extracto purificado este
no presenta algún germen. Dicha mezcla se colocó en un Rota vapor para separar el
solvente, luego del vegetal se obtiene una masa deshidratada que pesamos y protegimos
de la luz.
II.4.2.2. REACTIVACIÓN DE LAS CEPAS ATCC
En Mueller Hinton (Merck) 24 horas antes de la experimentación las cepas
adquiridas comercialmente en estado liofilizado fueron reactivadas. Haciendo el mismo
método para todas las cepas.
II.4.3. VALIDACIÓN Y CONFIABILIDAD DE LOS INSTRUMENTOS
25
Se utilizó una ficha de recolección de datos la cual fue validada por el experto
(anexo 03).
Según metodologías estandarizadas internacionalmente seguimos los protocolos
seguidas por dichas entidades. También aplicamos protocolos estandarizados por el
CLSI (Clinical and Laboratory Standard Institute) para sus pruebas piloto y sus ensayos
experimentales.
II.4.4. MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR
Se midió los halos de inhibición bacteriana de los discos con la concentración de
extracto en la planta evaluada. Luego de las pruebas y los datos obtenidos se prosiguió a
identificar como diámetro de halo inhibitorio en mm. Todos los datos obtenidos se
colocaron en la tabla de recolección.
II.5. PROCEDIMIENTOS DE ANÁLISIS DE DATOS
Este estudio fue cuantitativo transversal. Entonces para llevar a cabo todo el
análisis estadístico, utilizamos pruebas paramétricas, lo cual debimos cumplir 3
requisitos. Comenzamos con tener variable cuantitativa, segundo tener el supuesto de
normalidad (muestra homogénea) y por ultimo cumplir el supuesto de homocedasticidad
(que las varianzas sean homogéneas). Al cumplir con la variable numérica; pasmos a
analizar los resultados con la prueba de Pearson para determinar la relación de las
variables estudiadas.
Los datos obtenidos fueron llevados al software estadístico SPSS versión 21.
Donde analizamos las concentraciones para evaluar si existen diferencias entre ellas,
utilizamos Pearson para estudiar el efecto antibacteriano si este está relacionado con las
distintas concentraciones del extracto hidroetanolico del algarrobo, calculándose el
coeficiente de correlación como índice de tamaño de efecto.
II.6. CRITERIOS ÉTICOS
Este proyecto se rigió respetando el código de ética para la investigación en la
Universidad Señor de Sipán (USS) específicamente respetando el Artículo 24º. La
investigación clínica, observacional, colaborativa o extrainstitucional se regirán según la
normativa del Instituto Nacional de Salud y el Reglamento de Ensayos Clínicos en el
Perú.23
26
Esta investigación tendrá en cuanta los principios éticos y bioética tomando como
principio fundamental el respeto a la vida de la persona en la absoluta integridad personal,
incluyendo todas las facultades y competencias individuales, también se tendrá en cuanta
la declaración de Helsinki de La Asociación Médica Mundial Principios éticos para las
investigaciones médicas.25
II.7. CRITERIOS DE RIGOR CIENTÍFICOS
Valor de verdad: Los datos obtenidos en esta investigación presentan un
isomorfismo con respecto a la realidad y datos obtenidos.
Aplicabilidad: La investigación es viable y puede realizarse.
Replicabilidad: Al ser una investigación basada y sustentada en otras
investigaciones parecidas, se da fe de que puede existir la posibilidad que se pueda repetir
la investigación
Integridad: Porque los procedimientos para la práctica de la investigación son los
correctos y que connote justicia, coherencia y transparencia.
III. RESULTADOS
III.1. RESULTADOS EN TABLAS Y FIGURAS
III.1.1. TABLAS
Tabla 01. El efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólicos de prosopis pallida
frente a Enterococcus faecalis. Análisis de coeficiente de Pearson
Correlaciones
Concentración Prosopis pallida
Concentración
Correlación de Pearson 1 ,991
Sig. (bilateral) ,088
N 3 3
Prosopis pallida
Correlación de Pearson ,991 1
Sig. (bilateral) ,088
N 3 3
27
Según la tabla 1, y de acuerdo a la prueba estadística utilizada de Pearson que
consiste en una prueba que mide la relación estadística entre dos variables continúas. Si
la asociación entre los elementos no es lineal, entonces el coeficiente no se encuentra
representado adecuadamente de acuerdo a ello se ve la significancia de 0.88 lo que
demanda una respuesta positiva al efecto antibacteriano que se pretende dar a conocer a
la bacteria.
Tabla 02: Resultados de la CMI de los extractos hidroetanólico de Prosopis pallida,
sobre Enterococcus faecalis ATCC 29312.
Extracto CMI
(μg/mL)
Halo de inhibición
mm
Clorexidina 2% halo de
inhibición
Hidroetanólico del Prosopis pallida 700 ug/mL 14.7 mm 16 mm
Hidroetanólico del Prosopis pallida 800 ug/mL 17.8 mm 16 mm
Hidroetanólico del Prosopis pallida 900 ug/mL 22.02 mm 16 mm
Para la obtención de los resultados utilizamos la prueba estadística de Kruskal-
Wallis porque los datos son más de 2 grupos, de los resultados que se muestran en la tabla
2 la CMI del extracto hidroetanólico de Prosopis pallida arroja lo siguiente que en la
concentración de 700µg/mL mostró un halo de inhibición 14.7 mm, en el de 800 ug/ml
17.8 mm y en el de 900 ug/ml un halo de 22.02 mm siendo esta concentración aún mayor
que la del control positivo que es la Clorexidina 2% la cual mostro un halo de inhibición
de 16 mm.
Tabla 03: Resultados de la CMB de los extractos hidroetanólico de Prosopis pallida,
sobre Enterococcus faecalis ATCC 29312.
Extracto CMB
(μg/mL)
Halo de inhibición
mm
Clorexidina 2% halo de
inhibición
hidroetanólico del Prosopis pallida 700 ug/mL 18.25 mm 18 mm
hidroetanólico del Prosopis pallida 800 ug/mL 18.31 mm 18 mm
hidroetanólico del Prosopis pallida 900 ug/mL 19.05 mm 18 mm
Para la obtención de los resultados utilizamos la prueba estadística de Kruskal-
Wallis porque los datos son más de 2 grupos, de los resultados que se muestran en la tabla
3 la CMB en el extracto hidroetanólico de Prosopis pallida se obtiene en la concentración
28
de 700µg/mL mostrando un halo de 18.25 mm, en el de 800 ug/ml 18.31 mm y en el de
900 ug/ml un halo de 19.05 mm siendo esta última concentración aun mayor que la del
control positivo que es la Clorexidina 2% la cual mostro un halo de inhibición de 18 mm.
III.2. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Posterior a la ejecución del trabajo de investigación y al análisis de nuestros
resultados teniendo en cuanta a las tablas proseguimos a discutir dichos resultados con
los diferentes autores.
Tenemos a Fiestas y demás autores que pretendieron determinar de
Streptococcus pyogenes su efecto antibacteriano en los cultivos, este estudio fue in vitro
al igual que el de nosotros pero con diferente bacteria y planta medicinal, en nuestro
estudio determinamos que si existe un efecto antibacteriano de la planta utilizada lo que
se corrobora con este estudio pues también encontraron resultados positivos, es decir las
plantas medicinales usadas desde tiempos remotos presentan propiedades que los
antepasados utilizaban y hoy se corroboran con diferentes estudios como el nuestro y el
de Fiestas et al.
Por otro lado un estudio realizado por Cargua R. En el 2018 en Abato-Ecuador
evaluaron si existe una pripiedad antifungica del extracto etanólico y aceite esencial de
Plantago major frente al Candida albicans mediante difusión de disco en agar. Lo cual es
muy diferente a nuestro estudio el cual evaluó la actividad antibacteriana pero utilizo
también la técnica de difusión en disco de agar la cual presento resultados positivos al
igual que el estudio antifungico, entonces el método de laboratorio utilizados en ambos
estudios fueron los correctos más allá de que uno determine la actividad antifungica y el
nuestro la actividad antibacteriana. En nuestro estudio los halos de inhibición presentaron
resultados a las 24 horas pero luego de 3 días al igual que este estudio la bacteria volvió
a colonizar.
Al igual que Alvarado F en el 2017 en Piura Perú, realizó el estudio similar el cual
es experimental, este estudio uso muestras concentradas del extracto de 100 µg/mL hasta
1000 µg/mL, diferente al nuestro ya que solo usamos concentraciones de 700, 800,900
µg/mL. De las cuales presentaron similar resultado al estudio de Alvarado ya que el
evidencio resultados positivos a partir de 800 µg/mL en cambio nuestro estudio presento
resultados positivos en la concentración de 700, 800 y 900 µg/mL. Aunque los halos de
29
inhibición fueron menos en la concentración mínima al igual que el realizado por
Alvarado, aun así se considera un efecto antibacteriano.
En nuestro estudio solo evaluamos el efecto antibacteriano del extracto
Hidroetanolico del algarrobo mientras que Cárdenas en lima con su investigación
pretendió evaluar no solo el efecto antibacteriano sino también el antioxidante con
respecto al efecto antibacteriano frente al Staphylococcus aureus, dicho estudio no
coincide con nuestro estudio al ser una bacteria diferente pero en cuanto al efecto
antibacteriano Cárdenas al igual que nosotros determina que si hay un efecto
antibacteriano de la planta del algarrobo con las mismas concentraciones.
Un estudio por Borja sobre la cepa de Enterococcus faecalis. La cual también fue
la que utilizamos en este estudio pero la diferencia es que nosotros utilizamos el extracto
hidroetanolico del algarrobo mientras que Borja lo hizo con una muestra de manzanilla,
Plantago major y la mezcla de manzanilla y Plantago, para ambos estudios los resultados
fueron positivos ya que si se evidencio propiedad inhibitoria en la medida de halos de
inhibitorios, mientras mayor sea la concentración, la medida de los halos aumentaba esto
ocurrió en ambos estudios aunque fueron diferentes plantas pero si la misma bacteria.
A través de nuestro estudio evidenciamos que una estrategia para desarrollar
nuevos productos para el cuidado bucal serian aquellos estractos que evidencien
propiedades beneficiosas para el organismo, con acción antibacteriana, al igual que un
estudio realizado por Leandro et al. En el cual pretendieron evidenciar las propiedades de
la muestra hidroalcohólico de hojas de C. trapezifolia, para que puedan ser usados frente
a agentes que causantes de caries dental, periodontitis apical, al igual que nuestro estudio
ellos evidenciaron una actividad antibacteriana frente al Enterococcus faecalis, lo que
demuestra que dicha bacteria es susceptible a ciertas plantas medicinales las cuelas son
inofensivas puesto que en ciertas partes del Perú con consumidas es por ello que podrían
elaborarse productos de cuidado bucal a base de estas plantas medicinales.
En nuestro estudio pretendimos evidenciar el efecto antibacteriano del extracto
hidroetanolocio de la corteza del algarrobo al igual que Sandoval et al, pero en su caso el
uso las hojas del algarrobo. En ambos estudios se determinó que si existe un efecto
antibacteriano tanto para la Enterococcus faecalis que es la bacteria que usamos en
nuestro estudio a diferencia de Sandoval que uso Staphylococcus aureus y Escherichia
coli y para su estudio. Se determinó entonces en ambos estudios la propiedad
30
antibacteriana de la planta del Algarrobo en diferentes concentraciones y a medida que
aumenta la concentración umenta su propiedad antibacteriana.
IV. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
IV.1. CONCLUSIONES.
• Si existe efecto antibacteriano in vitro del extracto Hidroetanólico del Prosopis
Pallida (algarrobo) frente a Enterococcus faecalis.
• Se determina que la Concentración Mínima Inhibidora (CMI) de los extractos
hidroetanólicos de Prosopis Pallida (Algarrobo), sobre Enterococcus faecalis, es
la de 700 µg/m.
• Se determinar que la Concentración Mínima Bactericida (CMB) de los extractos
hidroetanólicos de Prosopis pallida (Algarrobo) sobre Enterococcus faecalis, es
de 700 µg/mL.
IV.2. RECOMENDACIONES
• Se recomienda realizar un estudio con más concentraciones y realizar las
observaciones a una hora de poner los discos.
• Se recomienda enfrentar el extracto hidroetanolico a mas bacterias relacionadas
a la cavidad bucal.
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de estudio más frecuentemente utilizados en investigación clínica. Revista
Médica Clínica Las Condes. 2019; 30(1):36-49.
25. DECLARACION DE HELSINKI DE LA ASOCIACION MEDICA MUNDIAL
Principios éticos para las investigaciones médicas en seres humanos (59ª
Asamblea General, Seúl, Corea, octubre 2008.
33
ANEXOS
Anexo 01
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Anexo 02
Imagen 01: molienda de las hojas
secas del algarrobo
Imagen 02: Se procederá a colocar
en un frasco de vidrio de color
ámbar 900 g. de las hojas molidas
Imagen 03: Filtración del
producto con papel filtro
Whatman
Imagen 04: Placas petri con halos
de inhibición
Imagen 04: medición de los resultados con
pie de rey electrónico
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Anexo 03