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Dr. Pablo LópezAsist. Dpto. Laboratorio de Patología Clínico
Área Biología MolecularAsist. Dpto. Genética.
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
““Prionopatías”Prionopatías”
• Enfermedades neurodegenerativas letales• Características biológicas únicas.
Incidencia: 0,5-1 caso por millón de habitantes y año
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Prion es una partícula proteica infecciosa que no contiene ácidos nucleicos.
Los priones son elementos que imparten y propagan variabilidad conformacional.
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Proteína que se replica a sí misma.
2 Conformaciones2 Conformaciones
PrPPrPCC NormalNormal
PrP PrP ScSc PatogénicaPatogénica
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
• Estructura en hoja beta ↓• Solubilidad ↑• Tendencia a agregar ↓• Sensibilidad a proteasas ↑
• Estructura en hoja beta ↑• Solubilidad↓• Tendencia a agregar ↑• Resistencia a proteasas ↑
PrPC n PrPSc
Síntesis
Degradación
PrPSc 4 PrPSc
Muy, muy lento Rápido
PrPC PrPSc
PrPSc
PrPSc
PrPSc
Hereditaria (12 a 14%)Hereditaria (12 a 14%)Adquirida (1-3 %)Adquirida (1-3 %)
EEB (ECJv)EEB (ECJv)
KuruKuru
IatrogénicaIatrogénica
Esporádica (85 %)Esporádica (85 %)????
Mutación Espontánea
Conversión espontánea de PrPc a PrPsc
????
ECJ típicoECJ típicoECJ atípicoECJ atípico
•E.C-J familiarE.C-J familiar•Gerstmann–Sträussler–Gerstmann–Sträussler–
Scheinker Scheinker •Insomnio Familiar FatalInsomnio Familiar Fatal
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
POSIBLE
PROBABLE
DEFINITIVO
I. Fase de Sospecha Clínica Demencia progresiva (< 2 años) 2 de 4 síntomas
Alt. visuales o Alt. visuales o cerebelosascerebelosas
Mutismo Mutismo aquinéticoaquinético
II. (A) Evaluación neurológica
EEG, RNM.
II. (B) Marcadores bioquímicos
Proteína 14-3-3 en LCR.
II. (C) Estudio genético
Mutaciones, polimorfismos.
MiocloniasMioclonias S. Piramidales S. Piramidales o Extra-o Extra-
piramidalespiramidales
III. Diagnóstico definitivoAnatomía patológica
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Diagnóstico de la Enfermedades Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCRNeurológicas por LCR
•Bajo desempeño diagnóstico Bajo desempeño diagnóstico de de PrPPrPscsc en LCR , sangre o suero. en LCR , sangre o suero.
• En LCR los En LCR los parámetros bioquímicosparámetros bioquímicos son son normalesnormales
• Presencia de Presencia de proteínasproteínas en LCR que actúan como marcadores en LCR que actúan como marcadores de de daño cerebral:daño cerebral: - - proteína 14-3-3proteína 14-3-3
- - activación de astrocitosis: S-100activación de astrocitosis: S-100- - muerte neuronal: NSE, muerte neuronal: NSE, - tau, proteina G- tau, proteina Go, o, , creatina kinasa específica de cerebro....., creatina kinasa específica de cerebro.....
n Sensitivity Specificity
14-3-3 1136 95% 93%N S E > 35 ng /ml 1276 81% 92%S 100 > 4.2 ng /ml 135 84% 91%Ta > u 1400 pg /ml 290 93% 91%PrP S c 34 20% 100%M R I 208 63% 92%E E G 805 66% 74%
In neurological/psychiatric conditions which are relevant in the differential diagnosis
Zerr I., Poser S. Clinical diagnosis and differential diagnosis of CJD and vCJD. With special emphasis on laboratory tests. APMIS 2002, 110: 88-98
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
No casos CJDCasos de CJD
• Recuento de Leucocitos • Glucosa• Proteínas• Dosificación de IgG• Sangre
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Falsos Falsos positivospositivos
1)1) Muestras en recipientes de bioseguridad.Muestras en recipientes de bioseguridad.
2)2) Condiciones mínimas de bioseguridad (N.2)Condiciones mínimas de bioseguridad (N.2)
3)3) Western-Blot de LCRWestern-Blot de LCR
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Controles Controles positivos positivos 14-3-314-3-3
30 kDa.
SensibilidadSensibilidad 87,6 % 87,6 %
EspecificidadEspecificidad 96,9 % 96,9 %
Valor predictivo positivo Valor predictivo positivo 91,2 %91,2 %
Valor predictivo negativo Valor predictivo negativo 95,6 % 95,6 %
ECJ posible
ECJ probable (criterios de OMS)
Calidad y Calidad y validez de la validez de la
proteína 14-3-3 proteína 14-3-3 en LCRen LCR
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Impact of the clinical context on the 14-3-3 test for the diagnosis of Impact of the clinical context on the 14-3-3 test for the diagnosis of sporadic CJDsporadic CJDNatividad Cuadrado-Corrales1, Adolfo Jiménez-Huete2, Carmen Albo1,Natividad Cuadrado-Corrales1, Adolfo Jiménez-Huete2, Carmen Albo1,
Rafael Hortigüela1, Luz Vega1, Laura Cerrato1, Maríajosé Sierra-Moros3,Rafael Hortigüela1, Luz Vega1, Laura Cerrato1, Maríajosé Sierra-Moros3,Alberto Rábano4, Jesús de Pedro-Cuesta5 and Miguel Calero*1Alberto Rábano4, Jesús de Pedro-Cuesta5 and Miguel Calero*1
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Desempeño del estudio de la proteína 14-3-3 Desempeño del estudio de la proteína 14-3-3 J Neurol (2009) 256:1620–1628
Diagnóstico de la Enfermedades Neurológicas por LCR
Desempeño del estudio de la proteína 14-3-3
J Neurol Neurosurg Psychiatry 2001;70:744–748
• El estudio bioquímico colabora en la orientación a diagnósticos alternativos.
• La detección de la p14-3-3 en LCR es una buena herramienta diagnóstica para el CJ esporádico , aplicada en un contexto clínico adecuado.
• El desempeño del estudio 14-3-3 es variable para los casos de origen genético.
• Para CJ de origen genético el estudio de las mutaciones del gen Prp es de elección.
• Baja sensibilidad en los CJ variantes.
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Dr. Pablo LópezDiagnóstico de la Enfermedades
Neurológicas por LCR