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Cromatografía de Líquidos
M. en C. Elba Rojas Escudero.
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Separación
◼ Para separar se emplean básicamente tres
alternativas:
◼ Separaciones mecánicas
◼ Procesos cinéticos y electrocinéticos
◼ Equilibrios de distribución entre dos fases
Elba Rojas E.
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Cromatografía
Sólido Líquido Sólido Líquido
Gas Líquido
CGS CGL CLS CLL
Elba Rojas E.
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Gas Líquido
Columna Plano
CLS CLL CFE CII CE
CPG CFG
CCF CP
Cromatografía
Elba Rojas E.
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Proceso Cromatográfico
◼ La fase móvil fluye, arrastrando consigo los
solutos
◼ Los solutos se reparten entre ambas fases
MuestraFase móvil Fase estacionaria
Elba Rojas E.
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Muestra
Elba Rojas E.
![Page 7: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/7.jpg)
Objetivos
SeparaciónMezcla de
compuestos
Cuantitativo
Purificación
Cualitativo
Elba Rojas E.
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Cromatografía
◼ Fase Normal
◼ FE → Polar
◼ FM → No polar
◼ Fase Inversa
◼ FE → No polar
◼ FM → Polar
Elba Rojas E.
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Elución
◼ La muestra se aplica al principio de la
columna como una banda fina
◼ El eluyente tiene menor afinidad por la fase
estacionaria que los solutos
◼ Los solutos avanzan por el sistema a
velocidades diferentes, menores a la de la
fase móvil
◼ Los solutos se separan en bandas que eluyen
al final de la columna
Elb
a R
oja
s E
.
![Page 10: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/10.jpg)
Requisitos de la muestra
◼ Presión de vapor baja
◼ Compuestos iónicos
◼ Compuestos de peso molecular elevado
◼ Termolábil
Elba Rojas E.
![Page 11: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/11.jpg)
Instrumentación
Fase móvilBomba de
alta presión
Inyector
Columna
Detector
Muestra
Control de
temperatura
Gradiente
de elución
Registrador
Elb
a R
oja
s E
.
![Page 12: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/12.jpg)
Fase móvil
Disolvente o
Hexano 0.00
Isoctano 0.01
Éter isopropílico 0.22
Cloruro de metileno 0.32
Acetonitrilo 0.50
Metanol 0.73
Elba Rojas E.
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Fase móvil
◼ Disolventes grado cromatográfico
◼ Agua de 18 m
◼ Baja viscosidad
◼ No volátil
◼ Miscibilidad
◼ Filtrada
◼ Sin oxígeno disuelto (degasificada)
◼ Solubilidad de los analitos
◼ Compatible con el detectorElba Rojas E.
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Cromatografía Fase Inversa
◼ F E
◼ Sílica químicamente modificada con
grupos no-polares: hidrocarburos
saturados: C2 dimetil, C4 tetrametil,
C8 octil, C18 octadecil
◼ F M
◼ Mezclas: acuosos / orgánicos
H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)
Elb
a R
oja
s E
.
![Page 15: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/15.jpg)
Fase estacionaria (columna)
◼ Empaque
◼ Sílica gel, C8, C18, Ciano, Amino,
Resinas, Polímeros
◼ Carga de Carbón 5-20 % w/w
◼ Intervalo de pH = f (FE)
◼ Límite de presión de trabajo
◼ Compatible con la fase móvil
Elba Rojas E.
![Page 16: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/16.jpg)
Cromatografía Fase Inversa
◼ Efecto solvofóbico fuerte:
◼ Parte apolar de la molécula del soluto es mayor
◼ % C en la FE es mayor
◼ Polaridad de la FM es alta (mayor % de H2O)
Elba Rojas E.
![Page 17: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/17.jpg)
Cromatografía Fase Inversa
◼ Ventajas
◼ Reproducibilidad en las separaciones
◼ Estabilidad de la FE (pH 7)
◼ Mezclas: acuosos/orgánicos
H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)
Elba Rojas E.
![Page 18: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/18.jpg)
Gradiente de Elución
Elba Rojas E.
![Page 19: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/19.jpg)
Problema general de la
elución
Elba Rojas E.
![Page 20: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/20.jpg)
Elución
Elba Rojas E.
![Page 21: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/21.jpg)
Instrumentación
Fase móvilBomba de
alta presión
Inyector
Columna
Detector
Muestra
Control de
temperatura
Gradiente
de elución
Registrador
Elb
a R
oja
s E
.
![Page 22: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/22.jpg)
Proceso Cromatográfico
◼ El lecho cromatográfico puede ser abierto
(placa) o cerrado (columna)
◼ La fase móvil fluye a lo largo del lecho
cromatográfico en contacto con la fase
estacionaria
Elb
a R
oja
s E
.
![Page 23: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/23.jpg)
Separación de los solutos
Elb
a R
oja
s E
.
![Page 24: Cromatografía de Líquidos - UNAMdepa.fquim.unam.mx/amyd//archivero/CL-Introduccion_36841.pdf · E. al final de la columna. Requisitos de la muestra Presión de vapor baja Compuestos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062416/6100e89a40029c29ea7f52ee/html5/thumbnails/24.jpg)
Ventajas
◼ Análisis de compuestos iónicos, de alto
peso molecular
◼ Diversidad de columnas y detectores
◼ Formación de derivados pre-columna y
post-columna
◼ Separaciones con control de pH
◼ Separaciones preparativas
Elba Rojas E.
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Limitantes
◼ Muestras “relativamente” limpias
◼ Solubilidad de la muestra en la fase móvil
◼ Viscosidad de la fase móvil
◼ Dimensiones de la columna
◼ Presión de trabajo
◼ Intervalo de pH
◼ Utilizar un filtro (pre-columna)
Elba Rojas E.
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Equipo para la
formación de derivados
FMFE
Inyector Reactor Detector
FMFE
Inyector Reactor Detector
Elb
a R
oja
s E
.