INSTITUTO POLITCNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICASBIOQUIMICA GENERALPRCTICA 5.1I.-CURVA TIPO DE AZCARES REDUCTORES GRUPO: 4QM1SECCIN DE LABORATORIO: 2 EQUIPO: 5

Introduccin Las curvas de calibracin son empleadas para medir la concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie de elementos de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un carcter medible (en ste caso, la absorbancia) y la variable a determinar (la concentracin). Para ello, se efectan disoluciones de muestras de contenido conocido y se produce una lectura y el establecimiento de una funcin matemtica, que en esta prctica no utilizaremos porque se estn minimizando errores, ya que se tiene muchas fuentes de error y con ste mtodo lo que se pretende observar es la linealidad de los puntos (tubos problema). Y para esto se considerar como un parmetro ptico-mtrico.Objetivo.Construir una curva de calibracin, mediante la cual se puedan medir las lecturas de absorbancia obtenidas en los experimentos de cintica enzimtica

Anlisis de resultados.Para la determinacin de la actividad de la enzima invertasa se utiliz un ensayo indirecto en el que los productos de reaccin se detectaron espectrofotomtricamente despus de que se convirtieron en derivados coloreados. La extensin de la hidrlisis enzimtica de sacarosa en glucosa ms fructosa se valor mediante el mtodo del cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS), el cual se basa en la reduccin del DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro azcar reductor al cido 3-amino-5-nitrosaliclico (de color rojo ladrillo) (Chaplin, 1986), se detect la presencia por lectura de la absorbancia en la zona de 540-570 nm (luz verde). Como se puede observar en las grficas 1, los resultados obtenidos no fueron los ideales pues debamos obtener una grfica lneal, pero se puede considerar que esta dentro de un intervalo aceptable de error. Probablemente el error pudo ser debido a varios factores, uno de ellos fue que tanto de parte del equipo como de la seccion, las pipetas que se utilizaron durante la prctica, algunas de ellas estaban sucias; tambin se pudo deber a la falta de precisin al medir los mL necesarios para cada tubo, o que la graduacin que tenan no era la indicada para medir los volumenes requeridos y al momento de sacar los tubos del bao no se interrumpi la reaccin con el bao de hielo al mismo tiempo. Se observa en ambas graficas donde se encuentra una mayor dispersin de los datos es entre la concentracin de 0.00004 y 0.0000.Con las curvas obtenidas se realizaron las grficas de tendencia lineal correspondientes que se ajustan a los datos, el R2 obtenido para la ecuacin de la recta fue de 0.9943 (Ver Grfica 1), teniendo en cuenta que el R2 es cercano a 1, los datos no tuvieron mucha dispersin y se puede considerar que tiene una mayor precisin y por lo tanto es conveniente utilizarla como la curva tipo de azucares reductores.

Conclusiones. La absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de azcar reductor. La curva de calibracin se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un carcter medible (laabsorbancia) y la variable a determinar (la concentracin). Al modificar alguno de los factores usados en la realizacin de esta prctica, obtuvimos un estndar para comparar como cambia la accin de la enzima sobre el analito. Una curva nos sirve de referencia para determinar el comportamiento de una muestra incgnita mediante interpolacin.

Referencias. Ting, S.V. 1956. Rapid Colorimetric Methods for Simultaneous Determination of Total Reducing Sugars and Fructose in Citrus Juices. Agric. Food Chem. Vol. 4(3) 263-266. Captulo 5: Anlisis de regresin. http://www.ugr.es/~bioestad/_private/cpfund5.pdf . Fecha de consulta: 28/Feb/2014. Extraccin y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadera .http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/31%20INVERTASA%20ENSAYO.pdf. Fecha de consulta: 28/Feb/2014. Azcares- Docencia UAM-Idocencia.izt.uam.mx/lyanez/analisis/practicas/azucares.rtf . Fecha de consulta: 28/Feb/2014.