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Conservacin de glucgeno en msculo con 3 fijadores

NDICE

PG.

I. Resumen...3

II. Introduccin.....4

II.I Marco terico....4

II.II Objetivo de la investigacin...11

II.III Problema..11

III. Desarrollo ......12

III.I Materiales.....12

III.II Metodologa............13

IV. Resultados......15

V. Anlisis e interpretacin de resultados..17

VI. Conclusiones......18

VII. Anexo...19

VIII. Bibliografa......20

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RESUMEN

El presente trabajo representa una investigacin que aborda el tema de deteccin de

enfermedades, partiendo de que el polisacrido glucgeno que, a pesar de ser una molcula

elemental para la vida de la clula, puede ser el indicio de algn problema metablico que

desencadenar en serias consecuencias para el individuo segn su diagnstico.

La tcnica histolgica, mtodo empleado para el estudio de tejidos, resulta muy til para la

deteccin de alguna anomala en los mismos, lo que representa una herramienta muy

importante para poder emitir un diagnstico. En nuestro caso, empleamos distintas

alternativas de uno de los pasos fundamentales de dicha tcnica; esto con el objetivo de hallar

la ms eficaz en la conservacin de glucgeno en los tejidos. Dicho paso, es el de fijacin,

proceso mediante el cual, una solucin penetrar en el tejido a estudiar para detener la

actividad enzimtica, as como para endurecerlo; stas propiedades que la solucin fijadora le

confiere resultan elementales para el resto del proceso e incluso para su observacin e

interpretacin.

Para lo anterior, en el Instituto Nacional de Neurologa y Neurociruga, se obtuvieron

muestras de tejido esqueltico de ratas Wistar, posteriormente se procesaron con 3 distintos

fijadores (Carnoy, Formol al 10% y Bouin) en 2 tcnicas diferentes (fresco y parafina). Tras su

anlisis se pudo observar una coloracin ms intensa en las muestras fijadas con la solucin

de Carnoy, lo que se entiende como una mejor conservacin de glucgeno en ellas. Tambin

se mostraron coloraciones ms definidas en la tcnica en fresco, lo que tambin sugiere una

menor dilucin de los polisacridos.

A partir de lo anterior se pudo llegar a la afirmacin de que el fijador ms eficaz para dicho

propsito result ser la solucin de Carnoy en ambas tcnicas; tambin pudimos comprobar

que la tcnica en fresco es la que mostr mejores resultados sobre la tcnica en parafina,

aunque reconociendo que los resultados de ambas son buenos y tiles para el diagnstico.

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INTRODUCCIN

Marco terico

Todo ser vivo est compuesto de miles de biomolculas que hacen posible su existencia,

sin embargo un desequilibrio en alguno de estos componentes sugiere un problema. Dentro

de estas, se encuentran los carbohidratos o hidratos de carbono. Los hidratos de carbono

(genricamente azcares) son las molculas orgnicas ms abundantes de la naturaleza; las

clulas de nuestros tejidos son capaces de sintetizar y metabolizarlos, utilizndolos para

almacenar energa. El termino carbohidrato hace referencia a que la mayora de los azucares

se ajustan a la estructura de Cn(H2O)n. Los carbohidratos se clasifican en:

Monosacridos o azcares simples: son carbohidratos que no pueden hidrolizarse a

compuestos ms simples. Pueden ser polihidroxialdehdos o aldosas (como la glucosa),

o polihidroxiacetonas o cetosas (como la fructosa).

Disacridos: son azcares hidrolizables en dos monosacridos. Es el caso de al

sacarosa, la lactosa o la celobiosa.

Polisacridos: Son carbohidratos que pueden ser hidrolizados en mltiples unidades de

monosacridos, es decir, son biopolmeros de monosacridos. Es el caso del almidn,

el glucgeno o la celulosa. Cuando se trata de menos de 20 unidades de

monosacridos se habla de oligosacridos (Martnez, 2008).

En estudios histolgicos se pueden considerar dos tipos de polisacridos los puros y los

unidos a otras substancias. Los polisacridos puros son los que son polmeros de un solo tipo

de monosacridos y el que est presente en las clulas animales es el glucgeno (Montero,

1997).

El glucgeno es el nico miembro natural de este grupo que permanece en los tejidos

animales tras la fijacin acuosa e inclusin en parafina. Existen diferentes tipos de glucgenos

debido a su grado de polimerizacin. Todos estn compuestos de cadenas de unidades de

alfa-gluco-piranosa (D-glucosa) y son fcilmente hidrolizados hasta glucosa hirvindolos con

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cidos diluidos. Se ha exagerado en la solubilidad del glucgeno en diversos fijadores, Baker

(1945) manifest que la fijacin formalnica preserva a las protenas de tal modo que el

glucgeno era retenido por ellas y no se disolva fcilmente por el agua. El cido pcrico tiene

un efecto similar. Vallance-Owen (1948) observ que la formalina es tan eficaz como el

alcohol absoluto para fijar el glucgeno y no encontr disminucin en la cantidad de esta

sustancia, manteniendo durante treinta y ocho das a los tejidos en el primer fijador y durante

12 horas despus en agua corriente. La insolubilidad del glucgeno fijado se debe,

probablemente, en parte a su precipitacin en forma de un complejo proteico (Pearse, 1960)

Reactivo de PAS

Actualmente, se conoce una tcnica o tincin para la demostracin de los polisacridos

en sus diferentes variantes y sta es la tcnica de reaccin de PAS (cido perydico y

reactivo de Schiff); la cual tiene como antecedente las observaciones de Malaprade en 1928,

donde utiliz por primera vez el cido perydico, para la determinacin qumica de glicoles y

en 1944 Mc Manus aplic la reaccin del cido perydico y el reactivo de Schiff a los estudios

histolgicos. El cido perydico oxida a los componentes que poseen grupos hidroxilo libres,

rompiendo algunos enlaces entre los C-C para formar dialdehidos y estos sitios reaccionan

con el reactivo de Schiff (Everson, 1960) el cual fue diseado por el cientfico del mismo

nombre del reactivo en 1866, para demostrar la presencia de grupos aldehdos en solucin y

la sensibilidad que es muy elevada. Entonces la oxidacin de la glucosa por el cido

perydico produce una intensa reaccin con el reactivo de Schiff, y lo mismo sucede con la

galactosa, manosa, fucosa y hexosamina. Una regla general de la intensidad de la reaccin

de Schiff nos indica que sta, es directamente proporcional al contenido de los azcares en el

tejido estudiado.

Las substancias que se pueden evidenciar con la reaccin de PASchiff son: polisacridos,

mucoprotenas, mucopolisacridos neutros, glucoprotenas, glucolpidos y algunas

substancias que no tienen carbohidratos pero que poseen grupos aldehdos. (Pearse, 1960).

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En estudios histolgicos e histoqumicos se ha observado que los polisacridos han

contribuido a la comprensin de la estructura de los tejidos, tanto sanos como enfermos; la

coloracin de los polisacridos con la tincin de PAS, es en la actualidad, un mtodo del panel

bsico de tcnicas para el diagnstico de los trastornos metablicos del msculo esqueltico

(Tsujino, 2000).

Enfermedades del metabolismo energtico muscular

Las enfermedades del metabolismo energtico muscular son un grupo de enfermedades

heterogneas desde el punto de vista gentico, clnico y bioqumico. Esquemticamente

desde el punto de vista bioqumico pueden ser agrupadas en tres categoras, as las podemos

subdividir en alteraciones del metabolismo del glucgeno, trastornos del metabolismo lipdico

y alteraciones de la funcin mitocondrial. (Navarro, 2008 y Servedei, 1989).

En condiciones normales la mayor parte de las clulas del organismo como las

musculares obtienen la energa en forma de ATP, a partir de la glucosa o la grasa

mayoritariamente.

En condiciones anaerbicas la glucosa es metabolizada en cido lctico, mientras que en

condiciones aerbicas tanto la glucosa como la grasa son catabolizadas hasta obtener bixido

de carbono y agua. El metabolismo aerbico, que tiene un mayor rendimiento, asegura la

provisin de energa durante el ejercicio de baja o moderada intensidad. El metabolismo

anaerbico provee energa durante el ejercicio intenso y de corta duracin, siendo en este

caso, el nico sustrato qumico utilizable la glucosa o su depsito en forma de glucgeno en

msculo (Prez, 2007).

En las miopatas metablicas del glucgeno, la falta de energa no es la causante de la

patologa, sino ms bien las molculas de combustible que no se han usado por el defecto

enzimtico causado por la falla en los genes que rigen la produccin en las enzimas que

degradan al glucgeno, provocando su acumulacin dentro de las clulas musculares. Esta

situacin puede deteriorar las clulas, conllevando a debilidad crnica y a la enfermedad.

(Prez, 2007).

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Tcnica histolgica

Se le denomina as al conjunto de procedimientos aplicados a un material biolgico

(animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones ptimas para

poder observar, examinar y analizar sus componentes morfolgicos a travs de los

microscopios fotnicos y electrnicos. (Montalvo Arenas, C., 2010).

Esta se divide en diez pasos: