Criterios macro y Criterios macro y

micromorfológicos básicos para micromorfológicos básicos para

la identificación la identificación

Mgster María de los Angeles SosaMgster María de los Angeles SosaMicrobiología GeneralMicrobiología General

UNNEUNNE

CultivoCultivoMedios de cultivo utilizados: Agar saboureaud glucosado (ASG)Agar papa glucosado (APG)Agar papa glucosado + cicloheximida (APG + Cicloheximida)Agar infusión cerebro corazón (ABHI)

Procedimientos:

Macrocultivo o colonia gigante: Cultivo en placa de PetriMicrocultivo o cultivos en láminaPico de flauta (En tubo de ensayo con tapón de algodón o a rosca) Examen Microscópico.Montajes directos : Azul de lactofenol cinta scotch

Siempre debo observar estructuras reproductivas!!!

Colonia Gigante o Macrocultivo

Cultivo en Lámina o Microcultivo

soporte

fragmento de micelio

portaobjeto

agar

MacromorfológicosMacromorfológicosCOLONIACOLONIA•Grado de Crecimiento: Grado de Crecimiento: rápido, moderado, rápido, moderado, lento.lento.•Textura:Textura: aterciopelada, algodonosa, granular, laxa. aterciopelada, algodonosa, granular, laxa.•Color: Color: Micelio – Conidios – AscocarposMicelio – Conidios – Ascocarpos•Topografía:Topografía: rugosa, verrucosa, crateriforme, rugosa, verrucosa, crateriforme, cerebriforme.cerebriforme.•Pigmentos: Pigmentos: Solubles – InsolublesSolubles – Insolubles•ExudadosExudados

ESTRUCTURAS SEXUALES Y ASEXUALESESTRUCTURAS SEXUALES Y ASEXUALES (lupa estereoscópica)(lupa estereoscópica)

COLONIA: Grado de CrecimientoCOLONIA: Grado de Crecimiento

COLONIA: Textura - ColorCOLONIA: Textura - ColorAterciopelada - BajaAterciopelada - Baja

Flocosa - AltaFlocosa - Alta

Laxa - AltaLaxa - Alta

AlgodonosaAlgodonosa

Rala o Rala o rizoidalrizoidal

Granulosa – Granulosa – Micelio vegetativo Micelio vegetativo

hialinohialino

Densa – Micelio Densa – Micelio Vegetativo oscuroVegetativo oscuro

Color de los Color de los Conidios – Conidios –

CleistoteciosCleistotecios

Pigmentos InsolublesPigmentos Insolubles

Pigmentos SolublesPigmentos Solubles

ExudadoExudado

Colonia RadiadaColonia Radiada

Colonia sulcadaColonia sulcada

Observaciónmicromorfológica

ObservaciónMinuciosa!!!!!

MicromorfológicosMicromorfológicos- Micelio vegetativo:-Tipo de Hifa ( sepatada o aseptada)

-Pigmentación (hialina o dematiacea)

- Micelio de reproducción:

- Disposición Disposición - SuperficieSuperficie- PigmentaciónPigmentación

-TamañoTamaño- MorfologíaMorfología- SuperficieSuperficie- PigmentaciónPigmentación- DisposiciónDisposición

Característica del conidióforoCaracterística del conidióforo

Característica de los conidiosCaracterística de los conidios

Característica del cuerpo de Característica del cuerpo de fructificaciónfructificación

Tipos de conidiosTipos de conidios

Grupos taxonómicos:Grupos taxonómicos:Zigomicetes Zigomicetes y y

HialohifomicetesHialohifomicetes

ZigomicetesZigomicetesHongos de micelio hialino no tabicado o cenocítico de Hongos de micelio hialino no tabicado o cenocítico de crecimiento rápido e invasivo.crecimiento rápido e invasivo.Hifas hialinas predominantemente anchas, de mas de 8 µm Hifas hialinas predominantemente anchas, de mas de 8 µm de diametro.de diametro.Tabiques transversales ausentes o muy escasos (cultivos Tabiques transversales ausentes o muy escasos (cultivos envejecidos)envejecidos)Reproducción sexual por Reproducción sexual por zigosporaszigosporas..Reproducción asexual por esporangiosporas producidos en Reproducción asexual por esporangiosporas producidos en esporangiosesporangiosAquí pueden hallarse hongos tan frecuentes como el moho Aquí pueden hallarse hongos tan frecuentes como el moho negro del pan.negro del pan.Géneros principales:Géneros principales:

RhizopusRhizopus LichtheimiaLichtheimia MucorMucor

Ciclo asexual de zigomicotaCiclo asexual de zigomicota

Ciclo sexual Zigomicota

Características generalesCaracterísticas generales

Hifas predominantemente anchas, de más de 8 µm de diámetro.

Tabiques transversales ausentes o muy escasos, que pueden aumentar su número con el envejecimiento del cultivo.

1 Esporangios uniesporados Cunninghamella 1’ Esporangios multiesporados 2 2 Esporangios cilíndricos (merosporangios), esporangiosporas

dispuestas siempre en una hilera Syncephalastrum

2’ Esporangios de otra forma 3 3 Esporangios en forma de botella o florero Saksenaea 3’ Esporangios globosos, esféricos o piriformes, esporangiosporas

irregularmente ordenadas, nunca en una sola hilera 4

4 Esporangios piriformes, columela con apófisis en forma de

embudo, esporangióforos conectados por estolones y rizoides que no nacen opuestos al esporangióforo.

Absidia

4’ Esporangios globosos 5 5 Esporangios sin columela Mortierella 5’ Esporangios con columela 6 6 Rizoides presentes 7 6’ Rizoides ausentes Mucor 7 Esporangios con columela con apófisis, esporangióforos

conectados por estolones, rizoides bien desarrollados que nacen en la base de los esporangióforos

Rhizopus

7’ Esporangios con columela sin apófisis, rizoides presentes o ausentes.

8

8 Termofílicos (crecen a 45 ºC), rizoides y estolones escasos o ausentes

Rhizomucor

8’ No Termofílicos (no crecen a 45 ºC), rizoides y estolones abundantes

Actinomucor

Esporangios multiesporados 2

Esporangios de otra forma 3

Esporangios globosos, esféricos o piriformes, esporangiosporas irregularmente ordenadas, nunca en una sola hilera

4

Esporangios piriformes, columela con apófisis en forma de embudo, esporangióforos conectados por estolones y rizoides que no nacen opuestos al esporangióforo.

Absidia

Claves dicotómicas

Macromorfología de la colonia Macromorfología de la colonia de un zigomicetode un zigomiceto

– Colonia de Colonia de crecimiento rápido, crecimiento rápido, invasiva.invasiva.

– Laxa, al principio es Laxa, al principio es blanca y al madurar blanca y al madurar es gris, verde oliva, es gris, verde oliva, amarilla a café. amarilla a café.

– La superficie se La superficie se cubre con manchas cubre con manchas oscuras cuando se oscuras cuando se desarrollan los desarrollan los esporangios. esporangios.

– El reverso es incoloro El reverso es incoloro o crema.o crema.

rizoides

estolones

Rhizopus

Esporangios-poras

Género Género RhizopusRhizopusMicromorfologíaMicromorfología– Rizoides amarillos o café claros que nacen Rizoides amarillos o café claros que nacen

desde los nodos.desde los nodos.– Esporangióforos café con columelas Esporangióforos café con columelas

hemisféricas, que se originan de nodos hemisféricas, que se originan de nodos adyacentes a los rizoides.adyacentes a los rizoides.

– Esporangios redondos, hialinos con base Esporangios redondos, hialinos con base aplanada. Se tornan oscuros cuando maduran aplanada. Se tornan oscuros cuando maduran las esporangiosporas. las esporangiosporas.

– Esporangiosporas hialinas o café claras, ovales Esporangiosporas hialinas o café claras, ovales a elipsoidesa elipsoides

RhizopusRhizopus

Género Género LichtheimiaLichtheimiaMicromorfologíaMicromorfología– Rizoides internodalesRizoides internodales– Columela cónica (similar a la base de un Columela cónica (similar a la base de un

embudo)embudo)– Apófisis con collarete.Apófisis con collarete.– Esporangios piriformes, frágiles y hialinosEsporangios piriformes, frágiles y hialinos– Esporangiosporas hialinas o amarillas Esporangiosporas hialinas o amarillas

verdosas, redondas u ovales, generalmente verdosas, redondas u ovales, generalmente de paredes lisas y una base plana. de paredes lisas y una base plana.

LichtheimiaLichtheimia

Género Género MucorMucorMicromorfologíaMicromorfología– Ausencia de rizoides.Ausencia de rizoides.– Esporangióforos ramificados hialinos o Esporangióforos ramificados hialinos o

pigmentados.pigmentados.– Esporangios globosos de tamaño variable. Frágil, Esporangios globosos de tamaño variable. Frágil,

cuando madura y se rompe, se observa la columela cuando madura y se rompe, se observa la columela con un collarete en la base. con un collarete en la base.

– Esporangiosporas amarillas o café, ovales o Esporangiosporas amarillas o café, ovales o elipsoides. elipsoides.

– Algunas especies se reproducen sexualmente in Algunas especies se reproducen sexualmente in vitro, produciendo zigosporas.vitro, produciendo zigosporas.

Mucor

Zigomicetes

Rhizopus Mucor

Lichtheimia

Infección oportunista aguda caracterizada por la inflamación,

trombosis e infarto vascular debida a la invasión de las paredes y la luz de los vasos sanguíneos por las hifas de

los zigomicetes o infección crónica del tejido subcutáneo.

ZIGOMICOSIS

EpidemiologíaPresentan distribución mundial.

Se los encuentra en el suelo, estiercol, forman parte de la flora ambiental.

Producen infecciones de las vías respiratorias altas (inhalación de esporas) Ej: Rinosinusitis

También producen infección muco cutánea crónica por inoculación traumática Ej: quemaduras

Afectan principalmente a individuos diabéticos e inmunocomprometidos. Ej: Zigomicosis Rinocerebral

Cuadro clínico

Acremonium

Fusarium

ScopulariopsisPenicillium

Scedosporium

Paecilomyces

Crecimiento inicial a 25-28ºCCrecimiento inicial a 25-28ºC

Crecimiento inicial a 25-28ºC

Hialino

Hialino, hifas delgadas

TabicadoCrecimiento

en cicloheximida

Dematiaceos Levaduras

Crec. muy rápido < 3 días

Hifas anchas y sin tabiques

ZIGOMICETOS

Crec. de 3-5 díasHifas hialinas

y tabicadasHIALOHIFOMICETES

HialohifomicetesHialohifomicetesHongos de micelio hialino y tabicado.Hongos de micelio hialino y tabicado.Hifas delgadas de 2 a 5 Hifas delgadas de 2 a 5 µm de diámetroµm de diámetroCrecimiento rápido (3 a 5 días)Crecimiento rápido (3 a 5 días)Colonias algodonosas, vellosas o granulares, de borde Colonias algodonosas, vellosas o granulares, de borde externo liso. Anverso de diversos colores y reverso gris externo liso. Anverso de diversos colores y reverso gris o beige.o beige.Reproducción asexual por esporulación (Reproducción asexual por esporulación (conidiosconidios))Pertenecen a la división Ascomiceto o Deuteromicota.Pertenecen a la división Ascomiceto o Deuteromicota. Reproducción sexual por fusión de una espora “macho” Reproducción sexual por fusión de una espora “macho” con una hifa receptiva “hembra”(o levadura). Las con una hifa receptiva “hembra”(o levadura). Las esporas sexuales (esporas sexuales (ascosporasascosporas) se desarrollan dentro de ) se desarrollan dentro de un saco llamado un saco llamado ascoasco. . Es el grupo con mayor número de especies. Es el grupo con mayor número de especies.

Esporas asexuales o conidiosEsporas asexuales o conidios

Conidiogénesis

Reproduccion asexual externa:*Conidios (toman el nombre de la estructura que les dio origen)

Subgrupos de hialohifomicetesSubgrupos de hialohifomicetes

1- Conidios producidos en cadenas:1- Conidios producidos en cadenas:

• Conidióforos que terminan en una vesícula dilatadaConidióforos que terminan en una vesícula dilatada: : AspergillusAspergillus

• Conidióforos ramificados en un penicilio o pincel: Conidióforos ramificados en un penicilio o pincel: PenicilliumPenicillium

2- Conidios producidos en racimos2- Conidios producidos en racimos:: FusariumFusarium..

Aspergillus

ASPERGILLUSASPERGILLUS

MacromorfologíaMacromorfología– Colonia algodonosas, vellosas, Colonia algodonosas, vellosas,

aterciopelada a granularaterciopelada a granular– Crecimiento rápido (3 a 5 días)Crecimiento rápido (3 a 5 días)– Color inicial blanco, luego verde, Color inicial blanco, luego verde,

amarillenta, gris, café o negra.amarillenta, gris, café o negra.– Reverso blanco, gris pálido o beige, Reverso blanco, gris pálido o beige,

o puede observarse pigmento o puede observarse pigmento amarillo o marfil.amarillo o marfil.

MicromorfologíaMicromorfología

– Hifas relativamente anchas, Hifas relativamente anchas, con ramificación dicotómica en con ramificación dicotómica en 45º. 45º.

– Conidióforos erectos, no Conidióforos erectos, no ramificados, de tamaño ramificados, de tamaño variable. variable.

– Presentan vesícula apical Presentan vesícula apical redondas, achatadas o redondas, achatadas o elipsoides.elipsoides.

– Fiálides nacen directamente de Fiálides nacen directamente de la vesícula (uni o biseriada).la vesícula (uni o biseriada).

– Conidios forman cadenas de Conidios forman cadenas de disposición columnar o radiada.disposición columnar o radiada.

Principales EspeciesPrincipales EspeciesColoniaColonia MicromorfologíaMicromorfología

A. fumigatus A. fumigatus Verde azuladaVerde azulada Vesículas subesférica, fiálidesVesículas subesférica, fiálidesa grisa gris uniseriada y conidios columnar.uniseriada y conidios columnar.

A. flavusA. flavus Amarillo Amarillo Vesículas pequeñas-achatadas y Vesículas pequeñas-achatadas y verdosoverdoso grandes-redondas, fiálides uni o grandes-redondas, fiálides uni o

biseriadas y conidios columnar biseriadas y conidios columnar y radiados.y radiados.

A. nigerA. niger NegraNegra Vesículas grandes y redondas, Vesículas grandes y redondas, fiálides biseriada, conidios fiálides biseriada, conidios

radiadosradiados

A terreusA terreus Canela a caféCanela a café Vesículas subesféricas, fiálides Vesículas subesféricas, fiálides biseriadas y conidios columnar.biseriadas y conidios columnar.

PenicilliumPenicillium

PENICILLIUMPENICILLIUMMacromorfologíaMacromorfología

Colonia de crecimiento Colonia de crecimiento rápido (3 a 5 días)rápido (3 a 5 días)A los 4 días, colonia vellosa, A los 4 días, colonia vellosa, aterciopelada a pulverulenta. aterciopelada a pulverulenta. Color generalmente Color generalmente verdeverde azulada con periferia blanca. azulada con periferia blanca. Algunos pueden ser amarillo, Algunos pueden ser amarillo, verde, café y rojo.verde, café y rojo.Algunos producen pigmentos Algunos producen pigmentos que difunde al medio.que difunde al medio.

PENICILLIUMPENICILLIUMMicromorfologíaMicromorfología

Hifas relativamente delgadas Hifas relativamente delgadas que dan origen a conidióforos que dan origen a conidióforos rectos y septados. Algunos rectos y septados. Algunos pueden ser únicos pueden ser únicos (monoverticilados) o estar (monoverticilados) o estar ramificados (bi o ramificados (bi o terverticilados)terverticilados)Típicamente tiene un penicilio Típicamente tiene un penicilio con métulas y fiálides que con métulas y fiálides que generan conidios.generan conidios.Conidios unicelulares en Conidios unicelulares en cadena. Tienen forma ovoide a cadena. Tienen forma ovoide a elipsoide, de paredes lisas o elipsoide, de paredes lisas o rugosas.rugosas.

FUSARIUMFUSARIUMMacromorfologíaMacromorfología– Crecimiento rápido. Crecimiento rápido. – Entre 3 a 6 días, Entre 3 a 6 días,

colonia inicial colonia inicial aterciopelada, luego aterciopelada, luego algodonosa. algodonosa.

– Gran variedad de Gran variedad de color; blanco, gris, color; blanco, gris, amarillo, café, amarillo, café, violeta, rosado.violeta, rosado.

– Presenta pigmento Presenta pigmento más oscuro hacia el más oscuro hacia el centro de la colonia.centro de la colonia.

FusariumFusariumMicromorfologíaMicromorfología

– Fiálides cortas que nacen Fiálides cortas que nacen directamente de la hifa directamente de la hifa

– Se producen conidios de Se producen conidios de distinto tamaño. Macroconidios distinto tamaño. Macroconidios son fusiformes, curvos con son fusiformes, curvos con extremo aguzados y presentan extremo aguzados y presentan 2 a 11 células.2 a 11 células.

– Microconidios son unicelulares, Microconidios son unicelulares, cilíndricos. Son únicos o en cilíndricos. Son únicos o en racimos (sustancia mucoide).racimos (sustancia mucoide).

FusariumFusarium

Macroconidias fusiformes falcadas (en forma de hoz) que surgen solitarias o agrupadas

HIALOHIFOMICOSISInfecciones oportunistas sistémicas cuyos agentes

etiológicos se presentan en los tejidos del hospedero en forma

de hifas hialinas septadas.

Fusarium Acremonium PaecilomycesPenicillium

Scopulariopsis Scedosporium

EpidemiologíaEpidemiologíaHongos ambientales, de distribución mundial.

Se observa una mayor concentración de esporos en ambientes húmedos, con gran cantidad de plantas, y en el suelo.

Cuando afectan a un individuo inmunocompetente dan lesiones localizadas, pero en inmunocomprometidos producen micosis invasoras, dando formas diseminadas de pronóstico grave.

Sitios comprometidos con mayor frecuencia

Piel

Tejido celular subcutáneo

Senos peranasales

Pulmón Infección de los senos paranasales

Infección pulmonar invasora

Infección de órganos y tejido cutáneo y subcutáneo

Fungemias

Celulitis, endocarditis, peritonitis y lesiones cerebrales

MUY HETEROGÉNEO

Cuadro clínico