cell cycle arrest and cell apoptosis

7/23/2019 Cell Cycle Arrest and Cell Apoptosis

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Arresto del ciclo celular y apoptosisinducida por extractos de Equisetumhyemale en clulas de leucemia

murina L1210Hongxia Li, Pan Wang, Quanhong Liu, Xiaoxia Cheng,

Yuetao Zhou, Yaping Xiao

Camila Imprenta.

Marina Gallardo.

Facundo Buschiao.

Guido In!ante Ferrari.

Martin "illiams.


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Terapiastradicionales parael cncer

Pronsticos Pobres

Efectossecundarios

Medicina Natural

Seguridad

Eficiencia

Efectos secundarios

mnimos

Lnea celular dela leucemiamurina L1210

Bajainmunogenicidad

Similar a lacondicin deleucemiahumana

Equisetum hyemale:Planta herbc


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Materiales Y Mtodos

Preparacin de extracto deE.hyemale.

a!ado" secado # molido de las partes de la superficie$

Extraccin asistida por microondas$

%iltracin$

&oncentracin al !aco" liofili'acin # almacenado$

(isolucin en PBS

&ulti!o celular$

nea celular )*)+ mantenida en (MEM$

Suplementada con suero de caballo # solucin de penicilina,

estreptomicina$

Se usaron clulas en fase logartmica para el experimento


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Aislamiento declulasmononuclearesnormales de sangre

peririca de rat!n"#$M%&'

En este experimento lasclulas aisladas deratones saludables seutili'aron como clulasnormales comparadas conlas )*)+$

Se aislaron mediante$--Lymphocyte#eparation $it-- de.ppl#gen /echnologiessiguiendo lasinstrucciones sugeridaspor la compa0a$

a !iabilidad de lasclulas fue e!aluadamediante el test deexclusin /ripan Blue"1ue dio como resultadomas del 234 de clulas!iables$

Ensayo de(ia)ilidad' El efecto del extracto

en la !iabilidad sedetermino mediante elensa#o de M//$

)++ul de suspensionesde clulas )*)+ secolocaron enmulti5ells de 26pocillos # se incubaroncon diferentesconcentraciones delextracto a diferentestiempos$ Se utili'o%axol como controlpositi!o$

Para la comparacin seutili'aron clulasPBM&$

&ada experimento fuereali'ado por triplicadopara asegurarresultados confiables$

Anlisis del %iclocelular' a proporcin de

clulas en 7+87) # en7*8M se determinomediante contenido de(9.$

as clulas se trataroncon !ariasconcentraciones delextracto por )*hs"luego se cosecharon "la!aron # se fijaronovenighta ,*+:&$

as clulas fijadas sela!aron con PBS" seincubaron con ;9.sa .# luego se las ti0o con#oduro de propidio$uego se anali'o porcitometria de flujo$

AnlisisEstadstico os datos se

expresaron des!iacin ede < experim

os anlisisestadsticosreali'aron manlisis de l!arian'a$

=n p,!alor >consideroestadsticamsignificante


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Tinci!n con *A#+' a tincin con (.P?

se utili'o paraobser!ar lamorfologa deln@cleo apoptotico$

as clulas )*)+ sesembraron en placas

de 6 Aells # setrataron conconcentracionescrecientes delextracto$

Se cosecharon lasclulas # se ti0eroncon ug8ml de (.P?por


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;esultadosE/aluaci!n de (ia)ilidad %elular' La densidad de las clulas inicial tiene una *ran in!luenciaso+re la )ia+ilidad de L1210. A medida ,ue aumenta la densidad- el e!ecto inhi+itorio de la dro*adisminuye.

(ariaciones de Tiempo de incu)aci!n' L1210 a una concentracin 1/10 !ue incu+ada con lasconcentraciones indicadas por tiempos )aria+les.


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Bajo las mismas condiciones anteriores " tras )*hs deincubacin se reali'aron comparaciones entre PBM& # )*)+

L1201 muestra mucha mas sensi+ilidad

,ue 'BMC. &uando la concentracin delextracto fue 0ug8ml" la !iabilidad dePBM& # de )*)+ fue de G"64 # de


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E/aluaci!n de Apoptosis' Exposicin de fosfatidilserina como marcadortemprano de apoptosis usando doble tincin con .nexina F,%?/&8P?" prueba contincin (.P?.


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E/aluaci!n de ,ragmentaci!n del *NA' .nlisis de las clulas da0adas contincin de P? # citometria de flujo$

E/aluaci!n del #otencial de mem)rana mitocondrial' El agotamientodel potencial de membrana mitocondrial es un marcador temprano deapoptosis$ .nlisis con rodamina )*


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Conclusiones

Fentajas$ Irigen 9atural$

?nno!ador" Econmico # de fcilIbtencin

&itotoxicidad nula en clulas

normales$ .mplio espectro de usos$

.rresto del ciclo celular$

(es!entajas$ (ensidades celulares iniciales altas inhiben el efecto de la droga$

(esconocimiento de los mecanismos de la droga$


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%la!onoides *,Phen#l,)",Ben'op#rone

Molculas importantes en la

coloracin de la planta$ Participan en la filtracin de

=F # en la fijacin denitrgeno simbitica

.ct@an como segundosmensajeros" reguladores

fisiolgicos e inhi+idores delciclo celular.

Estudios clnicos a!alan 1uela ingesta de dichasmolculas reducen el riesgode contraer carcicoma*astrico


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Muchas gracias$

&amila ?mprenta$

Marina 7allardo$

%acundo Buschia''o$

7uido ?nfante %errari$

Martin Ailliams$

J're*untasK

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