k19 OFICINA ESPANOLA DEPATENTES Y MARCAS

ESPANA

k11 Numero de publicacion: 2 155 839k51 Int. Cl.7: C07D 501/24

A61K 31/545

k12 TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3

k86 Numero de solicitud europea: 94118048.1k86 Fecha de presentacion : 15.11.1994k87 Numero de publicacion de la solicitud: 0 658 558k87 Fecha de publicacion de la solicitud: 21.06.1995

k54 Tıtulo: Separacion de isomeros de cefalosporina.

k30 Prioridad: 17.11.1993 AT 2330/9317.11.1993 AT 2329/93

k73 Titular/es:BIOCHEMIE GESELLSCHAFT M.B.H.6250 Kundi, AT

k45 Fecha de la publicacion de la mencion BOPI:01.06.2001

k72 Inventor/es: Ludescher, Johannes;Summer, Harald yWolf, Siegfried

k45 Fecha de la publicacion del folleto de patente:01.06.2001

k74 Agente: Davila Baz, Angel

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacion en el Boletın europeo de patentes,de la mencion de concesion de la patente europea, cualquier persona podra oponerse ante la OficinaEuropea de Patentes a la patente concedida. La oposicion debera formularse por escrito y estarmotivada; solo se considerara como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa deoposicion (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesion de Patentes Europeas).

Venta de fascıculos: Oficina Espanola de Patentes y Marcas. C/Panama, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION

Separacion de isomeros de cefalosporina.

La invencion se refiere a procedimientos para empobrecer la cantidad de isomero E (trans) en acido7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico Z/E (cis/trans) de formula

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Se sabe que la configuracion Z representa la caracterıstica que determina las propiedades ventajosasde los productos finales de cefalosporina en la gama Gram negativa. Por consiguiente, se desea un com-puesto activo con el menor contenido posible de isomero E para la eficacia optima.

Los procedimientos sinteticos para la produccion de estos antibioticos o productos intermedios de losmismos dan isomeros Z mezclados con isomeros E.

En el ejemplo 37 de EP 0 420 608 se describe la produccion de ester 4-metoxibencılico de acido 7-β-fenilacetamido-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico. De acuerdo con los datos de RMN de1H dados allı, se obtiene una mezcla de los isomeros Z/E. Durante la produccion del compuesto activodeseado se retiene la mezcla isomera.

De acuerdo con Journal of Antibiotics Vol. XLIII, N◦ 8, paginas 1047-1050, (1990), se obtiene ester4-metoxibencılico de acido 7-β-fenilacetamido-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico con unarelacion Z/E de 4,7/1. Se apunta que los isomeros en este estado son difıciles de separar. La separacionse lleva a cabo por lo tanto en una fase posterior, despues de retirar el grupo fenilacetilo, reacilar con lacadena lateral protegida de la sustancia activa y retirar los grupos protectores.

En Chem. Pharm. Bull. 39(9), 2433-2436, (1991) se describe la produccion del isomero Z puro deester 4-metoxibencılico de acido 7-β-fenilacetil-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico a par-tir de la mezcla isomera Z/E resultante separando parcialmente el isomero E mediante cristalizacion yefectuando posteriormente cromatografıa sobre gel de sılice con benceno y acetato de etilo. La mezclade disolventes usada para la cromatografıa y el material de la cromatografıa solo pueden regenerarse condificultad y el benceno es un disolvente que ya no debe usarse debido a su caracter carcinogeno.

De acuerdo con el ejemplo de referencia 1 de EP 0 236 231 el ester benzhidrılico analogo se ob-tiene en forma Z pura, pero tambien solo mediante el uso de benceno/acetato de etilo como el eluyenteen la etapa de cromatografıa. En el ejemplo de referencia 1 de EP 0 175 610, se describe de la mismamanera la separacion del isomero Z puro del ester benzhidrılico del acido 7-fenoxiacetamido-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico.

Un procedimiento adicional para la produccion de los compuestos de formula I, descrito en EP 597429, tiene lugar de acuerdo con el siguiente esquema de reaccion

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En este esquema de formulas, R es un grupo protector de sililo, X es -P+(R4)3I− o -P(O)(OR4)3 yX+ es -P+(R4)3 o -P(O)(OR4)2Y. R4 indica un grupo alquilo inferior o un grupo arilo e Y indica uncation de la serie alcalina o la forma protonada de una base organica. Se describen mezclas Z/E delos compuestos de formula .I con un contenido de E de aproximadamente 20 % y mas y su preparacion.Un procedimiento similar se describe en EP-A-0 503 453, pero en la reaccion de Wittig se usan basesorganicas fuertes en lugar de bases debiles como en EP-A-0 597 429.

De acuerdo con la invencion, en un aspecto se ha encontrado sorprendentemente que el isomero Z(cis) del acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico de formula

Ia

en la que los atomos de hidrogeno en el enlace C=C tienen configuracion cis, o una mezcla Z/E, porejemplo con un contenido alto de isomero Z, puede usarse como un compuesto intermedio central enla produccion de antibioticos de amplio espectro altamente eficaces, por ejemplo cefditoren pivoxil deformula

En otro aspecto, se ha encontrado sorprendentemente que las mezclas Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico desprotegido en la posicion 4 y 7, que tienen un cierto

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contenido de E, pueden convertirse en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılicoque tiene un contenido inferior de E a traves de una sal de amina.

En un aspecto la invencion proporciona por lo tanto metodos simples y eficaces para empobrecer lacantidad de acido 7-amino-3-[(E)2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en mezclas Z/E de acido7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico, por ejemplo de formula I, sometiendo una salde una mezcla Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico, por ejemplo unasal de una mezcla Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico con una aminade formula

NR1R2R3 III

en la que

R1, R2 y R3 son iguales o diferentes e independientemente uno de otro indican hidrogeno, alquilode 1 a 8 atomos de carbono; bencilo no sustituido o bencilo sustituido por grupos que son inertesbajo las condiciones de reaccion; o

cicloalquilo de 4 a 8 atomos de carbono; o

R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno significan un heterociclo de 5 o 6 miembros, que puedecontener uno o dos heteroatomos adicionales y R3 es como se define anteriormente;

a cristalizacion y convirtiendo esta sal de amina en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico,

por ejemplo

α) (i) haciendo reaccionar la mezcla Z/E de un compuesto de formula I con una amina de formula III,como se define anteriormente, para formar un compuesto de formula

II

en la que R1, R2 y R3 son como se definen anteriormente, en un disolvente o una mezcla dedisolventes, en los que los isomeros Z y E del compuesto de formula II son solubles en diferentesgrados, o

(ii) disolviendo o suspendiendo una mezcla Z/E de un compuesto de formula II, segun se defineanteriormente, en un disolvente o una mezcla de disolventes y ajustando el producto de solubilidadde los isomeros de formula II;

β) aislando el isomero Z de formula II o el compuesto de formula II con un bajo contenido de isomeroE; y

γ) convirtiendo un compuesto aislado de formula II con la ayuda de un acido en el compuesto de formula

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o en el compuesto de formula I con un bajo contenido de isomero E.

El procedimiento puede ser un procedimiento de separacion, por ejemplo para la separacion al menosparcial del isomero E y Z y/o para disminuir, es decir empobrecer, el contenido del isomero E en mezclasZ/E, por ejemplo para mejorar el contenido de Z o para proporcionar el isomero Z puro.

En otro aspecto la presente invencion proporciona un procedimiento como el descrito anteriormente, enel que una mezcla de isomeros Z y E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılicode formula I se somete adicionalmente a cromatografıa.

El procedimiento puede efectuarse como sigue:

La sal de amina puede formarse en un disolvente protico o en uno aprotico.

Un compuesto de formula I puede mezclarse con una amina, un disolvente organico o una mezclade disolventes y opcionalmente agua, dando como resultado una solucion o una suspension. Disolventesorganicos adecuados son, por ejemplo, alcoholes, por ejemplo metanol, etanol, uno de los propanoles obutanoles isomeros; cetonas, por ejemplo acetona o metil-cetona; amidas, por ejemplo dimetilformamidas;esteres, por ejemplo acetato de etilo, acetato de isopropilo, acetato de butilo; nitrilos, por ejemplo aceto-nitrilo; opcionalmente en presencia de agua; o mezclas de los disolventes anteriores; particularmente, porejemplo, acetona; acetona y agua; metanol; metanol y acetona. La mezcla puede diluirse opcionalmentecon un disolvente o una mezcla de disolventes adicional, es decir un disolvente o una mezcla de disolventesque tiene una solubilidad mas pobre para el isomero Z del compuesto de formula II, denominado aquı en losucesivo “contradisolvente”. Contradisolventes son, por ejemplo, los disolventes dados anteriormente conla excepcion de las amidas pero con la adicion de eteres, por ejemplo terc-butil-metil-eter, eter dietılico,tetrahidrofurano y mezclas de tales disolventes.

Convenientemente, puede usarse un disolvente que tambien puede usarse como contradisolvente.

Alternativamente, el procedimiento puede efectuarse como sigue:

Una mezcla Z/E de una sal de amina de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico puede disolverse o suspenderse en un disolvente o una mezcla de disolventes, y el poderde solubilizacion de la mezcla (producto de solubilidad) puede reajustarse opcionalmente anadiendo uncontradisolvente segun se describe anteriormente. Disolventes y contradisolventes que pueden usarse sedan anteriormente.

Convenientemente, puede usarse un disolvente que tambien puede usarse como contradisolvente.

El disolvente puede elegirse de modo que se separe por cristalizacion la sal de amina del acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico que tiene un contenido inferior de isomero E que lasmezclas Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico usadas como materialde partida.

Ejemplos de aminas utiles en el procedimiento de la invencion son aminas de formula

NR1R2R3

en la que R1, R2 y R3 son iguales o diferentes e independientemente uno de otro indican hidrogeno,alquilo de 1 a 8 atomos de carbono; bencilo no sustituido o sustituido o cicloalquilo de 4 a 8 atomos decarbono; o R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno significan un heterociclo de 5 o 6 miembros, quepuede contener uno o dos heteroatomos adicionales, y R3 es como se define anteriormente, por ejemploterc-butilamina, bencilamina, dibencilamina, diciclohexilamina, terc-octilamina (=2,4,4-trimetilpentil-2-amina), particularmente terc-butilamina, diciclohexilamina, terc-octilamina.

Si se usa una bencil- o dibencilamina el grupo bencilo puede no estar sustituido o estar sustituido porgrupos que son inertes bajo las condiciones de reaccion. Tales grupos son, por ejemplo, grupos alquilo de1 a 8 atomos de carbono, alcoxi o alquiltio de 1 a 8 atomos de carbono, halogeno, nitro, sulfoxi.

Si R1 junto con R2 y el atomo de nitrogeno significan un heterociclo de 5 o 6 miembros, que contieneopcionalmente 1 o heteroatomos adicionales, estos son, por ejemplo, atomos de nitrogeno, oxıgeno o azu-fre. Ejemplos de tales heterociclos son morfolina, N-metilmorfolina, oxazolidina o tiazolidina.

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La amina de formula III se emplea por ejemplo en cantidades estequiometricas o en un exceso delcompuesto que ha de purificarse.

La sal de amina de acuerdo con la presente invencion puede convertirse facilmente en compuestos deformula I con un contenido de E reducido o en el compuesto Z puro de formula Ia mediante el tratamientocon un acido. Esto puede efectuarse disolviendo o suspendiendo la sal de amina en agua y acidificando,por ejemplo anadiendo un acido tal como acido clorhıdrico, acido fosforico o acido sulfurico. La aminaque se libera puede retirarse opcionalmente mediante extraccion en una primera etapa alcalina o man-tenerse en solucion mediante la adicion de un disolvente organico tal como un alcohol o una cetona. Elcompuesto cristalino de formula I o el compuesto cristalino de formula Ia posteriormente se separa porfiltracion y se seca.

El procedimiento tiene varias ventajas. Las sales de amina se precipitan y cristalizan facilmente. Esteprocedimiento es especialmente ventajoso en la produccion de cefalosporinas cuando se aplica a mezclasZ/E de formula I con un alto contenido de E y/o que contienen subproductos, obteniendo productos conun contenido de E bajo y alta pureza. Esto tambien tiene la ventaja de un rendimiento total mejorado.

Las etapas del procedimiento pueden repetirse opcionalmente para obtener la relacion Z/E deseada.

Una sal de un compuesto de formula I con una amina de formula III, en la que R1, R2 y R3 son comose definen anteriormente, en particular compuestos de formula

II

en la que R1, R2 y R3 tienen los significados dados anteriormente, es nueva y tambien forma parte de lainvencion; especialmente compuestos de formula II en la que los atomos de hidrogeno en el enlace C=Ctienen la configuracion cis. Estas sales de amina facilitan sorprendentemente la separacion de mezclasZ/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico.

En otro aspecto la presente invencion proporciona una sal de amina que es sal de diciclohexilamoniode acido 7-amino-3-[(Z)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico, o

sal de (2,4,4-trimetilpentil)-2-amonio de acido 7-amino-3-[(Z)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico, o

sal de terc-butilamonio de acido 7-amino-3-[(Z)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico.

Pueden llevarse a cabo cromatografıas adicionales como sigue:

El compuesto de formula I puede disolverse, por ejemplo en agua, y, por ejemplo, anadiendo unabase, por ejemplo amonıaco, o un acido inorganico, por ejemplo acido clorhıdrico, y se somete a croma-tografıa, por ejemplo a cromatografıa de adsorcion. Los adsorbentes incluyen resinas adsorbentes, porejemplo resinas de intercambio ionico, por ejemplo tales como las vendidas como HP-20, HP-21 o SP207 (de Mitsubishi), XAD-1180, XAD-1600 o XAD-16 (por ejemplo Rohm-Haas) o Amberchrom CG-161(Toso-Haas), especialmente XAD-1600 y Amberchrom CG-161 o carbono activado, por ejemplo vendidocomo Norit CG-1, SX-plus, C-granular o Cecarbon GAC 40. La elucion puede efectuarse con agua ouna mezcla de disolvente/agua. Los disolventes pueden ser, por ejemplo, alcoholes, tales como metanol,etanol e isopropanol, o cetonas, por ejemplo acetona, particularmente alcohol. En este procedimiento elisomero E tiene una mejor adsorcion que el isomero Z y ası se eluye mas lentamente que el isomero Z. Lasprimeras fracciones eluidas contienen por lo tanto principalmente el isomero Z, mientras que las ultimasfracciones contienen principalmente el isomero E. El producto deseado puede obtenerse ajustando el valordel pH cerca del punto isoelectrico del compuesto de formula I, es decir de 2,5 a 4,5, particularmentehasta de 3,0 a 3,7. Puede producirse cristalizacion. Dependiendo, entre otras cosas, de que fracciones secombinen, se obtienen productos con una cantidad muy baja de isomero E o productos con un contenido

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superior de isomero E. En cualquier caso, el contenido del isomero E en el producto del procedimientode la invencion es inferior que el contenido en la mezcla Z/E de partida.

La cantidad de los adsorbentes depende, entre otras cosas, de la velocidad de disolucion deseada y dela relacion Z/E del compuesto de partida de formula I.

Las cromatografıas adicionales representan un metodo muy simple, economico y ecologicamente acep-table. La elucion puede efectuarse con agua y opcionalmente alcohol, que son disolventes ecologicamenteaceptables. Los adsorbentes pueden regenerarse, por ejemplo, lavando con agua o alcohol. Las mezclas dealcohol/agua pueden regenerarse facilmente. El equipo es simple. No son necesarios elucion con gradienteo elucion por etapas ni cambios del pH.

Los procedimientos a) y las cromatografıas adicionales pueden combinarse convenientemente.

El compuesto de formula I que tiene un bajo contenido de E o sus sales de amina pueden prepararsesegun se describe mediante los presentes procedimientos que contienen diversas cantidades de isomerosZ/E, por ejemplo en una relacion de 86:14 o menos, 91:9 o menos, 92:8 o menos, 96:4 o menos o 98:2o menos; por ejemplo, no detectables por RMN de 1H; por ejemplo, puede prepararse un compuesto deformula Ia y de formula II que tiene un contenido de E no detectable. Los compuestos de formula I que seusan como material de partida en el procedimiento de acuerdo con la presente invencion pueden contenercualquier relacion de Z/E pero al menos una cantidad detectable de Z ası como de E. Los procedimientosde acuerdo con la presente invencion, por ejemplo que incluyen cromatografıas adicionales, son adecuadospara una escala industrial.

Las mezclas Z/E de los compuestos de formula I que tienen un alto contenido del isomero E puedenprepararse de acuerdo con metodos conocidos.

El compuesto de formula Ia y los compuestos de formulas I con un contenido de isomero E de 15 % ymenos son nuevos y tambien forman parte de la invencion.

Los compuestos de formula I con un bajo contenido de E y el compuesto de formula Ia son materialesde partida ideales para la produccion de cefditoren pivoxil y compuestos activos similares que tienen elmismo modelo de sustitucion en la posicion 3. Puede producirse una amplia variedad de derivados en laposicion 7 y la posicion 4 (acido carboxılico) y su produccion en forma pura de acuerdo con la invenciontiene lugar muy simplemente y economicamente.

En un aspecto adicional la presente invencion proporciona el uso de una sal de un compuesto deformula I con una amina de formula III, en donde R1, R2 y R3 son como se definen anteriormente, en laproduccion de cefalosporinas.

Los detalles de las resinas son conocidos, por ejemplo a partir de los folletos de los fabricantes.

En los siguientes ejemplos, que ilustran la invencion con detalle, todas las temperaturas se dan engrados Celsius. Se usa acido trimetilsililpropionico-d4 como patron (RMN de 1H).

Ejemplo 1

Empobrecimiento de acido 7-amino-3-[(E)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) mediante el uso de la sal de diciclohe-xilamonio

a) Se introducen 3 g de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) conun contenido de E de alrededor de 14 % (RMN de 1H) en una mezcla de 6 ml de agua y 15 ml deacetona. La suspension se calienta hasta 30◦. Se anaden 2,04 ml de diciclohexilamina y la mezclase agita hasta que se obtiene una solucion practicamente transparente. El calentamiento se retira,se anaden unos pocos cristales seminales, y la suspension resultante se agita durante 15 minutos atemperatura ambiente. Se anaden 21 ml de acetona en gotas durante el transcurso de 15 minutos,y la mezcla de reaccion se pone posteriormente en un bano de hielo durante 2 horas. La sal dediciclohexilamonio se aısla a traves de un filtro de succion, se lava con un total de 20 ml de acetonay se seca a vacıo durante la noche.

Contenido de E (RMN de 1H): alrededor de 9 %

RMN de 1H (D2O): 1,13-1,34 (m, 10H, ciclohexilo); 1,65-1,69 (m, 2H, ciclohexilo); 1,82 (s, ancho,

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Se disuelven 2 g de sal de diciclohexilamonio obtenida bajo a) en 60 ml de agua a alrededor de30◦, y el valor del pH se ajusta lentamente hasta 3,5 mediante el uso de acido sulfurico diluido.La suspension se agita durante 30 minutos adicionales mientras se enfrıa con hielo. El acido librecristalino se succiona posteriormente a traves de un filtro, se lava con agua y acetona y se seca.

Contenido de (RMN de 1H): alrededor de 9 %

RMN de 1H (D2O/K2CO3): 2,38 (s, 3H, CH3, Z); 2,42 (s, 3H, CH3, E); 3,32-3,57 (ABq, J=18Hz,3H, SCH2, Z); 3,67, 3,82 (ABq, J=17Hz, 3H, SCH2, E); 4,81 (s, ancho, HOD); 5,1-5,5 (m, 2H, H-6,H-7, Z+E); 6,31, 6,64 (ABq, J=12Hz, 2H, CH=CH, Z); 6,83, 7,02 (ABq, J=16Hz, 2H, CH=CH,E); 8,72 (s, 1H, S-CH=N, E); 8,77 (s, 1H, S-CH=N, Z).

b) Se introduce 1 g de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) con uncontenido de E de alrededor de 9 % en una mezcla de 2 ml de agua y 5 ml de acetona. Se anaden0,68 ml de diciclohexilamina. Resulta una solucion practicamente transparente a partir de la cualcomienza la cristalizacion. La suspension se deja reposar a temperatura ambiente durante 15minutos, a continuacion se agita durante otros 15 minutos y a continuacion se anaden lentamente7 ml de acetona. Despues de enfriar durante 2 horas mas en un bano de hielo, se aısla la sal dediciclohexilamonio, se lava con 5 ml de acetona y se seca.

RMN de 1H (D2O): 1,13-1,34 (10H, ciclohexilo); 1,65-1,69 (2H, ciclohexilo); 1,82 (s, ancho, 4H,ciclohexilo); 2,04 (s, ancho, 4H, ciclohexilo); 2,39 (s, 3H, CH3); 3,2-3,3 (m, 2H, ciclohexilo); 3,32,3,57 (ABq, J=18,3Hz, 2H, SCH2); 4,80, (d, J=4,9Hz, 1H, -lactama); 4,81 (s, ancho, HOD); 5,21 (d,J=4,9Hz, 1H, -lactama); 6,32, 6,64 (ABq, J=11,7Hz, 2H, CH=CH); 8,78 (s, 1H, CH=N).

Contenido de E (RMN de 1H): no detectable

Se disuelven 0,8 g de la sal de diciclohexilamonio obtenida de acuerdo con b) en 30 ml de agua a 30◦.La mezcla se acidifica hasta pH 3,5 mientras se agita con acido sulfurico diluido y el deposito cristalinose aısla despues de reposar durante 30 minutos en un bano de hielo. El producto (acido libre) se lava conagua y acetona y se seca.

Punto de fusion: >200◦ (descomposicion).

RMN de 1H (D2O/K2CO3): 2,38 (s, 3H, CH3); 3,32, 3,57 (ABq, J=18,3Hz, 2H, SCH2); 4,80 (d, J=4,9Hz,1H, -lactama); 4,81 (s, ancho, HOD); 5,21 (d, J=4,9Hz, 1H, -lactama); 6,31, 6,64 (ABq, J=11,7Hz, 2H,CH=CH); 8,77 (s, 1H, SCH=N)

Contenido de E (RMN de 1H): no detectable.

Ejemplo 2

Empobrecimiento de acido 7-amino-3-[(E)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) mediante el uso de la sal de terc-octilamonio

Se introducen 6 g de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) con uncontenido de E de alrededor de 13 % (RMN de 1H) en una mezcla de 12 ml de agua y 30 ml de acetona.La suspension se calienta hasta 30◦. Se anaden 3,4 ml de terc-octilamina y la mezcla se agita durante30 minutos a temperatura ambiente. Se anaden 42 ml de acetona en gotas durante el transcurso de 15minutos y la mezcla de reaccion se pone posteriormente en un bano de hielo durante 2 horas. La sal deterc-octilamonio se aısla a traves de un filtro de succion, se lava con un total de 20 ml de acetona y seseca a vacıo durante la noche.

Punto de fusion: 195-199◦ (descomposicion)

RMN de 1H (D2O): 1,05 (s, 9H, C(CH3)3, terc-octilo); 1,45 (s, 6H, C(CH3)2, terc-octilo); 1,68 (s, 2H,CH2, terc-octilo); 2,24 (s, CH3, acetona); 2,40 (s, 3H, CH3); 3,34, 3,60 (ABq, J=18,1Hz, 2H, SCH2);4,80 (bajo HOD, 1H, -lactama); 4,81 (s, ancho, HOD); 5,22 (d, J=5,0Hz, 1H, -lactama); 6,33, 6,67 (ABq,

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J=11,6Hz, 2H, CH=CH); 8,79 (s, 1H, CH=N).

Contenido de E (RMN de 1H): no detectable.

Se mezclan 6 g de la sal de terc-octilamonio ası obtenida con 180 ml de agua y con aproximadamente100 ml de metanol a temperatura ambiente mientras se agita, hasta que se obtiene una solucion. El valordel pH se ajusta lentamente hasta 3,5 con acido sulfurico diluido. La suspension se agita durante 30minutos mas mientras se enfrıa con hielo. El acido libre cristalino se separa por succion a traves de unfiltro, se lava con agua y acetona y se seca.

RMN de 1H como el ejemplo 1a)

Contenido de E (RMN de 1H): no detectable.

Ejemplo 3

Empobrecimiento de acido 7-amino-3-[(E)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) mediante el uso de la sal de terc-butilamonio

Se anaden 0,5 g de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) con uncontenido de E de alrededor de 25 % (RMN de 1H) a una mezcla de 1 ml de agua y 5 ml de acetona. Seanaden 0,2 g de terc-butilamina y se forma una solucion transparente que se agita durante 30 minutos atemperatura ambiente. Se anaden 10 ml de acetona y la mezcla de reaccion se pone posteriormente enun bano de hielo durante 2 horas. La sal de terc-butilamonio se aısla a traves de un filtro de succion, selava con un total de 5 ml de acetona y se seca a vacıo durante la noche.

RMN de 1H (D2O): 1,34 (s, 9H, C(CH3)3, terc-butilo); 2,35 (s, 3H, CH3, Z y E); 3,30, 3,54 (ABq,J=18,1Hz, 2H, SCH2, Z); 3,6, 3,8 (ABq, 2H, SCH2, E); 4,78 (d, J=5,0Hz, 1H, -lactama, Z); 4,81,(s,ancho, HOD); 5,1 (d, 1H, -lactama, E); 5,18 (d, J=5,0Hz, 1H, -lactama, Z); 6,28, 6,61 (ABq, J=11,6Hz,2H, CH=CH, Z); 6,8, 7,0 (ABq, 2H, CH=CH, E); 8,7 (s, 1H, CH=N, E); 8,74 (s, 1H, CH=N, Z).

Contenido de E (RMN de 1H): alrededor de 4 %.

Ejemplo 4

Empobrecimiento de acido 7-amino-3-[(E)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) mediante cromatografıa

Se suspenden 10 g de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) con uncontenido de E de alrededor de 23 % (RMN de 1H) en 100 ml de agua y 25 ml de acetona y se acidificancon acido clorhıdrico acuoso hasta un valor del pH de 0,8 mientras se enfrıa con hielo. La solucion turbiase filtra sobre 3 g de carbono activado y el carbono se lava con 10 ml de agua, que contiene unas pocasgotas de acido clorhıdrico. El eluato se ajusta lentamente hasta un valor del pH de 3,5 con NaOH 2N yel producto precipita. La mezcla se agita durante otra hora mientras se enfrıa con hielo. El acido libreprecipitado se filtra, se lava con agua y acetona y se seca.

Contenido de E (RMN de 1H): alrededor de 14 %

Ejemplo 5

Empobrecimiento de acido 7-amino-3-[(E)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) mediante cromatografıa

Se mezcla 1 g de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico (Z/E) con un con-tenido de E de alrededor de 24 % (RMN de 1H) con 10 ml de agua y con un poco de amonıaco (pH 8). Lasolucion se transfiere a continuacion a una columna que se rellena con 100 ml de Amberchrom©R CG-161y se eluye con 2 % en volumen de isopropanol en agua. Las fracciones que contienen menos de 4 % deisomero E se recogen, se concentran hasta un volumen de aproximadamente 30 ml mediante evaporacion

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y se ajustan hasta un pH 3 con acido clorhıdrico. La mezcla se agita durante 1 hora en un bano de hielo,el deposito (acido libre) se separa por filtracion, se lava con agua y se seca.

Contenido de E (RMN de 1H): alrededor de 2 %.

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REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para empobrecer la cantidad de acido 7-amino-3-[(E)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico en mezclas Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılicode formula

I

sometiendo una sal de una mezcla Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico con una amina de formula

NR1R2R3 III

en la que R1, R2 y R3 son iguales o diferentes e independientemente uno de otro indican hidrogeno,alquilo de 1 a 8 atomos de carbono; bencilo no sustituido o bencilo sustituido por grupos que son inertesbajo las condiciones de reaccion; o cicloalquilo de 4 a 8 atomos de carbono; o

R1 y R2 junto con el atomo de nitrogeno significan un heterociclo de 5 o 6 miembros, que puede conteneruno o dos heteroatomos adicionales y R3 es como se define anteriormente;

a cristalizacion y convirtiendo esta sal de amina en acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico.

2. Un procedimiento para el empobrecimiento o la separacion, respectivamente, del isomero E enmezclas Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico

α) haciendo reaccionar la mezcla Z/E de un compuesto de formula I de acuerdo con la reivindicacion 1con una amina de formula III, segun se define en la reivindicacion 1, para formar un compuesto deformula

II

en la que R1, R2 y R3 son como se definen en la reivindicacion 1, en un disolvente o una mezclade disolventes, en los que los isomeros Z y E del compuesto de formula II son solubles en diferentesgrados,

β) aislando el isomero Z de formula II o el compuesto de formula II con un bajo contenido de isomeroE, y

γ) convirtiendo un compuesto aislado de formula II con la ayuda de un acido en el compuesto de formula

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Ia

o en el compuesto de formula I con un bajo contenido de isomero E.

3. Un procedimiento para el empobrecimiento o la separacion, respectivamente, del isomero E enmezclas Z/E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico

α) disolviendo o suspendiendo una mezcla Z/E de un compuesto de formula II de acuerdo con lareivindicacion 2 en un disolvente o una mezcla de disolventes y ajustando el producto de solubilidadde los isomeros de formula II,

β) aislando el isomero Z de formula II o el compuesto de formula II con un bajo contenido de isomeroE, y

γ) convirtiendo un compuesto aislado de formula II con la ayuda de un acido en el compuesto de formulaIa de acuerdo con la reivindicacion 2, o en el compuesto de formula I de acuerdo con la reivindicacion1, con un bajo contenido de isomero E.

4. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que una mezclade isomeros Z y E de acido 7-amino-3-[2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico de formula

I

se somete adicionalmente a cromatografıa.

5. Una sal de un compuesto de formula

I

con una amina de formula

NR1R2R3 III

en la que R1, R2 y R3 son iguales o diferentes e indican independientemente uno de otro hidrogeno,alquilo de 1 a 8 atomos de carbono; bencilo no sustituido o bencilo sustituido por grupos que son inertesbajo las condiciones de reaccion; o cicloalquilo de 4 a 8 atomos de carbono; o R1 y R2 junto con el atomode nitrogeno significan un heterociclo de 5 o 6 miembros, que puede contener uno o dos heteroatomosadicionales y R3 es como se define anteriormente.

6. Una sal de amina de formula

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en la que R1, R2 y R3 son iguales o diferentes e indican independientemente uno de otro hidrogeno,alquilo de 1 a 8 atomos de carbono; bencilo no sustituido o bencilo sustituido por grupos que son inertesbajo las condiciones de reaccion; o cicloalquilo de 4 a 8 atomos de carbono; o R1 y R2 junto con el atomode nitrogeno significan un heterociclo de 5 o 6 miembros, que puede contener uno o dos heteroatomosadicionales, en donde los atomos de hidrogeno en el enlace C=C del grupo vinilo tienen la configuracioncis.

7. Una sal de amina de acuerdo con la reivindicacion 6, que es

sal de diciclohexilamonio de acido 7-amino-3-[(Z)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico, o

sal de (2,4,4-trimetilpentil)-2-amonio de acido 7-amino-3-[(Z)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico, o

sal de terc-butilamonio de acido 7-amino-3-[(Z)-2-(4-metil-5-tiazolil)vinil]-3-cefem-4-carboxılico.

8. Uso de una sal de un compuesto de formula I, segun se define en la reivindicacion 1, con una aminade formula III, segun se define en la reivindicacion 1, en la produccion de cefalosporinas.

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE)y a la Disposicion Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a laaplicacion del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen aEspana y solicitadas antes del 7-10-1992, no produciran ningun efecto en Espana enla medida en que confieran proteccion a productos quımicos y farmaceuticos comotales.

Esta informacion no prejuzga que la patente este o no incluıda en la mencionadareserva.

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