DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS BACTERIANAS Y MICOTICASMEDIOS DE CULTIVODOCENTE: M.Sc. Ingrid Quezada Nepo

El Minsa registra 9739 casos en lo que va del 2014 , focos estn en zonas de selva

Elchikunguaes un virus para el que no hay vacuna ni tratamiento,

Segn datos de la Organizacin Panamericana de la Salud (OPS)del pasado 3 de julio, en el continentese han registrado 21 muertes por este virus, 4.756 casos confirmados y 302.081 casos sospechosos, de ellos 193.395 en la Repblica Dominicana.Aedes aegypti y Aedes albopictus.son los vectores del virus Chikungunya

La tuberculosis en el Per

40 millones de infectados por el VIH

Mala alimentacin

Bacteria come carneVibrio vulnificus

Segn el ltimo balance del 26 de agosto de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), el bola ha dejado mil 552 muertos entre los tres mil 69 casos registrados. En concreto, 694 personas fallecieron en Liberia, 430 en Guinea, 422 en Sierra Leona y 6 en Nigeria.

Que HACER?

Puntos a tratarQue entendemos por enfermedad infecciosa,Cules son los factores ms importantesPostulados de Koch y postulados moleculares.Enfermedades emergentes y reemergentesPatognesis y virulenciaPrincipales enfermedades infecciosasDiagnstico laboratorial de las enfermedades infecciosas.

Enfermedad infecciosa

Se da cuando la interaccin entre microorganismos y el hospedero tienen como resultado un dao de los tejidos que ocasiona manifestaciones clnicas.

Factores que condicionan las enfermedades infecciosasHospederoMicroorganismoMedio ambienteInfeccin enfermedad-Factores inmunes-Susceptibilidad gentica.Area geogrfica-Clima-Condiciones socioeconmicas-PolticasFactores virulentosCapacidad sobrevivencia

Postulados de KochEl microorganismo debe ser encontrado en todas las personas con la enfermedad El microorganismo debe ser aislado de las lesiones de una persona infectada y debe poder ser mantenido en cultivo puro.El cultivo puro del m.o. implicado e inoculado en un voluntario humano susceptible o animal experimental debe reproducir los sntomas de la enfermedad.El mismo microorganismo debe ser reaislado del humano o animal experimental-

Postulados de Koch1.- El M..O. debe encontrarse en todos los casos de la enfermedad2.-El M.O. debe poder aislarse en cultivo puro a partir de las lesiones producidas en el animal3.- El M.O. debe reproducir la enf cuando se inocula de un cultivo puro en un modelo animal4.- El mismo M.O. debe poder aislarse como cultivo puro a partir de las lesiones del modelo animal 5.- El M.O. debe inducir una respuesta inmune con la aparicin de ap. Especficos en sangre del hombre o animal infectado que pueda demostrarse por pruebas serolgicas

Postulados molecularesEl gene y/o sus productos debe ser encontrados en cepas del m.o. que causen enfermedad y no en cepas avirulentas Inactivar el gene en las cepas virulentas debe reducir la virulencia de estas.Debe demostrarse que el gene relacionado con la virulencia es expresado por el m.o. en el curso de la enfermedad en su hospedero.El producto del gene debe evocar una respuesta inmune protectora.

Patognesis y VirulenciaPatognesis :Capacidad que tiene un microorganismo de entrar en contacto con un hospedero e inducir cambios fisiolgicos o anatmicos resultantes en una enfermedad.Virulencia: Capacidad relativa de un microorganismo de causar dao en su hospedero.

l ltimo reporte de la Gerencia Regional de Salud de La Libertad seala que en lo que va del ao se han presentado 29 casos de peste, de los cuales hasta la fecha solo 12 han sido confirmados, entre ellos se registr la muerte de dos personas. De este ltimo grupo, ocho casos corresponden a peste bubnica, dos a peste neumnica y dos a peste septicmica. El primer caso del 2010 se registr el 16 de abril, en el sector Los Libertadores del distrito de Chicama. Una nia de cuatro aos, cuya identidad se mantiene en reserva, falleci vctima de la peste bubnica. Al parecer, transmiti esta enfermedad a cinco integrantes de su familia segn confirmaron las pruebas de laboratorio.El ltimo reporte de la Gerencia Regional de Salud de La Libertad seala que en lo que va del ao se han presentado 29 casos de peste, de los cuales hasta la fecha solo 12 han sido confirmados, entre ellos se registr la muerte de dos personas. De este ltimo grupo, ocho casos corresponden a peste bubnica, dos a peste neumnica y dos a peste septicmica. El primer caso del 2010 se registr el 16 de abril, en el sector Los Libertadores del distrito de Chicama. Una nia de cuatro aos, cuya identidad se mantiene en reserva, falleci vctima de la peste bubnica. Al parecer, transmiti esta enfermedad a cinco integrantes de su familia segn confirmaron las pruebas de laboratorio.

El segundo caso se present tres meses despus del primero. Se trataba de una peste neumnica en una mujer de 29 aos, procedente del distrito Chocope (provincia de Ascope, a una hora de Trujillo), quien contagi a un mdico de 35 aos del Hospital Regional Docente de Trujillo y a un estudiante de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.

Enfermedades Emergentes y Reemergentes Enfermedades Infecciosas Producidas por microorganismos

Enfermedades NO infecciosas Las otras

Enfermedades Emergentes y Re-emergentesEnfermedades Emergentes NO infecciosas Adiccin a drogas Trastornos alimentarios Sedentarismo Afecciones Cardiovasculares Accidentologa vial Patologa tumoral etc

Enfermedades Emergentes y Re-emergentes Enfermedades InfecciosasBacterias, Virus, Parsitos, Hongos, Priones

Factores Presentes en la Emergencia y la Reemergencia de las infecciones

1.- Factores demogrficos y del comportamiento humano2.-El impacto de la nueva tecnologa y la industria3.- El desarrollo econmico y cambios en el uso de la tierra4.- Aumento internacional de viajes y comercio5.- Cambios y adaptacin microbiana6.- Venida a menos de la salud pblica

Factores de riesgo potencial en la emergencia de las Infecciones1.- Resistencia bacteriana2.- Propagacin por los alimentos 3.- Bioterrorismo4.- Inmunodeprimidos

Emergentes por Resistencia BacterianaBacilo de Koch en la tuberculosis Multifarmaco ResistenteStaphylococcus coagulasa negativo ( Enterococo) resistente a vancomicinaStaphylococcus aureus penicilino y meticilino resistentesNeisseria gonorrhoeae MFRHelycobacter pylori resistente a metronidazolHaemophylus influenza cepas resistentes a ciprofloxacino

Microbiologa clnica DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSASToma de muestraAislamiento e identificacin delmicroorganismoEstudio de sensibilidad antimicrobiana

CONDICIONES GENERALES DE LA MUESTRA

1-Preparacin del paciente

2- Identificacin de la muestra:

Datos personales y epidemiolgicos Cuadro clnico Tratamientos previos La Toma de Muestra debe ser antes del inicio del tratamiento

Condiciones Generales de la muestra3.- Calidad de la muestraCantidadRepresentatividadTipo de procesamiento segn el posible agente involucradoRECOLECCIN EN CONDICIONES DE ESTERILIDAD

LA ENFERMEDAD INFECCIOSA SITUACION ACTUAL En pocos aos la microbiologa y el conocer de las enfermedades infecciosas su diagnstico y tratamiento han pasado a niveles de biologa molecular con saberes muy precisos de patogenia y de los mtodos para evitar las lesiones Tabla 1

1969 : Virus Lassa virus ( Nigeria ) 1973 : Rotavirus 1975 : Parvovirus B 19 1976 : Virus del Ebola, Criptosporidium parvum 1977 , Legionella pneumophila , Campilobacter , Virus Hepatitis Delta . 1980 : Virus HTLV I 1981 : Toxina estafiloccica 1983 : E coli O 157 , HTLV II , Borrelia burdofi ( Enfermedad de Lyme ) , virus VIH H.P. 1988 : Herpes virus humano 1991 : Virus hemorrgico Guaranito ( Venezuela ) 1992 : V. Clera 0 139 , Nuevas Bartonellas ; B. henselae , B. elizabathae . 1993: Virus Hanta virus ( forma pulmonar ) 1994 : Virus Sabia ( Brasil )

DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSASAntes del desarrollo de la Microbiologa el diagnstico de las enfermedades se realizaba atendiendo exclusivamente a las manifestaciones clnicas .En la actualidad para el diagnstico utilizamos los siguientes exmenes de laboratorio: 1.-E. que sugieren infeccin 2.- E. que demuestran los m.o. 3.- E. que demuestran la sensibilidad

Exmenes que sugieren infeccinHemogramaUroanalisisCoprogramaProtena C ReactivaElectroforesis de protenasAnlisis de lquidos corporalesImaginologa

EXAMEN EN FRESCO Y TINCIONES

Preparaciones sin teir : Examen en fresco Mtodo de la gota pendiente . Mtodo de la gota gruesa Extensiones de sangre perifrica Tincin de Gram. Tincin de Ziehl Neelsen

DETECCION DE COMPONENTES ESTRUCTURALES Y METABOLICOS Tcnicas de diagnstico ms rpidas sensibles y especficas.Se realiza sobre la muestra sospechosa de enfermo y nos permite dar una identificacin rpida del agente etiolgico.Se puede clasificar: A.- Tcnicas de base inmunolgica B.- Tcnicas de base no inmunolgicaAl compartir gneros y especies diferentes pueden dar reacciones cruzadas falsas positivas, los reactivos buscan unas especificidades sobre la base de compuestos no contenidos en otros patgenos diferente

DETECCION DE ANTIGENOSExisten numerosas tcnicas que detectan antgenos en suero y lquidos orgnicos Depende del cuadro clnico y de la concentracin de M.O.en el liquido corporal Las ms frecuentes: 1.- Aglutinacin de ltex. 2.- Coaglutinaciones 3,-Contrainmunoelectroforesis 4.- Enzimunoensayo 5.- Radioinmunoanlisis 6.- Anticuerpos monoclonales 7.- Inmunofluorescencia directa

DIAGNOSTICO INDIRECTO

Confirmar la infeccin producida por un determinado agente identificando componentes de la respuesta inmune especfica. La respuesta es ms o menos persistente y capaz, adems de producir una memoria , un recuerdo del contacto con el antgeno que le permitir reaccionar en forma ms eficaz en el siguiente contacto.

BASES DEL DIAGNOSTICO INDIRECTOEspecificidad: Propiedad que permite al sistema inmune responder frente al agente externo que la provoc y que esa respuesta no afecte a otros antgenos

Memoria inmunitaria. Permite que el sistema inmune recuerde haber tenido contacto previo con un antgeno y responda frente a l de forma anamnsica. Esta propiedad es la base de la eficacia de las vacunas .

Evolucin de anticuerpos ante la infeccin

EL CICLO DIAGNOSTICO

RUTA DESDE EL PACIENTE HASTA EL DIAGNOSTICO MICROBIOLGICODa uno

Diagnstico de Enfermedades Infecciosas por Examen Directo de Muestras de Cultivo

MUESTRAS ENFERMEDAD SOSPECHADAPROCEDIMIENTOS DE LABORATORIOHALLAZGOS POSITIVOSCultivo de GargantaDifteria Coloracin de Gram.Delicados bacilos grampositivos pleomrficos en forma de letras chinas.Tincin con azul de metileno.Bacilos teidos de azul plido, con grnulos metacromticos prominentes.Faringitis estreptoccica agudaTcnica directa de anticuerpos fluorescentes (despus de 4 6 horas de incubacin de caldo Todd Hewitt).Cocos fluorescentes en cadenas: Usar controles positivos y negativos con cada tincin.lcera Orofaringea Enfermedad de VincentColoracin de Gram.Presencia de bacilos gramnegativos y bacilos delgados con forma de espiral.EsputoAspirados transtraquealesLavados bronquialesNeumona BacterianaColoracin de Gram.Diversos tipos bacterianos: Es particularmente diagnstico Streptococcus pneumoniae encapsulados.

Lquido CefalorraqudeoMeningitis Bacteriana.Coloracin de Gram.Bacilos gramnegativos pleomrficos (especies de Haemophilus).Diplococos gramnegativos (Neisseria meningitidis).Diplococos grampositivos (Streptococcus pneumoniae).Tincin con azul de metileno Formas bacterianas que tien de azul negro.Tincin con naranja de acridina. Formas bacterianas que se ven verdes brillantes en un microscopio con iluminacin ultravioleta.Meningitis Neumoccica Reaccin de Quellung (antisuero tipo especfico).Apariencia hinchada y de vidrio granulado de cpsulas bacterianas. Meningitis CriptoccicaMontaje en tinta china o nigrosina.Levaduras encapsuladas, con brotes unidos por hilos delgados.Listeriosis Coloracin de Gram.Montaje de gota pendiente.Bacilos grampositivos delicados.Bacterias con movilidad.

Orina Infeccin por LevadurasColoracin de Gram o tincin Wright GiemsaSeudohifas o levaduras en brotacin.Infeccin Bacteriana Coloracin de GramDiversos tipos de bacterias.Leptospirosis Examen de campo oscuro.Espiroquetas mviles laxamente plegadas.Exudado purulento uretral o cervicalGonorreaColoracin de Gram.Diplococos intracelulares gramnegativos.Infeccin por clamidiasTincin directa con anticuerpo fluorescente del extendido.Cuerpos elementales.Exudado purulento vaginalInfeccin por levaduras Montaje directo o coloracin de Gram. Seudohifas o levaduras en brotacin.Infeccin por tricomonasMontaje directo.Flagelos con movilidad de saetas.Gardnerella vaginalis Tincin de Pap o coloracin de Gram.Medicin del pH de las secreciones vaginales.Celula clave o pH de secreciones vaginales >5.5.lcera de pene o vulvar (chancro)Sfilis primaria Montaje de campo oscuro de la secrecin del chancro.Espiroquetas mviles fuertemente plegadas.Chancroide Coloracin de Gram. de la secrecin de la lcera del aspirado de bulbo inguinal.Bacilos gramnegativos pequeos intracelulares o extracelulares.

Ojo Conjuntivitis purulentaColoracin de Gram.Diversas especies bacterianas.TracomaTincin de Giemsa de raspadois de crnea.Grupos de inclusin intracelular perinuclear.Heces Enterocolitis purulentaColoracin de Gram.Neutrfilos y agregados de estafilococos.CleraMontaje directo en agua peptonada alcalina.Bacilos con movilidad caracterstica de flechas (o saeta): No hay neutrfilos,Enfermedad parasitariaMontaje directo en solucin salina o yodo.Examen de muestras.purgadasParsitos adultos o fragmentos de parsitos: Protozoos o huevos.Respajes de piel, fragmentos de uas o cabello cortadoDermatofitosis Montaje de 10% o KOHHifas delicadas o grupos de esporas.Tia versicolorMontaje de 10% o KOH o en algodn azul de lactofenol.Hifas o esporas semejando fideos o albndigas.Sangre Fiebre recurrente (Borrelia)Tincin de Wright o Giemsa, o examen de capo oscuro.Espiroquetas con morfologa tpica.Parsitos de la sangre: Paludismo, tripanosomiasis, filariasis.Tincin de Wright o de Giemsa.Examen directo de sangre anticoagulada por la presencia de microfilarias.Parsitos intracelulares (paludismo, babesia).Tripanosomas extracelulares o microfilarias.

Guas para la toma y envo de muestras al laboratorio que requieren cultivo

Tipo de microorganismoMuestraTransporteComentariosS. Nervioso CentralBacteriasLCRTubo tapa rosca estrilEnvo inmediato al laboratorio no refrigerar si se va a retardar el envo.HongosLCRIgual Buscar C. neoformans, raro otros hongosMicobacteriasLCR (mnimo vololumen 10 ml.IgualBsqueda de M-tuberculosi,M.avium-intracellulareBacterias anaerobiasPUS DE ABSCESO Y BIOPSIAS Sistema de transporte para anaerobiosParsitos Pus de absceso y biopsiastubo tapa rosca estrilBsqueda de E. hyatoltica Acantamoeba sp.VirusLCRTubo tapa rosca estril transportar en hielo.

. Tracto gastrointestinalBacteriasMateria fecal(ideal tres muestras)Biopsia gstricaRecipiente estril con tapa rosca si el transporte es rpido, materia fecal en medio de transporte Cary Blair ;biopsia gstrica en caldo glucosadoBaqueda de Shigella Salmonella, Campylobacter Aeromonas; en biopsia gstrica cultivo para Helicobacter pylori.MicobacteriasAspirado gstrico, materia fecalNeutralizar el aspirado gstrico antes del transporte en tubo estril , materia fecal en recipiente Estril tapa roscaBsqueda de M.tuberculosis en aspirado gstrico .M. avium-intracellulare en materia fecal .Parsitos Materia fecal, biopsiarectal, aspirado duodenal , biopsia de intestino delgado Si el transporte se demora poner materia fecal en preservativo , biopsias se trandsportan en recipiente estril tapa rosca I. Delgado para GiardiaBsqueda de parsitos en general en materia fecal :Giardia spp.S. stercoralis y A. lumbricoides en aspirado duodenal biopsia rectal para E. hystoltica, biopsia de intestino Cryptosporidum y MicrosporidumVirusMuestras esofgicas. Biopsias rectales usar recipiente estril transportado en hielo o medio de transporte especfico para virusBsqueda de CMV y HSV en esfago ; HSV en biopsia rectal.

Tracto GenitalBacteriasSecrecin uretral, cervical, vaginal, anal , pus de abscesos ( trompa de falopio,Bartolini, lquido amniotico, etc.) material de lceras genitales Secreciones se colectan con microcepillo o aplicadores de alginato de calcio, necesitan medio de transporte para gonococo o Chamydia segn el caso . El material de abscesos debe ir en medio de transporte para anaerobios . Material de lceras en medio de transporteGonococo se busca en secrecin uretral , vaginal o cervical; Chamydia se busca en secrecin uretral y cervical . Anaerobios se buscan en material de abscesos . H. ducreyi se busca en material de lcerasVirusMaterial de lesiones genitales o perianalesRecipiente estril transportado en hielo o medio de transporte especfico para virusBsqueda de HSVParsitos Secrecin vaginal o prostticaRecipiente estril tapa roscaBsqueda de trichomonas vaginalis.HongosSecrecin vaginal anal o cervicalTubo tapa rosca estril Bsqueda de Cndida spp.

Ojos BacteriasMaterial obtenido por raspado con haza estril (lceras corneanas) o por puncin (lquiddos oculares);en conjuntivitis tomar muestra con aplicador de alginato de calcioInocular los medios directamente con la muestra o utilizar medios de transporte en caso de sospecha de anaerobios, transportar aplicadores en medio de transportePigenos, anaerobios ( particularmente P.acnes),gonococo. C.trachomatisen muestras de conjuntivaHongosMaterial obtenido con raspado de lceras corneanasInocular directamente los mediosHongos ambientales que se inoculan por traumavirusMaterial de conjuntiva o lcerasobtenido con escobillan o haza netlica Usar medio de transporte para virusHSV, adenovirus

Tracto respiratorioBacteriasAspirado de senos nasales o paranasales isopado farngeo.aspirado o isopado nasofarngeoMaterial de sinos nasales o paranasales utilizar medio de transporte para anaerobios y medio de cary y blair para bacterias convencionales , trasporte de aplicador en tubo tpa rosca estril o tubo con silica gel;tubo de transpote con clado de casaminocidos para :,PertusiAnEROBIOS ,Neumococo. Staphylococo, en material de senos paranasales ; Streptococo beta hemoltico en isopado farngeo , Bordetella pertusis en aspirado o isopado nasofarngeo .Hongos Material de lesiones o ulceras en mucosasInocular directamente los medios Histoplasma capsulatum, Paracoccidiodes brasiliensis , Candida spp.

Tracto respiratorio inferiorBacterias Esputo, lavado bronqueoalveolar biopsisa pulmonar empiema, material de puncin pulmomnarEsputo, pus, biopsias lavado broncoalveolar, lavado bronquial , en recipiente estril para tapa rosca; usar adicionalmente medio de trasnporte para anaerobios para empiemas y material de puncin pulmonar Neumococo,H.influenzae. Legionella, M.tuberculosis, Nocardia;anaerobios en empiemasHongosIgual Recipiente estrilTapa rosca

Piel y tejido subcutneoBacteriasAspirados con jeringas de pus, biopsiasMedio de transporte para aerobios , medio de trasporte para anaerobios cuando se sospechen, recipiente tapa rosca estril para micobacteriasEstreptococos, estafilococos, anaerobios, M.,fortuitum, M.chelonei, M. marinumHongosMaterial obtenido por raspado de lesiones, biopsias.Recipiente estril tapa roscaDermatofitos , levaduras, hongos dimrficosVirusLquido de vesculas pstulas o lceras Medio de transporte para virusHSV y Varicella-zosterParsitosIgualInoculacin directa de los mediosLeishmania

Tracto UrinarioBacteriaOrina de primera hora de la maana , tres muestras de orinade primera hora de la maana cuando se busca M.tuberculosisRecipiente estril tapa rosca ( conservar en nevera si el transporte no es inmediatoEntricos, M.tuberculosis, S.saprophyticusHongos Orina de primera hora de la maanaRecipiente estril tapa roscaCandida spp.

Observaciones de laminas

Diplococos Gram negativos

Diplococos Gram positivos

Streptococcus pyogenes

Pruebas Diferenciales

CANDIDA SP

Ptiriasis versicolor

Trichophyton mentagrophytes

GRACIAS

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