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Laboratorio de Fisiologa
Practica No 1 Osmosis y Homeostasis del Medio Interno.
Tcnica de Laboratorio.
Materiales:
Torundas de algodn.
Alcohol
Solucin salina 0,9% (154mEq/l) y al 1,8% (290mEq/l)
Jeringuilla 10 ml (cc) con aguja hipodrmica No 20 descartable.
Dextrosa al 5% (500 mg/ml) y al 50% (5g/ml)
Torniquete.
Tubos de ensayo de vidrio de 10 ml
Pipetas de 5ml
Porta y cubreobjetos.
Solucin urea al 0,3 M
Centrifuga
Cajas de Petri
Anticoagulante, Citrato de sodio al 3,8%
Microscopio.
Los siguientes procedimientos se realizarn durante la prctica de laboratorio.
1. Obtencin de sangre mediante puncin venosa en venas perifricas.
2. Separacin de suero y plasma.
3. Preparacin de solucin madre (eritrocitos en dilucin).
4. Exposicin de solucin madre a distintas soluciones segn concentracin y tonicidad.
5. Observacin al microscopio de cambios celulares.
Procedimiento:
Obtencin de sangre venosa en venas perifricas del pliegue del codo:
1. Posicione al paciente para su comodidad, se recomienda un sustento posterior para el pliegue del codo.
2. Observe que los materiales a utilizarse se encuentren al alcance de la mano y que se tenga todo lo indispensable para cumplir con medidas de antisepsia y asepsia.
3. Identifique en el brazo la fosa antecubital, vena baslica o ceflica y palpe cuidadosamente (utilice maniobras de ingurgitacin que le sern indicadas).
4. Aplique el torniquete 5 a 7 cm por encima de la fosa antecubital con una presin inframaximal.
5. Palpe la vena que debe ser de un buen calibre, estar fija y tener un trayecto rectilneo.
6. Realice la asepsia de la zona elegida con una torunda de alcohol y espere un minuto.
7. Tome la jeringuilla con su mano derecha, mientras con el pulgar de la mano izquierda fije la vena, retire el capuchn de la aguja y con el bisel hacia arriba inserte firmemente en la piel y en la vena introducindola oblicuamente.
8. Si fluye sangre espontneamente introduzca la aguja 1 a 2 cm en el trayecto de la vena y aspire suavemente hasta obtener 10 ml de sangre. En caso de no fluir sangre, retroceda, cambie de direccin y avance sin retirar la aguja de la piel.
9. Una vez obtenida la muestra deseada, retire primeramente el torniquete y luego la aguja con la jeringuilla, aplique una torunda con alcohol en el sitio puncionado y haga presin sin doblar el brazo durante 1 min.
Obtencin de suero y plasma:
1. Vierta 5ml de la muestra obtenida en cada tubo de ensayo (uno con anticoagulante y otro sin anticuagulante), cuidadosamente por las paredes del mismo.
2. El tubo de ensayo sin anticoagulante djelo reposar durante 30 a 60 min.
3. El tubo de ensayo con anticoagulante centrifguelo durante 10 min a 2000rpm.
Preparacin de solucin madre:
1. Obtener 1 ml del sedimento sanguneo y colocarlo en una caja petri.
2. Colocar en dicha caja 5ml de solucin salina isoosmolar isotnica (SS 0,9%).
Exposicin a soluciones y observacin al microscopio:
1. Coloque 1ml de solucin madre y aada 2ml de alguna de las soluciones de experimentacin (hiperosmolares, hipertnicas, isoosmolares, isotnicas, hiposmolares o hipotnicas).
2. Deje reposar solucin preparada durante 30 min.
3. Coloque una gota de solucin preparada en un portaobjetos y cubra con un cubreobjetos.
4. Observe al microscopio las clulas y sus caractersticas.
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