Laboratorio de Fisiologa

Practica No 1 Osmosis y Homeostasis del Medio Interno.

Tcnica de Laboratorio.

Materiales:

Torundas de algodn.

Alcohol

Solucin salina 0,9% (154mEq/l) y al 1,8% (290mEq/l)

Jeringuilla 10 ml (cc) con aguja hipodrmica No 20 descartable.

Dextrosa al 5% (500 mg/ml) y al 50% (5g/ml)

Torniquete.

Tubos de ensayo de vidrio de 10 ml

Pipetas de 5ml

Porta y cubreobjetos.

Solucin urea al 0,3 M

Centrifuga

Cajas de Petri

Anticoagulante, Citrato de sodio al 3,8%

Microscopio.

Los siguientes procedimientos se realizarn durante la prctica de laboratorio.

1. Obtencin de sangre mediante puncin venosa en venas perifricas.

2. Separacin de suero y plasma.

3. Preparacin de solucin madre (eritrocitos en dilucin).

4. Exposicin de solucin madre a distintas soluciones segn concentracin y tonicidad.

5. Observacin al microscopio de cambios celulares.

Procedimiento:

Obtencin de sangre venosa en venas perifricas del pliegue del codo:

1. Posicione al paciente para su comodidad, se recomienda un sustento posterior para el pliegue del codo.

2. Observe que los materiales a utilizarse se encuentren al alcance de la mano y que se tenga todo lo indispensable para cumplir con medidas de antisepsia y asepsia.

3. Identifique en el brazo la fosa antecubital, vena baslica o ceflica y palpe cuidadosamente (utilice maniobras de ingurgitacin que le sern indicadas).

4. Aplique el torniquete 5 a 7 cm por encima de la fosa antecubital con una presin inframaximal.

5. Palpe la vena que debe ser de un buen calibre, estar fija y tener un trayecto rectilneo.

6. Realice la asepsia de la zona elegida con una torunda de alcohol y espere un minuto.

7. Tome la jeringuilla con su mano derecha, mientras con el pulgar de la mano izquierda fije la vena, retire el capuchn de la aguja y con el bisel hacia arriba inserte firmemente en la piel y en la vena introducindola oblicuamente.

8. Si fluye sangre espontneamente introduzca la aguja 1 a 2 cm en el trayecto de la vena y aspire suavemente hasta obtener 10 ml de sangre. En caso de no fluir sangre, retroceda, cambie de direccin y avance sin retirar la aguja de la piel.

9. Una vez obtenida la muestra deseada, retire primeramente el torniquete y luego la aguja con la jeringuilla, aplique una torunda con alcohol en el sitio puncionado y haga presin sin doblar el brazo durante 1 min.

Obtencin de suero y plasma:

1. Vierta 5ml de la muestra obtenida en cada tubo de ensayo (uno con anticoagulante y otro sin anticuagulante), cuidadosamente por las paredes del mismo.

2. El tubo de ensayo sin anticoagulante djelo reposar durante 30 a 60 min.

3. El tubo de ensayo con anticoagulante centrifguelo durante 10 min a 2000rpm.

Preparacin de solucin madre:

1. Obtener 1 ml del sedimento sanguneo y colocarlo en una caja petri.

2. Colocar en dicha caja 5ml de solucin salina isoosmolar isotnica (SS 0,9%).

Exposicin a soluciones y observacin al microscopio:

1. Coloque 1ml de solucin madre y aada 2ml de alguna de las soluciones de experimentacin (hiperosmolares, hipertnicas, isoosmolares, isotnicas, hiposmolares o hipotnicas).

2. Deje reposar solucin preparada durante 30 min.

3. Coloque una gota de solucin preparada en un portaobjetos y cubra con un cubreobjetos.

4. Observe al microscopio las clulas y sus caractersticas.