procesamiento y conservación de muestras para biobancos el caso de anatomía patológica
Post on 16-Apr-2015
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Archivo de muestras en distintos formatos
1. A temperatura ambiente (varios tipos)
2. En congelación (con distintas opciones)
3. Cultivos celulares y almacenamiento en nitrógeno líquido de las células (-196ºC)
4. Muestras derivadas del Biobanco: obtención y archivo de ADN, ARN y PROTEÍNAS a partir de las muestras de tejidos
Archivo de muestras a temperatura ambiente
• Láminas con improntas (tejidos sólidos) y extensiones (tejidos líquidos)
• Bloques de parafina: una vez cumplidas las funciones diagnósticas, pueden ser usadas en proyectos de investigación (Archivo en Parafina: BIOBANCO)– Como sabéis: fijación adecuada en formalina tamponada,
deshidratación en alcoholes de grado creciente y xilol, e inclusión en moldes con parafina.
– En parafina: patologías inflamatorias y patologías tumorales (APOYO INVESTIGACIÓN EN CÁNCER: BANCO TUMORES)
Bancos de Tumores
• ¿De qué forma asiste al Patólogo un TEAP del Banco de Tumores, cuando hay que congelar alguna muestra?,
• La congelación de muestras es habitual en los Bancos de Tumores:– ¿Cómo procesa el TEAP la muestra para su
congelación?
Muestras fijadas en formol
• Siempre “muestras excedentes de diagnóstico”
• Se evapora el formol• Se guarda el tejido en tubo y caja a -80ºC• Código del Banco de Tumores y Número de
Biopsia
Muestras “frescas”• Linfoides, actuaciones intraoperatorias (bordes de
resección): congelación• ¿Cuál es la mejor forma?
– En criomoldes, con OCT (medio denso) en presencia de ISOPENTANO muy frío
• Enfríado a su temperatura de congelación (-160ºC) (el mejor método si hay que congelar muchas muestras). Se sumerge el isopentano en nitrógeno líquido.
• Enfríado a –50ºC (baños “Histobath”).• Enfríado a –80ºC (Isopentano en congelador de –80ºC); (el
método más cómodo cuando se congela muestra a muestra). Nieve carbónica (hielo seco) como apoyo (-80ºC)
¿Por qué es el molde con OCT e ISOPENTANO la forma mejor?
• Porque permite hacer buenos cortes en congelación (criostato) y teñir con H-E o hacer estudios de IHC.
• Porque a partir de unos pocos cortes de criostato de 30um se puede obtener ADN, ARN y PROTEÍNAS, optimizando así el uso de las muestras (su duración)
• El ISOPENTANO congela rápido y homogéneamente• El OCT es criosolidificable y protege el tejido
¿Hay otras opciones de congelación en fresco?
• Sí, congelar en nitrógeno líquido, que es más rápido, y se hace, como sabéis los que trabajáis como Técnicos, para las muestras que esperan diagnóstico intraoperatorio.
• Pero el nitrógeno congela muy rápido el exterior y peor el interior del tejido (menos homogéneo que el isopentano)
Cultivos celularesAlmacenamiento en nitrógeno líquido
• Se pueden tomar un fragmento de tejido para luego disgregarlo y establecer un cultivo de células (cultivo primario)
• También se pueden separar células de mieloma y de leucemia de la sangre y almacenarlas en nitrógeno líquido (Tumores hematológicos)
Muestras derivadas del Biobanco
Obtención y archivo de ADN, ARN y Proteínas
• Las muestras fijadas en formol son buenas para ADN, peores para ARN y malas para proteínas
• Las muestras frescas congeladas en OCT e ISOPENTANO son buenas para ADN, ARN y proteínas
• Se puede obtener ADN, ARN Y PROTEÍNAS a partir de cortes de criostato, consiguiendo así:– OPTIMIZAR EL USO DE LOS TEJIDOS entregando a los
investigadores solicitantes de muestras, no el tejido, sino parte del ADN, ARN o PROTEÍNAS obtenidos.
– En el caso del ADN, pueden establecerse sub-bancos derivados, pues se obtiene suficiente cantidad para la investigación en curso y también para futuras investigaciones.
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