laboratorio de inmunopatología del sida gesida 2019 · resultados aids immunopathology unit...
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Las envueltas de los clusters de subtipo F1 de reciente expansión en
Europa Occidental presentan una utilización diferente de CCR5 frente a
las envueltas de subtipo BDr. Javier García Pérez
Instituto de Salud Carlos III. CNMLaboratorio de Inmunopatología del Sida
Diciembre 2019AIDS Immunopathology Unit
GeSIDA 2019
Introducción
AIDS Immunopathology Unit
Año de diagnóstico
% f
orm
a ge
né
tica
Año de diagnóstico
% f
orm
a ge
né
tica
Formas genéticas de VIH en Galicia
Formas genéticas de VIH en País Vasco
Delgado et al., Gesida 2017
Delgado et al., Plos One, 2015
Vinken et al., Frontiers in Microbiology, 2019
Cluster F1_1
Belgian clade
Spanish clade
GeSIDA 2019
Introducción
AIDS Immunopathology Unit
Respuesta a terapia ARV
P=0,032
P=0,01
P=0,01
P=0,03
Cuevas et al., Gesida 2017 y 2018.
Cluster F1_1
CCR5 CXCR4
Alto % de tropismo dual en cluster F1_1
R 5 X 4R 5
69 %
31 %
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
Semana
% C
V i
nd
ete
cta
ble
B
F1
12 24 36 48
0
2 0 0
4 0 0
6 0 0
8 0 0
1 0 0 0
Semana
Pro
me
dio
CD
4+
B
F1
12 24 36 48
Cid-Silva et al., AIDS, 2018.
Peor respuesta al tratamiento del cluster F1_1 GeSIDA 2019
AIDS Immunopathology Unit
Not I*
Xho I
gag vifvpr
tatLac Z
rev
nefLTR LTR
vpu
Renilla
pol
Sac II*PO F1_3
PO F1_1
PO B
pNL4.3-lacZenv-Ren
Métodos
10
16
9
INFECCIÓN
TRANSFECCIÓN 293T
PBMCsHEK293T-CCR5+CD4
TZM-blU87-R5/X4
Affinofile
Tropismo
Capacidad Replicativa
Eficacia de utilización de los receptores
Susceptibilidad a Maraviroc
Selección de pacientes GeSIDA 2019
Resultados
AIDS Immunopathology Unit
Sub B + controles Cluster F1_1 Cluster F1_3
Infe
cció
n (
RLU
s)
Infe
cció
n (
RLU
s)
Infe
cció
n (
RLU
s)
Infe
cció
n (
RLU
s)
Infe
cció
n (
RLU
s)
Infe
cció
n (
RLU
s)
PB
MC
sU
87
R5
/X4
1 4 5 9
10
11
12
22
26
27
36
38
46
49
58
59
0
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
1 0 0 0 0
DMSO
MVC
AMD
MVC+AMD
1 3 4 5 9
10
11
12
14
BX
08
NL
4.3
VS
V
0
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
1 0 0 0 0
DMSO
MVC
AMD
MVC+AMD
24
25
28
30
39
43
60
64
65
66
0
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
1 0 0 0 0
DMSO
MVC
AMD
MVC+AMD
1 3 4 5 9
10
11
12
14
BX
08
NL
4.3
VS
V
0
1 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0
3 0 0 0 0 0
4 0 0 0 0 0
5 0 0 0 0 0
6 0 0 0 0 0
7 0 0 0 0 0
R5 DMSOR5 MVCX4 DMSO
X4 AMD
1 4 5 9
10
11
12
22
26
27
36
38
46
49
58
59
0
1 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0
3 0 0 0 0 0
4 0 0 0 0 0
5 0 0 0 0 0
6 0 0 0 0 0
7 0 0 0 0 0
R5 DMSOR5 MVC
X4 DMSOX4 AMD
24
25
28
30
39
43
60
64
65
66
0
1 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0
3 0 0 0 0 0
4 0 0 0 0 0
5 0 0 0 0 0
6 0 0 0 0 0
7 0 0 0 0 0
R5 DMSOR5 MVCX4 DMSO
X4 AMD
R 5 X 4R 5 R 5 X 4R 5 R 5 X 4R 5
89 %
11 %
69 %
31 %
100 %
Análisis del tropismo R5/X4
CCR5 CXCR4
MVC AMDGeSIDA 2019
Resultados
AIDS Immunopathology Unit
su
b B
F1_1
F1_3
0
1 0 0 0 0
2 0 0 0 0
3 0 0 0 0
su
b B
F1_1
F1_3
-1 0 0 0 0 0
0
1 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0
3 0 0 0 0 0
Cap
Rep
licat
iva
(RLU
s)
Cap
Rep
licat
iva
(RLU
s)
Cap
Rep
licat
iva
(RLU
s)
TZM-bl PBMCs HEK293T-CCR5+CD4
PO
B
F1_1
F1_3
0
5 0 0 0 0
1 0 0 0 0 0
1 5 0 0 0 0
Análisis de la capacidad replicativaGeSIDA 2019
Resultados
AIDS Immunopathology Unit
Affinofile CD4bajo/CCR5alto Affinofile CD4alto/CCR5bajo
% In
fecc
ión
(R
elat
ivo
a c
élu
las
CD
4al
to/C
CR
5al
to)
% In
fecc
ión
(R
elat
ivo
a c
élu
las
CD
4al
to/C
CR
5al
to)
su
b B
F1_1
F1_3
-2
0
2
4
6
su
b B
F1_1
F1_3
4 0
5 0
6 0
7 0
8 0
Análisis de la eficacia de utilización de CD4 y CCR5 en células Affinofile
Johnston S H et al. J. Virol. 2009
5ng/ml
1,25ng/ml
0ng/ml
0
20000
40000
60000
80000
100000
120000
140000
160000
2u
M
1u
M
0,5
uM
0,2
5u
M
0,1
25
uM
0u
M
CCR5
5ng/ml
1,25ng/ml
0ng/ml
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
350000
400000
2u
M
1u
M
0,5
uM
0,2
5u
M
0,1
25
uM
0u
M
CD4
Expresión de receptores
GeSIDA 2019
Resultados
AIDS Immunopathology Unit
%In
hib
ició
n (
25
nM
MV
C)
HEK293T-CCR5+CD4
su
b B
F1_1
F1_3
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
HEK293T-CCR5+CD4
%In
hib
ició
n (
10μ
M M
VC
)
Análisis de la susceptibilidad a Maraviroc
-1 3 -1 2 -1 1 -1 0 -9 -8 -7 -6 -5
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
M V C ( lo g ,M )
% I
nh
ibit
ion
(M
VC
)
MVCMPI
IC50GeSIDA 2019
Conclusiones
AIDS Immunopathology Unit
La capacidad de las envueltas de los cluster de subtipo
F1 para utilizar el receptor CCR5 unido a MVC en
comparación con las envueltas de subtipo B sugiere un
reconocimiento más heterogéneo del receptor.
MVC MVC MVC
sub B F1_1 F1_3
GeSIDA 2019
Gracias!!!
AIDS Immunopathology Unit
Inmunopatología del Sida (ISCIII)
Almudena Cascajero
José Alcamí.
Nuria González
Francisco Díez-Fuertes
Mayte Pérez- Olmeda
SpanishHIV/AIDSResearchNetwork
Mercedes Bermejo
Mayte Cuevas
Javier Cañada
Mónica Sánchez
Elena Delgado
Miguel Thomson
Biología y Variabilidad del VIHGeSIDA 2019
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