la flora amazÓnica: una herramienta promisoria para combatir bacterias oportunistas...

LA FLORA AMAZÓNICA: UNA HERRAMIENTA PROMISORIA PARA

COMBATIR BACTERIAS OPORTUNISTAS

DROGORRESISTENTES

CIRNA

ALVARO TRESIERRA AYALAatresierraayala@hotmail.com

OBJETIVO

Determinar la actividad antibacteriana

in vitro de extractos etanólicos de la

corteza de plantas amazónicas frente a

cepas drogorresistentes

OBJETIVO

Determinar la actividad antibacteriana

in vitro de extractos etanólicos de la

corteza de plantas amazónicas frente a

cepas drogorresistentes

¿Fuente?

8

9

10

Determinar la prevalencia de

Staphylococcus aureus y Pseudomonas

aeruginosa en teclados y ratones de

computadoras del Hospital Iquitos

“César Garayar García”

TÉCNICA DEL HISOPADO SOBRE

SUPERFICIES

Caldo Salado (10 ml)Incubar a 37 ˚C por 24 h

Agar CetrimideIncubar a 37 ˚C x

24 h

Caldo Tripticasa de Soya (10 ml)Incubar a 37 ˚C por 24 h

Caldo Peptonado con 0.02% Cristal Violeta (10 ml)

Incubar a 37 ˚C por 24 h

Agar Baird ParkerIncubar a 37 ˚C x 24 h

Prueba: CATALASA (+)

Staphylococcus aureus

Coloración Gram: Gram (+)

Prueba: COAGULASA (+)

Pruebas:OX/FER GLUCOSA (+)PRODUCCIÓN INDOL (-)CRECIMIENTO 42˚ C (+)

Prueba: OXIDASA (+)

Pseudomonas aeruginosa

Coloración Gram: Gram (-)

Tabla 1: Porcentaje de computadoras analizadas contaminadas o no por las especies bacterianas en estudio

Tipo de computadora

N° %

Contaminada 26

37.6

No contaminada 43

62.4

TOTAL 69 100.0

 Bacteria en estudio

Cepas aisladas

N° %

S. aureus 16 + 6* 68.7

P. aeruginosa 4 + 6* 31.3

TOTAL 32 100.0

Presencia de especies bacterianas en estudio en las computadoras contaminadas del Hospital Iquitos “Cesar Garayar García”

* Seis computadoras presentaron contaminación doble

Determinar los perfiles de resistencia antibiótica de

las cepas bacterianas

Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer

(citado por Panghal et al.,2011)

Porcentaje de resistencia y determinación de drogorresistencia en las diez cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas del hardware de computadoras

Familia Antibiótico AntibióticoCepa de P. aeruginosa % de Resist

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

CEFALOSPORINA Ceftazidima S S S S S R R R S R 40

CARBAPENEMS Imipenem R R S R R R R R R R 90Meropenem R R S R R R R R R R 90

MONOBACTAMS Aztreonam R R R R S R R R R R 90AMINOGLUCÓSIDOS Gentamicina R S S S S S S S S R 20

Amikacina R S S S S S S S S R 20QUINOLONAS Norfloxacina R R R S R R S S S R 60

Drogorresistencia + + + + + + + + + +

Análisis de los resistotipos en las diez cepas de P. aeruginosa

ResistotipoCepa de P. aeruginosa

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

SRRRRRR XSRRRSSR XSSSRSSR XSRRRSSS X XSRRSSSR XRRRRSSR XRRRRSSS X XRRRRRRR X

Porcentaje de resistencia y determinación de drogorresistencia en las veintidos cepas de Staphylococcus aureus aisladas del hardware de computadoras.

Familia antibió-

tico

Nom-bre

anti-biótico

Cepa de Staphylococcus aureus% Re-sist

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

PENICILI-NAS

Penici-lina

R R R R R R R R R R R R R R R R S R R R R R 95

Oxaci- lina

S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S 0

GLICOPÉP-TIDOS

Vanco-micina

S S S S R S S S S S S S S S S S S S S S S S 5

AMINOGLU CÓSIDOS

Genta-micina

S S S R S R S S S S S S R S S S S S S S S S 14

FLUORO-QUINOLO-NAS

Norflo-xacina

S S S R S S S S S R S S R R R S R S S S S S 27

Ciprofloxacina

S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S 0

TETRACI- CLINAS

Tetraci-clina

S S R R S R R S S R S S R S S S S S S S S R 32

MACRÓLI-DOS

Eritro-micina

S S R S S S S R R R S R S R R S S R R S S R 45

Drogorre-sistencia

- - + + + + + + + + - + + + + - - + + - - +

Análisis de los resistotipos en las veintidos cepas de S.aureus.

Resisto- tipo

Cepa de S. aureus1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 2

122

RSSSSSSS x x x x x xRSSSSSRR x xRSSRRSRS x xRSRSSSSS xRSSRSSRS xRSSSSSRS xRSSSSSSR x x x x xRSSSRSRR xRSSSRSSR x xSSSSRSSS x

Evaluar la susceptibilidad de las cepas bacterianas drogorresistentes frente a

extractos vegetales.

Tabernaemontana maxima

Alchornea triplinervia

Annona muricataAverrhoa carambola

Brunfelsia grandiflora

Cedrela odorata

Plantas amazónicas evaluadas

Alchornea triplinervia “escobo”

Annona muricata “guanábana”

Averrhoa carambola “carambola”

Brunfelsia grandiflora “chiric sanango”

Caraipa grandifolia “aceite caspi”

Cedrela odorata “cedro”

Tabernaemontana heterophylla

T. macrocalix

T. markgrafiana

T. maxima

Extractos etanólicos de cortezas

Proporcionados por el Laboratorio de Investigación de Productos Naturales

Antiparasitarios de la Amazonía (LIPNAA).

SECADO MOLIENDA MACERACIÓN

CONCENTRACIÓN FILTRACIÓNEXTRACTOS

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANA

Solución stock del extracto 1g /ml

15 µl de la solución stock de cada extracto

Evaluar la actividad antibacteriana de los

extractos vegetales sobre las cepas bacterianas

Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer

(citado por Panghal et al.,2011)

Actividad de los extractos vegetales frente a las cepas de Pseudomonas aeruginosa

Annona muricata Averrhoa carambolaT. heterophyllaT. markgrafiana

Extracto de planta

Datos descriptivos de los halos de inhibición de los extractos contra P. aeruginosa (mm)

Promedio DS MedianaValor

MáximoValor

Mínimo

Alchornea triplinervia

12.6 3.55 12.25 18.5 8

Brunfelsia grandiflora

8.55 1.66 8 12 7

Caraipa grandifolia 9.7 1.67 10 12.5 7

Cedrela odorata 12.5 3.07 12.75 17 8

Tabernaemontana macrocalyx

7.34 0.44 6.95 8 7

T. maxima 7.8 0.56 7.32 11 0

Sin actividad

Actividad de los extractos vegetales frente a las cepas de Staphylococcus aureus

Extracto de planta

Datos descriptivos de los halos de inhibición de los extractos contra S. aureus (mm)

Promedio DS MedianaValor

MáximoValor

Mínimo

Alchornea triplinervia

17.92 2.95 18 23.5 13.5

Annona muricata 11.05 2.38 11 15 7

Averrhoa carambola

10.6 1.74 10 15 8

Brunfelsia grandiflora

10.9 2.87 11 18 7.5

Caraipa grandifolia 13.29 2.30 13 17.5 9.5

Cedrela odorata 16.7 3.13 16.5 24.5 13

Tabernaemontana heterophylla

17.66 1.28 17.9 22.3 15.7

T. maxima 23.3 1.76 23.41 25.3 22

T. markgrafiana 24.4 3.22 24.49 26.7 19.7T. macrocalyx Sin actividad

Determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y de la Concentración Bactericida Mínima (CBM) de los extractos vegetales activos frente a las cepas de P. aeruginosa y S. aureus

CIM CBM

Macrométodo de dilución en

caldo

< conc. cuyo subcultivo produce un número de UFC < al 0.1% del inóculo original.

EXTRACTOSPseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus

CIM (mg/ml)

CBM (mg/ml)

CIM (mg/ml)

CBM (mg/ml)

Cedrela odorata 15.62 125 3.91 7.81Alchornea triplinervia

62.5 250 3.91 15.62

Caraipa grandifolia 250 500 3.91 15.62

Averrhoa carambola S.A S.A 15.62 62.5

Annona muricata S.A S.A 31.25 125Brunfelsia grandiflora

125 250 62.5 250

Tabernaemontana macrocalyx

125 500 S.A S.A

T. heterophylla S.A S.A 31.25 125T. maxima 250 500 3.91 7.81

T. markgrafiana S.A S.A 3.91 7.81

CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (CIM) Y CONCENTRACIÓN BACTERICIDA MÍNIMA (CBM) DE LOS EXTRACTOS VEGETALES FRENTE A

LAS BACTERIAS EN ESTUDIO

S.A.: Sin Actividad

Screening fitoquímico

Presencia de metabolitos con posible actividad antibacteriana

FlavonasTriterpenosAlcaloidesCumarinas

AntocianinasAntraquinon

asSaponnasEsteroles

Alchornea triplinervia y Cedrela odorata, constituyen alternativas promisorias para

combatir a Pseudomonas aeruginosa drogorresistentes, tan igual como lo son

Tabernaemontana maxima y Tabernaemontana markgrafiana para

Staphylococcus aureus drogorresistentes.

AGRADECIMIENTOS

Al Centro de Investigaciones de Recursos Naturales de la Amazonia de la UNAP, por brindar el financiamiento al Proyecto de Investigación: SENSIBILIDAD A EXTRACTOS VEGETALES DE PATÓGENOS NOSOCOMIALES AISLADOS DEL HARDWARE DE COMPUTADORAS, CON ÉNFASIS EN BACTERIAS DROGORRESISTENTES.

A los ex tesistas: A los tesistas: Daniela Da Cunha Najar Betsabeth Trinidad Guzmán Esther García Satalay Emperatriz Morales Amaringo Ricardo Abadie Saénz Manuel Ruiz Panaifo Ronald Medina Olimar Edgard Valderrama Rojas Cecilia Barbarán Urresti, Priscilla del Àguila Guevara Manuela Ruiz Miranda Karla Laury Silva

Gavy Paredes Sánchez. Milca Eléspuru Shuña

Janina Tello Lozano