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Aportaciones Dra Inés Fuentes Noriega
Lab 113, conjunto E, Facultad de Química UNAM
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Introducción
• En el proyecto del desarrollo de un fármaco, actualmente se está dando importancia prioritaria al fármaco con propiedades específicas como un elemento integral del proyecto, estas propiedades de interés primordial incluyen:
• - Propiedades estructurales: Uniones hidrógeno, lipofilicidad, peso molecular, pKa, área superficial polar, forma y reactividad.
• - Propiedades fisicoquímicas: Solubilidad, permeabilidad y estabilidad química.
• - Propiedades bioquímicas: Metabolismo (fase I y II), uniones a tejido y proteínas y transporte (salida, eflujo).
• - Farmacocinética y toxicidad: Depuración, vida media, biodisponibilidad, interacción fármaco-fármaco y LD50.
•
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• La estructura determina las propiedades del compuesto.
• Cuando esta estructura interactúa con el ambiente físico es a causa de sus propiedades fisicoquímicas (ejemplo, solubilidad) . Cuando esta estructura interactúa con las proteínas, es por causa de sus propiedades químicas (ejemplo, metabolismo).
• A un nivel más alto, cuando las propiedades fisicoquímicas y bioquímicas interactúan con sistemas vivos es por causa de su farmacocinética y toxicidad, y se puede controlar estas propiedades del compuesto al modificar su estructura.
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• Se tendrá una mejor planeación, ejecución e interpretación de los experimentos a nivel de la clínica.
• Se reducirá el tiempo de investigación al conocer estas propiedades en relación a su actividad y estructura.
• El desarrollo farmacéutico será mas rápido y menos costoso, una vida de patente mas larga y una mejor aceptación hacia el paciente y mayor confianza en la seguridad y eficacia
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Laboratorio de Biofarmacia
• En preclínica• Se realizan estudios de:
• Validación de metodología analítica (métodos espectrofotométrico y CLAR). NOM 177, 2013. FDA y OMS.
• Perfil de solubilidad – pH• Determinación de pKa por el método espectrofotométrico• Determinación del coeficiente de determinación octanol/sol. Amortiguadora de pH
7.4 • Cinética del compuesto in vitro: plasma/sangre total• Unión a proteínas por el método de ultrafiltración y diálisis al equilibrio.• Disolución intrínseca del compuesto a estudiar, por el método de Wood.• Estudios de permeabilidad en células MDCK y CaCo2. Colaboración con Dra Lena Ruiz• Farmacocinética preclínica. Colaboración con UNEXA.
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Productos comerciales
• Perfiles de disolución aparente. Estudios en colaboración con empresas farmacéuticas.
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Determinación de pka
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DIALISIS AL EQUILIBRIO
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Condiciones de diálisis al equilibrio
Extracción en plasma.
Celda de menor grosor: solución amortiguadora 0.064M
pH=7.4,
Celda de mayor grosor: muestra del f´rmaco en plasma
(humano o rata) o solución de albúmina al 4% o sol de alfa
glicoproteína
•Solución amortiguadora de fosfatos 0.064 M pH=7.4•Solución de albumina
•Solución de alfa-glicoproteína•Solución patrón del fármaco•Solución del fármaco en plasma
Preparación de soluciones
Cuantificación por algún métodoanalítico
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Método por ultrafiltración
Se preparan soluciones del fármaco en albumina (45 mg/mL) , en -glicoproteína (1 mg/mL) y en plasma humano por triplicado cada una.
- Se colocan 0.5 mL de cada una en los cartuchos de ultrafiltración Nanospin 10,000 MWCO, se centrifugan por 30 minutos a 15 000 rpm y se toman 100 uL del ultrafiltrado para analizarlos por CLAR.
- Se corre una curva en el fluído correspondiente y se calculo la concentración del fármaco libre, de tal forma que la unida se calculó por:
Cunido = Ct - Clibre.
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Técnica de ultrafiltración
Mezcla Introducción dentrode la unidad defiltrado
Aplicación de vacióa sequedad
Macrosoluto yligando
Obtención delligando permeablea la membrana
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ESTUDIOS DEPERMEABILIDAD:Concentración inhibitoria 50 (CI50)
Proliferación celular Inocular células en placas tipo ELISA
Administrar Casiopeína ® III-ia
Fijar célulasTeñir con
sulforrodamina BExtraer el colorante
Analizar con un lector de
microplacas a 564 nm
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Estudios de permeabilidad
Proliferar células Inocular en celdas
TranswellMedir resistencia
transepitelial
Según la dirección del ensayo, colocar la Casiopeína ® III-
ia
Muestrear en intervalos de 15
minutos
Verificar integridad de la membrana
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Control de calidad de la membrana
Colocar en la parte apical Lucifer
yellow
Exponer el tiempo total del
experimento en las mismas condiciones
Muestrear
Leer en fluorometro
A 485nm de excitación y 538 nm de emisión
Si el paso del luciferyellow es mayor al
1% se rechaza
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Métodos para determina la disolución intrínseca
• Método de la tableta suspendida
• Método del disco rotatorio
• Método del disco estático
• MÉTODO DE WOOD
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Perfil general de disolución Intrínseca