universidad central del ecuador … · con experiencias buenas y malas, donde siempre hemos luchado...
TRANSCRIPT
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE QUÍMICA DE ALIMENTOS
ESTUDIO DE NIVELES DE CAFEÍNA Y TAURINA EN COMPARACIÓN CON LA
NORMA TÉCNICA ECUATORIANA INEN 2411:2008, PARA UNA MUESTRA DE LA
POBLACIÓN DE BEBIDAS ENERGÉTICAS COMERCIALES DEL PAÍS.
AUTOR: Jorge Washington Regalado Mogollón
e-mail: [email protected]
Tesis de Grado para optar por el Título Profesional de:
QUÍMICO DE ALIMENTOS
Tutor: MSc. Raúl Alfonso Bahamonde Soria
e-mail: [email protected]
Quito, Diciembre del 2014
ii
Regalado Mogollón, Jorge Washington (2014). Estudio de niveles de
cafeína y taurina en comparación con la Norma Técnica
Ecuatoriana INEN 2411:2008, para una muestra de la
población de bebidas energéticas comerciales del país.
Trabajo de investigación para optar por el grado de
Químico de Alimentos. Carrera de Química de Alimentos.
Quito: UCE. 106 p.
iii
DEDICATORIA
Especialmente a Dios, por ser la luz que guía nuestras vidas.
A mis padres Patricio y Rosario, por haberme dado una vida llena de amor con la mejor
educación y una familia con quien compartir y dedicar mi vida.
A mí adorada esposa y mi precioso hijo que me brindan su amor puro y sincero quienes han sido
mi fortaleza para cumplir mis metas.
A mis hermanos Medardo y Rocío, y a todos mis seres queridos, que siempre me han apoyado
para llegar a cumplir mis anhelos y sueños.
A mis amigos que lucharon conmigo para siempre salir adelante.
A todos ustedes les dedico esta investigación.
iv
AGRADECIMIENTOS
A la Universidad Central del Ecuador, a la Facultad de Ciencias Químicas y a todos los profesores
que durante el tiempo de mi formación superior supieron brindarme sus conocimientos para ser útil
a la sociedad y a la patria.
A mi tutor de tesis Doctor Raúl Bahamonde, por guiarme y brindarme sus valiosos conocimientos,
en la elaboración de este trabajo de investigación, gracias por el tiempo dedicado en este esfuerzo
por culminar una etapa más de mi vida.
A los miembros de mi tribunal, Dra. Liliana Naranjo y Dra. Beatriz Vargas, por el tiempo brindado
para ayudarme en mi meta de llegar a ser un profesional.
Al apoyo de la Dra. Ana María Hidalgo en el Laboratorio OSP de Alimentos, mil gracias por su
ayuda con los equipos necesarios para terminar este trabajo de investigación.
A la Dra. Guadalupe Jibaja y el Dr. Oscar Luzuriaga, gracias por brindarme su apoyo durante todo
el transcurso de mis estudios con sus sabios consejos.
Al Ing. Sixto Leiva, Gerente del Centro de Distribución y al Ing. Eduardo Castro, Jefe del Área de
Alimentos Perecederos de Corporación Favorita C.A., gracias por brindarme el apoyo con la
información y tiempo necesario para cumplir mis objetivos.
A toda mi familia, por su amor incondicional y en especial a mis padres, quienes siempre me
aconsejaron, para llegar a ser un hombre de bien y cumplir con mis metas.
A la valiosa ayuda del Dr. Geovanny Garófalo y la Quím. Paola Cifuentes por brindarme su tiempo
y guiarme en la elaboración de este trabajo de investigación.
A mis grandes amigos Mireya, Verónica y Luis, con quienes he compartido mi vida de estudiante
con experiencias buenas y malas, donde siempre hemos luchado para salir adelante.
A todos ustedes, muchas gracias.
v
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
INFORME DEL TRIBUNAL CALIFICADOR
vi
vii
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
INFORME DEL TRIBUNAL CALIFICADOR
viii
LUGAR DONDE SE REALIZÓ LA INVESTIGACIÓN
El presente tema “ESTUDIO DE NIVELES DE CAFEÍNA Y TAURINA EN COMPARACIÓN
CON LA NORMA TÉCNICA ECUATORIANA INEN 2411:2008, PARA UNA MUESTRA DE
LA POBLACIÓN DE BEBIDAS ENERGÉTICAS COMERCIALES DEL PAÍS”, se realizó en la
provincia de Pichincha, Parroquia Eloy Alfaro, los análisis se realizaron en la ciudad de Quito, en
las instalaciones de los laboratorios de Oferta de Servicios y Productos (OSP) Área de Alimentos,
de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador, calle Francisco Viteri
s/n y Gato Sobral.
ix
CONTENIDO
Pág.
RESUMEN DOCUMENTAL ................................................................................................... xviii
SUMMARY ................................................................................................................................ xix
CAPÍTULO I ................................................................................................................................ 1
1. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 1
1.1. Planteamiento del problema................................................................................................ 1
1.2. Formulación del problema .................................................................................................. 2
1.3. Objetivos ............................................................................................................................. 2
1.3.1. Objetivo general............................................................................................................. 2
1.3.2. Objetivos Específicos .................................................................................................... 2
1.4. Importancia y justificación de la investigación .................................................................. 2
CAPÍTULO II .............................................................................................................................. 4
2. MARCO TEÓRICO ................................................................................................................... 4
2.1. Antecedentes ......................................................................................................................... 4
2.2. Fundamento teórico ............................................................................................................... 6
2.2.1. La Industria de las bebidas energéticas en el mundo y en el Ecuador ........................... 6
2.2.2. Bebidas energéticas ....................................................................................................... 6
2.2.2.1. Tipos de bebidas energéticas ......................................................................................... 7
2.2.2.2. Acción de las bebidas energéticas ................................................................................. 7
2.2.2.3. Composición química .................................................................................................... 7
2.2.3. Química de algunas bebidas energéticas ....................................................................... 9
2.2.4. Cafeína ........................................................................................................................... 9
2.2.4.1. Generalidades ................................................................................................................ 9
2.2.4.2. Propiedades físico -químicas. ...................................................................................... 10
2.2.4.3. Principales fuentes. ...................................................................................................... 11
2.2.4.4. Epidemiologia del consumo. ....................................................................................... 11
2.2.4.5. Mecanismos de acción ................................................................................................. 12
2.2.4.6. Efectos farmacológicos ................................................................................................ 12
x
2.2.4.7. Farmacocinética ........................................................................................................... 13
2.2.4.8. Toxicología .................................................................................................................. 15
2.2.4.9. Cafeína en bebidas ...................................................................................................... 15
2.2.4.10. Bebidas energéticas .................................................................................................. 16
2.2.5. Taurina ......................................................................................................................... 16
2.2.6.1. Generalidades .............................................................................................................. 16
2.2.6.2. Propiedades físico-químicas. ....................................................................................... 16
2.2.6.3. Principales fuentes. ...................................................................................................... 17
2.2.6.4. Epidemiologia del consumo. ....................................................................................... 17
2.2.6.5. Mecanismo de acción .................................................................................................. 17
2.2.6.6. Efectos farmacológicos. ............................................................................................... 17
2.2.6.7. Farmacocinética ........................................................................................................... 18
2.2.6.8. Toxicología .................................................................................................................. 18
2.2.6.9. Taurina en bebidas ....................................................................................................... 18
2.3. Métodos empleados en la determinación de cafeína y taurina en alimentos ..................... 19
2.3.1. Muestreo y preservación de la muestra........................................................................ 19
2.3.2. Técnicas de separación, identificación y cuantificación .................................................. 19
2.3.3. Cromatografía .............................................................................................................. 20
2.3.4. Determinación de cafeína por H.P.L.C. ....................................................................... 20
2.3.5. Determinación de taurina por H.P.L.C. ....................................................................... 20
2.5. Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) ....................................................... 20
2.5.1. Columnas ..................................................................................................................... 22
2.5.2. Detectores .................................................................................................................... 22
2.6. Fundamento legal ................................................................................................................ 22
CAPÍTULO III ........................................................................................................................... 26
3. METODOLOGÍA .................................................................................................................... 26
3.1. Tipo de investigación ............................................................................................................ 26
3.2. Variables de la investigación ............................................................................................... 26
3.2.1. Variables independientes ............................................................................................. 26
xi
3.2.2. Variables dependientes ................................................................................................ 26
3.3. Población y muestra ............................................................................................................ 26
3.3.1. Población ..................................................................................................................... 26
3.3.2. Muestra ........................................................................................................................ 27
3.4. Diseño metodológico ........................................................................................................... 28
3.4.1. Identificación de las marcas comercializadas en el país .............................................. 28
3.4.2. Muestreo ...................................................................................................................... 28
3.4.3. Recolección y codificación de las muestras ................................................................ 28
3.5. Determinación del método de análisis ................................................................................. 29
3.6. Equipo y materiales ............................................................................................................. 29
3.7. Reactivos y disolventes ....................................................................................................... 29
3.8. Preparación de soluciones ................................................................................................... 29
3.8.1. Preparación de la solución buffer de acetato de sodio ................................................. 29
3.8.2. Preparación de la fase móvil ........................................................................................ 30
3.8.3. Preparación de soluciones estándar de cafeína ............................................................ 30
3.8.4. Preparación de soluciones estándares de taurina ......................................................... 30
3.9. Condiciones Cromatográficas ............................................................................................. 31
3.10. Tratamiento de las muestras para la determinación de cafeína y taurina ............................ 31
3.11. Hipótesis de la investigación ............................................................................................... 32
3.11.1. Contenido de cafeína ................................................................................................... 32
3.11.2. Contenido de taurina .................................................................................................... 32
3.12. Aplicación del método ......................................................................................................... 32
3.13. Parámetros del diseño experimental .................................................................................... 33
3.14. Análisis Estadístico ............................................................................................................. 34
3.15. Análisis de Varianza ............................................................................................................ 34
3.16. Hipótesis del Análisis de Varianza ...................................................................................... 35
3.16.1. Hipótesis para el contenido de cafeína ........................................................................ 35
3.16.2. Contenido de taurina .................................................................................................... 36
3.17. Prueba de DMS (Diferencia Mínima Significativa) ............................................................ 36
xii
3.18. Distribución t de Student ..................................................................................................... 37
CAPÍTULO IV ........................................................................................................................... 38
4. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ........................................................ 38
4.1. Análisis de resultados y obtención de las curvas de calibración de cafeína y taurina ......... 38
4.1.1. Registro de resultados y curvas de calibración de cafeína y taurina…… .................... 38
4.1.2. Ecuaciones de las rectas de regresión .......................................................................... 39
4.1.3. Cálculo de los intervalos de confianza ........................................................................ 40
4.2. Aplicación del método cromatográfico en la determinación de cafeína y taurina .............. 43
4.2.1. Registro de las áreas obtenidas de los picos de cafeína y taurina en el análisis de las
bebidas energéticas ................................................................................................................... 43
4.3. Cálculo de la concentración de cafeína y taurina en las bebidas energéticas ...................... 44
4.3.1. Cálculo de la concentración de cafeína........................................................................ 44
4.3.2. Cálculo de la concentración de taurina ........................................................................ 45
4.4. Análisis estadístico para la concentración de cafeína .......................................................... 47
4.4.1. Análisis de varianza para la concentración de cafeína................................................. 47
4.4.2. Prueba DMS (Diferencia Mínima Significativa) ......................................................... 48
4.4.3. Prueba t-student para los tratamientos ......................................................................... 48
4.5. Análisis estadístico para la concentración de taurina .......................................................... 50
4.5.1. Análisis de varianza para la concentración de taurina ................................................. 50
4.5.2. Prueba DMS (Diferencia Mínima Significativa) ......................................................... 51
4.5.3. Prueba t-student para los tratamientos ......................................................................... 52
CAPÍTULO V ............................................................................................................................. 54
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ....................................................................... 54
5.1. Conclusiones ....................................................................................................................... 54
5.2. Recomendaciones ................................................................................................................ 55
BIBLIOGRAFÍA ......................................................................................................................... 56
ANEXOS ..................................................................................................................................... 60
xiii
LISTA DE TABLAS
Pág.
Tabla 2. 1. Composición de diferentes marcas de bebidas energéticas .............................................. 9
Tabla 2. 2. Características de la cafeína ........................................................................................... 10
Tabla 2. 3 Características de la Taurina ........................................................................................... 16
Tabla 3. 1. Población de bebidas energéticas ................................................................................... 27
Tabla 3. 2. Muestra de bebidas energéticas ...................................................................................... 27
Tabla 3. 3 Códigos y los lotes de las diferentes bebidas energéticas recolectadas........................... 28
Tabla 3. 4 Preparación de disoluciones estándar de cafeína ............................................................ 30
Tabla 3. 5. Preparación de las disoluciones estándar de taurina ...................................................... 31
Tabla 3. 6. Condiciones de trabajo en HPLC .................................................................................. 31
Tabla 3. 7. Parámetros del diseño experimental ............................................................................... 33
Tabla 3. 8. Arreglo de datos para la distribución de bloques completamente al azar. ..................... 34
Tabla 3. 9. Esquema del análisis de varianza para DBCA con submuestras. ................................... 35
Tabla 4. 1 Datos experimentales para la obtención de las curvas de calibración de cafeína .......... 38
Tabla 4. 2. Datos experimentales para la obtención de las curvas de calibración de taurina .......... 38
Tabla 4. 3. Valores de pendiente y ordenada al origen de las curvas de calibración de cafeína ...... 39
Tabla 4. 4. Valores de pendiente y ordenada al origen de las curvas de calibración de taurina ...... 39
Tabla 4. 5. Ecuación de la recta de regresión de cafeína .................................................................. 40
Tabla 4. 6. Ecuación de la recta de regresión de taurina .................................................................. 40
Tabla 4. 7. Límite de confianza de la pendiente (b) y la ordenada al origen (a) para la curva de
calibración de cafeína ....................................................................................................................... 41
Tabla 4. 8. Intervalos de confianza de la pendiente (b) y de la ordenada al origen para la curva de
calibración de taurina ....................................................................................................................... 41
Tabla 4. 9. Lectura de las áreas correspondientes a los picos de cafeína y taurina en las muestras de
bebidas energéticas ........................................................................................................................... 43
Tabla 4. 10. Concentraciones de cafeína y taurina en las muestras de bebidas energéticas ............. 46
Tabla 4. 11. Análisis de Varianza .................................................................................................... 47
Tabla 4. 12. Comparación de los tratamientos mediante la prueba DMS para la concentración de
cafeína. ............................................................................................................................................. 48
xiv
Tabla 4. 13 Resultados de la prueba de hipótesis sobre la la concentración de cafeína; nivel de
significancia = 0.05, n = 9. Tomando como valor referencial el nivel inferior de la norma INEN
(250mg/L). ....................................................................................................................................... 49
Tabla 4. 14. Resultados de la prueba de hipótesis sobre la la concentración de cafeína; nivel de
significancia = 0.05, n = 9. Tomando como valor referencial el nivel superior de la norma INEN
2411:2008 (350mg/L). ..................................................................................................................... 49
Tabla 4. 15. Análisis de Varianza .................................................................................................... 50
Tabla 4. 16. Comparación de los tratamientos mediante la prueba DMS para la concentración de
taurina. .............................................................................................................................................. 51
Tabla 4. 17. Resultados de la prueba de hipótesis sobre la la concentración de taurina; nivel de
significancia = 0.05, n = 9. Tomando como valor referencial de la norma INEN 4000mg/L. ..... 52
xv
LISTA DE FIGURAS
Pág.
Figura 2. 1 Metabolismo de la cafeína según ................................................................................... 14
Figura 2. 2 Esquema HPLC............................................................................................................. 21
Figura 4. 1. Intervalo de confianza para la curva de calibración de cafeína .................................... 42
Figura 4. 2. Intervalos de confianza de la curva de calibración de taurina ...................................... 42
Figura 4. 3. Resultados del análisis de cafeína en las bebidas energéticas ...................................... 50
Figura 4. 4 Resultados del análisis de taurina en las bebidas energéticas ........................................ 53
xvi
LISTA DE ECUACIONES
Pág.
Ecuación 3. 1. Ecuación de la recta de regresión ............................................................................. 33
Ecuación 3. 2. Concentración de cafeína considerando el factor de dilución .................................. 33
Ecuación 3. 3. Concentración de taurina considerando el factor de dilución ................................... 33
Ecuación 3. 4. Diferencia Mínima Significativa .............................................................................. 36
Ecuación 3. 5. Ecuación de la Distribución t de Student ................................................................. 37
Ecuación 4. 1. Intervalo de confianza para la pendiente .................................................................. 40
Ecuación 4. 2. Intervalo de confianza para la ordenada al origen .................................................... 40
Ecuación 4. 3. Cálculo de la concentración de cafeína en las bebidas energéticas .......................... 44
Ecuación 4. 4. Cálculo de la concentración de taurina en las bebidas energéticas .......................... 45
xvii
LISTA DE ANEXOS
Pág.
Anexo 1. Norma Técnica Ecuatoriana NTE INEN 2411:2008. Bebidas Energéticas ...................... 60
Anexo 2. Tabla militar estándar ....................................................................................................... 65
Anexo 3. Información Comercial Supermaxi (Bebidas Energéticas) .............................................. 67
Anexo 4. Tabla de composición de diferentes bebidas energéticas ................................................. 69
Anexo 5. Método oficial de la AOAC 29.1.14: Determinación de cafeína ...................................... 70
Anexo 6. Método oficial de la AOAC 50.1.07A: Determinación de taurina ................................... 71
Anexo 7. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 1 ...................................... 74
Anexo 8. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 2 ...................................... 76
Anexo 9. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 3 ...................................... 78
Anexo 10. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 5 .................................... 80
Anexo 11. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 6 .................................... 82
Anexo 12. Cromatograma de cuantificación de taurina en el estándar N. 1 .................................... 84
Anexo 13. Cromatograma de cuantificación de taurina en el estándar N. 2 .................................... 86
Anexo 14. Cromatograma de cuantificación de taurina en el estándar N. 4 .................................... 88
Anexo 15. Cromatograma de cuantificación de taurina en la bebida energética LM1 .................... 90
Anexo 16. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética 0M2 ..... 92
Anexo 17. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética TM3 ..... 94
Anexo 18. Cromatograma de cuantificación de cafeina y taurina en la bebida energética NM4..... 96
Anexo 19. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética AM5..... 98
Anexo 20. Gráficas de las 4 curvas de calibración para cafeína: ................................................... 100
Anexo 21. Gráficas de las 4 curvas de calibración para Taurina: .................................................. 102
Anexo 22. Distribución F para el análisis de varianza ................................................................... 104
Anexo 23. Valores RES para la prueba DMS (Diferencia Mínima Significativa) ......................... 104
Anexo 24. Tabla de distribución t de student ................................................................................. 106
xviii
RESUMEN DOCUMENTAL
Todas las bebidas energéticas se encuentran al alcance de los diferentes grupos de la población
ecuatoriana ya que son de libre consumo, estas bebidas buscan elevar el desempeño físico y mental
aumentando los niveles de energía. Se realizó un estudio para cuantificar y categorizar las bebidas
energéticas existentes en el mercado, en base a la composición y concentración de los principales
estimulantes del SNC.
Mediante esta investigación se determinó de forma cuantitativa las concentraciones de cafeína y
taurina en cinco marcas de bebidas energéticas comerciales del país tomado completamente al azar
según la Tabla Militar Estándar MSP, evaluadas mediante un DBCA y comparado con la Norma
Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008 utilizando una Distribución t de Student para determinar si
existen diferencias significativas.
Las muestras fueron analizadas mediante el método de Cromatografía Líquida de Alta Resolución,
implementados en el laboratorio OSP de Alimentos. Se realizó la determinación de cafeína y
taurina en tres lotes con tres repeticiones de cada lote. De esta manera se logró cuantificar en
función de la concentración de cafeína y taurina en comparación con la Norma Técnica Ecuatoriana
INEN 2411:2008; obteniéndose para cafeína los siguientes resultados: un 20% de bebidas
energéticas que cumplen con la norma de cafeína, el 60% se encuentra por debajo del límite
inferior y el 20% se encuentra sobre el nivel superior; y para taurina el 100% de bebidas
energéticas cumple con la norma señalada.
PALABRAS CLAVES: BEBIDAS ENERGÉTICAS, CAFEÍNA, CROMATOGRAFÍA
LIQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN, ESTIMULANTE SISTEMA NERVIOSO CENTRAL,
NORMA TÉCNICA ECUATORIANA INEN 2411:2008, TAURINA.
xix
SUMMARY
All energy drinks are available to different groups of the Ecuadorian population as they are free
consumption, these energy drinks seek to boost physical and mental performance by increasing
energy levels. A study was conducted to quantify and categorize existing energy drinks on the
market, based on the composition and concentration of the main CNS stimulants.
Through this research was determined quantitatively concentrations of caffeine and taurine in five
brands of commercial energy drinks in the country, in a completely random way, according to the
Military Table Standard MSP, the samples were evaluated using a completely Randomized Block
Design, and compared with INEN Ecuadorian Technical Standard 2411: 2008 using a Student's t
distribution to determine if significant differences exist.
Samples were analyzed by the method of High Performance Liquid Chromatography, implemented
in the OSP Food Laboratory, and making the determination of caffeine and taurine in three batches
with three replicates of each batch. In this way it was possible to quantify, in terms of the
concentration of caffeine and taurine, compared with INEN Ecuadorian Technical Standard 2411:
2008; for caffeine obtaining the following results: 20% of energy drinks that meet the standard of
caffeine, 60% is below the lower limit and 20% is located on the upper level; and 100% taurine
energy drinks meets with the standard indicated.
KEY WORDS: CAFFEINE, CENTRAL NERVOUS SYSTEM STIMULANT, ENERGY
DRINKS, INEN ECUADORIAN TECHNICAL STANDART 2411:2008, HIGH
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY, TAURINE.
1
CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN
1.1. Planteamiento del problema
Se conoce que las bebidas energéticas son un grupo de productos que se consumen ampliamente en
nuestro país. Algunos son importados y otros fabricados por la industria nacional, están disponibles
para ser adquiridos por los consumidores sin ningún tipo de restricciones.
Son bebidas que gozan de una alta popularidad y publicidad por sus propiedades estimulantes y las
características de inocuidad que se les atribuyen. La población que las consume es variada, lo hacen
atletas, estudiantes y ejecutivos durante la actividad física, intelectual o en general se busca aumentar
los niveles de energía, evitar el sueño e incluso disminuir el apetito o reducir de peso, sin importar
edad, condición física o estado de salud.
Existe mucha confusión entre los conceptos de bebidas hidratantes y energéticas, llevando a que se
utilicen los términos de forma intercambiable. Las bebidas hidratantes surgieron en Estados Unidos en
los años sesenta cuando la universidad de Florida desarrolló una fórmula de carbohidratos y
electrolitos para mejorar el desempeño de un grupo de jugadores de fútbol americano y para prevenir
la deshidratación.
Por su parte, las bebidas energéticas surgieron en Escocia y en Japón con el objetivo de aumentar la
energía y la concentración; inicialmente se componían de una mezcla de vitaminas y luego se les
adicionaron la cafeína y los carbohidratos, surgiendo el Red Bull. Esta bebida gozaba de buena
popularidad en Europa pero al llegar a los Estados Unidos las estrategias mercantiles tradicionales no
funcionaron, por lo que empezaron a patrocinar a deportistas aéreos y aviadores aficionados. Más
adelante, las bebidas energéticas entraron a los bares haciendo parte de las mezclas para cocteles con
lo que su popularidad aumentó. Se puede afirmar que las bebidas energéticas surgen por su efecto
estimulante mental, tienen altos niveles de cafeína, taurina y glucuronolactona, mientras que las
bebidas hidratantes no contienen cafeína o la tienen en niveles bajos.
En líneas generales, si el deportista tiene una dieta adecuada no es necesario el uso de estos productos
para una buena hidratación. Los estudios muestran que al usar ambos tipos de bebidas, las personas
tienen una percepción diferente de su desempeño aunque objetivamente esta diferencia no se
documente.
2
De manera particular el consumo de bebidas energéticas se ha extendido en los últimos años y con ello
la discusión acerca del contenido de sustancias estimulantes en sus formulaciones. El principal problema
se encuentra concretamente, en los altos niveles de cafeína y taurina, ambos componentes pueden
provocar alteraciones en la frecuencia cardiaca y en la tensión arterial, así como arritmias y taquicardias
que pueden ser especialmente peligrosas para los enfermos de corazón.
1.2. Formulación del problema
En el país la NORMA TÉCNICA ECUATORIANA INEN 2411:2008. BEBIDAS ENERGÉTICAS,
establece los requisitos que deben cumplir las bebidas que por su composición química induzcan al
organismo humano sano y maduro a mejorar su desempeño fisiológico, no se encuentran en el Ecuador
estudios acerca de los niveles de cafeína y taurina en estos productos por lo cual el presente proyecto
investigativo busca levantar una estadística muestral, sobre si las bebidas energéticas de expendio libre
cumplen con los niveles permisibles según la norma INEN señalada, para que de acuerdo a su contenido
químico sean destinadas a ciertos fragmentos de la población.
1.3. Objetivos
1.3.1. Objetivo general
Realizar un estudio de niveles de cafeína y taurina en comparación con la NORMA TÉCNICA
ECUATORIANA INEN 2411:2008. BEBIDAS ENERGÉTICAS, para una muestra de la
población de bebidas energéticas comerciales del país.
1.3.2. Objetivos Específicos
Identificar las marcas comerciales de las diferentes bebidas energéticas expendidas en el país.
Tomar muestras de la población completamente al azar de bebidas energéticas en el país.
Establecer la metodología y parámetros para analizar cuantitativamente los niveles de cafeína
y taurina en bebidas energéticas.
Comparar los resultados experimentales con la NORMA TÉCNICA ECUATORIANA INEN
2411:2008. BEBIDAS ENERGÉTICAS.
1.4. Importancia y justificación de la investigación
Las bebidas energéticas tienen amplia distribución dentro del mercado ecuatoriano, su consumo
aumentado debido al fácil acceso en supermercados. El poco conocimiento de sus características lleva
a confusión con las bebidas hidratantes usándolas de forma indiscriminada, aunque las bebidas
hidratantes buscan prevenir la deshidratación y las energéticas tienen un efecto estimulante.
3
Las bebidas energéticas, tienen en su composición algunos ingredientes que pueden llegar a ser
nocivos para el organismo. No existen datos en el Ministerio de Salud acerca del consumo de estos
productos pero una encuesta realizada en el 2008 por la Universidad Tecnológica Equinoccial se
revela que en un grupo de 300 personas el 74,67% consumen bebidas energéticas y de ellas el 48,66%
se inclinan por el consumo de V220, seguido de RED BULL con 31,70% y CICLON con 9,38%.
(Bosmediano, 2008)
En el país según un reporte de ventas mensual del Sistema de Información Comercial Supermaxi,
una de las principales compañías ecuatorianas dedicadas al servicio y comercio, que se ha
caracterizado por ser la líder en comercio minorista, reporta entre las bebidas más vendidas a; 220V,
RED BULL, VOLCAN, MONSTER ENERGY, MOKE UP ENERGIZANTE.
El estudio es de relevante importancia para la industria alimentaria, ya que un análisis cuantitativo de
cafeína y taurina permitiría conocer si se está cumpliendo con los niveles establecidos en la
fabricación de bebidas carbonatadas para su debida autorización, y con ello proporcionar productos de
calidad que no causen efectos secundarios al consumidor.
4
CAPÍTULO II
2. MARCO TEÓRICO
2.1. Antecedentes
El consumo de bebidas no alcohólicas es de carácter masivo y la industria dedicada a la elaboración de
estas bebidas energéticas tiene una particular importancia dentro de la producción y desarrollo de la
economía ecuatoriana. (Puruncajas, 2011), según estadísticas del Ministerio de Industrias y
Productividad (MIPRO) demuestran un aumento en las importaciones, en el año 2005 se registra
importaciones de 17791 mil dólares y para el año 2007 suben a 27481 mil dólares, con un crecimiento
del 54,47%; tendencia que seguía hasta el 2011.
Las bebidas energéticas encontradas en el mercado actual tienen en su composición sustancias
químicas como la cafeína y taurina que son sustancias con posibles efectos sobre la salud. (EFSA,
2013)
Un reciente informe de la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) casi el 20% de los
menores de diez años toma una media de dos litros mensuales de bebidas energéticas.
En la encuesta participaron más de 52000 personas de los 27 estados miembros de la Unión Europea
(UE). Los participantes, de edades comprendidas entre los 3 y 65 años, fueron seleccionados para dar
una cobertura adecuada de población y de diferentes patrones de consumo. Se dividió a los voluntarios
en tres grupos, en función de su edad: niños de 3 a 10 años (5500), adolescentes (32000) y adultos
(14500). (EFSA, 2013)
Los resultados obtenidos demostraron que, dos de cada diez menores de 10 años toman bebidas
energéticas. Para cualquier profesional sanitario, comprobar que el 18% de los niños consume bebidas
energéticas supone un serio motivo de preocupación, ya que beben una media de dos litros mensuales
y de entre estos niños "consumidores", alrededor del 16% son "altos consumidores crónicos", ya que
su ingesta media mensual asciende a 4 litros.
Los menores de doce años no deberían probarlas, ya que en ellos el riesgo de intoxicación por cafeína
es alto (estas bebidas suelen tener cantidades muy altas), y en niños mayores este riesgo también
existe, por lo que se debería desaconsejarlas de forma clara.
Entre los perjuicios que pueden ocasionar en los niños, según un estudio publicado en marzo de 2011
en la revista Pediatrics, menciona: menor sensación de bienestar, trastornos del estado de ánimo, baja
autoestima, depresión, bajo rendimiento escolar, mala calidad del sueño, obesidad infantil, aumentos
5
de la tensión arterial, incrementos indeseables de la glucemia (relacionados con el riesgo de diabetes),
problemas dentales, óseos entre otros. (Basulto, 2013)
Se agrega la necesidad de que las autoridades sanitarias alerten sobre los riesgos de las bebidas
energéticas en niños y apliquen normas estrictas sobre su publicidad. (BIWEL, 2013)
En Estados Unidos, la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) anunció en noviembre
del año 2012 que una bebida conocida como 5-Hour Energy, ha aparecido citada en los informes
forenses de 13 muertes producidas en los últimos tiempos. A comienzos del mismo mes, ya señaló que
abriría una investigación sobre cinco muertes relacionadas con el consumo de bebidas Monster
Energy.
Según un artículo publicado en The New York Times, existen un total de 90 demandas relacionadas
con este tipo de bebidas desde 2009, 30 de las cuales tenían relación con patologías graves, como
ataques al corazón, convulsiones y abortos espontáneos. (Barnés, 2012)
En Francia, Noruega y Dinamarca se venden las bebidas energéticas solo en farmacias. En Argentina y
Uruguay, se condiciona el contenido de cafeína y taurina. En Paraguay no existe limitación ni
advertencia alguna en el alto contenido de cafeína que poseen estos productos que es de más de 32
mg/100mL. Puerto Rico busca limitar la comercialización libre al público a través de una ley y ha
comenzado a multar a los locales que ofrecen las bebidas energéticas, muy popular entre estudiantes y
universitarios. En Colombia, Chile y Ecuador también evalúan restringir o limitar la venta libre de las
sustancias.
Un estudio de cafeína menciona que el consumo agudo o crónico de esta puede dar lugar a una amplia
variedad de efectos adversos, intoxicaciones e incluso la muerte. Finalmente, se destaca que la cafeína
puede considerarse una droga de abuso. (Parado, Alvarez García, Barral, & Albaladejo, 2007)
En lo que concierne a la taurina Tlhe University of Utah Health Care Center, informa que consumir
un suplemento de sólo un aminoácido como la taurina puede descompensar el balance natural de
nitrógeno, esto puede dar paso a una disminución en la eficiencia metabólica y causar tensión arterial
que puede afectar la salud de los riñones.
El New York University Langone Medical Center advierte que sólo se debe ingerir suplementos de
taurina que cumplan con altos estándares de calidad. Incluso el más mínimo contaminante en el
suplemento puede ser importante si se lo ingiere en altas cantidades. (Langone, NYU Medical Center,
2011)
Esto despierta la necesidad de un estudio acerca de los niveles de cafeína y taurina. Su análisis ha
alcanzado una fundamental importancia, esto a causa de su uso en la industria farmacéutica y
6
alimentaria; ya sea como ingrediente en la elaboración de refrescos y bebidas energéticas, o por su
presencia en otros productos. Se han desarrollado nuevos métodos instrumentales para su
determinación en diversas matrices. Los más confiables y robustos se basan en el uso de técnicas
instrumentales de separación (cromatografía de gases, cromatografía líquida de alta resolución y
electroforesis capilar) acoplados con diversas técnicas de detección como la espectroscopia de
absorción molecular UV/Vis y la espectrometría de masas (Schulze & Manson, 2004) (Rivera,
Shamah, Villalpando, Ávila, & Jiménez, 2006)
2.2. Fundamento teórico
2.2.1. La Industria de las bebidas energéticas en el mundo y en el Ecuador
Fueron creadas para deportistas incrementando la resistencia física, proveer reacciones más veloces y
lograr un nivel de concentración mayor, evitar el sueño, proporcionar sensación de bienestar, estimular
el metabolismo y ayudar a eliminar sustancias nocivas para el cuerpo. (Honorable Cámara de
Representantes, 2008)
La mayoría de las marcas que se encuentran en el mercado mundial (alrededor de 200 diferentes) son
de origen austríaco, estando entre las más conocidas: Red Bull, Battery, Maxx, Power Horse, Red
Devil y Dark Dog.
En el mercado mundial de bebidas energéticas se ha visto un crecimiento promedio en su volumen
anual del 14% aproximadamente. En el mercado interno de bebidas no alcohólicas existe gran
diversidad de productos como los jugos de frutas, bebidas energéticas, gaseosas, té saborizados, agua
embotellada entre otros.
Algunas de las marcas que las distribuyen son Aloe Berry Néctar, 220V, FAB Forever Active Boost
Natural Energy Drink, Red Bull, IBHM, Volt entre otras. Es tanto su consumo que las ventas anuales
ascienden a aproximadamente 10 millones de litros de este producto. En Ecuador se habla de 155 mil
latas mensuales, representando 1% del mercado de los refrescos. (Puruncajas, 2011)
2.2.2. Bebidas energéticas
Las bebidas energéticas, deportivas o hipertónicas se describen en la NORMA TÉCNICA
ECUATORIANA INEN 2411:2008. BEBIDAS ENERGÉTICAS, como aquellas bebidas que por
su composición química induzcan al organismo humano sano y maduro a mejorar su desempeño
fisiológico.
7
2.2.2.1. Tipos de bebidas energéticas
Las bebidas carbonatadas no alcohólicas se dividen en:
a. Bebidas sin sabor: no contienen jarabe, ni colorantes que alteren el sabor del agua.
b. Bebidas con sabor: bebida que se obtiene por disolución de azúcar en agua potable y adición de
dióxido de carbono, acidificantes, colorantes, conservantes y saborizantes, sometida a un proceso
tecnológico apropiado.
c. Bebidas dietéticas: bebidas que contengan una cantidad mínima de azúcar blanca o de jarabe
simple, su elaboración es a base de edulcorante, que son sustituto del azúcar.
2.2.2.2. Acción de las bebidas energéticas
Estas bebidas actúan como estimulantes, regeneradoras, desintoxicadoras y tranquilizantes del
cuerpo, pues trabajan directamente sobre el sistema nervioso, muscular y cardiaco. (Facultad de
Ciencias Medicas, Bogotá, 2013)
Estos atributos son debidos a los ingredientes que contiene la mayoría de estas bebidas como son
taurina, cafeína, guaraná, ginseng, glucuronolactona, vitaminas, minerales, inositol y carnitina entre
otras sustancias.
2.2.2.3. Composición química
Están constituidas por una serie de componentes de distinto origen y de distinta función en el
organismo una vez que hayan sido ingeridos. Los ingredientes y sus porcentajes se modifican según el
fabricante; los más comunes son:
2.2.2.3.1. Agua
Es el compuesto más importante, ya que es el cuerpo de la bebida.
2.2.2.3.2. Carbohidratos
La mayoría de estas bebidas contienen cerca de 20 a 30 gramos de carbohidratos, aunque algunas de
ellas puede pasar de 60 gramos, en forma de monosacáridos y disacáridos como fructuosa, sacarosa
dextrosa, glucosa, maltodextrinas, la glucuronolactona que es un derivado de la glucosa y actúa como
un intermediario en su metabolismo, la D ribosa que es el punto de partida de la producción de ATP.
(Gijón, 2011)
8
2.2.2.3.3. Proteínas
Produce la síntesis de glucógeno muscular durante la recuperación.
2.2.2.3.4. Aminoácidos
Estas bebidas poseen aminoácidos individuales como la glutamina, la arginina, la taurina cuyo efecto
es retardar la fatiga y mejorar el rendimiento.
2.2.2.3.5. Vitaminas
Se encuentran todas la vitaminas del complejo B, así como las vitaminas C y E. Sin embargo, si la
persona mantiene una dieta equilibrada la adición de estos compuestos no dan ningún beneficio y
acaban excretándose (Gijón, 2011).
2.2.2.3.6. Extractos de hierbas
Se emplean hierbas como astragalus, el ginseng, la echinacea para mejorar el sistema inmunológico y
la memoria, de igual manera los extractos de guaraná donde el principio activo es la cafeína.
2.2.2.3.7. Dióxido de carbono
Es un gas incoloro, inodoro y con un ligero sabor ácido, comercialmente se usa en la fabricación de
bebidas carbonatadas, las cuales se encuentran saturadas a una presión de 3 a 4 atmósferas.
2.2.2.3.8. Edulcorantes
El edulcorante utilizado para la mayor parte de bebidas carbonatadas es la sacarosa (azúcar de mesa).
Es utilizada para dar cuerpo a la fórmula y obtener un sabor agradable y dulce.
2.2.2.3.9. Cafeína
La cafeína provoca un estímulo al cerebro al disminuir la acción de la adenosina, un transmisor
nervioso que produce calma. Se genera entonces una sensación de vitalidad, de fuerza durante algunas
horas. Este estado de alerta hace que se aumente la concentración y la resistencia a los mayores
estados físicos y mentales. (Gijón, 2011)
2.2.2.3.10. Taurina
La taurina está presente en pequeñas cantidades en las bebidas energéticas, es un aminoácido esencial
condicionado que se halla en forma natural en el cuerpo y en los alimentos y es uno de los
aminoácidos más abundantes donde hay alta actividad eléctrica, en ojos, en el cerebro, los músculos,
9
el corazón, las plaquetas y el sistema nervioso en desarrollo y sus niveles sanguíneos declinan con la
edad. (Solórzano, 2004)
2.2.3. Química de algunas bebidas energéticas
En el mercado se encuentran diversas bebidas energéticas, como se exponen a continuación algunas de
ellas tomando en cuenta su contenido químico.
Tabla 2. 1. Composición de diferentes marcas de bebidas energéticas
Marca Guaraná
Lamanita
Dynamite
Red bull
Speed
Unlimited
Guaraná
Natural B52
Fructosa (%) 5,4 5,7 0,6 5 5,8 5,9
Glucosa (%) 6,1 6,4 2,6 5,5 5,9 6,1
Sacarosa (%) 1,1 0 8 1,8 0,1 0,2
Azúcares totales (%) 12,6 12,1 11,2 12,3 11,8 12,2
Sórbico (mg/L) 37 0 0 0 0 0
Benzoico (mg/L) 289 0 0 0 0 0
Taurina (g/L) 0 4,6 4 0,7 0 0,5
Cafeína (mg/L) 6 336 341 322 300 263
Vitamina C (mg/L) 0 0 0 138 139 231
Ácido pantoténico(mg/L) 0 5 24 13 6 23
Vitamina B6 (mg/L) 0 23,6 24,8 4,1 4 7,3
Niacina B3 (mg/L) 0 0 81 0 34 62
Riboflavina B(mg/L) 0 0,9 6 0 3,2 0
Ácido fólico (mg/L) 0 0 0 0 0 0,64
Biotina (mg/L) 0 0 0 0,32 0 0
Vitamina B12 (ug/L) 0 0 23,9 0 0 0
Tomado de (Calle S. , 2011)
2.2.4. Cafeína
2.2.4.1. Generalidades
La cafeína es un polvo inodoro, incoloro y amargo. Friedrich Ferdinand Runge la aisló del café en
1819 y del té en 1827, pero su estructura química no se describió hasta 1875 por E. Fischer. También
es conocida por el nombre teína, guaranína o mateína.
10
Ha sido consumida durante siglos a pesar de los intentos repetidos de prohibir su uso por motivos
morales, económicos, médicos o políticos. El descubrimiento del café tuvo lugar en el siglo IX en
Arabia. Se cultivó por primera vez en Etiopía, de la misma forma que el té en China y el cacao en
América del Sur. La cafeína es una sustancia que se encuentra en ciertas plantas naturales y puede
producirse sintéticamente en laboratorio. Se localiza en cantidades variables en las semillas, las hojas
y los frutos. (Carral, 2011)
2.2.4.2. Propiedades físico -químicas.
Este compuesto pertenece a la familia de las metilxantinas, que también abarcan otras sustancias
similares, como son la teofilina y la teobromina.
Tabla 2. 2. Características de la cafeína
Nombre Común Sinonimias Estructura
Cafeína
1,3,7-Trimetilxantina,
Trimetilxantina,
3,7-Dihidro-1,3,7-trimetil-1H-purina-2,6-diona,
Metilteobromina,
Metilteofilina
Aspecto: Cristalino blanco, inodoro en forma de agujas blancas o polvo, con un gusto muy
amargo, eflorescente en contacto con aire.
Propiedades químicas de la cafeína:
Fórmula molecular: C8H10N4O2
Masa molecular: 194.19 g/mol
Solubilidad en agua: Tiene más afinidad por algunos disolventes orgánicos, como el
cloroformo y el diclorometano.
En agua: 22 mg/ml (25 °C)
180 mg/ml (80 °C)
670 mg/ml(100 °C).
Acidez (pKa): 10.4 a 4 °C
Coeficiente de reparto: octanol/agua 0.07
Propiedades físicas:
Punto de sublimación: 178° C
Punto de fusión: 238°C
11
Densidad: 1.23g/mL
DL50: de 150 a 200 miligramos por kilogramo de masa corporal
2.2.4.3. Principales fuentes.
La cafeína es una sustancia que se encuentra naturalmente en ciertas plantas o se produce
sintéticamente y se usa como aditivo en ciertos productos alimenticios. Entre sus principales fuentes
consta el café cuya cantidad de cafeína varía según la calidad del grano, el tiempo y forma de
preparación fluctuando entre 30 y 175 mg por 150 mL, en el descafeinado entre 2 y 8mg por 150mL.
En el té, el segundo producto en contenido de cafeína, la concentración fluctúa entre 20 y 73
mg/100mL. El cacao en menor cantidad se encuentra en alrededor del 0,4%. El contenido de cafeína
del chocolate oscila entre 5 y 20 mg/100g y depende del lugar de procedencia del cacao.
En las plantas como la guaraná, el mate, la cola y el yoco también contienen cafeína en 2 al 4%.
2.2.4.4. Epidemiologia del consumo.
El café representa el principal aporte de cafeína dentro de la dieta del adulto en países como los
EEUU, Finlandia, Suecia, Dinamarca y Suiza. En España se estima que el 80% de la población adulta
tiene un consumo medio de cafeína de entre 200 y 300 mg/día /persona (2 y 3 tazas de café). En niños
menores de 18 años, la ingesta media es de 1 mg/kg/día y las principales fuentes de cafeína son los
refrescos y el chocolate. Hace unos años, la Food and Drug Administration (FDA) de los E.E.U.U.
limitó la cantidad de cafeína en las bebidas carbonatadas a 0,2 mg/mL, por considerarla una sustancia
con potencial adictivo y ser una fuente importante de cafeína en todas las edades. (Moro, Lizasoain, &
Ladero, 2003).
Existen numerosos productos destinados a los niños (refrescos, helados, caramelos) que contienen
cafeína sin ser especificada en la etiqueta. La FDA sólo obliga a indicar la cantidad de cafeína en el
etiquetado del producto cuando se añade de forma intencionada.
En el 2003 se aprobó una nueva normativa europea, que amplía la directiva 2002/67/CE, en la que las
bebidas con un contenido superior a 150 mg/L de cafeína deberán especificarlo en las etiquetas porque
es una información necesaria para niños y embarazadas (Consumaseguridad, 2003).
Las bebidas energéticas están bajo control en algunos países. Así, en el 2004, en Francia, Dinamarca y
Noruega sólo se podía adquirir Red Bull en las farmacias por su alto contenido en cafeína y los
peligros que ello conlleva. Se ha relacionado esta bebida con al menos cuatro fallecidos, un irlandés en
el 2000 y tres suecos en el 2001. En dos de ellos se asoció al consumo de alcohol y en los otros dos
con una actividad física intensa.
12
La prohibición de su venta en Francia se justifica por las posibles interacciones entre los ingredientes
(cafeína, taurina que es un aminoácido y glucuronolactona, un carbohidrato) y el resultado de
experimentos en ratones en los que tras ingerir taurina padecieron, ansiedad, irritabilidad, sensibilidad
al ruido y automutilaciones. Se cree que alto contenido en cafeína podría provocar una deshidratación
en el consumidor que realiza un ejercicio físico intenso.
En el 2001 en Suecia se recomendó a sus consumidores no ingerir Red Bull con alcohol ni después de
un ejercicio físico intenso. En cambio en el Reino Unido, donde Red Bull es líder de ventas, no ha
realizado ninguna investigación ni está prevista una limitación en su venta por considerarlo seguro, a
pesar que podría disminuir la presión arterial. En el 2006, se publicó un ensayo clínico en él se
concluye que la ingesta de una bebida energética disminuye las sensaciones subjetivas de intoxicación
alcohólica, pero no reduce los déficits motores y visuales causados por el alcohol (Ferreira, de Mello
MT, & ML, 2006)
2.2.4.5. Mecanismos de acción
Las metilxantinas (cafeína, teofilina y teobromina) por su semejanza a las purinas se unen a los
receptores A1 y A2 de la adenosina, actuando como antagonistas competitivos (concentraciones de
10-40 micromolar/L).
Esto produce una inhibición de la fosfodiesterasa que da lugar a un aumento de las concentraciones de
AMPc y de GMPc, una activación de canales de K+ y una inhibición de los canales de Ca2+ de tipo N.
En el cerebro los receptores de adenosina inhiben la liberación de numerosos neurotransmisores
(GABA, acetilcolina, dopamina, glutamato, noradrenalina y serotonina), la cafeína producirá el efecto
contrario. Los receptores A2 se coexpresan con receptores de encefalina y dopamina D2 en las
neuronas del estriado (Mandel, 2002)
La cafeína potencia la neurotransmisión dopaminérgica en esa área cerebral y en parte podría explicar
su potencial de abuso. Además, la cafeína actúa a concentraciones mucho mayores de las que
antagonizan la adenosina como inhibidor directo de la fosfodiesterasa (400 micromol/L) (Ayesta &
Camí, 2003)
2.2.4.6. Efectos farmacológicos
Sistema Nervioso Central
Psicoestimulantes. La cafeína produce una activación generalizada del Sistema Nervioso Central,
posiblemente al aumentar la liberación de noradrenalina (Underm, 2006). Aumenta la alerta, reduce la
sensación de cansancio y fatiga, aumenta la capacidad de mantener un esfuerzo intelectual y mantiene
el estado de vigilia a pesar de la privación de sueño (Beaumont, y otros, 2005). Además, mediante la
13
inhibición de los receptores A2, la cafeína tiene una acción reforzante mediante la liberación de
dopamina en el circuito cerebral de recompensa (sistema mesolímbico y núcleo accumbens). Esta
acción se explicaría por un aumento de la fosforilación del DARPP-32 (fosfoproteína de la regulación
de dopamina y AMPc. (Lindskog, P, & Pozzi L, 2002).
Efectos analgésicos. La cafeína tiene un efecto analgésico dosis-dependiente potenciada por los
inhibidores de la serotonina y un efecto adyuvante en la analgesia.
Respiratorios
Las metilxantinas estimulan el centro respiratorio y son bronco-dilatadoras. La teofilina es la más
utilizada clínicamente a pesar de presentar un margen terapéutico estrecho y provocar los efectos
adversos más graves. La cafeína mejora discretamente la función respiratoria al aumentar la
contractilidad del diafragma.
Cardiovasculares
La administración de cafeína provoca un aumento de la presión arterial (William R, Michael F,
Andrea, & Vincent, 2004) y tiene un efecto cronotrópico e inotrópico positivo por inhibición de los
receptores adenosínicos cardiacos, resultando en un aumento de la frecuencia cardiaca. En cambio, el
chocolate a dosis bajas induce la formación de óxido nítrico y disminuye la presión arterial (Taubert,
Roesen, Lehmann, & Jung N, 2007). La cafeína no induce o empeora la severidad de las arritmias
ventriculares (Lars & Ves, 2005). Las metilxantinas producen vasoconstricción a nivel cerebral
(Hurlé, 2003)
Músculo esquelético
La cafeína mejora el rendimiento físico produciendo vasodilatación a nivel muscular, aumenta la
respuesta contráctil al estímulo nervioso, disminuye el cansancio y la fatiga. (Hurlé, 2003)
Dopaje. La cafeína fue durante años una sustancia restringida en el deporte y se consideró “doping” si
se sobrepasaban los 12 mg/mL en orina. Para dar positivo sería necesario ingerir unas 7 u 8 tazas de
café y recoger una muestra a las 2-3 horas. En las listas de sustancias prohibidas en el deporte desde
2004 ya no consta como prohibida y por ello puede consumirse sin limitaciones, aunque según la
AMA está dentro de la lista de sustancias en estudio.
2.2.4.7. Farmacocinética
La cafeína tiene buena absorción por vía oral, la biodisponibilidad es del 100%, cruza la barrera
hematoencefálica y fetoplacentaria (característica común de todas las metilxantinas), alcanza la
14
concentración plasmática máxima en 30-60 min después de la ingesta en ausencia de comida, se une
en un 36% a proteínas plasmáticas, el volumen de distribución es de 0,6 L/kg, se metaboliza por el
sistema enzimático citocromo P450, principalmente por la isoenzima CYP1A2 por lo que en cada
individuo la velocidad de metabolismo de la cafeína puede variar debido a la capacidad de inducción
enzimática y a las diferentes interacciones posibles en el sistema CYP 450 (Barry D. Smith, 2007)
Figura 2. 1 Metabolismo de la cafeína según (Calle S. , 2011)
La cafeína por una reacción de N-metilación pasa a paraxantina (1,7- dimetilxantina) 84%,
teobromina (3,7- dimetilxantina) 12% y teofilina (1,3- dimetilxantina) 4%. Menos del 5% de la cafeína
se elimina por vía renal sin cambios y se han reportado casos de excreción en leche materna. La
teofilina se absorbe completamente por vía oral, por cada 1mg/kg ingerido se esperan niveles séricos
de 2μg/mL en 1-2 horas tras la ingesta o hasta 24 horas después, se une en un 40-56% a proteínas
plasmáticas y el volumen de distribución es de 0,45 L/kg. Es metabolizada por el sistema enzimático
CYP 450 por las isoenzimas 1A2, 2E1 y 3A3, el 10% se excreta vía renal sin cambios.
La teobromina es un alcaloide primario encontrado en el cacao, es uno de los responsables de los
efectos positivos del chocolate sobre el ánimo pues se considera un estimulante suave. Se absorbe bien
por vía oral, con una biodisponibilidad del 80%, uniéndose en un 21% a proteínas plasmáticas, el
volumen de distribución es 0,62 L/kg y la vida media estimada es de 6 a10 horas. El metabolismo se
15
produce en el sistema enzimático CYP 450. Se ha evidenciado eliminación por leche materna (Arnaud,
1987)
2.2.4.8. Toxicología
Según la AMA (Agencia Mundial Antidopaje) en el Programa de Seguimiento 2014 la cafeína no se
considera como sustancia prohibida. Su Dosis letal (DL50) depende del peso y la sensibilidad
individual y se estima que cerca de 150 a 200 mg/ kg de masa corporal, alrededor de 80 a 100 tazas de
café para un adulto promedio. Las intoxicaciones más frecuentes se dan en personas no consumidoras
de cafeína, pero también se dan casos en usuarios que aumentan su dosis habitual o consumidores
habituales de altas dosis de cafeína.
Los síntomas más frecuentes por sus efectos farmacológicos son la taquicardia, inquietud,
nerviosismo, temblor e insomnio. Tras el uso continuado de cafeína la intoxicación puede no
aparecer a pesar de la ingesta de grandes cantidades de cafeína debido al desarrollo de tolerancia. Los
criterios descritos DSM IV-TR para el diagnóstico de la intoxicación por cafeína. (Consumaseguridad,
2003)
Otros signos descritos han sido el edema de pulmón, arritmias (desde taquicardia a fibrilación
auricular o ventricular) infarto de miocardio y rabdomiolisis. La intoxicación en el neonato puede
presentarse en forma de agitación, irritabilidad, hipertonía, sudoración, taquicardia, dilatación gástrica,
insuficiencia cardiaca, edema de pulmón y alteraciones hidroelectrolíticas y metabólicas. La dosis letal
aguda de cafeína estimada en adultos estaría entre 5 y 10 g vía intravenosa u oral. (Underm, 2006)
2.2.4.9. Cafeína en bebidas
Bebidas cola
En su composición química los refrescos incluidos los etiquetados como dieta light, destacan bases
xánticas como la cafeína (1,3 - 2,5 %) y la teobromina (0,1 - 0,2 %). Contienen almidón como
sustancia de reserva y en pequeña proporción aminas, también contiene otros principios como betaína,
colina y sales minerales como potasio, fósforo, magnesio, calcio, ácido silícico. Un 5% de refrescos
están libres de cafeína.
Una bebida de cola es un refresco usualmente saborizado con caramelo. En la elaboración de las
primeras recetas se usaban semillas de Cola acuminata, que tienen un sabor amargo, contribuyen en
menor medida o ninguna a la mayoría de las recetas. A pesar del nombre de bebida de cola, sus
ingredientes principales son azúcar, aceites cítricos (naranja, lima o cáscara de limón), canela, vainilla
y un saborizante ácido, los cuales en su justa medida y proporción se diluyen en agua carbonatada
16
junto a colorantes y conservantes. Muchos fabricantes de bebidas de cola añaden otros ingredientes a
estos para crear un sabor propio de la marca. (Carral, 2011)
2.2.4.10. Bebidas energéticas
Las bebidas energéticas presentan mayor contenido en cafeína que los refrescos. Las dosis varían entre
83 y 336 mg/L. (Parado, Alvarez García, Barral, & Albaladejo, 2007)
2.2.5. Taurina
2.2.6.1. Generalidades
La taurina es un aminoácido neutro en cuya composición entra a formar parte el azufre. Su nombre se
deriva de Bos Taurus (bilis de buey) la bilis de toro de la cual fue aislada por primera en 1827 por los
científicos alemanes Friedrich Tiedemann y Leopold Gmelin. La Taurina difiere de la mayoría de los
otros aminoácidos, en que no se incorpora a las proteínas. Existe como un aminoácido libre en la
mayoría de los tejidos animales y es uno de los aminoácidos más abundantes en el músculo, las
plaquetas y en el Sistema Nervioso. Se sintetiza a partir de la cisteína, que es otro aminoácido
azufrado, por acción de una descarboxilasa similar a la GAD (glutamato descarboxilasa).
Parece que su papel inhibitorio se reduce a una acción en la médula espinal, como la glicina. En
comparación con la intensa actividad inhibitoria del GABA (ácido gama amino butírico) en el
cerebro, la taurina solo tiene una débil acción depresora. Además de como neurotransmisor, actúa
como un regulador de la sal, del equilibrio del agua dentro de las células y como un estabilizador de
las membranas celulares. La taurina participa en la desintoxicación de químicos extraños y también
está involucrada en la producción y la acción de la bilis.
2.2.6.2. Propiedades físico-químicas.
Su nombre químico es ácido 2-aminoetanosulfónico. Es diferente de los otros aminoácidos, ya que
contiene un grupo ácido sulfónico. Generalmente se la clasifica como un aminoácido pero no posee
un grupo carboxílico. La taurina está involucrada en varios procesos de síntesis de proteínas.
Tabla 2. 3 Características de la Taurina
Nombre Común Sinonimias Estructura
Taurina
Ácido 2-amino-etano-sulfónico.
17
Aspecto: Polvo cristalino blanco.
Propiedades químicas de la taurina
Fórmula molecular: C2H7NO3S.
Masa molecular: 125 g/mol
Solubilidad en agua: Soluble en agua, prácticamente insoluble en alcohol.
Acidez (pKa): 1,5 a 4 °C
Propiedades físicas :
Punto de sublimación: 178°C
Punto de fusión: 305,11°C
Densidad: 1,734g/mL
2.2.6.3. Principales fuentes.
Su distribución es muy abundante en el reino animal y sin embargo escaso en el vegetal, donde se
encuentra solamente en algunos hongos y algas. En el organismo humano es uno de los aminoácidos
más abundantes, el cual, a diferencia de sus precursores, no se incorpora a las proteínas (aunque se ha
encontrado formando parte de algunos péptidos pequeños). Se encuentra presente prácticamente en
todos los tejidos: cerebro, bazo, riñones, glándulas suprarrenales, hígado, tiroides, corazón, páncreas,
pulmones, plaquetas, leucocitos, plasma y músculo. El organismo adulto contiene de 12 a 19 gramos
de taurina.
2.2.6.4. Epidemiologia del consumo.
Actualmente, algunos autores clasifican a la taurina como un aminoácido esencial en la dieta. Otros
prefieren encuadrarlo como aminoácido semiesencial o "esencial condicional". La ausencia en la dieta
de un "nutriente esencial condicional", no provoca de forma inmediata una enfermedad carencial, pero
a largo plazo puede dar lugar a alteraciones biológicas.
2.2.6.5. Mecanismo de acción
Se ha sugerido, que podría actuar como modulador del crecimiento; en la neurotransmisión,
colaborando en el desarrollo del cerebro, Sistema Nervioso Central, retina y función cardíaca; y más
recientemente se piensa que influye en la función hepática, reduciendo la hepatotoxicidad inducida por
las sales biliares. Algunos estudios han relacionado también la taurina con distintas situaciones
patológicas como son trastornos cardíacos, hepatitis aguda, fibrosis quística.
2.2.6.6. Efectos farmacológicos.
A nivel del Sistema Nervioso.- La taurina se encuentra en cantidades importantes en todos los tejidos
excitables del Sistema Nervioso Central, donde tienen una gran influencia en la regulación del mismo,
18
la taurina es un importante estabilizador de las membranas de las células nerviosas. Si la membrana de
la célula está eléctricamente inestable, la transmisión nerviosa no se hará correctamente dando lugar a
alteraciones del sistema nervioso. Posee un rol significativo durante el desarrollo cerebral, modulando
los procesos de diferenciación, migración, desarrollo y regeneración del Sistema Nervioso Central,
además posee un efecto protector en el daño neuronal producido por el neurotransmisor glutamato y
uno de los mecanismos por los cuales ejerce su efecto es previniendo o reduciendo la elevación de
Ca2+ intracelular que produce el glutamato.
A nivel de los Músculos Esqueléticos.- Sabemos que hay una elevada concentración de taurina en los
músculos esqueléticos, de hecho la mayor parte aparece en forma libre. La taurina ha demostrado su
participación en el mecanismo excitación - contracción del músculo esquelético, lo que significa que
afecta a la transmisión de una señal eléctrica hacia las fibras musculares. Esto tiene una gran
importancia para asegurar un rendimiento muscular óptimo.
A nivel del sistema Cardiocirculatorio.- Ayuda a normalizar la frecuencia cardiaca y las
contracciones, incrementa la retención de potasio y magnesio en el músculo cardiaco, puede prevenir
el desarrollo de una cardiomiopatía y reducir los síntomas de fallo cardiaco congestivo. Suprime la
angiotensina, proteína de la sangre que provoca elevación de la presión arterial.
2.2.6.7. Farmacocinética
La concentración de taurina en un tejido específico está determinada no sólo por su capacidad de
síntesis, sino además por la captación de taurina que realizan los tejidos desde el plasma sanguíneo,
mediante fenómenos de transporte. Se supone que la taurina comparte junto a la ß-alanina, la glicina y
la hipotaurina, el mismo «carrier» o transportador ya que éstos compuestos tienen semejanza
estructural con este aminoácido.
2.2.6.8. Toxicología
Entre los efectos adversos encontrados con el consumo de taurina se encuentran las enfermedades
renales como los síndromes nefróticos y alteraciones de la síntesis hepática de fosfatidilcolina, la
FAO documenta el límite en alimentos de 4500 mg/L.
2.2.6.9. Taurina en bebidas
La dosis diaria de taurina debe estar entre 100 y 150 mg y una lata de una bebida popular, por ejemplo,
tiene 1000 milígramos de taurina producida sintéticamente. Algunas personas beben hasta ocho latas
al día (8000 mg de taurina), cantidad que puede tener efectos similares a los de una droga en el
organismo y puede ocasionar la muerte. (Center, 2012)
19
2.3. Métodos empleados en la determinación de cafeína y taurina en alimentos
Los métodos de análisis de aditivos alimentarios deberán proporcionar una precisión y exactitud
adecuadas siendo a la vez rápidos y simples de manera que proporcione resultados fiables para el
análisis de alimentos complejos en un tiempo razonable. (Juan, Picó, & Font, 2003)
La preparación de la muestra es el paso más complejo en la determinación de residuos, representando
más de 50% del tiempo del análisis. Este proceso se compone de extracción desde la matriz y
purificación del extracto. (Seiber, 1999)
La selección del método depende de la naturaleza de la bebida estudiada, sin embargo una gran
mayoría de procedimientos se fundamenta en las técnicas cromatografías, en particular la
cromatografía acoplada con una variedad de detectores. (Trujillo, 2006)
2.3.1. Muestreo y preservación de la muestra
Para recolectar productos envasados en presentación comercial se deben tomar en forma aleatoria de
acuerdo al plan de muestreo, tomando del mismo lote, la cantidad adecuada para los ensayos. Las
muestras se deben enviar al laboratorio en las mismas condiciones en que se presentan al consumidor.
Tratándose de productos envasados en contenedores grandes, será necesario abrir éstos para poder
colectar la cantidad de muestra necesaria y por lo tanto se debe tener cuidado de no dañar ni
contaminar la muestra. Debe evitarse que el área donde se realizará la toma de muestra contribuya a la
contaminación y deterioro de las mismas.
Cuando sea necesario medir la temperatura de la muestra. La muestra utilizada para este fin deberá ser
diferente de la que se envía al laboratorio para los ensayos. (FAO, 2012)
2.3.2. Técnicas de separación, identificación y cuantificación
Una vez obtenido el extracto éste se analiza mediante métodos clásicos como gravimétricos y
volumétricos, además de métodos instrumentales como espectrometría y diversas formas de
cromatografía.
La identificación y cuantificación de estos compuestos por cromatografía se realiza con detectores
selectivos que se encuentran acoplados al equipo. Las técnicas cromatografías permiten una
aproximación eficiente en el análisis. (Rubinson & Rubinson, 2001)
20
2.3.3. Cromatografía
La cromatografía es un método de separación de diferentes componentes de una muestra, un rasgo
característico de la cromatografía es la presencia de dos fases; dispuestas de tal manera que mientras
una permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de él
(fase móvil).
Aunque los principios fundamentales son los mismos, se acostumbra clasificar los métodos
cromatográficos según el estado físico de la fase móvil. (Carral, Determinación analítica de la cafeina
en diferentes productos comerciales, 2011)
2.3.4. Determinación de cafeína por H.P.L.C.
Este método permite determinar el contenido de cafeína en bebidas energéticas carbonatadas. La
disolución que contiene la cafeína es sometida al HPLC en una columna C-18, octadecilo comercial
con una longitud de 10 cm con detector de ultravioleta. La cafeína contenida es cuantificada por
comparación con una solución estándar tratada similarmente. (Calle S. , 2011)
2.3.5. Determinación de taurina por H.P.L.C.
Para identificar taurina en las muestras se requiere comparar los tiempos de retención del pico del
estándar con la muestra. Para la determinación del tiempo de retención del estándar se inyecta una
concentración conocida. (Gijón, 2011)
Durante los últimos 25 años, se ha investigado y desarrollado innovadoras técnicas de derivatización
precolumna, comprobadas, para el análisis de aminoácidos con los métodos químicos para HPLC con
la que se obtienen análisis más rápidos, una mejor resolución de los componentes y resultados
cualitativos y cuantitativos excelentes. (Waters, 2013)
2.5. Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)
La cromatografía de líquidos, hoy en día, es la técnica de separación más ampliamente utilizada,
debido a su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas, su idoneidad para la separación de
especies no volátiles o termolábiles y sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de
primordial interés en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general.
(Ramírez, 2009)
En la Cromatografía Líquida los componentes de una mezcla son llevados a través de una fase
estacionaria, fijada dentro de una columna mediante el flujo de una fase móvil líquida. Las
separaciones están basadas en las diferencias de la velocidad de migración entre los componentes de la
muestra, que vienen condicionadas por la naturaleza de los analitos y su interacción con las fases.
21
La Cromatografía liquida de alta resolución o HPLC (High Performance Liquid Cromatography), es
una técnica cromatográfica usada para separar componentes usando una variedad de interacciones
químicas entre el analito y la columna cromatográfica. (Carral, Determinación analítica de la cafeina
en diferentes productos comerciales, 2011)
Se lleva a cabo una cromatografía líquida en fase normal cuando la fase estacionaria es relativamente
polar y la fase móvil es relativamente apolar, se efectúa una cromatografía en fase inversa cuando la
fase estacionaria es relativamente apolar y la fase móvil es relativamente polar.
Figura 2. 2 Esquema HPLC (Puruncajas, 2011)
Existen cuatro tipos básicos de cromatografía en los que la fase móvil es un líquido:
• Cromatografía de reparto, para especies poco polares pero no iónicas de masa molecular
menor de 104 g/mol.
• Cromatografía de adsorción o cromatografía líquido-sólido, para especies no polares, isómeros
estructurales y grupos de compuestos de masa molecular menor de 104 g/mol.
• Cromatografía de intercambio iónico, para especies iónicas de masa molecular menor de 104
g/mol.
• Cromatografía de exclusión por tamaño o cromatografía en geles, para solutos con masa
molecular mayor de 104 g/mol.
22
2.5.1. Columnas
Están hechas de acero inoxidable, con un diámetro interno de 2-5 mm y una longitud variable de 10 a
30 cm, dependiendo del diámetro de las micropartículas que contiene la columna (fase estacionaria),
que puede ser de 3 - 10μm. Como cierre de las columnas se utilizan placas filtrantes de acero que no
dejan escapar las micropartículas de la columna. En muchos casos se utiliza una precolumna para
eliminar contaminantes y partículas de polvo.
La mayor parte de los instrumentos comerciales modernos están equipados con calentadores de
columna, que controlan la temperatura, desde la cercana al ambiente hasta 150 ºC. Manteniendo la
temperatura constante se obtienen mejores cromatogramas. (Rubinson & Rubinson, 2001)
2.5.2. Detectores
Para HPLC se emplean distintos detectores dependiendo de la naturaleza de la muestra.
• Detectores selectivos: responden a una propiedad del soluto en disolución. Son los detectores
ultravioleta/visible (UV/Vis), detector de fluorescencia y detector electroquímico. El más utilizado es
el UV/Vis, (también puede clasificarse como detector universal) sobre todo el espectrofotómetro, que
registra sustancias que absorben la radiación ultravioleta o visible. Los hay muy sensibles, son
relativamente independientes de las oscilaciones de temperatura y se pueden utilizar en la elución en
gradiente. (Rubinson & Rubinson, 2001)
• Detectores universales: responden cuando una propiedad de la fase móvil es cambiada por la
presencia de un soluto. Son el detector del índice de refracción (RI) y el detector de conductividad. El
más utilizado es el detector RI, que registran todas aquellas sustancias que presenten un índice de
refracción distinto al de la fase móvil pura. La señal será tanto mayor cuanto mayor sea la diferencia
en el índice de refracción. Es necesario un control estricto de la temperatura y no se pueden utilizar
para separaciones por elución en gradiente. (Ramírez, 2009)
2.6. Fundamento legal
De acuerdo con la ley estadounidense, las sodas no pueden contener más de 71,5 mg de cafeína por
cada 350mL. Pero esta limitación no se aplica a las bebidas energéticas, consideradas como
suplementos alimenticios. (Las bebidas energizantes, en el punto de mira de las autoridades de EEUU,
2012)
En la Unión Europea se consideran bebidas gasificadas y se las denomina Energy Drink, estas deben
cumplir una disposición reciente, que establece que las bebidas (excepto café y té) que contengan
más de 150 mg de cafeína por litro, deben declararlo en el rótulo y agregar “Alto en cafeína”. El
23
Codex Alimentarius no solicita ningún tratamiento especial, después de un amplio debate, donde
concluyó que no encontraban motivos para ello. En la región de Australia y Nueva Zelanda, un grupo
de científicos elaboró un amplio informe, después de analizar sus componentes y estableció los
límites para el contenido de cafeína con un máximo de 320 mg/L y de taurina en 2.000 mg diarios.
Las denomina también Energy Drink y las coloca dentro del grupo llamado bebidas cafeinadas.
(Melgarejo, 2009)
Para la FDA (Food and Drug Administration de USA) son alimentos corrientes y tanto la taurina
como la glucuronolactona se consideran sustancias seguras y por ende, no tienen establecido un nivel
máximo. En Brasil se las denomina compuesto líquido listo para beber. En Chile se denominan
bebidas energéticas y están dentro del capítulo de bebidas para fines determinados. En Argentina se
incorporaron las bebidas energéticas al Código Alimentario como Suplemento Dietario y esta
clasificación establece una serie de frases obligatorias que deben colocarse en el rótulo. En la
actualidad se están estudiando proyectos de modificaciones sobre este encuadre, ya que hay un
consenso generalizado de que no son un suplemento dietario. (Melgarejo, 2009)
Según la Norma Técnica de Bogotá se establecen los siguientes requisitos físico-químicos de las
bebidas energéticas para consumo humano.
En el país la NORMA TÉCNICA ECUATORIANA INEN 2411:2008. Bebidas Energéticas; establece
los requisitos que deben cumplir las bebidas que por su composición química induzcan al organismo
humano sano y maduro a mejorar su desempeño fisiológico con un contenido minino en cafeína de
250 mg /L ni mayor a 350 mg/L, y para taurina de 4000 mg/L vale aclarar que estas concentraciones
son altas comparándolas con lo permitido en otras norma internacionales. Vale aclarar que estos
valores sobrepasan los límites establecidos por un grupo de científicos en la región de Australia en
Nueva Zelanda, donde se permite como máximo en cafeína 320 mg/L y 2000 mg diarios de taurina.
24
2.6.1. Constitución de la República del Ecuador
Art. 3.- Son deberes primordiales del Estado
1. Garantizar sin discriminación alguna el efectivo goce de los derechos establecidos en la
Constitución y en los instrumentos internacionales, en particular la educación, la salud, la
alimentación, la seguridad social y el agua para sus habitantes.
Art. 52.- Las personas tienen derecho a disponer de bienes y servicios de óptima calidad y a elegirlos
con libertad, así como a una información precisa y no engañosa sobre su contenido y características.
Soberanía alimentaria
Art. 281.- La soberanía alimentaria constituye un objetivo estratégico y una obligación del Estado
para garantizar que las personas, comunidades, pueblos y nacionalidades alcancen la autosuficiencia
de alimentos sanos y culturalmente apropiados de forma permanente.
13. Prevenir y proteger a la población del consumo de alimentos contaminados o que pongan en riesgo
su salud o que la ciencia tenga incertidumbre sobre sus efectos.
Art. 54.- Las personas o entidades que presten servicios públicos o que produzcan o comercialicen
bienes de consumo, serán responsables civil y penalmente por la deficiente prestación del servicio, por
la calidad defectuosa del producto, o cuando sus condiciones no estén de acuerdo con la publicidad
efectuada o con la descripción que incorpore.
2.6.2. Derechos y obligaciones de los consumidores según la ley orgánica del consumidor
Art. 4.- Derechos del consumidor.- Son derechos fundamentales del consumidor, a más de los
establecidos en la Constitución Política de la República, tratados o convenios internacionales,
legislación interna, principios generales del derecho y costumbre mercantil, los siguientes:
- Derecho a la protección de la vida, salud y seguridad en el consumo de bienes y servicios, así
como a la satisfacción de las necesidades fundamentales y el acceso a los servicios básicos.
- Derecho a que proveedores públicos y privados oferten bienes y servicios competitivos, de
óptima calidad, y a elegirlos con libertad.
- Derecho a recibir servicios básicos de óptima calidad.
- Derecho a la información adecuada, veraz, clara, oportuna y completa sobre los bienes y
servicios ofrecidos en el mercado, así como sus precios, características, calidad, condiciones
de contratación y demás aspectos relevantes de los mismos, incluyendo los riesgos que
pudieren presentar.
25
- Derecho a la protección contra la publicidad engañosa o abusiva, los métodos comerciales
coercitivos o desleales.
- Derecho a la educación del consumidor, orientada al fomento del consumo responsable y a la
difusión adecuada de sus derechos.
- Derecho a la reparación e indemnización por daños y perjuicios, por deficiencias y mala
calidad de bienes y servicios.
- Derecho a acceder a mecanismos efectivos para la tutela administrativa y judicial de sus
derechos e intereses legítimos, que conduzcan a la adecuada prevención, sanción y oportuna
reparación de los mismos.
26
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA
3.1. Tipo de investigación
En el presente proyecto se desarrollará una investigación descriptiva y analítica en la cual se
determinará cuantitativamente cafeína y taurina en bebidas energéticas, bajo condiciones
establecidas de laboratorio y posteriormente se realizara un análisis comparativo entre los niveles
de cada muestra.
3.2. Variables de la investigación
Las variables planteadas para esta investigación son las siguientes:
3.2.1. Variables independientes
Las variables independientes son los 5 tratamientos que se emplearon para la determinación de
cafeína y taurina.
Los tratamientos empleados fueron las 5 bebidas energéticas de diferentes marcas
comercializadas en el país.
3.2.2. Variables dependientes
Las variables dependientes son la concentración de cafeína y taurina en las bebidas
energéticas más consumidas del país.
3.3. Población y muestra
3.3.1. Población
Las 11 bebidas energéticas que se venden en el país.
27
Tabla 3. 1. Población de bebidas energéticas
TIPO DE
ENVASE
Número de
bebidas
energéticas
Bebidas
energéticas
Volumen
de
Presentación
(mL)
Eslogan
publicitario
EN ENVASE
DE LATA
1 Red Bull 250 (ENERGY
DRINK)
2 V 220 310 (Bebida
Energizante)
3 Monster 350 (Energy)
4 XL 250 (Energy
Drink)
5 CICLON 250 (Energy
Drink)
6 CULT 250 ENERGY
ACTIVATOR
7 4.40 269 ENERGY
DRINK
EN ENVASE
DE
POLIETILENO
8 WAKE UP 250 +ENERGY
Drink
9 Volcán 365 Energía total
10 ROCKSTAR) 375 ENERGY
DRINK
11 V 220 365 Bebida
energizante
3.3.2. Muestra
Tomando la tabla militar estándar del Anexo 2, según el tamaño del lote que corresponde a 11
bebidas energéticas con un nivel de inspección estricto C, el tamaño de la muestra corresponde a
5 bebidas.
Tabla 3. 2. Muestra de bebidas energéticas
TIPO DE
ENVASE
Número de
bebidas
energéticas
BEBIDAS
ENERGÉTICAS
VOLUMEN DE
PRESENTACIÓN
(mL)
EN ENVASE DE
LATA
1 LM1 250
2 AM5 269
EN ENVASE DE
POLIETILENO
3 NM4 365
4 TM3 375
5 0M2 365
28
3.4. Diseño metodológico
La investigación se divide en tres partes:
3.4.1. Identificación de las marcas comercializadas en el país
Se trabajó mediante el reporte de ventas mensual del año 2013 del sistema de información
comercial de Corporación Favorita C.A. Anexo 3.
3.4.2. Muestreo
Se tomaron al azar 5 muestras de bebidas energéticas según las marcas, para este caso la unidad
de muestreo estuvo constituida por bebidas de 250 mL, 269 mL y 310 mL en presentaciones de
latas de aluminio y 365 mL, 375 mL en presentaciones de botellas de polietileno.
3.4.3. Recolección y codificación de las muestras
El trabajo de investigación se realizó durante los meses de marzo y junio del 2014; cada muestra
de bebidas energéticas se adquirió en diferentes semanas y en diferentes locales de la cadena de
supermercados de corporación favorita C.A., teniendo en cuenta que las muestras deben
pertenecer a lotes diferentes. Durante el presente trabajo de investigación se realizó la
codificación de las muestras de las marcas de bebidas energéticas (tabla 3.1), para realizar los
estudios análisis de cafeína y taurina correspondientes.
Tabla 3. 3 Códigos y los lotes de las diferentes bebidas energéticas recolectadas en un período de
4 meses.
MARCAS CÓDIGO LOTES
Marca1 LM1 Lote 1: 1327547 D.5
Lote 2: 1327547 D.6
Lote 3: 1327548.D.8
Marca 2 0M2 Lote 1: 22/01/14 - 22/01/15
Lote 2: 09/04/14 - 08/04/15
Lote 3: 12/06/14 - 12/07/15
Marca 3 TM3 Lote 1: 2107
Lote 2: 2109
Lote 3: 2112
Marca 4 NM4 Lote 1: 045 A1
Lote 2: 046A 1
Lote 3: 048A 1
Maraca 5 AM5 Lote 1: L1 20:44
Lote 2: L2 18:34
Lote 3: L3 16:35
29
3.5. Determinación del método de análisis
Para la determinación cuantitativa de cafeína y taurina se estableció como métodos de análisis los
Métodos oficiales de la AOAC 29.1.14 y 50.1.07A respectivamente (Anexo 5 y 6), utilizando
como técnica de separación la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, implementados en el
laboratorio OSP de Alimentos en el Cromatógrafo HPLC Hitachi.
3.6. Equipo y materiales
El presente trabajo de investigación se llevó a cabo con un sistema de cromatografía líquida
constituido por:
Inyector
Detector UV de longitud de onda variable.
Jeringa de 100 L para cromatografía de líquidos
Membranas de filtración de 0,45 m
Balanza analítica con precisión de 0,0001 g.
Equipo de obtención de agua purificada
Ultrasonido
Potenciómetro
Probetas de vidrio de 100mL
Viales para cromatografía de 2 mL.
Balones aforados de 1000, 100, 10, 5mL
Pipetas volumétricas 10, 5, 2, 1mL
3.7. Reactivos y disolventes
Sal de acetato de sodio
Acetonitrilo grado HPLC
Ácido acético glacial grado HPLC
Cafeína (99,5%)
Taurina (≥99 %)
Agua purificada
3.8. Preparación de soluciones
3.8.1. Preparación de la solución buffer de acetato de sodio
Pesar 0,820 g de acetato de sodio para la preparación de 1 litro de la solución.
Disolver con agua purificada.
30
Adicionar ácido acético glacial, hasta obtener un pH= 4,2 en la solución buffer.
3.8.2. Preparación de la fase móvil
La preparación de la fase móvil se obtiene con una mezcla de Buffer de acetato de sodio-
Acetonitrilo 84:16 (v/v).
3.8.3. Preparación de soluciones estándar de cafeína
Preparar una solución stock de cafeína 20,0 mg/L.
A partir de la solución stock de cafeína se prepararon disoluciones estándar de
diferentes concentraciones de cafeína, aforando al volumen deseado.
En la tabla 3.4 se describen las alícuotas de la solución stock, los volúmenes de aforo y las
diferentes concentraciones de las disoluciones estándar de cafeína.
Tabla 3. 4 Preparación de disoluciones estándar de cafeína
Volumen de la
solución stock
(mL)
Aforo (mL) Concentración de las
disoluciones estándar
(mg/L)
1 25 0,8
1 10 2
1 5 4
5 10 10
20 25 16
Luego de la preparación de las disoluciones estándar de cafeína se colocaron las disoluciones
en los viales y se hicieron cuatro análisis de cada estándar para obtener cuatro curvas de
calibración (Anexo 20), con las cuales se pudo obtener la ecuación de la recta de regresión con
su respectivo r2.
3.8.4. Preparación de soluciones estándares de taurina
Preparar una solución stock de taurina de 20,0 mg/L.
A partir de la solución stock de taurina se prepararon disoluciones estándar de
diferentes concentraciones de taurina, aforando al volumen deseado.
En la tabla 3.3 se describen las alícuotas de la solución stock, los volúmenes de aforo y las
diferentes concentraciones de las disoluciones estándar de taurina.
31
Tabla 3. 5. Preparación de las disoluciones estándar de taurina
Volumen de la
solución stock
(mL)
Aforo (mL) Concentración de
las disoluciones
estándar (mg/L)
5 100 1
2 10 4
4 10 8
3 5 12
20 25 16
Luego de la preparación de las disoluciones estándar de taurina se colocaron las disoluciones
en los viales y se hicieron cinco lecturas de cada estándar para obtener cinco curvas de
calibración (Anexo 21), con las cuales se pudo obtener la ecuación de la recta de regresión con
su respectivo r2.
3.9. Condiciones Cromatográficas
Las condiciones cromatográficas utilizadas en el presente trabajo de investigación son:
Tabla 3. 6. Condiciones de trabajo en HPLC
Columna C18
Temperatura del horno 100°C
Presión de la Columna 2700 psi
Volumen de inyección 90 uL
Velocidad de flujo 2 mL/min
Longitud de onda de detección 254 nm
Tiempo de Retención para cafeína 2 min
Tiempo de retención para taurina 0,9 min
La composición de la fase móvil utilizada fue una mezcla de Buffer de acetato de sodio-
Acetonitrilo 84:16 (v/v). (El ácido acético glacial se emplea para igualar la fuerza iónica de las
fases y no define la polaridad de las mismas).
3.10. Tratamiento de las muestras para la determinación de cafeína y taurina
Debido a que las muestras de bebidas energéticas generalmente contienen dióxido de carbono,
éstas no pueden ser cargadas directamente en la columna cromatográfica. Por esta razón, las
muestras fueron previamente desgasificadas por ultrasonido durante 20 minutos, luego fueron
32
filtradas a través de una membrana (poro 0.45 µm), descartando los primeros ml filtrados. El
extracto final se utilizó directamente para los análisis de determinación de cafeína y taurina
por HPLC.
3.11. Hipótesis de la investigación
3.11.1. Contenido de cafeína
Para la determinación de cafeína se ha planteado las siguientes hipótesis:
3.11.1.1. Hipótesis nula
Las marcas de bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de cafeína que se
encuentra dentro de los parámetros especificados en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2411:2008. Bebidas Energéticas.
3.11.1.2. Hipótesis alternativa
Las marcas de bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de cafeína que no se
encuentra dentro de los parámetros especificados en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2411:2008. Bebidas Energéticas
3.11.2. Contenido de taurina
Para la determinación de taurina se ha planteado las siguientes hipótesis:
3.11.2.1. Hipótesis nula
Las marcas de bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de taurina que se
encuentra dentro de los parámetros especificado en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2411:2008. Bebidas Energéticas.
3.11.2.2. Hipótesis alternativa
Las marcas de bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de taurina que no se
encuentra dentro de los parámetros especificado en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2411:2008. Bebidas Energéticas.
3.12. Aplicación del método
La ecuación empleada para la aplicación del método cromatográfico (Ecuación 3.1) es de la forma
general:
33
Ecuación 3. 1. Ecuación de la recta de regresión
𝑦 = 𝑎 + 𝑏𝑥
Donde “𝒂" es la ordenada al origen, “𝒃" es la pendiente, "𝒙" es la concentración de cafeína/
taurina, "𝒚" es el área determinada mediante el método cromatográfico.
A partir de la ecuación de la recta de regresión (Ecuación 3.1), los valores de concentración
interpolados; corresponde a mg cafeína/L y mg taurina/L.
También se requiere tomar en cuenta el factor de dilución aplicado durante el análisis en cada una
de las bebidas energéticas, para lo cual se emplean la Ecuación 3.2 y 3.3 respectivamente.
Ecuación 3. 2. Concentración de cafeína considerando el factor de dilución
𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎/ 𝐿 = 𝐶𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑥 𝐹𝐷
Dónde:
𝐶 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑝𝑜𝑙𝑎𝑑𝑎 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛.
𝐹𝐷 = 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
Ecuación 3. 3. Concentración de taurina considerando el factor de dilución
𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎/ 𝐿 = 𝐶𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎 𝑥 𝐹𝐷
Dónde:
𝐶 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑝𝑜𝑙𝑎𝑑𝑎 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛.
𝐹𝐷 = 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛.
3.13. Parámetros del diseño experimental
En total fueron analizadas 45 muestras; 9 muestras por cada marca de bebida energética. Se
presentan los detalles en la Tabla 3.4
Tabla 3. 7. Parámetros del diseño experimental
Número de repeticiones por tratamiento (r) 9
Número de tratamientos (t) 5
Número de unidades experimentales (txr) 45
Características de la unidad experimental: cada unidad
experimental estará constituida de un envase de bebida.
34
3.14. Análisis Estadístico
El análisis estadístico aplicado en el presente trabajo de investigación se describe a
continuación:
Análisis de Varianza.
Prueba de D.M.S: Diferencia Mínima Significativa para establecer interacciones
significativas entre tratamientos.
Distribución t-student para comparar los resultados obtenidos con la norma INEN.
Para el análisis de los datos en esta investigación se empleó una Distribución de Bloques
Completamente al Azar (DBCA), con submuestras, del tipo t x r. Dónde: “t” son los 5
tratamientos; “r” son los 3 lotes, con 3 repeticiones para cada lote. Lo cual se esquematiza en
la Tabla 3.5.
Tabla 3. 8. Arreglo de datos para la distribución de bloques completamente al azar.
TRATAMIENTOS (t)
Lotes (r) Repetición LM1 0M2 TM3 NM4 AM5
1
1 𝑋111 𝑋112 𝑋113 𝑋114 𝑋115
2 𝑋121 𝑋122 𝑋123 𝑋124 𝑋125
3 𝑋131 𝑋132 𝑋133 𝑋134 𝑋135
2
1 𝑋211 𝑋212 𝑋213 𝑋214 𝑋215
2 𝑋221 𝑋222 𝑋223 𝑋224 𝑋225
3 𝑋231 𝑋232 𝑋233 𝑋234 𝑋235
3
1 𝑋311 𝑋312 𝑋313 𝑋314 𝑋315
2 𝑋321 𝑋322 𝑋323 𝑋324 𝑋325
3 𝑋331 𝑋332 𝑋333 𝑋334 𝑋335
3.15. Análisis de Varianza
Para interpretar los datos obtenidos del Diseño de Bloques Completamente al Azar (DBCA) con
submuestras, se realizó un Análisis de Varianza correspondientes a cada diseño experimental, el
cual nos permitió determinar si existe una diferencia estadísticamente significativa o no entre los
tratamientos y entre los lotes. En la Tabla 3.6 se detallan las fórmulas aplicadas en el Análisis de
Varianza.
35
Tabla 3. 9. Esquema del análisis de varianza para DBCA con submuestras
Fuente de
Variación
Suma de Cuadrados Grados de
Libertad
Cuadrado Medio F
calculada
Tratamientos ∑ 𝑥2𝑖. .
𝑟 ∗ 𝑚− 𝐹𝐶
(𝑡 − 1) 𝑆𝐶𝑡
(𝑡 − 1)
𝐶𝑀𝑡
𝐶𝑀𝐸
Lotes ∑ 𝑥2𝑗
𝑡 ∗ 𝑚− 𝐹𝐶
(𝑡 − 1) 𝑆𝐶𝐵
(𝑟 − 1)
𝐶𝑀𝐵
𝐶𝑀𝐸
Error
Experimental
[𝑆𝐶𝑇 − (𝑆𝐶𝑡 + 𝑆𝐶𝐵)] 𝑚(𝑟 − 1)(𝑡 − 1) 𝑆𝐶𝐸
𝑚(𝑟 − 1)(𝑡 − 1)
Total ∑ 𝑋𝑖𝑗2 − 𝐹𝐶
(𝑡 ∗ 𝑟 ∗ 𝑚) − 1
Dónde:
𝑭𝑪: Factor de corrección
𝒕: Tratamientos
𝒎: Muestras
𝒓: Repeticiones de cada análisis
𝑺𝑪𝒕: Suma de cuadrados de los tratamientos
𝑺𝑪𝑩: Suma de cuadrados de los lotes
𝑺𝑪𝑻: Suma de cuadrados totales
𝑪𝑴𝒕: Cuadrado medio de los tratamientos
𝑪𝑴𝑩: Cuadrado medio de los lotes
𝑪𝑴𝑬: Cuadrado medio del error
3.16. Hipótesis del Análisis de Varianza
3.16.1. Hipótesis para el contenido de cafeína
Para el análisis de varianza se ha planteado las siguientes hipótesis:
3.16.1.1 Hipótesis nula
No existe diferencia significativa en el contenido de cafeína entre los tratamientos; todos los
tratamientos son iguales.
𝐿𝑀1𝐶 = 0𝑀2𝐶 = 𝑇𝑀3𝐶 = 𝑁𝑀4𝐶 = 𝐴𝑀5𝐶
36
3.16.1.2. Hipótesis alternativa
Si existe diferencia significativa en el contenido de cafeína entre los tratamientos; al menos un
tratamiento es diferente.
𝐿𝑀1𝐶 ≠ 0𝑀2𝐶 ≠ 𝑇𝑀3𝐶 ≠ 𝑁𝑀4𝐶 ≠ 𝐴𝑀5𝐶
3.16.2. Contenido de taurina
Para el análisis de varianza se ha planteado las siguientes hipótesis:
3.16.2.1. Hipótesis nula
No existe diferencia significativa en el contenido de taurina entre los tratamientos; todos los
tratamientos son iguales.
𝐿𝑀1𝑇 = 0𝑀2𝑇 = 𝑇𝑀3𝑇 = 𝑁𝑀4𝑇 = 𝐴𝑀5𝑇
3.16.2.2. Hipótesis alternativa
Si existe diferencia significativa en el contenido de taurina entre los tratamientos; al menos un
tratamiento es diferente.
𝐿𝑀1𝑇 ≠ 0𝑀2𝑇 ≠ 𝑇𝑀3𝑇 ≠ 𝑁𝑀4𝑇 ≠ 𝐴𝑀5𝑇
3.17. Prueba de DMS (Diferencia Mínima Significativa)
Es una prueba de rango múltiple que se emplea para determinar las diferencias entre las medias de
los tratamientos y detectar que marcas estudiadas cumplen con la Norma INEN. Para lo cual se
emplea la Ecuación 3.4.
Ecuación 3. 4. Diferencia Mínima Significativa
𝑫𝑴𝑺 = 𝜀 (𝑅𝐸𝑆)
Dónde:
RES = valor obtenido de tablas t, con un nivel de significancia al 5 %.
𝜺 = √𝐶𝑀𝐸
𝑟 ∗ 𝑚
CME= Cuadrado medio del error experimental
r=número de repeticiones
37
m= número de bloques
3.18. Distribución t de Student
Para evaluar las hipótesis de la investigación se aplicó la Distribución t de Student (Ecuación 3.5)
empleando un nivel de significancia = 0.05.
Ecuación 3. 5. Ecuación de la Distribución t de Student
𝒕𝟎 =�̅� − 𝒛
𝒔/√𝒏
Dónde:
�̅�: 𝑒𝑠 𝑙𝑎 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑡𝑟𝑎𝑡𝑎𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑟𝑎𝑛𝑔𝑜 𝐶
𝒛: 𝑒𝑠 𝑒𝑙 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑁𝑜𝑟𝑚𝑎 𝐼𝑁𝐸𝑁
𝒔: 𝑒𝑠 𝑙𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑣𝑖𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝒏: 𝑒𝑠 𝑒𝑙 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑎𝑡𝑜𝑠
38
CAPÍTULO IV
4. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
4.1. Análisis de resultados para la obtención de las curvas de calibración de cafeína y
taurina
4.1.1. Registro de resultados para la obtención de las curvas de calibración de cafeína y
taurina
En las tablas 4.1 y 4.2 se presentan las áreas obtenidas que identifican los picos de cafeína y
taurina, respectivamente, en el análisis de mezclas estándar a 6 niveles de concentración
aplicando el método cromatográfico, las áreas de las lecturas están expresadas en Volts.
Tabla 4. 1 Datos experimentales para la obtención de las curvas de calibración de cafeína
Curva 1 Curva 2 Curva 3 Curva 4 Curva 5
Concentración
(mg/L)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
0,8 194759 187682 185731 186280 186731
2 455541 454083 451689 451665 451889
4 897824 895310 893678 891136 892678
10 2130831 2230104 2218750 2219198 2219950
16 3593390 3580851 3576188 3582649 3582188
20 4439320 4419684 4401324 4393105 4397324
Tabla 4. 2. Datos experimentales para la obtención de las curvas de calibración de
taurina
Curva 1 Curva 2 Curva 3 Curva 4 Curva 5
Concentració
n (mg/L)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
Área
(Volt)
1 1045 1086 1089 1020 1096
4 29382 29567 29420 28975 29670
8 73874 73980 73598 74016 73989
12 120815 120581 120683 120198 120810
16 165309 164986 165198 166274 167865
20 206385 204798 205863 206285 205098
39
En las Tablas 4.3 y 4.4 se presentan los valores de la ordenada al origen y pendiente de las rectas
de regresión Área vs Concentración y los coeficientes de correlación (r2) obtenidos en el análisis
de mezclas estándar de cafeína y taurina, respectivamente. Las correspondientes gráficas se
muestran en la Anexo 20 y 21.
Tabla 4. 3. Valores de pendiente y ordenada al origen de las curvas de calibración de cafeína
Y = a + bx
Curvas de calibración Ordenada al
origen (a)
Pendiente (b) Valor r2
N.1 586,9500 221745,1385 0,9993
N.2 13101,0000 221384,6295 0,9999
N.3 12386,0000 220701,5858 0,9999
N.4 12876,0000 220582,9217 0,9998
N.5 13085,8389 220686,4577 0,9998
Tabla 4. 4. Valores de pendiente y ordenada al origen de las curvas de calibración de taurina
Y = a + bx
Curvas de calibración Ordenada al
origen (a)
Pendiente (b) Valor r2
N.1 -12180,0121 10981,8045 0,9994
N.2 -11715,5169 10906,4115 0,9993
N.3 -12103,5566 10958,5629 0,9993
N.4 -12418,7732 11004,6006 0,9992
N.5 -11884,0383 10980,8562 0,9988
El valor de los coeficientes de correlación, r2 > 0.997, indica que existe una relación lineal
entre áreas de los picos y la concentración de cafeína y taurina en las mezclas estándar
analizadas.
4.1.2. Ecuaciones de las rectas de regresión para el cálculo de la concentración de cafeína y
taurina, respectivamente
En las Tablas 4.5 y 4.6 se presentan las ecuaciones de las rectas de regresión para el análisis de
cafeína y taurina, respectivamente, para obtener estas ecuaciones se emplearon los promedios de
las cuatro curvas de calibración indicadas en las Tablas 4.3 y 4.4.
40
Tabla 4. 5. Ecuación de la recta de regresión de cafeína
Ecuación: y= a + bx
Intersección (a) 10407,1093
Pendiente (b) 221020,1467
Valor r2 0,9998
Tabla 4. 6. Ecuación de la recta de regresión de taurina
Ecuación: y= a + bx
Intersección (a) -12060,37942
Pendiente (b) 10966,44716
Valor r2 0,9992
4.1.3. Cálculo de los intervalos de confianza
Los intervalos de confianza se calcularon mediante las siguientes ecuaciones:
Ecuación 4. 1. Intervalo de confianza para la pendiente
𝐿𝐶𝑏 = 𝑏 ± 𝑡. 𝑆𝑏
Ecuación 4. 2. Intervalo de confianza para la ordenada al origen
𝐿𝐶𝑎 = 𝑎 ± 𝑡. 𝑆𝑎
Dónde:
𝒃: 𝑒𝑠 𝑙𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
𝒂: 𝑒𝑠 𝑙𝑎 𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑎𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛
𝒕: 𝑒𝑠 𝑒𝑙 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑏𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑣𝑎𝑙𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑓𝑖𝑎𝑛𝑧𝑎 𝑎𝑙 95%
𝑺𝒃: 𝑒𝑠 𝑙𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑣𝑖𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
𝑺𝒂: 𝑒𝑠 𝑙𝑎𝑑𝑒𝑠𝑣𝑖𝑎𝑐𝑖ó𝑛𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛𝑑𝑎 𝑎𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛
En la Tabla 4.7 y 4.8 se reportan los intervalos de confianza de la pendiente y de la ordenada al
origen en las curvas de calibración de cafeína y taurina, respectivamente, empleando la Ecuación
4.1 y 4.2
41
Tabla 4. 7. Límite de confianza de la pendiente (b) y la ordenada al origen (a) para la curva de
calibración de cafeína
Curva 1 Curva 2 Curva 3 Curva 4 Curva 5
Límite de confianza de la pendiente
LSb 230043,2778 224025,5594 223964255,3 224645,6372 224265,5594
LIb 214120,9352 218719,3041 217443954,4 216516,3965 215909,3041
Límite de confianza de la ordenada al origen
LSa 88197,2293 43393,3516 49455,1638 59136,4284 46491,3516
LIa -92953,9707 -16976,8168 -24727,4090 -33351,3254 -19896,9168
Tabla 4. 8. Intervalos de confianza de la pendiente (b) y de la ordenada al origen para la curva
de calibración de taurina
Curva 1 Curva 2 Curva 3 Curva 4 Curva 5
Intervalos de confianza de la pendiente
LSb 11357,4137 11293,1479 11348,0872 11429,2675 11383,1579
LIb 10588,9158 10499,4589 10550,7560 10571,9365 10509,4589
Intervalos de confianza de la ordenada al origen
LSa -7436,04542 -6803,99537 -7179,79748 -7183,77414 -7103,99537
LIa -16748,3043 -16421,5066 -16841,4421 -17572,4667 -16931,5066
A continuación se presentan las gráficas de los intervalos de confianza de la pendiente (b) y la
ordenada al origen (a) para la curva de calibración de cafeína y taurina. Figura 4.1 y 4.2
42
Figura 4. 1. Intervalo de confianza para la curva de calibración de cafeína
Figura 4. 2. Intervalos de confianza de la curva de calibración de taurina
0
500000
1000000
1500000
2000000
2500000
3000000
3500000
4000000
4500000
5000000
0 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,014 0,016 0,018 0,02 0,022
Áre
a
Concentración (mg/L)
Límites de Confianza para la Recta de Regresión de Cafeína
Límite Superior
Límite Inferior
Promedio
LM1
0M2
TM3
NM4
AM5
-25000
0
25000
50000
75000
100000
125000
150000
175000
200000
225000
250000
0 0,003 0,006 0,009 0,012 0,015 0,018 0,021 0,024
Áre
a
Concentración (mg/L)
Límites de Confianza para la Recta de Regresión de Taurina
Límite Superior
Límite Inferior
Promedio
LM1
0M2
TM3
NM4
AM5
43
4.2. Aplicación del método cromatográfico en la determinación de cafeína y taurina en las
bebidas energéticas.
4.2.1. Registro de las áreas obtenidas de los picos de cafeína y taurina en el análisis de las
bebidas energéticas
En la Tabla 4.9 se presenta en el lado izquierdo los códigos de las diferentes bebidas energéticas
que fueron analizadas; luego se muestra los lotes y las repeticiones que para cada caso es de 3 y a
continuación las lecturas correspondientes a las áreas de los picos de cafeína y taurina (en Volt)
aplicando el método cromatográfico.
Tabla 4. 9. Lectura de las áreas correspondientes a los picos de cafeína y taurina en las muestras
de bebidas energéticas:
Código Lotes Repeticiones CAFEÍNA
Áreas (Volt)
TAURINA
Áreas (Volt)
LM1
1
1 1259349 171653
2 1328538 172986
3 1246784 167340
2
1 1236234 172980
2 1213098 165309
3 1310853 169398
3
1 1237849 170345
2 1248659 171549
3 1257635 163075
0M2
1
1 1097964 113001
2 1098523 98397
3 1089798 104862
2
1 1099887 108647
2 1096989 110348
3 1098546 99834
3
1 1098647 109745
2 1099593 108935
3 1089864 101758
TM3
1
1 941159 118934
2 956399 109784
3 937539 118475
2
1 942763 118573
2 939712 112974
3 930874 109838
3
1 941816 109298
2 937203 113749
3 941957 119464
NM4
1
1 677198 87600
2 679790 94755
3 678578 93075
2
1 689630 90893
2 679856 89564
3 678964 87464
44
3
1 685938 90017
2 679473 91057
3 679967 89983
AM5
1
1 1860904 204669
2 1827993 198650
3 1839647 202746
2
1 1847659 201798
2 1859372 199637
3 1901375 196094
3
1 1899634 201723
2 1902361 203982
3 1839876 202647
4.3. Cálculo de la concentración de cafeína y taurina en las bebidas energéticas aplicando el
método cromatográfico
4.3.1. Cálculo de la concentración de cafeína
En la ecuación 4.3 se indica el cálculo necesario para obtener las concentraciones de cafeína en
las muestras de las bebidas energéticas; en ésta ecuación se empleó las áreas de los picos en Volt,
para reemplazar en y de ésta forma se despeja x para obtener la concentración de cafeína en cada
muestra.
Ecuación 4. 3. Cálculo de la concentración de cafeína en las bebidas energéticas
𝑦 = 10407,1093 + 221020,1467𝑥
Aplicando la Ecuación 4.3 se obtuvieron las concentraciones de cafeína (mg/L) en las diferentes
muestras de cada bebida energética aplicando el método cromatográfico, los resultados se
presentan en la Tabla 4.10.
Ejemplo: Cálculo de la concentración de cafeína en la bebida energética codificada como
LM1:
Aplicado la ecuación 4.3 se obtiene:
𝑦 = 10407,1093 + 221020,1467𝑥
1259349 = 10407,1093 + 221020,1467𝑥
𝑥 = 5,6508 𝑚𝑔/𝐿
𝐶𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 = 5,6508 𝑚𝑔/𝐿
45
Considerando el factor de dilución aplicado obtenemos la concentración de cafeína en la bebida
energética codificada como LM1:
𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎/𝐿 = 𝐶𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 𝑥 𝐹𝐷
𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎/𝐿 = 5,6508 𝑥 50
𝒎𝒈 𝒄𝒂𝒇𝒆í𝒏𝒂/𝑳 = 𝟐𝟖𝟐, 𝟓𝟒𝟎𝟑
4.3.2. Cálculo de la concentración de taurina
En la ecuación 4.4 se indica el cálculo necesario para obtener las concentraciones de taurina en
las muestras de las bebidas energéticas, procedimiento similar al cálculo de la concentración de
cafeína.
Ecuación 4. 4. Cálculo de la concentración de taurina en las bebidas energéticas
𝑦 = −12060,3794 + 10966,4472𝑥
Ejemplo: Cálculo de la concentración de taurina en la bebida energética codificada como
LM1:
Aplicado la ecuación 4.4 se obtiene:
𝑦 = −12060,3794 + 10966,4472𝑥
171653 = −12060,3794 + 10966,4472𝑥
𝑥 = 16,7523 𝑚𝑔/𝐿
𝐶𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎 = 16,7523 𝑚𝑔/𝐿
Considerando el factor de dilución aplicado obtenemos la concentración de taurina en la bebida
energética codificada como LM1:
𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎/𝐿 = 𝐶𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎 𝑥 𝐹𝐷
𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑢𝑟𝑖𝑛𝑎/𝐿 = 16,7523 𝑥 100
𝒎𝒈 𝒕𝒂𝒖𝒓𝒊𝒏𝒂/𝑳 = 𝟏𝟔𝟕𝟓, 𝟐𝟑𝟏𝟓
Aplicando la Ecuación 4.4 se obtuvieron las concentraciones de taurina (mg/L) en las diferentes
muestras de cada bebida energética aplicando el método cromatográfico, los resultados se
presentan en la Tabla 4.10
46
Para obtener los datos que se presentan en las columnas resaltadas de la Tabla 4.10 en primer
lugar se tomó en cuenta el factor de dilución aplicado en las muestras de bebidas energéticas
analizadas; en el caso del análisis de cafeína el factor de dilución es de 50; en el análisis de
taurina el factor de dilución es de 100.
Con los resultados finales de concentración de cafeína y taurina en mg/L se realizará el análisis de
las hipótesis de investigación.
Tabla 4. 10. Concentraciones de cafeína y taurina en las muestras de bebidas energéticas
CAFEÍNA TAURINA
Código Lotes Repeticiones Concentración
(mg/L)
Concentración
(mg/L)
LM1
1
1 282,5403 1675,2315
2 298,2314 1688,3434
3 279,7436 1636,8421
2
1 277,3579 1688,2886
2 272,1259 1618,3159
3 294,2321 1655,6146
3
1 277,7231 1664,2529
2 280,1677 1675,2355
3 282,1975 1597,9380
0M2
1
1 246,0898 1141,1770
2 246,2162 1007,9634
3 244,2431 1066,9353
2
1 246,5246 1101,4610
2 245,8693 1116,9771
3 246,2214 1021,0713
3
1 246,2442 1111,4767
2 246,4581 1104,088
3 244,2580 1038,6215
TM3
1
1 210,6301 1195,2962
2 214,0765 1111,8324
3 209,8115 1191,1093
2
1 210,9929 1192,0032
2 210,3029 1140,9307
3 208,3043 1112,3250
3
1 210,7787 1107,3993
2 209,7355 1148,0000
3 210,8106 1200,1307
NM4
1
1 150,9384 909,4762
2 151,5246 974,7421
3 151,2505 959,4176
2
1 153,7498 939,5140
2 151,5395 927,3913
3 151,3378 908,2356
3
1 152,9149 931,5234
2 151,4529 941,0099
47
3 151,5646 931,2132
AM5
1
1 418,6198 1977,3468
2 411,1773 1922,4432
3 413,8127 1959,8057
2
1 415,6246 1951,1583
2 418,2733 1931,4463
3 427,7718 1899,1280
3
1 427,3781 1950,4742
2 427,9948 1971,0802
3 413,8645 1958,9027
4.4. Análisis estadístico para la concentración de cafeína
4.4.1. Análisis de varianza para la concentración de cafeína
En la Tabla 4.11 se presenta el análisis de varianza para la concentración de cafeína con un
diseño de bloques completamente al azar.
Tabla 4. 11. Análisis de Varianza
Fuente de
Variación
Suma de
Cuadrados
G. Libertad Cuadrado
Medio
F calculada F tabulada
0,05
TRATAMIENTOS 362224,0 4 90555,9 2313,7915 2,78
LOTES 0,749217 2 0,374608 0,00934 3,40
ERROR 939,272 24 39,1374
TOTAL 363164,0 44
Para los tratamientos obtuvimos un valor de F calculado de 2313,79 el cual es mayor que el valor
de F tabulado al 5% de 2,78000; lo cual nos indica que se rechaza la hipótesis nula y se acepta la
hipótesis alternativa, la cual nos indica que al menos un tratamiento es diferente a los demás
tratamientos.
Para reconocer cuál tratamiento es diferente se empleó el DMS.
Para los lotes obtuvimos un valor de F calculado de 0,00934 el cual es menor que el valor de F
tabulado al 5% de 3,40; lo cual nos indica que se acepta la hipótesis nula; donde todos los lotes
son iguales.
48
4.4.2. Prueba DMS (Diferencia Mínima Significativa)
Tabla 4. 12. Comparación de los tratamientos mediante la prueba DMS para la concentración de
cafeína.
Las concentraciones de cafeína de cada una de las bebidas energéticas analizadas se colocaron en
orden ascendente para una mejor apreciación de los rangos de significancia.
Marcas/
Tratamientos
Casos Media
(mg/L)
Grupos
Homogéneos
NM4 9 151,808 A
TM3 9 210,605 B
0M2 9 245,791 C
LM1 9 282,707 D
AM5 9 419,391 E
La prueba de diferencia mínima significativa agrupa a los tratamientos en categorías en base a sus
similitudes estadísticas, obteniéndose un total de 5 rangos de significancia (A, B, C, D, E), lo cual
se puede apreciar en la Tabla 4.12
Para el tratamiento del rango D, la concentración de cafeína se encuentran dentro del
rango establecido por la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008.
4.4.3. Prueba t-student para los tratamientos
Para establecer una comparación entre la concentración de cafeína de cada bebida energética y los
parámetros especificados en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008. Bebidas
Energéticas (Anexo 1) se aplica la prueba t-student, empleando un nivel de significancia 0,05%.
En las Tablas 4.13 y 4.14 se muestran los resultados obtenidos.
4.4.3.1. Prueba t-student para el nivel inferior (250mg/L) de la Norma Técnica Ecuatoriana
INEN 2411:2008
Hipótesis Nula: 𝐻0: �̅� = 250 𝑚𝑔/𝐿
Hipótesis Alternativa: 𝐻𝑎: �̅� ≠ 250 𝑚𝑔/𝐿
49
Tabla 4. 13 Resultados de la prueba de hipótesis sobre la la concentración de cafeína; nivel de
significancia = 0.05, n = 9. Tomando como valor referencial el nivel inferior de la norma INEN
(250mg/L).
Tratamientos/Marcas t (calculada) t (tablas) Criterio
LM1 11,783 2,306 Rechaza Hipótesis nula
0M2 14,119 2,306 Rechaza Hipótesis nula
TM3 76,599 2,306 Rechaza Hipótesis nula
NM4 323,781 2,306 Rechaza Hipótesis nula
AM5 76,478 2,306 Rechaza Hipótesis nula
4.4.3.2. Prueba t-student para el nivel superior (350mg/L) de la Norma Técnica
Ecuatoriana INEN 2411:2008
Hipótesis Nula: 𝐻0: �̅� = 350 𝑚𝑔/𝐿
Hipótesis Alternativa: 𝐻𝑎: �̅� ≠ 350 𝑚𝑔/𝐿
Tabla 4. 14. Resultados de la prueba de hipótesis sobre la la concentración de cafeína; nivel
de significancia = 0.05, n = 9. Tomando como valor referencial el nivel superior de la norma
INEN 2411:2008 (350mg/L).
Tratamientos/Marcas t (calculada) t (tablas) Criterio
LM1 24,243 2,306 Rechaza Hipótesis nula
0M2 349,61 2,306 Rechaza Hipótesis nula
TM3 271,64 2,306 Rechaza Hipótesis nula
NM4 653,52 2,306 Rechaza Hipótesis nula
AM5 31,329 2,306 Rechaza Hipótesis nula
Se obtuvieron valores de t calculados los cuales son mayores que el valor de t tabulado al 5%
de 2,306; lo cual nos indica que se rechaza la hipótesis nula y en consecuencia se acepta la
hipótesis alternativa.
Los resultados obtenidos en las tablas 4.13 y 4.14 indican que todas las bebidas energéticas
analizadas no tienen la cantidad máxima ni mínima de cafeína permitida por lo cual se
requerirá un método gráfico para visualizar si la concentración de cafeína está dentro del rango
permitido para la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008.
50
Figura 4. 3. Resultados del análisis de cafeína en las bebidas energéticas
Mediante el método gráfico se pueden visualizar los siguientes resultados:
El 20% de las bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de cafeína que se
encuentra dentro del rango permitido por la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008.
El 60% de las bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de cafeína que se
encuentra por debajo del nivel inferior que establece la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2411:2008.
El 20% de las bebidas energéticas analizadas tienen una concentración de cafeína que se
encuentra sobre el nivel superior que establece la Norma Técnica Ecuatoriana INEN
2411:2008.
4.5. Análisis estadístico para la concentración de taurina
4.5.1. Análisis de varianza para la concentración de taurina
En la Tabla 4.15 se presenta el análisis de varianza para la concentración de taurina con un diseño
de bloques completamente al azar.
Tabla 4. 15. Análisis de Varianza
Fuente de
Variación
Suma de
Cuadrados
Grados de
Libertad
Cuadrado
Medio
F calculada F tabulado
TRATAMIENTOS 6,59228x106 4 1,64807x106 871,4856 2,78
LOTES 1559,31 2 779,653 0,4123 3,40
ERROR 45386,5 24 1891,1042
TOTAL 6,63923x106 44
282,707
245,791
210,605
151,808
419,391
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
LM1 0M2 TM3 NM4 AM5
Co
nce
ntr
ació
n d
e C
afe
ína
mg/
L
Bebidas energéricas
Concentración deCafeína en lasbebidas energéticas
Límite SuperiorNorma INEN
Límite inferiorNorma INEN
LM1
51
En la Tabla 4.15 se presentan los resultados del análisis de varianza con un diseño de bloques
completamente al azar.
Para los tratamientos obtuvimos un valor de F calculado de 871,486 el cual es mayor que el valor
de F tabulado al 5% de 2,78000; lo cual nos indica que se rechaza la hipótesis nula y se acepta la
hipótesis alternativa, la cual nos indica que al menos un tratamiento es diferente a los demás
tratamientos.
Para reconocer cuál tratamiento es diferente se empleó el DMS.
Para los lotes obtuvimos un valor de F calculado de 0,4123 el cual es menor que el valor de F
tabulado al 5% de 3,40; lo cual nos indica que se acepta la hipótesis nula; por lo tanto todos los
lotes son iguales.
4.5.2. Prueba DMS (Diferencia Mínima Significativa)
Tabla 4. 16. Comparación de los tratamientos mediante la prueba DMS para la concentración de
taurina.
Las concentraciones de taurina correspondientes a cada bebida energética analizada se colocaron
en orden ascendente para una mejor apreciación de los rangos de significancia.
Tratamientos/Marcas Casos Media
(mg/L)
Grupos
Homogéneos
NM4 9 935,836 F
0M2 9 1078,86 G
TM3 9 1155,45 H
LM1 9 1655,67 I
AM5 9 1946,87 J
La prueba de diferencia mínima significativa agrupa a los tratamientos en categorías en base a sus
similitudes estadísticas, obteniéndose un total de 5 rangos de significancia (F, G, H, I, J), lo cual
se puede apreciar en la Tabla 4.16.
Estos resultados indican que las concentraciones de taurina son estadísticamente diferentes entre
los tratamientos; pero se encuentran dentro del rango establecido por la Norma Técnica
Ecuatoriana INEN 2411:2008; ya que la norma especifíca que la concentración de taurina no
debe ser mayor a 4000 mg/L.
52
4.5.3. Prueba t-student para los tratamientos
Para establecer una comparación entre la concentración de taurina de cada bebida energética y los
parámetros especificados en la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008. Bebidas
Energéticas (Anexo 1) se aplica la prueba t-student, empleando un nivel de significancia 0,05%.
En la Tabla 4.17 se muestran los resultados obtenidos.
Hipótesis Nula: 𝐻0: �̅� = 4000 𝑚𝑔/𝐿
Hipótesis Alternativa: 𝐻𝑎: �̅� ≠ 4000 𝑚𝑔/𝐿
Tabla 4. 17. Resultados de la prueba de hipótesis sobre la la concentración de taurina; nivel de
significancia = 0.05, n = 9. Tomando como valor referencial de la norma INEN 4000mg/L.
Tratamientos/Marcas t (calculada) t (tablas) Criterio
LM1 221,131 2,306 Rechaza Hipótesis nula
0M2 186,456 2,306 Rechaza Hipótesis nula
TM3 215,716 2,306 Rechaza Hipótesis nula
NM4 428,754 2,306 Rechaza Hipótesis nula
AM5 246,869 2,306 Rechaza Hipótesis nula
Los valores de t calculados son mayores que el valor de t tabulado al 5% de 2,306; lo cual nos
indica que se rechaza la hipótesis nula y en consecuencia se acepta la hipótesis alternativa.
Los resultados presentados en la tabla 4.17 nos indican que todas las bebidas energéticas
analizadas no tienen la cantidad máxima de taurina permitida por la Norma Técnica Ecuatoriana
INEN 2411:2008.
En base a los resultados presentados en la tabla 4.16 se puede apreciar que las concentraciones de
taurina en todas las bebidas energéticas analizadas se encuentran por debajo límite máximo
establecido por la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008. Estos resultados se pueden
observar en la figura 4.4:
53
Figura 4. 4 Resultados del análisis de taurina en las bebidas energéticas
Mediante el método gráfico se observa que el 100% de las bebidas energéticas analizadas
tienen una concentración de taurina que se encuentra por debajo del límite máximo establecido
por la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008. BEBIDAS ENERGÉTICAS.
Interpretación de Resultados:
Se realizó un estudio de 5 bebidas energéticas diferentes en comparación con la Norma Técnica
Ecuatoriana INEN 2411:2008; en donde se obtuvieron los siguientes resultados:
La bebida energética codificada como LM1 es la ú0nica que cumple con la normativa
señalada en el contenido de cafeína y taurina; con los siguientes valores 282,707 mg/L
de cafeína y 1655,67 mg/L de taurina; por lo cual según la norma señalada sería un
producto de calidad apto para el consumo humano responsable.
Las tres bebidas 0M2, TM3, NM4, cumplen con la normativa señalada en taurina, al
contrario que en cafeína donde su contenido es menor, por lo que serían productos con
una calidad defectuosa que no podrían cumplir con las propiedades que se les
atribuye.
La bebida energética codificada como AM5 cumplen con la normativa señalada con
el contenido de taurina 1946,87 mg/L, pero no cumple en el contenido de cafeína
419,39 mg/L, esto podría representar un riesgo en la salud de los consumidores.
1655,67
1078,86 1155,45935,836
1946,87
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
4500
LM1 0M2 TM3 NM4 AM5
Co
nce
ntr
ació
n d
e t
auri
na
mg/
L
Bebidas energéticas
Concentración detaurina en lasbebidasenergéticas
Norma INEN
54
CAPÍTULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1. Conclusiones
Se identificaron 11 bebidas energéticas que se comercializan en la mayor cadena de
supermercados del país, Megamaxi y Supermaxi de Corporación Favorita C.A., entre las
que se encuentran diferentes presentaciones entre 250 y 350 mL, así también diferentes
tipos de envases como son lata y polietileno.
Se seleccionó mediante un muestreo completamente al azar 5 marcas de bebidas
energéticas de la población de bebidas según la Tabla Militar Estándar del Ministerio de
Salud Pública; donde el tamaño de la población fue de 11 bebidas energéticas, con un
nivel de inspección estricto de categoría C que corresponde a un plan de muestreo de 5
unidades, las cuales fueron codificadas por confidencialidad de las marcas; como se
detalla a continuación: LM1, 0M2, TM3, NM4, AM5.
Para la determinación cuantitativa de cafeína y taurina se estableció como métodos de
análisis los Métodos oficiales de la AOAC 29.1.14 y 50.1.07A respectivamente,
utilizando como método de análisis la Cromatografía Líquida de Alta Resolución,
implementados en el laboratorio OSP de Alimentos de la Facultad de Ciencias Químicas,
en el Cromatógrafo HPLC Hitachi con las siguientes condiciones de trabajo: columna
C18, temperatura 100°C, presión de la columna 2700 psi, volumen de inyección 90 uL,
longitud de onda de detección 254 nm, tiempo de retención para cafeína 2 min, tiempo de
retención para taurina 0,9 min.
De las cinco marcas analizadas se determinó que únicamente el 20% de la población de
bebidas energéticas, cumplen con la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008.
Bebidas Energéticas, siendo la bebida energética LM1 la que cumple con un valor de
282,707 mg/L, en la concentración de cafeína y 1655,6 mg/L, en la concentración de
taurina.
55
Existen una bebida energética, que representa el 20% de la población, codificada como
AM5, que supera el valor máximo de 350 mg/L establecido en la Norma Técnica
Ecuatoriana INEN 2411:2008. Bebidas Energéticas, con un valor de 419,391 mg/L que
corresponde al 19,71% de exceso en cafeína.
De las cinco marcas analizadas se determinó que el 100% de la población de bebidas
energéticas cumplen con la Norma Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008. BEBIDAS
ENERGÉTICAS, en la concentración de taurina, con valores desde 1655,67 mg/L hasta
1946,87 mg/L.
5.2. Recomendaciones
Se recomienda continuar con la investigación analizando los posibles mix de vitaminas
añadidas a las diferentes bebidas energéticas, de acuerdo a los datos obtenidos en la tabla de la
composición química de las bebidas energéticas, presentada en el Anexo 4.
De acuerdo a la composición de las bebidas energéticas, la organización mundial de la salud
sugiere que sean denominadas bebidas estimulantes, ya que puede existir una confusión con
las bebidas hidratantes, por lo cual se sugiere de acuerdo a la Ley Orgánica del Consumidor,
el derecho a la educación del consumidor, orientada al fomento del consumo responsable y a
la difusión adecuada de sus derechos
Realizar estudios para una muestra diferente de bebidas energéticas para determinar si están
constituidas por otro tipo de estimulantes para garantizar que son alimentos sanos que no
ponen en riesgo la salud como se manifiesta en el Art. 281, Lit. 13 de la Constitución de la
República del Ecuador.
Se recomienda tomar en cuenta estos datos investigativos para la modificación de normas que
controlen las concentraciones de cafeína en estas bebidas energéticas en base a la Norma
Técnica Ecuatoriana INEN 2411:2008. BEBIDAS ENERGÉTICAS, ya que un contenido
elevado puede representar un riesgo para la salud, y se emita Registros Sanitarios a aquellas
bebidas energéticas que cumplan con la norma señalada.
Se propone crear una normativa en la cual se exija que además de la ley actual del etiquetado
no mezclar con bebidas alcohólicas, también se establezca los riesgos que conlleva la mezcla
de las mismas.
56
BIBLIOGRAFÍA
Arnaud, M. (1987). La farmacologia de la cafeina. Barcelona.
Ayesta, F., & Camí, J. (2003). Farmacodependencias. Farmacologia Humana . Barcelona: Masson.
Barnés, H. G. (11 de Noviembre de 2012). 13 muertes en EE.UU. ¿Las bebidas energéticas son
seguras? El Confidencial , pág. 1.
Barry D. Smith, U. G. (2007). Caffeine and activation theory. En Neuroscience, Effects on Health and
Behavior (págs. 9-43). Francia: Taylor y Francis Group.
Basulto, J. (18 de junio de 2013). Erosky Consumer. Recuperado el 12 de octubre de 2013, de Diez
perjuicios de las bebidas energéticas:
http://www.consumer.es/web/es/alimentacion/aprender_a_comer_bien/infancia_y_adolescencia/2013/
06/12/216969.php
Beaumont, M., Batejat, D., Coste, O., Doireau, P., Chauffard, F., Enslen, M., y otros. (2005). Recovery
after prolonged sleep deprivation: residual effects of slow- release caffeine on recovery sleep,
sleepiness and cognitive functions.
BIWEL. (13 de Junio de 2013). BIVEL. (EFSA, Editor) Recuperado el 12 de Octubre de 2013, de
Bebidas energéticas e infancia: http://www.biwel.cat/es/noticias-y-agenda/promocion-de-la-salud/427-
100-kcal-menos-en-el-trabajo-que-hace-50-anos-3
Bosmediano, A. (22 de Marzo de 2008). Proyecto de factibilidad para la creación de una empresa
importadora y distribuidora del energizante “Energy 69” en el cantón Quito. Universidad Tecnológica
Equinoccial , pág. 5.
Calle, S. (2011). “Determinación analítica de la cafeína en diferentes productos comerciales. España:
Universidad Politecnica de Cataluña.
Carral, E. (12 de Junio de 2011). Determinación analítica de la cafeina en diferentes productos
comerciales. Proyecto final de carrera . Barcelona, Barccelona, España: Universitat Politècnica de
Catalunya (UPC).
Center, G. H. (11 de Octubre de 2012). Los peligros de la taurina, encontrada comúnmente en las
bebidas energéticas. Recuperado el 6 de 10 de 2013, de Peligros de Salud:
http://www.globalhealingcenter.net/salud-natural/peligros-taurina.html
57
Consumaseguridad. (30 de 06 de 2003). Consumaseguridad. Recuperado el 16 de Octubre de 2013, de
Normativa legal: http://www.consumaseguridad.com/web/es/
normativa_legal/2003/06/30/7147.php#bibliografia
EFSA. (6 de Marzo de 2013). Agencia Española de Seguridad Alimentaria y Nutrición. Recuperado el
12 de Octubre de 2013, de Informe sobre bebidas "energéticas":
http://www.aesan.mspsi.gob.es/AESAN/web/punto_focal_efsa/detalle/bebidas_energeticas.shtml
Facultad de Ciencias Medicas, Bogotá. (26 de 01 de 2013). Facultad de Ciencias Medicas.
Recuperado el 12 de Octubre de 2013, de Bebidas Energizantes:
https://www.google.com.ec/search?q=clases+de+bebidas+energizantes&oq=clases+de+bebidas+e&aq
s=chrome.1.69i57j0l5.6797j0j8&sourceid=chrome&espv=210&es_sm=93&ie=UTF-
8#es_sm=93&espv=210&q=La+energ%C3%ADa+es+la+capacidad+para+realizar+distintos+tipos+de
+trabaj
FAO. (2012). Guía Para Muestreo de Alimentos. Food and Agriculture Organization of the United
Nations , 4.
Ferreira, S., de Mello MT, P. ,., & ML, d. S.-F. (30 de Abril de 2006). Effects of energy drink
ingestion on alcohol intoxication. Alcohol. Clin. Recuperado el 22 de Octubre de 2013, de Publmed:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16573577
Gijón, A. (22 de agosto de 2011). Bebidas energéticas Estudio en alumnos de 2 año de Bachillerato.
Química de los Alimentos y Nutrición . Granada.
Haas, R. (2009). Livestrong Recuperado el 12 de septiembre de 2013, de Efectos negativos de la
taurina: http://www.livestrong.com/es/efectos-secundarios-taurina-lista_14215/
Honorable Cámara de Representantes. (7 de octubre de 2008). Proyecto de ley número 021.
Recuperado el 12 de octubre de 2013, de Informe de ponencia segundo debate del proyecto de ley 021
de 2008 Cámara.:
http://servoaspr.imprenta.gov.co:7778/gacetap/gaceta.mostrar_documento?p_tipo=27&p_numero=021
&p_consec=21179
Hurlé, M. (2003). Fármacos antiasmáticos y broncodilatado- res. Farmacologia Humana . Barcelona:
Masson.
Langone, NYU Medical Center. (08 de Enero de 2011). NYU Langone. Recuperado el 10 de 0ctubre
de 2013, de Herbs & Supplements Taurine: http://www.med.nyu.edu/content?ChunkIID=21793
58
Lars, P., & Ves, t. (2005). Caffeine and risk of atrial fibrillation or flutter: the Danish Diet, Cancer,
and Health Study.
Las bebidas energizantes, en el punto de mira de las autoridades de EEUU. (24 de Octubre de 2012).
Recuperado el 13 de Octubre de 2013, de Semana:
http://www.google.com/hostednews/afp/article/ALeqM5iExDilY-
dpF1ev7cNpRU6iLCK2GQ?docId=CNG.8d67c16e68c1fd4742b1a52e05bac32e.01
Lindskog, M., P, S., & Pozzi L, K. Y. (2002). Involvement of DARPP-32 phosphorylation in the
stimulant action of caffeine. Macmillan: Letters to Nature.
Mandel, H. (2002). Food and Chemical Toxicology. Washington: Food Science.
Melgarejo, M. (2009). El verdadero poder de las bebidas. Germany: Nutrinfo.
Moro, M., Lizasoain, I., & Ladero, J. (2003). Drogodependencias 2 edicion. (L. J. Lorenzo P, Ed.)
255-62.
Parado, R., Alvarez García, Y., Barral, D., & Albaladejo, M. (2007). Cafeína: un nutriente, un
fármaco, o una droga de abuso. Adicciones , 225-238.
Puruncajas, I. (2 de ABRIL de 2011). Proyecto de factibilidad para la creación de una empresa de
producción y comercialización de una bebida energizante que tiene como materia prima la guayusa.
Tesis . Quito, Pichincha, Ecuador: Universidad Politécnica Salesiana.
Raben, A., & Tagliabue, A. (1994). Resistant starch: The effect on postprandial glycemia, hormonal
response, and satiety. Am J Clin Nutr.
Ramírez, L. (17 de Noviembre de 2009). Determinación de pesticidas en vegetales mediante
cromatografía de gases-espectrometría de masa/masa (GC-MS/MS). Huajuapan de León,, Oaxaca,
México.
Rivera, J., Shamah, T., Villalpando, S., Ávila, M., & Jiménez, A. (2006). Encuesta Nacional de Salud
y Nutrición. En SCIELO, Estado Nutncio(2006) (págs. 2-6). Cuernavaca: México: Instituto Nacional
de Salud Pública.
Rubinson, K., & Rubinson, F. (2001). Análisis instrumental. Madrid, España: Pearson Editorial, S. A.
Schulze, M., & Manson, J. (2004). Sugar-sweetened beverages, weight gain, and incidence of type 2
diabetes in young and middleaged women. New york: JAMA.
Solórzano, H. (15 de Agosto de 2004). Salud y Medicina. Recuperado el 11 de Octubre de 2014, de La
Taurina: es un aminoácido desconocido.: http//www.hector.solorzano.com/articulos/taurina.html
59
Taubert, D., Roesen, R., Lehmann, C., & Jung N, S. (2007). Effects of Low Habitual Cocoa Intake on
Blood Pressure and Bioactive Nitric Oxide. . Trial .
Underm, B. (2006). The Pharmacological Basis of Therapeutics. New York: McGrawHill.
Waters. (15 de Marzo de 2013). Amino-Acids. Recuperado el 26 de Octubre de 2013, de Adicciones:
http://www.waters.com/waters/es_ES/Amino-Acids/nav.htm?locale=es_ES&cid=513088
William R, L., Michael F, W., Andrea, S., & Vincent. (2004). Bong Hee Sung; Barbara S. McKey;
Thomas L. Whitsett. Blood Pressure Response to Caffeine Shows Incomplete Tolerance After Short-
Term Regular Consumption. Hypertension.
60
(Continua)
ANEXOS
Anexo 1. Norma Técnica Ecuatoriana NTE INEN 2411:2008. Bebidas Energéticas
61
(Continua)
62
(Continua)
63
(Continua)
(Continua)
64
Por: (INEN, 1991) . Bebidas Energéticas
65
J
(Continúa)
Anexo 2. Tabla militar estándar
66
Por: Ministerio de Salud Pública. Tabla Militar Estándar
67
Anexo 3. Información Comercial Supermaxi (Bebidas Energéticas)
. (Continúa)
68
69
Anexo 4. Tabla composición de diferentes bebidas energéticas
BEBIDAS ENERGéTICASEN ENVASE DE LATA
INGREDIENTES BEBIDA
EN ENVASE DE POLIETILENO
Agua desmineralizada x x x
Caña de azúcar x
Agua carbonatada x X x x x x 3,5 volúmernes X
Sacarosa x X x 11,3g/100ml x x x x x X
Dextrosa (Glucosa) x x x x x x
Regulador de Acidez (Citrato de Sodio) x x x x x x x x x x
Taurina x 129mg/310ml x 1000mg/250ml 1000mg/250ml x x x x
Glucuronolactona x x x
Cafeína (80mg/250ml) 108 mg/310ml x 80mg/250ml 80mg/250ml 80mg/250ml x x x x x
Inositol x x x x x
Aromatizantes Naturales y Artificiales x de fruta x cereza, fresa, cola champagne
Color Caramelo x x Colorante artificial x x x x x x
Ácido Citrico ( como acidulante) x x x x x x x x x
Premix de vitaminas x x x x x x
Riboflavina (Vitamina B2) x 0,6mg/100ml 0,8mg/250ml x x x
Nicotinamida(Vitamina B3) x x x x
Ácido Pantoténico (Vitamina B5) x 2 mg/100ml x x x x x
Pirodoxina Clorhidrato (Vitamina B6) x 2 mg/100ml 1mg/250ml x x x x x
Cobalamina (Vitamina B12) x 0,2ug/100ml 0,0005mg/250ml x 0,10% x x
Benzoato de Sodio (como preservante) x x x x x
Saborizantes Energy y Sabor artificial a fresa Tutti-frutti x Tutti-frutti x
Caramelo amónico x
Niacina 8mg/100ml x x
Dioxido de Carbono (CO2) x
Acido Carbónico x
Antioxidante E300
Vitamina C x
Biotina (Vitamina B7) o,075mg/250ml
Extracto de Guaraná x x
Extracto de Ginseng x x
L-Carnitina x
Sucralosa x
Energia (Calorias) 110 160 113 120 122,5 140 110 178 120 160
Elaborado por: Jorge Regalado
V 220 (365ml)
Bebida
energizante
Red Bull
(250ml)
ENERGY
V 220 (310ml)
Bebida
energizante
EN ENVASE DE LATA
XL (250ml)
Energy Drink
CICLON
(250ml)
energy drink
CULT (250ml)
ENERGY
ACTIVATOR
4.40 (269ml)
ENERGY
DRINK
WAKE UP
(250ml) +
ENERGY
Drink
Volcan
(365ml)
energía total
ROCKSTAR(3
75ml)
ENERGY
DRINK INGREDIENTES BEBIDA
Monster
(350ml)
Energy
EN ENVASE DE POLIETILENO
70
Anexo 5. Método oficial de la AOAC 29.1.14: Determinación de cafeína
Por: AOAC OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS (2006). Method 979.08 Caffeine
71
(Continúa)
Anexo 6. Método oficial de la AOAC 50.1.07A: Determinación de taurina
72
(Continúa)
73
Por: AOAC OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS (2006). Method 997.05 Taurine
74
Anexo 7. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 1
Cafeína
2,147 min
75
Cromatograma 1.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 1 con una concentración de 8,00E-04 mg/ml, en
el cual se observa el pico de cafeína al tiempo 2,147 min
76
Anexo 8. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 2
Cafeína
2,123 min
77
Cromatograma 2.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 2 con una concentración de 2,00E-03 mg/ml, en
el cual se observa el pico de cafeína al tiempo 2,123 min
78
Anexo 9. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 3
Cafeína
2,123 min
79
Cromatograma 3.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 3 con una concentración de 4,00E-03 mg/ml, en
el cual se observa el pico de cafeína al tiempo 2,093 min
80
Anexo 10. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 5
Cafeína
2,077 min
81
Cromatograma 4.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 5 con una concentración de 0,016 mg/ml, en el
cual se observa el pico de cafeína al tiempo 2,077 min
82
Anexo 11. Cromatograma de cuantificación de cafeína en el estándar N. 6
Cafeína
2,163 min
83
Cromatograma 5.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 6 con una concentración de 0,02 mg/ml, en el
cual se observa el pico de cafeína al tiempo 2,163 min
84
Anexo 12. Cromatograma de cuantificación de taurina en el estándar N. 1
Taurina
0,967 min
85
Cromatograma 6.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 1con una concentración de 0,001 g/ml, en el
cual se observa el pico de taurina al tiempo 0,967 min
86
Anexo 13. Cromatograma de cuantificación de taurina en el estándar N. 2
Taurina
0,993 min
87
Cromatograma 7.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 2con una concentración de 0,004 g/ml, en el
cual se observa el pico de taurina al tiempo 0,983 min
88
Anexo 14. Cromatograma de cuantificación de taurina en el estándar N. 4
Taurina
0,907 min
89
Cromatograma 8.- Cromatograma por HPLC en el estándar N. 4 con una concentración de 0,012 g/ml, en el
cual se observa el pico de taurina al tiempo 0,907 min
90
Anexo 15. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética LM1
Cafeína
1,890 min
Tauri
na
0,950
min
91
Cromatograma 9.- Cromatograma por HPLC en una muestra de bebida energética LM1, en el cual se observa
el pico de cafeína al tiempo 1,890 min y el pico de taurina al tiempo de 0,950 min.
92
Anexo 16. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética 0M2
Cafeína
2,137 min
Tauri
na
0,89
0
min
93
Cromatograma 10.- Cromatograma por HPLC en una muestra de bebida energética 0M2, en el cual se observa
el pico de cafeína al tiempo 2,137 min y el pico de taurina al tiempo de 0,890 min.
94
Anexo 17. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética TM3
Cafeína
2,087 min
Tauri
na
0,937
min
95
Cromatograma 11.- Cromatograma por HPLC en una muestra de bebida energética TM3, en el cual se observa
el pico de cafeína al tiempo 2,087 min y el pico de taurina al tiempo de 0,937 min.
96
Anexo 18. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética NM4
Cafeína
1,890 min
Tauri
na
0,897
min
97
Cromatograma 12.- Cromatograma por HPLC en una muestra de bebida energética NM4, en el cual se observa
el pico de cafeína al tiempo 1,890 min y el pico de taurina al tiempo de 0,897 min.
98
Anexo 19. Cromatograma de cuantificación de cafeína y taurina en la bebida energética AM5
Cafeína
1,897 min
Tauri
na
0,899
min
99
Cromatograma 13.- Cromatograma por HPLC en una muestra de bebida energética AM5, en el cual se observa
el pico de cafeína al tiempo 1,897 min y el pico de taurina al tiempo de 0,899 min.
100
Anexo 20. Gráficas de las 4 curvas de calibración para cafeína:
Curva de calibración N. 1 para cafeína
Curva de calibración N. 2 para cafeína:
Curva de calibración N. 3 para cafeína
y = 2E+08x + 586,95R² = 0,9993
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
0,00E+00 5,00E-03 1,00E-02 1,50E-02 2,00E-02 2,50E-02
Áre
a (V
olt
)
Concentración (mg/L)
CURVA 1
y = 2E+08x + 13101R² = 0,9999
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
0,00E+00 5,00E-03 1,00E-02 1,50E-02 2,00E-02 2,50E-02
Áre
a
Concentración (mg/L)
CURVA 2
y = 2E+08x + 12386R² = 0,9999
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
0,00E+00 5,00E-03 1,00E-02 1,50E-02 2,00E-02 2,50E-02
Áre
a
Concentración (mg/L)
CURVA 3
101
Curva de calibración N. 4 para cafeína
Curva de calibración N. 5 para cafeína
y = 2E+08x + 12876R² = 0,9998
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
0,00E+00 5,00E-03 1,00E-02 1,50E-02 2,00E-02 2,50E-02
Áre
a
Concentración (mg/L)
CURVA 4
y = 220686x + 13086R² = 0,9998
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0
Áre
a
Concentración mg/L
CURVA 5
102
Anexo 21. Gráficas de las 4 curvas de calibración para Taurina:
Curva de calibración N. 1 para taurina
Curva de calibración N. 2 para taurina
Curva de calibración N. 3 para taurina
y = 1E+07x - 12180R² = 0,9994
-50000
0
50000
100000
150000
200000
250000
0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025
Áre
a m
v
Concentración mg/L
Curva 1
y = 1E+07x - 11716R² = 0,9993
-50000
0
50000
100000
150000
200000
250000
0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025
Áre
a m
V
Concentración mg/mL
Curva 2
y = 1E+07x - 12104R² = 0,9993
-50000
0
50000
100000
150000
200000
250000
0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025
Áre
a m
V
Concentración mg/L
Curva 3
103
Curva de calibración N. 4 para taurina
Curva de calibración N. 5 para taurina
y = 1E+07x - 12419R² = 0,9992
-50000
0
50000
100000
150000
200000
250000
0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025
Áre
a m
V
Concentración mg/L
Curva 4
y = 10981x - 11884R² = 0,9988
-50000
0
50000
100000
150000
200000
250000
0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0
Áre
a
Concentración mg/L
CURVA 5
104
Anexo 22. Distribución F para el análisis de varianza
Por: Antonio Anzaldua Morales (2004). Evaluación sensorial de los alimentos
105
Anexo 23. Valores RES para la prueba DMS (Diferencia Mínima Significativa)
Por: Antonio Anzaldua Morales (2004). Evaluación sensorial de los alimentos
106
Anexo 24. Tabla de distribución t de student
Por: Antonio Anzaldua Morales (2004). Evaluación sensorial de los alimentos