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Transferencia de material genético II: Transformación
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Principio de Transformación
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El principio transformante es DNA
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Transformación:Cambio genético estable
producido al incorporar DNA exógeno
Natural
Artificial
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Transformación Natural
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Transformación Natural
Las bacterias mas estudiadas son:
GRAM +
GRAM -
Streptococcus pneumoniae Bacillus subtilis
Neisseria gonorrhoeae Haemophilus influenzae
El proceso se divide en 2 Etapas
1 Desarrollo de un estado competente
2 Procesamiento del DNA
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1 Desarrollo de un estado Competente
¿Qué es una célula competente?
Un estado fisiológico en el que una célula es capaz de tomar una molécula de DNA y ser
transformada
¿Qué induce la competencia de manera natural?
Limitación en nutrientesMitomicina C
Alta densidad CelularTemperatura y pH
Inducen la transcripción de genes com, indicadores de estado de
competencia
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Transporte de DNA en GRAM +
ANTES se debe formar el pseudopili que atraviesa la
pared celular
1. Unión del DNA a la superficie por interacción con proteínas (++) del
pseudopili
2. Unión a receptor: ComEA (no es secuencia específica)
3. Fragmentar y degradar la cadena que no se transporta
4. Se ha encontrado una endonucleasa en membrana
ComEC: canal en la membrana
ComFA: unión a ATP
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Transporte de DNA en GRAM -
Se ha sugerido que el reconocimiento es secuencia
específica: (5´GCCGTCTGAA-3´)
Pili tipo IV:
Sistema de secreción tipo II
El pili debe cruzar la membrana interna, el espacio periplásmico y la membrana
externa
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¿Para que sirve la transformación natural?
Nutrición Recombinación
Fuente de Carbon y Nitrógeno
Reparación
La reparación de DNAnecesita nucleotidos
Adaptación, cambio o mejoramiento
metabólico
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Transformación Artificial
La bacteria más utilizada es Escherichia coli
Una técnica fundamental en biología molecular
Clonación
Sobre expresión de proteínas
Producción de plásmidos
Generación de organismos transgénicos
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¿Que tipo de DNA usamos para transformar?
Sobre expresión de proteínas
Silenciamiento de genes
Producción de plásmidos
Interacción de proteínas
Generación de organismos transgénicos
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Generación de organismos transgénicos
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Inducción de competencia artificial
1 Tratamiento químico
3 mL medio Luria
Incubar toda la noche a 37°C
3 mL NaCl
Resuspender
5 mL CaCl2
Resuspender
Incubar 20 min 2500 r.p.m 7 min
CÉLULAS COMPETENTES
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Transformación por choque térmico
Choque térmico
Regresar a hielo
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Inducción de competencia artificial
2 Electroporación
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Sitio múltiple de restricción
Origen de replicación
Gen que confiere resistencia a kanamicina:
kanamicina fosfotransferasa
Plásmido pET-TEM
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Acción de la Kanamicina
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SEMEJANZAS Y DIFERENCIAS TRANSFORMACIÓN vs CONJUGACIÓN