MicrobiologíaTrabajoPráctico3.Cultivoeidentificaciónde

bacterias.

GRACIELANATALIAPUCCI

Objetivos:

Reconocer los distintos medios de cultivo utilizados para la

recuperación de bacterias, y comprender las distintas técnicas que

posibilitan la identificación de los agentes etiológicos responsables de los

procesos infecciosos.

Mapa conceptual

Introducción.

Para aumentar la biomasa de las bacterias es necesario cultivarlas en el laboratorio. Como toda célula las bacterias necesitan condiciones ambientales y nutricionales para poder desarrollarse. Por lo tanto estos microorganismos para crecer y multiplicarse van a necesitar nutrientes (fuente de carbono, nitrógeno e hidrógeno) y condiciones adecuadas de pH, temperatura, atmósfera y tiempo de incubación.

Para el desarrollo de las bacterias se utilizan medios de cultivo estériles

que pueden ser: sólidos, semisólidos y líquidos, estos son el soporte que

les brinda los nutrientes para el desarrollo.

diagnostico

clinico microbiologico

tomademuestra

cultivo

identi2icaciondegermen

Pruebasmetabolicas,serologicas.Tecnicas

moleculares

Sensibilidadantibiotica

tratamiento

Los medios de cultivo sólidos se fraccionan

en placasde Petri y se utilizan para

aislamiento y recuento, utilizando la

técnica de agotamiento por estría que se

muestra en la figura de abajo.

Esta técnica se realiza de forma aséptica, esterilizando el ansa en el

mechero entre cada estría.

En los medios de cultivo líquidos.

Fig. Tomado de http://projectomartin.blogspot.com.ar/2012/12/practica-

7_9.html la presencia de turbidez indicará el desarrollo bacteriano.

Los medios de cultivo se los puede clasificar en:

Medios Nutritivos:

Son medios simples que contienen los nutrientes básicos para

permitir el crecimiento de bacterias heterótrofas.

Medios enriquecidos:

La adición al caldo o agar nutritivo de componentes como sangre,

suero, vitaminas, aminoácidos u otros componentes ricos en compuestos

orgánicos, les proporciona sustancias nutritivas complementarias que

permiten el crecimiento de organismos heterótrofos más exigentes.

Medios selectivos:

Añadiendo al agar nutritivo ciertos productos especiales, puede

impedirse el desarrollo de algunos grupos bacterianos sin inhibir otros.

Por ejemplo, el cristal violeta en concentraciones específicas previene el

crecimiento de bacterias Gram positivas (salvo los Estreptococcus ß-

hemolíticos y Enterococcus) sin afectar el desarrollo de Gram negativas.

Medios diferenciales:

La adición de ciertas sustancias químicas a los medios de cultivo

trae como resultado determinado tipo de crecimiento bacteriano o

cambios, permitiendo diferenciar distintos tipos de bacterias. Por

ejemplo, si se siembra una mezcla de bacterias en un medio agar sangre,

algunas bacterias pueden hemolizar los glóbulos rojos (apareciendo una

zona clara alrededor de la colonia), mientras que otras no lo hacen. Así es

posible distinguir entre bacterias hemolíticas y no hemolíticas que

proliferan en un mismo medio.

Identificación de bacterias

Las bacterias se pueden identificar, asignar un nombre, por diferentes

métodos, entre ellos están los métodos clásicos de identificación metabólica.

Actividad Práctica:

La cátedra les dará placas con medio de cultivo plaqueado en caja de

Petri y usted realizará la técnica aséptica previa postración del personal de

la cátedra. Las diferentes colonias pueden tener diferentes formas y

tamaños.

El personal de la cátedra les mostrará identificaciones de bacilos Gram

negativos. En tubos que es la forma tradicional o antigua

La cátedra les dará placas con medio de cultivo plaqueado en caja de

Petri y usted realizará la técnica aséptica previa postración del personal de

la cátedra. Las diferentes colonias pueden tener diferentes formas y

tamaños.

Existen equipos comerciales como los API.

Fig. Foto tomado de http://bmeditores.mx/salmonelosis-en-las-aves-parte-iii-

paratifoidea-aviar/

Otrastécnicasqueseutilizan:Para poder arribar a un diagnóstico certero de una determinada enfermedad infecciosa además de los cultivos microbiológicos para recuperar el germen causal, deben tenerse en cuenta otras herramientas de evaluación que ayudan a la confirmación de los diagnósticos: examen clínico médico, serología, técnicas moleculares, examen microscópicos Algunos ejemplos de diagnóstico: SIFILIS

ü Campo oscuro (Tinción Fontana Tribondeau): observación de espiroquetas

• (Treponema pallidum)

ü VDRL (tamizaje inespecífico)

ü FTAbs (prueba confirmatoria)

Chlamydias ü Métodos inmunocromatográficos (antígeno)

ü Prueba confirmatoria: PCR o cultivo celular

Recordar: Chlamydias es un género de bacterias intracelulares

Streptococo Beta Hemolítico grupo “A”:

ü Métodos inmunocromatográficos (Antígeno) - RAPIDO

ü Cultivo de Fauces: 72 hs- CONFIRMATORIO