toxicologia en el momento actual se reconoce que la toxicología es una ciencia multidisciplinaria....

TOXICOLOGIATOXICOLOGIA

En el momento actual se reconoce que la En el momento actual se reconoce que la Toxicología Toxicología es una es una ciencia multidisciplinaria. ciencia multidisciplinaria.

Esta característica es una de las razones del rápido desarrollo Esta característica es una de las razones del rápido desarrollo de la Toxicología en los últimos años, gracias a las de la Toxicología en los últimos años, gracias a las contribuciones de profesores, investigadores y profesionales contribuciones de profesores, investigadores y profesionales de muy diferente formación inicial (de muy diferente formación inicial ( RepettoRepetto, 1.995)., 1.995).

Existen muchas definiciones de la misma; una de las más completa Existen muchas definiciones de la misma; una de las más completa es la siguiente:es la siguiente:

Toxicología -Toxicología - es la ciencia que estudia las sustancias químicas en es la ciencia que estudia las sustancias químicas en cuanto que son capaces de producir alteraciones patológicas en los cuanto que son capaces de producir alteraciones patológicas en los seres vivos, con sobrevida- con o sin secuelas - o muerte , estudia seres vivos, con sobrevida- con o sin secuelas - o muerte , estudia los mecanismos de producción de dichas alteraciones y los medios los mecanismos de producción de dichas alteraciones y los medios para contrarrestarlas – antídotos o antagonistas - , así como los para contrarrestarlas – antídotos o antagonistas - , así como los procedimientos para detectar, identificar y cuantificar tales procedimientos para detectar, identificar y cuantificar tales agentes y evaluar su grado de toxicidadagentes y evaluar su grado de toxicidad , como también su , como también su dispersión en el medio ambientedispersión en el medio ambiente ( ( RepettoRepetto, 1.981 y 1.997). , 1.981 y 1.997).

Productos Productos QuímicosQuímicos

Exposición Exposición

Efectos Efectos

Productos Productos QuímicosQuímicos

Exposición Exposición

Efectos Efectos

Toxicidad :Toxicidad : Capacidad para producir daño a un organismo vivo en Capacidad para producir daño a un organismo vivo en relación a la cantidad de sustancia administrada o absorbida, la vía relación a la cantidad de sustancia administrada o absorbida, la vía de administración, y su distribución en el tiempode administración, y su distribución en el tiempo

Dosis:Dosis: Cantidad de sustancia por kilogramo de peso que es capaz Cantidad de sustancia por kilogramo de peso que es capaz de de producir un efecto en 24 horasproducir un efecto en 24 horas

Intoxicaciones y sus clasesIntoxicaciones y sus clasesIntoxicaciones y sus clasesIntoxicaciones y sus clases

salud

tiempo

a c a c

b

d e d

A-Intoxicación Aguda A-Intoxicación Aguda B- Intoxicación CrónicaB- Intoxicación Crónica

f

b

enfermedad a- estado de salud b- posibilidad de muertec- recuperación totald- recuperación con secuelas e/f - progresivos déficit salud

Toxicidad AgudaToxicidad Aguda

Toxicidad CrónicaToxicidad Crónica

Intoxicación aguda :Intoxicación aguda : Única dosis con Única dosis con aparición de sintomatología antes de aparición de sintomatología antes de las 24 horaslas 24 horas

Intoxicación crónicaIntoxicación crónica : : Absorción Absorción repetida de un toxico en largos repetida de un toxico en largos periodos de tiempo periodos de tiempo

Distintos Tiempos en un proceso tóxicoDistintos Tiempos en un proceso tóxico

Absorción Absorción

Aparición Aparición

Máximo Máximo -Muerte--Muerte- DesapariciónDesaparición

Latencia Duración del efecto Latencia Duración del efecto

Agente XenobióticoAgente Xenobiótico

Etimología: “Ajeno a la vida”,Etimología: “Ajeno a la vida”, todo cambio significativo en la todo cambio significativo en la composición o condiciones naturales de un medio constituye composición o condiciones naturales de un medio constituye una forma de contaminación que afectan al recurso en sí o a una forma de contaminación que afectan al recurso en sí o a su uso para un fin determinadosu uso para un fin determinado

Los Los agentes agentes que lo provocan pueden ser: químicos, físicos, que lo provocan pueden ser: químicos, físicos, biológicosbiológicos

El El mediomedio afectado puede ser aire, agua, suelo o cualquier afectado puede ser aire, agua, suelo o cualquier sustrato orgánicosustrato orgánico

Los agentes pueden producirse en forma espontánea o Los agentes pueden producirse en forma espontánea o provocada por la actividad del hombreprovocada por la actividad del hombre

En cuanto a la En cuanto a la composicióncomposición puede ser una variación anómala puede ser una variación anómala en su proporción o la incorporación de sustancias que no se en su proporción o la incorporación de sustancias que no se encuentran en el ambiente en forma normal e introducidas encuentran en el ambiente en forma normal e introducidas por la actividad del hombrepor la actividad del hombre

Características tóxicas del agente Características tóxicas del agente xenobióticoxenobióticoDosis Letal 50 (DL50) :Dosis Letal 50 (DL50) : Es la dosis que produce la muerte del 50% deEs la dosis que produce la muerte del 50% de

los animales de un lote de experimentación.los animales de un lote de experimentación.[DL50] = [DL50] = miligramos de compuesto por kilogramo de peso del animalmiligramos de compuesto por kilogramo de peso del animal

A menor valor de la DL50 , más peligrosa es la A menor valor de la DL50 , más peligrosa es la sustancia respecto de otra de mayor magnitud.sustancia respecto de otra de mayor magnitud.

Sustancia Química DL50 mg/kg

Etanol 10.000

Cloruro de sodio 4.000

Estricnina 2

Nicotina 1

Toxina Botulínica 0,00001

DenominaciónDenominación DL50 oral rataDL50 oral rata Dosis oral letal hombre Dosis oral letal hombre adultoadulto

ExtremadamenExtremadamente tóxicote tóxico

Menor a 1 mg/KgMenor a 1 mg/Kg 1 gota1 gota

Altamente Altamente tóxicotóxico

1 – 50 mg/Kg1 – 50 mg/Kg 1 cucharada ( 4 ml)1 cucharada ( 4 ml)

ModeradamentModeradamente tóxicoe tóxico

50 – 500 mg/Kg50 – 500 mg/Kg 30 g30 g

Ligeramente Ligeramente tóxicotóxico

0,5 – 5 g/Kg0,5 – 5 g/Kg 250 g250 g

Prácticamente Prácticamente no tóxico no tóxico

5 –15 g/Kg5 –15 g/Kg 1 litro1 litro

Relativamente Relativamente inocuoinocuo

Mayor a 15 g/KgMayor a 15 g/Kg Mayor a 1 litroMayor a 1 litro

Pueden emplearse como indicadores , otros efectos diferentes Pueden emplearse como indicadores , otros efectos diferentes a los de la muertea los de la muerte

Por ejemplo, Por ejemplo, Indicadores Biológicos de Exposición , Indicadores Biológicos de Exposición , los cuales pueden los cuales pueden ser : ser :

A- Químicos : A- Químicos : Concentración del toxico o sus metabolitos en Concentración del toxico o sus metabolitos en fluidos biológicosfluidos biológicos

B- Bioquímicos : B- Bioquímicos : modificación de parámetros bioquímicos modificación de parámetros bioquímicos fisiológicos ( Me Hb; actividad enzimática ,etc)fisiológicos ( Me Hb; actividad enzimática ,etc)

C- Funcionales : C- Funcionales : Capacidad respiratoria, vol.min circulatorioCapacidad respiratoria, vol.min circulatorio

D- Histológicos: D- Histológicos: Lesiones tisularesLesiones tisulares

Los Los marcadores biológicosmarcadores biológicos, también denominados , también denominados determinantes determinantes o o indicadores biológicos de exposiciónindicadores biológicos de exposición a un a uncompuesto químico pueden ser, según su naturaleza, elcompuesto químico pueden ser, según su naturaleza, elpropio compuesto, sus metabolitos característicos, propio compuesto, sus metabolitos característicos, productos procedentes de reacciones de conjugación delproductos procedentes de reacciones de conjugación delcompuesto o de sus metabolitos que se puedan producir en compuesto o de sus metabolitos que se puedan producir en los ciclos bioquímicos endógenos, formados por los ciclos bioquímicos endógenos, formados por reacción del compuesto o por sus metabolitos con reacción del compuesto o por sus metabolitos con macromoléculas, interferencias bioquímicas o enzimáticasmacromoléculas, interferencias bioquímicas o enzimáticasmedibles, etcmedibles, etc . .

Los medios biológicos en los que se Los medios biológicos en los que se puede determinar la puede determinar la presencia de los marcadores biológicos presencia de los marcadores biológicos de exposición laboralde exposición laboralestán muy relacionados con las vías de están muy relacionados con las vías de entrada, distribuciónentrada, distribucióny eliminación de cada compuesto, así y eliminación de cada compuesto, así como con su como con su naturaleza químicanaturaleza química

La mayoría de las determinaciones La mayoría de las determinaciones biológicas biológicas se realizan en sangre, orina o aire se realizan en sangre, orina o aire exhaladoexhalado

LaLa sangre sangre constituye el principal vehículo de transporte y constituye el principal vehículo de transporte y distribución de los compuestos químicos en el cuerpo, distribución de los compuestos químicos en el cuerpo, por tanto la mayoría de las sustancias biológicamente por tanto la mayoría de las sustancias biológicamente activas o sus metabolitos se pueden encontrar en este activas o sus metabolitos se pueden encontrar en este medio.medio.

La La orinaorina es fácil de recoger, se pueden utilizar grandes es fácil de recoger, se pueden utilizar grandesvolúmenes de muestra y es también una técnica no volúmenes de muestra y es también una técnica no invasiva.invasiva.

Las determinaciones en Las determinaciones en aire exhaladoaire exhalado están limitadas a la están limitadas a la exposición a compuestos orgánicos volátiles; es un exposición a compuestos orgánicos volátiles; es un método no invasivo y el mejor aceptado por la población método no invasivo y el mejor aceptado por la población por la sencillez de la toma de muestra .por la sencillez de la toma de muestra .

Vías o rutas de absorción

Xenobiótico

Barrera Biológica

Cutánea

Gastrointestinal

Alveolar

Placentaria

Otras

Distribución

Órgano blanco

Efectos

Incorporación de los Incorporación de los Tóxicos al organismoTóxicos al organismo

ContaminanteContaminante

Vía DérmicaVía Dérmica Vía DigestivaVía DigestivaVía RespiratoriaVía Respiratoria

ECOTOXICOLOGIA # TOXICOLOGIAECOTOXICOLOGIA # TOXICOLOGIA

Toxicología: estudia las interacciones nocivas entre sustancias químicas y organismo vivos

Objeto de estudio: individuos

Ecotoxicología: estudia los efectos de los contaminantes sobre los ecosistemas

Objeto de estudio: poblaciones, comunidades, ecosistemas

ECOTOXICOLOGÍAECOTOXICOLOGÍA Ecotoxicología: estudia el destino y los efectos de los contaminantes

en los ecosistemas intentando explicar las causas y prever los riesgos probables

Destino de los contaminantes: emisión, distribución, transporte, transformación (química/biológica), bioacumulación

Efectos biológicos de los contaminantes: sobre las poblaciones, comunidades y ecosistemas

Modificaciones en la estructura y funcionamiento del ecosistema: declinación de aves, diversidad de especies de algas, disminución/aumento de la productividad primaria

Contaminante: toda forma de materia capaz de alterar, modificar o interferir en forma negativa con los elementos del ambiente siendo factor de riesgo para el hombre y otros seres vivos

Efectos directos contaminantes: actúan sobre los individuos (y a través de ellos sobre las poblaciones, comunidades, ecosistemas) ejemplos: metales pesados, pesticidas

Efectos indirectos contaminantes: actúan sobre el medio físico, ejemplos: sólidos suspendidos, materia orgánica

ECOTOXICOLOGÍAECOTOXICOLOGÍA Efecto tóxico: es el producido por uno o varios agentes tóxicos sobre

un organismo, población o comunidad que se manifiesta por cambios biológicos y su grado se evalúa por una escala de intensidad relacionada con la dosis (cantidad administrada/unidad de peso corporal) o la cc (sustancia aplicada al medio) del agente tóxico

El efecto puede ser: Cuantal: presencia o ausencia de una característica Letal: muerte por acción directa consecuencia de la exposición Subletal: por debajo del nivel que causa la muerte Agudo: efecto que se manifiesta rápida y severamente después de un

corto período de exposición: 0-96hs Crónico: efecto luego de un largo período de exposición (días o años)

según la especie Combinado: dos o más sustancias aplicadas al mismo tiempo

producen distintos efectos o modos de acción Potenciación o sinergismo: cuando la toxicidad de una mezcla es

mayor a la esperada debido a la suma de toxicidades de los agentes individuales

Inhibición o antagonismo: cuando la toxicidad es menor a la esperada debido a la suma de toxicidades de los agentes individuales

ECOTOXICOLOGÍAECOTOXICOLOGÍA Ensayos de toxicidad:Ensayos de toxicidad: tienen como propósito determinar si los

compuestos químicos tóxicos se encuentran en cantidades tóxicas

No están pensados para predecir efectos sobre los ecosistemas en forma cuantitativa, aunque muchos estudios han demostrado la existencia de una asociación significativa entre los resultados de los ensayos y el impacto en los ecosistemas

El bioensayo es un método utilizado para detectar y evaluar la capacidad inherente de un agente tóxico de producir efectos adversos sobre los organismos vivos

Realizado en condiciones definidas y sobre organismos individuales o un grupo de organismos determinado se estudian las relaciones dosis o cc vs efecto o respuesta

Ninguna especie aislada podría representar un ecosistema entero se recomiendan ensayos secuenciales incluyendo: algas, dàfnidos y peces

MEDICIONES EN BIOENSAYOSMEDICIONES EN BIOENSAYOS

Los efectos tóxicos a evaluar pueden ser: mortalidad, inmovilidad, inhibición del crecimiento, alteración del comportamiento, etc

IC 50: concentración de la muestra que provoca una disminución o inhibición del 50% de la luminiscencia (Vibrio fisheri u otra bacteria) en un tiempo determinado

CE 50: concentración efectiva de la muestra que provoca un efecto en el 50% de la población (Daphnia magna u otro invertebrado) en un tiempo determinado

COMO EMPLEAR LOS RESULTADOS DE LOS COMO EMPLEAR LOS RESULTADOS DE LOS ENSAYOS DE TOXICIDADENSAYOS DE TOXICIDAD

Clasificar efluentes en UTA (unidades tóxicas agudas)

UTA = 1 / CE 50 x 100

CE 50 - 24hs CE 50 - 24hs

(% v/v de efluente)(% v/v de efluente)

UTAUTA Caraterización del Caraterización del efluenteefluente

< 25 %< 25 % > 4> 4 Muy tóxicoMuy tóxico

26 – 50 %26 – 50 % 2 – 42 – 4 TóxicoTóxico

51 – 75 %51 – 75 % 1.33 – 1.991.33 – 1.99 Moderadamente Moderadamente tóxicotóxico

> 75 %> 75 % < 1.33< 1.33 Levemente tóxicoLevemente tóxico

CONTROL DE DESCARGAS A CUERPOS RECEPTORES

Objetivo: asegurar que las descargas no contengan contaminantes tóxicos en cantidades tóxicas

Monitoreo químico: control de sustancias específicas

Biomonitoreo: Ensayos de toxicidad (WET o toxicidad total del efluente): no da

información sobre tóxicos específicos, ni sobre el tratamiento o la persistencia ni los efectos sobre la salud humana pero, permite evaluar la toxicidad conjunta de todos los constituyentes de un efluente complejo o la reducción de los efectos tóxicos limitándose a medir un único parámetro su toxicidad

Bioensayo: evaluación de la condición de un cuerpo de agua mediante el estudio de organismos residentes

Factores de incertidumbre: condiciones de mezcla del efluente en el cuerpo receptor , variabilidad en la sensibilidad entre especies, variabilidad de toxicidad del efluente

COMO SE REALIZA UN ENSAYO DE COMO SE REALIZA UN ENSAYO DE TOXICIDAD CON EFLUENTESTOXICIDAD CON EFLUENTES

Toma de muestra

Conservación de la muestra

Pretratamiento de la muestra

Realización del ensayo

BIOENSAYOSBIOENSAYOS Microtox (Vibrio fischeri)

Método rápido de toxicidad empleando Daphnia magna y KIT-TOX.

Ensayo de toxicidad aguda con Daphnia magna

Ensayo de toxicidad aguda con semillas de lechuga (Lactuca sativa L)

BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOXBIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX

Organismo de ensayo: Vibrio fischeri Una especie de bacteria marina Gram

negativa Anaerobia facultativa Del género VIBRIÓN, familia Vibrionaceae Exhibe BIOLUMINESCENCIA

Vibrio fischeri

Se encuentra en una relación simbiótica con el calamar sepiólide Euprymna scolopes

El Euprymna scolopes posee una serie de apéndices recubiertos de mucosidad alrededor de su órgano luminoso con los que recoge bacterias Vibrio fischeri del entorno marino

Vibrio fischeri

Principales características:

La Bioluminiscencia (emisión de luz por parte de organismos vivos como resultado de sus actividades bioquímicas)

Su gran sensibilidad que presenta a una amplia variedad de sustancias tóxicas


Principio de la técnica:

Se determina la inhibición de la luminiscencia de una suspensión de células de Vibrio fischeri como resultado de la exposición de dicha suspensión a diluciones de la muestra.

Se somete a distintas diluciones (1,10, 45 y 90 %) durante distintos tiempos (5, 15, 30 min).

También se hacen los controles, donde no se le suministra la muestra o toxina y se analiza la baja de la luminiscencia


Expresión de los resultados: IC 50 (concentración de la muestra que provoca una disminución de la luminiscencia en un tiempo determinado )

Alcance: aguas residuales, lixiviados, aguas dulces superficiales o subterráneas o aguas saladas

Tóxicos de referencia: permiten evaluar bajo condiciones estandarizadas la sensibilidad relativa de la bacteria luego de la reconstitución y la confiabilidad de los ensayos

Fenol: IC50 5 min 13-26mg/l Cinc: IC50 15min 0.6-2.2 mg/l Zn/l

IC50 15min 3-10mg/l (Zn SO4.7H2O)


Analizador de toxicidad aguda

BIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOXBIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOXBIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOXBIOENSAYO DE TOXICIDAD MICROTOX


El software del equipo calcula la relación concentración/efecto para cada tiempo de exposición usando análisis por regresión lineal

El resultado puede expresarse como IC50 (concentración inhibitoria 50) que es la concentración de la muestra a la cual se observa una disminución de la luminiscencia del 50%; este valor se calcula a partir de la curva concentración-respuesta (variable métrica) y representa la concentración a la cual la variable (en este caso la luminiscencia) es un 50% menor que el control

El resultado también puede expresarse como porcentaje de inhibición: como resultado de la exposición de la suspensión de bacterias a una concentración de la muestra con respecto al control y se expresa en porcentaje, por ejemplo la muestra a una concentración del 20% causa un 65% de inhibición de la luminiscencia a los 15 minutos de exposición


Interferencias: las pérdidas de luminiscencias por absorción de la luz o dispersión pueden suceder en caso de muestras turbias o fuertemente coloreadas y se compensa usando una cubeta de corrección de color (cubeta con cámara doble)

Se requiere una concentración de oxígeno mayor a 0.5mg/l para que se produzca la luminiscencia las muestras con altas DBO pueden causar deficiencias o ser inhibitorias

Limitaciones: sustancias insolubles, poco solubles, volátiles o cuyo estado se altere durante el período de ensayo puede afectar el resultado o su reproducibilidad

Las concentraciones salinas en la muestra inicial que excedan los 30mg/l de ClNa pueden conducir a efector hiperosmóticos

Conservación de las muestras: refrigeradas hasta 24hs y congeladas a -20°C durante 2 meses sin conservantes de carácter biocida

Métodos de detección de toxicidad empleando Daphnia magna

Organismo de ensayo: Daphnia magna

Del orden de los Cladóceros de la clase Crustácea (pariente de los cangrejos) las especies del género Daphnia

Se trata de una pequeña “pulga de agua” que mide de 1 a 3 mm

Vive en lagos y lagunas, alimentándose de algas microscópicas y sirviendo, a su vez, de alimento a los peces

Tiene un ciclo de vida corto (3 o 4 semanas)

Reproducción partenogenética ( asegura una uniformidad de respuesta de los individuos )


Alta sensibilidad a los tóxicos; es capaz de acusar 0.005mg de mercurio en agua y menores concentraciones de pesticidas y residuos industriales

Son las más usadas como organismos de prueba o de referencia en ensayos de toxicidad


Con Daphnia magna se hacen tres tipos de ensayos:

Método rápido de toxicidad empleando Daphnia magna y KIT-TOX.( fluorescencia de sustrato bajo luz UV)

Ensayo de toxicidad aguda (CL50 o CE50): la concentración del tóxico capaz de matar o inmovilizar el 50% de la población en 48hs

Ensayo de toxicidad crónica: la evaluación se basa en la capacidad reproductiva o el crecimiento de los individuos.

Método rápido de toxicidad empleando Daphnia magna y KIT-TOX

Objetivo:

Detección temprana de agentes

contaminantes que hayan ingresado al agua

Permite detectar la presencia de un alto rango de sustancias en un tiempo máximo de dos horas desde el inicio del ensayo


Principio de la técnica: Los organismos que hayan estado expuestos a

sustancias tóxicas, tendrán reducida su capacidad de ingerir y consecuentemente de clivar enzimáticamente un sustrato azucarado con marcado fluorescente

La respuesta enzimática permite al usuario caracterizar la toxicidad de una muestra liquida, cuantificando la supresión de la actividad enzimática.

La visualización ocular de los organismos incubados en la muestra a evaluar, bajo luz ultravioleta de onda larga, y contabilización de los fluorescentes y no fluorescentes en cada cámara de exposición.


El azúcar es el sustrato marcado

Las Daphnias a usar son neonatos (menores de 24 horas) sin alimentar por aproximadamente 4 horas previas al ensayo

Se emplean 36 organismos: 6 celdas con 6 organismos cada celda


Llenar cada cámara con la dilución de la muestra a analizar

Someter las Daphnias por un periodo de 60 min al efecto de la muestra y también a controles negativo y positivo (dicromato 0,8 mg/L)

Luego de la hora, agregar 6 gotas del sustrato IQ e incubar 15min.

Bajo luz UV, se cuentan los organismos que florecen en cada cámara

Si 4 o más de los 18 organismos expuestos a la muestra no florecen, el agua es tóxica para el consumo humano


Principio: En la prueba de toxicidad aguda también se

emplean neonatos de D.magna expuestos a diferentes concentraciones de una muestra o de un tóxico durante un periodo de 48 hs

Como resultado de dicha exposición se puede determinar la concentración en que la muestra produce la muerte del 50% de la población de neonatos expuestos (CL50) con un nivel de confiabilidad del 95%.


En vasos de precipitado de vidrio. 25 ml. 10 neonatos por vaso, por triplicado ( 30 por

tratamiento) Control (agua dura reconstituida). Control positivo con una solución tóxico de

referencia. dicromato de potasio (K 2Cr 2O 7) 0,8mg/L. CL50

Diluciones de la muestra: 100; 50; 25; 12,5; 6,25% Incubar 48 hs

Ensayo de toxicidad aguda con Daphnia magna.

Cálculo de la CL50: Para el cálculo de la CL50 y

sus respectivos límites de confianza al 95% se utiliza el método Probit, que permite estimar la CL50 ajustando los datos de mortalidad mediante una técnica de probabilidad para estimar los valores que siguen una distribución logarítmica de tolerancias


Aceptabilidad de los resultados: La mortalidad en el control negativo no debe exceder el

10%. La concentración final de oxígeno disuelto debe ser

mayor de 2 mg/l. La CL50 para el tóxico de referencia deberá estar

dentro de los límites de confianza preestablecidos en la carta control

En caso de emplear un control positivo de CL50, los valores de mortalidad obtenidos deberán encontrarse cercanos al 50%.( entre 33% y 57%)

Ensayo de toxicidad crónica con Daphnia magna

Si un test de toxicidad aguda no detecta efecto alguno de mortandad o inmovilización, esto no siempre significa que el agua analizada no contenga sustancia alguna capaz de producir otro tipo de daño

Para estos casos se utilizan los tests de toxicidad crónica en los que la evaluación se basa en la capacidad reproductiva o el crecimiento de los individuos


Principio: El bioensayo de toxicidad con

semillas de lechuga (Lactuca sativa L) es una prueba estática de toxicidad aguda (120 hs de exposición) en la que se pueden evaluar los efectos fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento


La evaluación del desarrollo de la radícula y del hipocotilo constituyen indicadores representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de la planta.


A diferencia de la prueba tradicional de germinación de semillas, la evaluación del efecto en la elongación de la radícula y del hipocotilo de las plántulas permite ponderar el efecto tóxico de compuestos solubles presentes en niveles de concentración tan bajos que no son suficientes para inhibir la germinación, pero que sin embargo, pueden retardar o inhibir completamente los procesos de elongación de la radícula o del hipocotilo, dependiendo ello del modo y sitio de acción del compuesto.


En cada cápsula de Petri un disco de papel de filtro. • Saturar el papel de filtro con 4 mL de la dilución

evitando que se formen bolsas de aire. • Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente

veinte semillas, dejando espacio suficiente entre ellas para permitir la elongación de las raíces.

• Tapar las cápsulas y colocarlas en bolsas plásticas para evitar la pérdida de humedad. Dado que algunas variedades de semillas de lechuga requieren oscuridad para que se produzca la germinación, las cajas de Petri deben cubrirse de la luz durante el periodo de ensayo

• Incubar durante 120 hs (cinco días) a una temperatura de 22± 2 °C. Realizar repeticiones para cada dilución ensayada


Terminado el periodo de exposición (120 h), se procede a cuantificar el efecto en la germinación y en la elongación de la radícula y del hipocotilo

Registrar el número de semillas que germinaron normalmente, considerando como criterio de germinación la aparición visible de la radícula

Utilizando una regla o papel milimetrado, medir cuidadosamente la longitud de la radícula y del hipocotilo de cada una de las plántulas correspondientes a cada concentración de tóxico o dilución de muestra y a los controles

La medida de elongación de la radícula se considera desde el nudo (región más engrosada de transición entre la radícula y el hipocotilo) hasta el ápice radicular

La medida de elongación del hipocotilo se considera desde el nudo hasta el sitio de inserción de los dos cotiledones


Expresión de los resultados: • Promedio y desviación estándar de la

elongación de la radícula y del hipocotilo de las plántulas de cada repetición.

• Porcentaje de inhibición del crecimiento de la radícula y del hipocotilo, con el promedio de elongación para cada dilución respecto del promedio de elongación del control negativo.

• Porcentaje de inhibición en la germinación.

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