NOMBRE DE LOS INTEGRANTES:

AGUILAR FELIPE AUREA AIDA

LOPEZ LOPEZS ANA KAREM

MARTINEZ INOCENTE CINTHIA

RODRIGUEZ LARA ALEJANDRA

ISIDRO HERNADEZ

ERICK JAVIER

ASIGNATURA: PROC. TECNICAS BACTEREOLOGICAS

GRADO Y GRUPO: TECER SEMESTRE

CATEDRATICO: AUREA RAMOS PARRA

PRACTICA: N° 1 ESTERILIZACION DE MATERIALES Y PREPARACION DE LOS CULTIVOS

CALIFICACION: ___________________________________________________________

OBSERVACIONES:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

OBJETIVOS DE LA ESTERILIZACIÓN:

No se puede hablar de esterilización sin considerar el concepto de microorganismo. Un microorganismo es un agente microscópico vivo e imperceptible a los sentidos que generalmente está agrupado en colonias, aunque bien puede estar como una unidad formadora de colonias (U.F.C.), la que se desarrolla en un medio apropiado para formar colonias perceptibles. Los microorganismos pueden ser patógenos (productores de ciertas enfermedades) o banales (los habitualmente hallados en los alimentos, el aire, el polvillo ambiental, que no perjudican al hombre.

El hecho de que existan distintos tipos de gérmenes en el medio ambiente, crea grandes dificultades en los estudios bacteriológicos, cuando es necesario obtener las especies microbianas en estado de pureza, ya que tanto el instrumental como los medios de cultivo son invadidos con suma facilidad por los microbios del medio ambiente.

Con el fin de subsanar estos inconvenientes se practica la esterilización, procedimiento que consiste en destruir todos los gérmenes vivos que existan sobre los objetos o sustancias que se desean libre de ellos (asépticos).

Los Microorganismos pueden clasificarse en criorresistentes, que son los resistentes al frío y termorresistentes o resistentes a las altas temperaturas, aunque la clasificación más común es por la temperatura a la que se reproducen. Así se los puede clasificar en Criófilos (-5 a 14 °C); Mesófilos (25 a 47 °C) y Termófilos (50 hasta 113 °C). Por ejemplo, muchos hongos se destruyen con la temperatura, pero sus esporas aún son viables y cuando encuentran un medio apropiado, rico en nutrientes y humedad, se reproducen. Por tal motivo la tecnología para su destrucción debe considerar éstas variables.

LA ESTERILIZACIÓN

Esta operación comprende todos los procedimientos físicos, mecánicos y químicos, que se emplean para destruir, inactivar o retener gérmenes en general y patógenos en particular. A través de esta, los materiales de laboratorio para determinados diagnósticos y los elementos quirúrgicos y la piel del enfermo alcanzan un estado de desinfección que evita la contaminación operatoria.

MÉTODOS FÍSICOS:

CalorLa utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición y la temperatura.Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.

Fuego Directo: Este procedimiento consiste en exponer a la llama de un mechero de Bunsen el objeto que se desea esterilizar. Cuando éste es de metal se deja permanecer en el área de reducción de la llama hasta que se ponga al rojo (asas de cultivo; algunas agujas, etc.). Si es de vidrio se deja un tiempo prudencial, procurando que la llama llegue a todos lados. Antes de utilizar el objeto esterilizado es necesario dejarlo enfriar en un sitio aséptico. Este procedimiento tiene limitaciones debido a que deteriora los objetos y si son de gran volumen, la esterilización nunca es perfecta.

Calor Seco: El calor seco produce desecación de la célula, esto es tóxico por niveles elevados de electrolitos y fusión de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estéril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos.

Aún así se sigue utilizando el calor seco en todos los laboratorios para la esterilización de placas de petri y pipeteros (recipientes metálicos para alojar pipetas para la siembra de sustancias líquidas).

La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos componentes o nutrientes de los microorganismos, requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.

Estufas: Para esterilizar por intermedio del aire caliente es necesario colocar los objetos

En aparatos especiales llamados ESTUFAS. Y llevar el aire interior a una temperatura entre 150 y 190 °C. Uno de los primeros aparatos utilizados para este fin fué el horno de Pasteur, que luego se sustituyó por estufas de aire caliente. Estas constan de una doble cámara, el aire caliente generado por una resistencia eléctrica circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cámaras, a temperaturas variables, siendo la más aconsejadas 170º C para el instrumental metálico y a 140º C para el contenido de los tambores. Se

mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal denominados de par bimetálico, consistente en dos metales de distinto coeficiente de dilatación. Cuando uno se dilata, el otro no lo hace y se arquea. Uno de los extremos de éste dispositivo se halla en contacto con un interruptor que corta la alimentación de la resistencia calefactora.

UN AVANCE EN EL CONTROL DE TEMPERATURA: En la actualidad la mayoría de las estufas de esterilización o de cultivo se termorregulan por medio de un termostato hidráulico que consiste en una ampolla metálica con gas en su interior, hermética, unida por medio de un capilar de metal a un tambor que varía su volumen cuando aumenta la temperatura. Este tambor está en contacto con una llave interruptora, de manera que si el gas interior del tambor se dilata por el calor, la llave a la que está unido interrumpe el fluido eléctrico a la resistencia, manteniendo así la temperatura de la cámara.

MODERNIZACIÓN EN EL DISPOSITIVO DE CONTROL DE TEMPERATURA: Se ha logrado controlar la temperatura mediante un circuito electrónico que utiliza el microprocesador 555, utilizando como sensor una termorresistencia. Esta baja la resistencia a la corriente al aumentar la temperatura y la señal es enviada al procesador, el que corta un relé que alimenta la corriente de la resistencia de calefacción. Tanto éste como otros dispositivos electrónicos ofrecen extrema sensibilidad de control, ya apto mas para estufas de cultivo que para esterilización.

Ventajas del calor seco:

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de

sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas:

*Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.

NOCIONES GENERALES

El cultivo de setas es una técnica relativamente moderna que iniciaron los franceses en el siglo XVII y que rápidamente se propagó por Europa. En América se mejoró sustancialmente el método dando inicio a lo que hoy se conoce por Fungicultura. Lógicamente el interés principal fue el culinario de ahí que el primer hongo cultivado fuese el champiñón. La técnica básica se ha ido adaptando a los requerimientos propios de cada tipo de seta. En los setenta aparecieron diferentes métodos para el cultivo de hongos psilocíbicos que provocaron la independencia del consumidor frente al mercado negro. La técnica se le conocía como "san Antonio" y resultaba un poco laboriosa y requería conocimientos de laboratorio. La novedad era que todo aquello que en el método San Antonio se hacía en el laboratorio, era posible hacerlo ahora en la cocina de casa. Pero aún estaba por llegar lo mejor que era la simplificación total de la mano de Psilocybe Fanaticus. Todos los cambios habidos en el cultivo de cualquier hongo saprófito (aquel que se nutre de materia orgánica) deben pasar obligatoriamente por cuatro fases:

1. Obtención del micelio en cultivo puro2. Producción del inoculo (grano miceliado preparado para sembrar)3. Inoculación y colonización del substrato4. Producción de los carpóforos (setas)Muy importantes son los diferentes parámetros que se dan en las dos fases básicas del cultivo: fase vegetativa y fase reproductiva. Parámetros de cultivo de la fase vegetativa:

Humedad relativa: 90%Temperatura del substrato: entre 28 y 30 grados celsius (centígrados)Nivel de CO2. Entre 5000 y 10000 ppm (partes por millónPresencia de luz: no necesariaIntercambio aéreo: mínimoDuración de la fase: de dos a tres semanasParámetros de cultivo de la fase de fructificación: Humedad relativa: 90%Temperatura del substrato: entre 21 y 25 º C (formación de primordios) y entre 29 y 33ºC (desarrollo de primordios).

Nivel de CO2: menos de 5000 ppmIntercambio gaseoso: muy necesario cada díaNecesidades lumínicas: 10-12 horas de luz/día. Espectro azul. Fluorescentes c-33 (luz de día)

ALGUNOS FUNDAMENTOS BÁSICOS SOBRE EL CULTIVO DE HONGOS COMESTIBLES PARA LOS AFICIONADOS:

EL PROCESO DE CULTIVAR HONGOS PUEDE DIVIDIRSE EN CUATRO ETAPAS:

1) Adquirir y mantener un cultivo de tejido de hongo (llamado micelio) de la línea de hongo que Ud. desee. (Un cultivo de tejido es en cierta forma como un esqueje de una planta. Comenzar con un cultivo de tejido le asegura que Ud. tendrá una línea de hongo genéticamente idéntica a la que Ud. desea. Algunos cultivadores comienzan con esporas, que se asemejan más a las semillas. Las esporas pueden dar o no, una línea de hongo con las propiedades de fructificación de los genitores. Debido a que las esporas no pueden cultivarse en presencia de peróxido de hidrógeno, yo siempre trabajo con un cultivo de tejido de micelio. Cultivos de tejido (también se llaman cultivos de agar) de varias especies de hongos se pueden comprar en los comercios de suministros o pueden comenzarse desde hongos frescos)

2) Usar un poquito del cultivo de tejido para empezar el blanco de hongo (una especie de "arrancador" del cultivo de hongo), el cual generalmente se cultiva en pequeña cantidad sobre aserrín o granos esterilizados.

3) Usar el blanco para introducir el micelio del hongo en un material orgánico (sustrato) seleccionado para que en él se formen los hongos.

4) Lograr que los hongos ("sombreros") se formen y crezcan una vez que el sustrato ha sido completamente colonizado por el micelio del hongo.

COMENZANDO CON UN KIT

Cuando Ud. compra un kit de hongos, generalmente estará empezando en la etapa cuatro. El comerciante productor de hongos ya ha completado los pasos previos para Ud., y le provee el cultivo de hongos listo para formar los hongos. Ud. provee un buen embiente, usualmente fresco y húmedo. Hacer que los hongos se formen puede ser fácil o difícil, dependiendo del tipo de hongo que está cultivando. Entre los más fáciles de hacer fructificar estan los hongos ostra de las familias Pleurotus y Hypsizygus. El "Melena de león" (Hericium erinaceus) también es bastante fácil.Entre las más difíciles de hacer formar hongos está el Maitake (Grifola frondosa) y las Morellas (Morchella species). El Shiitake (Lentinula edodes) está más o menos en la mitad.

COMENZANDO CON BLANCO DE HONGO COMPRADO

También es posible comenzar por la etapa tres, comprando un "iniciador" (blanco de hongo) a un proveedor e introduciendo el micelio del hongo en crecimiento en un material orgánico que Ud. mismo ha preparado. Hay una variedad de sustratos posibles: paja, compost, troncos, virutas de madera y aserrín son los más comunes, pero la gente también ha usado cosas como papel de diarios, cartón, grano esterilizado, moliendas de café, etc. dependiendo de la especie de hongo que deseaban cultivar.

CLASES DE HONGOS Y LOS SUSTRATOS QUE PREFIEREN

En general, hay dos grandes clases de hongos cultivados: aquellos que prefieren crecer sobre compost y aquellos que prefieren crecer sobre materiales leñosos (madera). El hongo botón común (champignon) y otras especies de Agaricus pertenecen a la primera clase, cultivándose en compost, pero también pueden crecer en paja. Los hongos ostra, shiitake, reishi, maitake, y melena de león, todos prefieren materiales lignocelulolíticos, tales como el aserrín, las virutas de madera y a veces la paja.

COMPOST

Cada tipo de material orgánico requiere un proceso diferente para liberarlo de los organismos competidores. El compost es el material que requiere más tiempo para su preparación, un par de semanas para madurar. Necesita que se caliente a una temperatura que neutralice las especies dañinas, sin que llegue

a ser tan alta que mate a los microbios beneficiosos. No se permite al compost que cumpla con todo el proceso natural. En cambio, se lo utiliza un poco antes, cuando está lleno de los actinomycetes blancos que proveen los nutrientes que los hongos necesitan. El cultivador enfría el compost, le agrega algo de yeso (sulfato de calcio) y mezcla con él el blanco de hongo.

MATERIALES LEÑOSOS

Los materiales leñosos y la paja se pueden preparar mucho más rápido que el compost. Tradicionalmente, estos materiales requerían un tratamiento con calor, como la esterilización a presión, la pasteurización con vapor, o sumergirlos en agua hirviendo, para eliminar los organismos competidores. El método del peróxido aporta ahora otras formas de preparar algunos sustratos sin utilizar el calor. También puede prevenir una contaminación posterior por mohos y bacterias presentes en el ambiente, así que usar materiales compatibles con el agregado de peróxido de hidrógeno puede ahorrar un montón de problemas. Para los hongos descomponedores de madera, el pellet combustible de madera, el cual se desintegra en aserrín cuando se lo trata con agua hirviendo, anda muy bien en este sentido, así como también la paja de trigo.

HACIENDO QUE SE FORMEN LOS HONGOS

A la hora de hacer que los hongos se formen, las especies que prefieren compost necesitan un procedimiento diferente al requerido por los hongos que prefieren madera. Los primeros usualmente necesitan tener una capa de "suelo" llamada "casing" (cobertura), aplicada encima del cultivo una vez que el tejido del hongo ha colonizado totalmente el compost. La capa similar al suelo provee un reservorio de humedad y crea una zona de bajo nivel de nutrientes (comparada con el compost), enviando al hongo la señal de comenzar a formar los cuerpos fructíferos. Los pequeños hongos botón comienzan así a formarse en la capa de cobertura. El cultivador mantiene la cobertura húmeda mediante riegos ligeros a medida que los hongos se agrandan.

Con las especies que prefieren la madera, el procedimiento para hacer que se formen los hongos varía un poquito de una especie a otra, pero generalmente involucra un cambio en las condiciones ambientales, tales como una caída en la temperatura, un aumento en la circulación del aire, y/o un aumento en los niveles de luz.

Una vez que Ud. haya probado cultivar hongos con un kit y con blanco de hongos comprado, tendrá una idea mejor en cuanto a querer involucrarse en mantener cultivos de agar y hacer su propio blanco. Estos procedimientos requieren un mayor compromiso y atención al detalle. Antes del invento de la técnica del peróxido, generalmente era posible mantener los cultivos de agar y cultivar el blanco de hongos si Ud. disponía de un área de trabajo en condiciones de esterilidad, como mínimo una cámara de guantes. Con el peróxido, se hace posible llevar a cabo esos pasos en una cocina común, y

mantener los cultivos en cualquier lugar donde haya temperatura y nivel de luz apropiados. Aún deberá aprender los fundamentos de las "técnicas estériles" — procedimientos simples de manera de manipular los cultivos para mantenerlos puros. Pero Ud. no necesitará facilidades para trabajar en esterilidad ni lugares en su casa libres de polvo.