ESTUDIO MICROSCOPICO DE CÉLULAS Y TEJIDOS Las células pueden ser observadas en estado vivo

En cultivos in Vitro

Preparación de cortes histologicos Se realizan rebanadas finisimas (cortes) Técnica a la parafina.-

1.- Obtención del tejido.- biopsia2.- Fijación.- formaldehído al 4 %3.- Deshidratación.- En alcohol4.- Aclaración.- Con Xilol

5.- Inclusión.- Inclusión en parafina6.- Corte.- con microtomo

7.- Tinción y montaje.- se sustituye la parafina por agua

http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:Electrical_microtome.jpg

Partes de un microscopio óptico

SISTEMA ÓPTICO

OCULAR

OBJETIVO:

CONDENSADOR

DIAFRAGMA:

FOCO:

SISTEMA MECANICO

SOPORTE

PLATINA

CABEZAL

REVÓLVER

TORNILLOS DE ENFOQUE

MICROSCOPIO ELECTRONICO.- * Uso de haz de electrones * Resolución de 1 nm.

MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN

PREPARACIÓN DE CORTES CON ME.Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico)Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C Corte.- 60 a 80 nm de espesorTinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo

Microfotográficas electrónicas.- Electrones invisibles pasan por pantalla fluoroscópica que proporciona macrofotografía electrónica.

MICROSCOPIA ELECTRONICA DE BARRIDO.- (tridimencional)

Rastrea la muestra

Generan imagen en televisión llamada microfotografia electronica

PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS.-

– Longitudinal– Transversal– Oblicuo rasante o

tangencial– Imágenes de

tubos (vasos sanguíneos)

– Tabiques o septos (Hepatocitos)

TINCIÓN HISTOLÓGICA.-HematoxilinaEosina

Coloración basófila y acidófilaSustancia basofila afinidad por colorantes basicos o alcalinosSustancia acidofila afinidad por colorantes ácidos

Reacción de ácido periódico de Schiff (PAS).- para teñir polisacaridos Demostrar presencia de glúcogenoColor violeta o magenda.

Colorantes de grasa.- se usa cortes por congelación.Escarlata R. Sudan III o Sudan IV

ARTEFACTOS.- Degeneración post morten

+ Contracción

+ Precipitado

+ Pliegues y arrugas

+ Muescas de la cuchilla

+ Manejo burdo de los tejidos

MICROSCOPIO ELECTRONICO.- * Uso de haz de electrones * Resolución de 1 nm.

MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN

PREPARACIÓN DE CORTES CON ME.Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico)Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C Corte.- 60 a 80 nm de espesorTinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo

Microscopio comun (o de luz) y sus aplicaciones.Amplifica la imagen

Permite identificar el objeto con mayor detalle (resolución)

Microscopio por contraste de fase.-permite observación de células vivas

Microscópio por fluorosencia.- Señala sitios de localización especifica

Tinción por inmunofluorescencia.- con colorantes fluorescentes (fluoresceína)Tinción inmunoaurica.- con oro coloidal

EMPLEO DEL MICROSCOPIO DE LUZObjetivo de poca potencia (objetivo de rastreo)Objetivo de gran amplificaciónObjetivo de inmersión en aceite.

Necesidad de conservar limpias las lentes.- Suciedad en el cubre objetos Aceite en el objetivoSuciedad en el ocularSuciedad en el condensador.