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Guía para la presentación de proyectos de menor cuantía por fuera de convocatoria

Proyectos de Investigación, Innovación y Creación de la Universidad de Caldas”

Vicerrectoría de Investigaciones y Postgrados

Título del proyecto1

Efecto de la cetosis subclínica sobre la respuesta inmune de la glándula mamaria desafiada con

Streptococus agalactiae en bovinos.

Proyecto de investigación presentado por fuera de convocatoria invocando la Resolución 07 de 2011

emanada de la Vicerrectoría de Investigaciones y Posgrados

Nombre de los grupos de investigación

(registre la información de los grupos que participan)

Nombre del grupo Facultad/Instituto/Departamento Clasificación

Grupo de Investigación Biología de

la Producción Pecuaria

Ciencias Agropecuarias / Instituto de

Biotecnología Agropecuaria / Producción

Agropecuaria

A1

Tipo de proyecto de I&D

Investigación

Básica2

XX Investigación

Aplicada3

Innovación

Tecnológica4

Creación:

Tipo de innovación

Innovación tecnológica de

producto

Innovación tecnológica de

proceso

Innovación

organizacional

Área Estratégica del Plan de Desarrollo

Biotecnología Arte Cultura y Humanidades Problemática social

Salud XX Ambiental Ninguna de las

áreas

1 Se recomienda que no exceda 15 palabras

2 Son estudios que tienen como propósito el trabajo experimental o teórico realizado principalmente con el

objeto de generar nuevos conocimientos sobre los fundamentos de fenómenos y hechos observables, sin prever

ninguna aplicación específica inmediata 3 Son proyectos de investigación original realizada para la adquisición de nuevos conocimientos, dirigida

principalmente hacia un fin u objetivo práctico, determinado y específico 4 Se refiere a aquellos proyectos que tienen como objetivo el desarrollo de nuevos productos o procesos, así

como las modificaciones tecnológicas importantes en productos o procesos




INTEGRANTES DEL EQUIPO DE INVESTIGACIÓN

(indicar cuál es el investigador responsable con un asterisco)

Nombre/tipo de vinculación en la

Universidad de caldas Departamento o Programa

Área de conocimiento (según

anexo 1)

NESTOR ALONSO VILLA ARCILA* Producción Agropecuaria Agronomía, veterinaria y afines

ALEJANDRO CEBALLOS MARQUEZ Producción Agropecuaria Agronomía, veterinaria y afines

JUAN CARLOS RODRIGUEZ L. Prince Edward University -

Canada

Agronomía, veterinaria y afines

JUAN CARLOS SEPULVEDA Fac. de Medicina - UTP Ciencias médicas

Lugar de ejecución del proyecto Ciudad Departamento

Manizales Caldas

Presupuesto (Ingresar al siguiente enlace)

Valor total del proyecto: $ 32.392.552 Valor solicitado en metálico a

la VIP para este proyecto

(entre 0 y 15 smmlv):

$ 9.150.000 Fuentes de financiación:

Duración total (meses): 6 meses

b. Resumen ejecutivo (máximo 500 palabras)

Durante el inicio de la lactancia las vacas de leche experimentan una serie de cambios metabólicos

debidos, generalmente, a un balance energético negativo, caracterizados principalmente por un

aumento en los cuerpos cetónicos, ácidos grasos libres y una disminución de la glucosa sérica (Zarrin

et al., 2014). El aumento de los β-hidroxibutiratos, principal cuerpo cetónico, se denomina cetosis y es

una enfermedad que tiene una prevalencia alta y genera un impacto económico a nivel de hato por la

disminución en la producción de leche y un aumento en la incidencia de enfermedades asociadas al

periparto como mastitis, metritis, desplazamiento del abomaso y un aumentando así, del riesgo de

sacrificio (Berge and Vertenten, 2014; Chapinal et al., 2012; Ospina et al., 2010).

La mastitis bovina es una enfermedad de una alta prevalencia y genera a nivel mundial los costos más

altos en producción de ganado de leche. La respuesta inmune de la vaca después de que los patógenos

mamarios ingresan a la glándula mamaria es convocada y rápidamente la magnitud de la respuesta a la

injuria no se hace esperar (Sordillo, 2005b).

Experimentos con infecciones experimentales con Streptococcus agalactiae, donde el recuento de

células somáticas (RCS) aumentó de 45.000 a 849.000 células/mL, han indicado que esta elevación

http://sig.ucaldas.edu.co/gestionDocumental/archivos/Anexo_1_Presupuesto_estandar_proyectos.xlsx




como consecuencia de la infección causó un aumento de la lipolisis y proteólisis de la leche cruda

comparado con la leche con un RCS más bajo (Ma et al., 2000). Después de pasteurizar, homogenizar

y almacenar la leche a 5°C, las propiedades organolépticas de la leche que tenía un RCS más bajo

fueron de más calidad que leches con un alto RCS (Ma et al., 2000). La investigación realizada por

estos autores concluyó que las infección intramamaria (IMI) tenían un alto impacto sobre la calidad

organoléptica y sensorial de la leche durante un período de 21 días en la góndola del supermercado,

sugiriendo que los procesadores deberían implementar un sistema de pago por calidad para leches con

un RCS bajo.

Cuando las bacterias superan las barreras anatómicas de la glándula mamaria puede establecerse la

IIM y es allí donde los leucocitos juegan un papel determinante en la severidad y duración de la IIM.

Durante la IIM los PMN, en particular los neutrófilos, migran desde el torrente sanguíneo a la glándula

mamaria constituyéndose en la primera línea de defensa; son llevados al sitio de infección por agentes

quimio tácticos como son las interleukinas (IL) como la IL1, IL6, IL-8, TNF-α (Paape et al., 2003;

Sohn et al., 2007).

Por lo anterior, el objetivo de este proyecto es evaluar el efecto de los β-hidroxibutiratos en la

respuesta inmune a nivel de glándula mamaria en vacas con infección intramamaria inducida con

Strep. agalactiae, mediante la determinación en leche de Haptoglobina (Hp), Amiloide A Sérico

(AAS), la interleuquinas IL-8 y el factor de necrosis tumoral (TNF), y por citometría las integrinas

CD14 y 11B.

Los resultados favorecerán los programas de prevención, control y erradicación de este patógeno en

las lecherías del Triángulo del Café.

c. Conformación y trayectoria del equipo de investigadores (máximo 500 palabras)

El grupo de investigación en Biotecnología Agraria se conformó en el año 2004 en la Universidad de

Caldas y hoy está escalafonado como grupo A1 ante Colciencias. Tres de los autores del proyecto

pertenecen a este grupo. El autor responsable de este proyecto ha adelantado investigaciones en

diversos campos como la Salud Productiva en Bovinos con el apoyo de entidades reconocidas en el

sector pecuario como la Asociación Colombiana de Criadores de Ganado Cebú – Asocebú y

Asonormando. Estas investigaciones se han enfocado en incrementar el rendimiento productivo de los

hatos y fruto de estos trabajos existen varias publicaciones en revistas nacionales e internacionales.

Ahora, mediante este proyecto se abordará el problema de la cetosis y su efecto en la sanidad

mamaria, evaluada mediante la respuesta inmune a un patógeno que tiene una alta prevalencia en

nuestro medio como es el Strep. agalactiae. Prevalencia que de acuerdo a estudios realizados entre




investigadores de la Universidad de Caldas y Prince Edwards supera el 40% en tanques de

enfriamiento. Lo anterior es continuación de la filosofía del grupo que es trabajar bajo una óptica de

salud de hato o poblacional y que los resultados redunden en beneficio de la producción bovina

nacional.

Para la ejecución del proyecto se ha conformado un equipo de profesionales con una trayectoria muy

amplia en el área de los bovinos y con especial énfasis en el metabolismo, la mastitis, la inmunología y

salud de hato, donde cada uno de los co-investigadores son de renombre en las diferentes áreas, es así

como el Dr. Alejandro Ceballos M., es reconocido a nivel nacional e internacional en el diagnóstico,

manejo, tratamiento, prevención y control de mastitis bovina; a publicado numerosos trabajos sobre

mastitis en revistas de circulación internacional, además, durante un período de tiempo tuvo la

oportunidad de implementar planes de prevención de infecciones intramamarias (IIM) y reducción del

recuento de células somáticas en rebaños lecheros en el occidente del estado de Nueva York. Planes

que sin duda alguna podrán ser adaptados a los sistemas de producción de leche en el Eje Cafetero.

Igualmente, se han vinculado con el proyecto los Dres. Juan Carlos Rodríguez L. de la Universidad de

Prince Edward en Canadá y el Dr. Juan Carlos Sepúlveda de la Universidad Tecnológica de Pereira,

ambos son reconocidos Inmunólogos, ellos ha hecho numerosos aportes en el área de la inmunología

Veterinaria y humana y como co-investigadores de este estudio tiene a su cargo apoyar la parte

molecular del proyecto; lo que asegura la calidad de los resultados finales del estudio.

d. Descripción del proyecto (máximo 15 páginas Letra Arial 12, espacio doble)

Con el mejoramiento genético alcanzado a través de los años en ganado de leche se han multiplicado

los desórdenes nutricionales que generan enfermedades metabólicas e infecciosas (Dillon et al., 2006).

Las enfermedades metabólicas o enfermedades de la producción son provocadas por un desequilibrio

entre los nutrientes que ingresan al organismo del animal (hidratos de carbono, proteínas, minerales,

agua), su metabolismo y los egresos a través de la leche, feto, materia fecal, orina etc. (Wittwer and

Contreras, 1980). Los desequilibrios nutricionales que afectan a las vacas de alta producción se

producen porque el aporte o la utilización de los alimentos no satisfacen los requerimientos de

mantenimiento o producción (Roche et al., 2009). Cuando estos desequilibrios son de corta duración y

no muy severos, el animal los puede compensar utilizando sus reservas corporales; sin embargo, si el

desequilibrio es severo o moderado pero persistente, el animal agota sus reservas corporales y se

presenta una enfermedad producto de la movilización grasa que se llama cetosis.

Existe una asociación directa entre condición corporal y cetosis, una condición corporal de 3.5 o más,

en una escala de 1 a 5 al momento del parto está asociada a la presentación de cetosis (Gillund et al.,




2001). Durante el periparto las vacas de leche experimentan una serie de adaptaciones metabólicas

principalmente relacionadas con la movilización de sus reservas corporales, producto de un balance

energético negativo; particularmente son cambios significativos en ácidos grasos libres y el contenido

de fosfolípidos a nivel de membrana celular en el tejido adiposo e hígado (Drackley, 1999). A nivel

hepático y específicamente del hepatocito, estos cambios pueden causar daños por la excesiva lipolisis

y acumulación de triacilgliceroles (Jorritsma et al., 2001).

El hígado graso o lipidosis hepática es una enfermedad metabólica que afecta más del 50% de las

vacas durante la lactación temprana (Jorritsma et al., 2001), está asociada a un incremento en la

incidencia de enfermedades metabólicas e infecciosas, como cetosis (Smith et al., 1997), mastitis

(Suriyasathaporn et al., 2000), metritis y disminución de la fertilidad (Bobe et al., 2007). La

acumulación de lípidos a nivel hepático puede alterar la función del hígado como son la síntesis y

biotransformación de metabolitos y proteínas, la detoxificación y excreción de productos de desecho

que comprometen el sistema inmune (Jorritsma et al., 2003). La acetonemia es una alteración

metabólica producida por un balance energético negativo que se presenta en la vaca en períodos de

alta demanda con disminución de la glicemia, incremento de los ácidos grasos libres y acumulación de

cuerpos cetónicos en la sangre y fluidos (Drackley, 1999). Además, se produce un depósito de grasa

en el hígado que derivan en una serie de trastornos bioquímicos que en la mayoría de los casos

produce una enfermedad que no es posible detectar clínicamente (subclínica) (Miettinen and Setälä,

1993).

Los cuerpos cetónicos, los betahidroxibutiratos (ßHB) y el acetoacetato, son productos fisiológicos en

el metabolismo de carbohidratos y lípidos de rumiantes, sus precursores son las grasas y ácidos grasos

de la dieta, así como los depósitos de grasa del animal (Duffield et al., 2009). El ácido butírico de la

dieta es transformado en el epitelio de los preestómagos, vía acetoacetato, a ßHB por lo que este

constituye el principal cuerpo cetónico de la sangre del rumiante. Por otra parte, los ácidos grasos de

cadena larga producto de la movilización de reservas de grasa son convertidos en el hígado a

acetoacetato y luego a ßHB, el cual puede ser empleado como fuente de energía y en la síntesis de

grasa en la ubre. De esta forma, la cetosis se produce cuando la producción de cuerpos cetónicos es

superior a los que se utilizan, lo cual se presenta cuando hay un déficit de energía (oxalacetato),

producto de alta demanda de glucosa para producir lactosa (Drackley, 1999; Drackley et al., 2005).

La cetosis subclínica corresponde a los casos en que hay un incremento anormal de los cuerpos

cetónicos, si bien el animal no presenta ningún signo clínico, como anorexia, alteraciones digestivas o

nerviosas de la cetosis (Anderson, 1988). Su importancia radica en que está asociada a una reducción

en la producción de leche y a un deterioro en la fertilidad del grupo de animales afectados (Leblanc,

2010). No es claro si estos problemas son causados primariamente por el aumento de los cuerpos




cetónicos o bien, son producidos por el BEN. Se ha descrito que la prevalencia de la cetosis subclínica

en los dos primeros meses de lactancia varía entre un 8 y un 34% (Dohoo and Martin, 1984; Duffield

et al., 1997). Por lo anterior, la cetosis subclínica es más prevalente que la cetosis clínica.

La cetosis subclínica y clínica tienen una asociación temporal y negativa sobre la producción de leche,

por ejemplo, se ha observado una disminución en la producción de leche entre la segunda y cuarta

semana de lactancia (Rajala-Schultz et al., 1999). La relación grasa – proteína en leche también se ve

afectada, el porcentaje de grasa en leche aumenta en la cetosis subclínica producto del incremento de

ßHB y ácidos grasos que participan normalmente en la síntesis de la grasa de la leche (Heuer et al.,

1999). La proteína en leche de vacas con cetosis disminuye y está asociada a un deficiente aporte de

energía, ya que la proteína en leche también depende del balance de energía (Miettinen and Setälä,

1993).

MASTITIS

La mastitis bovina, es una reacción inflamatoria de la glándula mamaria y produce alteraciones físicas

y químicas en la leche, aumento del recuento de células somáticas (RCS) por la presencia de

microorganismos patógenos y finalmente cambios en la pérdida de la funcionalidad (Calderón and

Rodríguez, 2008).

Las bacterias de los géneros Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium y algunos gérmenes

Gram negativos, son responsables de más del 90 % de los casos clínicos y subclínicos (Barker et al.,

1998; Wilson et al., 1997). La enfermedad puede cursar como subclínica (la de mayor prevalencia en

el hato) o como clínica, con alteraciones macroscópicas de la leche y síntomas palpables de la ubre y,

a veces, de tipo sistémico en todo el animal. Clásicamente se ha definido como una “enfermedad

multifactorial” porque el riesgo de infección depende de la habilidad de la vaca para rechazarla, del

tipo, número y de la patogenicidad de las bacterias presentes en el hato, y fundamentalmente, de las

condiciones del ambiente, del manejo en general y de la rutina de ordeño en particular que se estén

desarrollando en el establecimiento (Ramírez et al., 2001; Sordillo, 2005b; Wilson et al., 1997).

La protección contra los patógenos comprende una compleja interacción entre órganos, tejidos, células

y moléculas que conforman el sistema inmune del cuerpo (Moser and Leo, 2010). La glándula

mamaria (GM) es protegida por estos mecanismos de defensa. La inmunidad innata, también conocida

como inmunidad no específica es la predominante en los estados iniciales de infección, está presente y

es activada rápidamente por numerosos estímulos, pero no aumenta por la repetida exposición al

agente infeccioso; además, la defensa innata está mediada por barreras físicas del pezón (Sordillo,

2005a). Si los mecanismos de defensa no específica funcionan adecuadamente muchos patógenos son




eliminados en corto tiempo y antes de que los mecanismos de defensa específicos sean activados

(Sordillo and Streicher, 2002).

El canal del pezón es la principal puerta de entrada a la glándula mamaria de numerosos patógenos

causantes de mastitis y es la primera línea de defensa contra la mastitis cuando los patógenos entran a

través de éste a la glándula mamaria; este canal es sellado entre ordeños y en el período seco por una

queratina derivada del epitelio estratificado de revestimiento (Rainard and Riollet, 2006). Los ácidos

grasos esterificados y no esterificados y proteínas asociadas a la queratina actúan como

bacteriostáticos y bactericidas (Hogan et al., 1988). La piel es también considerada como parte de esta

primera barrera de defensa contra los patógenos, una piel sana reduce la contaminación de bacterias

como el Staphylococcus aureus que predisponen a nuevas infecciones de la GM (Rainard and Riollet,

2006).

El contenido acuoso del estrato cornificado debe mantenerse en un rango entre 10 – 20 % para que la

piel mantenga sus características de flexibilidad y suavidad, si el contenido de humedad disminuye por

debajo del 10 %, la piel se torna rugosa y resquebrajada. Bajo estas condiciones, el contenido ácido de

la piel, formado principalmente por ácido láctico, ácidos grasos libres y aminoácidos, cambiará. Como

consecuencia la piel será más propensa a la colonización de patógenos, predisponiendo a los animal a

infecciones (Zecconi et al., 2000).

El músculo liso y la elasticidad de los tejidos alrededor del conducto del pezón, hacen que este se

mantenga cerrado y limite así el ingreso bacteriano (Sordillo et al., 1997). El diámetro del pezón y en

menor medida la longitud del mismo, tienen una relación directa con la incidencia de enfermedades

intramamarias. A mayor diámetro, mayor tasa de nuevas infecciones. Estudios morfométricos indican

que el diámetro del canal del pezón cambia considerablemente durante el periodo seco y la lactancia

del animal. Este diámetro fue mucho mayor a los 7 días del secado comparado con los días 1, 16 y 30,

hallándose una relación positiva entre diámetro e incidencia de enfermedades intramamarias

(Nickerson, 1989). Asimismo, a medida que el proceso involutivo progresa, la glándula se torna más

resistente. Dicha resistencia, entre otras causas, es atribuida a la formación del tapón de queratina en el

conducto del pezón, la cual tiene componentes con un efecto microbicida que previenen el ascenso y

multiplicación bacteriana en la glándula (Craven and Williams, 1985)

Entre los componentes solubles de la glándula mamaria y que hacen parte del sistema inmune están la

lactoferrina, xantina oxidasa y lactoperosidasas entre otras. La lactoferrina (Lf) es una proteína

perteneciente a la familia de las trasnferrinas y cuyo papel biológico más importante es colaborar en

los mecanismos innatos de protección de la glándula mamaria. El efecto bacteriostático de la Lf en su

forma de apo Lf se ha atribuido a su habilidad de captar el ion Fe3+ y limitar así su utilización por




bacterias patógenas, es así como después de la infección la Lf es liberada por los neutrófilos y células

epiteliales a la circulación sanguínea (Legrand and Mazurier, 2010). En rumiantes la Lf actúa

sinérgicamente con las IgG1 inhibiendo bacterias causantes de mastitis que tienen un alto

requerimiento de hierro y que son susceptibles a la actividad bacteriostática de Lf como son la E. coli

seguida por el S. aureus, sin embargo, otras bacterias como el Streptococcus son resistentes (Rainard,

1986; Sordillo and Streicher, 2002).

La leche bovina contiene muy poca cantidad de Lf (20 – 200 µg/mL) comparada con la leche humana

(1 – 2 mg/mL). Mientras que el calostro bovino contiene altas cantidades de Lf (2 – 5 mg/mL)

(Rainard and Riollet, 2006). Los factores solubles de defensa hacen parte tanto del sistema inmune

innato como del específico y representan una importante línea de defensa dentro de la glándula

mamaria. Estos factores son principalmente las inmunoglobulinas, células de defensa y las citoquinas.

Las inmunoglobulinas (Ig) son producidas por activación antigénica de los linfocitos B. El suero

bovino y la secreción láctea contiene principalmente tres clases de Igs: IgG, que tiene dos subclases

las IgG1 y IgG2, IgM y IgA; la estructura básica de todas es similar y están compuestas por dos

cadenas aminoacidicas largas e idénticas (Korhonen et al., 2000). Una función importante de las Ig es

su habilidad para aumentar la capacidad de fagocitosis y reconocimiento de las bacterias por parte de

los leucocitos (opsonización). Las Igs también previenen la adhesión de microbios a superficies

mucosas, inhibiendo el metabolismo bacteriano, aglutinando bacterias y neutralizando toxinas y virus.

Las IgM se producen en menos proporción que las IgG, pero son consideradas más eficientes que las

IgG, con respecto a las IgA no ayudan a la opsonización de bacterias, pero aglutinan antígenos y

neutralizan virus y toxinas bacterianas disminuyendo la propagación de infecciones bacterianas en la

GM (Korhonen et al., 2000).

La concentración de Igs en la glándula varía de acuerdo al momento de la lactancia y al grado de salud

de la misma. En leche normal su concentración es relativamente baja en comparación con el calostro

(50 – 150 mg/ml), o con la glándula inflamada, incrementándose en este último caso entre 2 y 3 veces

sobre el valor normal (Sordillo et al., 1997).

Cuando las bacterias superan las barreras anatómicas de la glándula mamaria puede establecerse la

IIM y es allí donde los leucocitos juegan un papel determinante en la severidad y duración de la IIM.

Los leucocitos están divididos en polimorfonucleares (PMN) que incluyen (neutrófilos, eosinófilos y

basófilos), los macrófagos y linfocitos, estos últimos participan en la respuesta inmune innata y

adquirida. Durante la IIM los PMN, en particular los neutrófilos, migran desde el torrente sanguíneo a

la glándula mamaria constituyéndose en la primera línea de defensa; son llevados al sitio de infección

por agentes quimio tácticos como son las interleukinas (IL) como la IL1, IL6, IL-8, IL-12, IL-1β,




factor de necrosis tumoral (TNF)-α y leucotrinos B4 liberados por el endotelio y los macrófagos

(Paape et al., 2003; Sohn et al., 2007). Una vez los PMN se unen a las bacterias éstos producen

sustancias oxidantes como el peróxido de hidrogeno, superóxido de hidrogeno y el radical hidroxilo

que matan la bacteria (Paape et al., 2002).

Los animales que tienen una mejor respuesta a nuevas infecciones IIM no solo reclutan rápidamente y

masivamente un número alto de PMN sino que además, tienen altos niveles sanguíneos de IgG2,

además de una efectiva respuesta inflamatoria temprana (Burton and Erskine, 2003). El número de

neutrófilos es relativamente bajo en la glándula mamaria sana (<105 células/mL), mientras, en caso de

mastitis puede constituirse en el 90% del total de leucocitos (>106 células/mL) (Sordillo, 2005a).

Los PMN tienen cinco funciones claves de vigilancia y defensa en la IIM, estas son: marginación,

migración, fagocitosis, estallido respiratorio y degranulación. La marginación y la migración son

críticos en la respuesta inmune innata y sucede como respuesta inflamatoria en el sitio de la infección.

La fagocitosis, estallido respiratorio y degranulación culminan con la muerte del patógeno

intracelularmente por parte de los PMN que han emigrado desde el torrente circulatorio a sitio de la

infección.(Burton and Erskine, 2003).

Durante el periparto la función y el número de neutrófilos está alterada o afectada por los

glucocorticoides, estos tienen un efecto inhibidor en la migración de los PMN por una disminución en

la expresión del receptor de adhesión de los neutrofilos llamado CD62L (selectina L) que es necesaria

para la penetración dentro del endotelio en los sitios de infección (Weber et al., 2004). Así mismo,

(Lamote et al., 2004), han demostrado que el 17β estradiol también tiene efecto sobre los PMN

durante el periparto, inhibiendo la diapédesis de estas células al sitio de infección, lo que explicaría

porque la mayoría de infecciones se establecen al inicio de la lactancia, por el efecto inmunosupresor

de esta hormona y que se encuentra en altas concentraciones alrededor del parto. Con respecto a la

progesterona, altos niveles de ésta tienen un efecto negativo sobre los PMN generando una desviación

a la izquierda y favoreciendo la aparición de PMN inmaduros (Moreira da Silva et al., 1998).

Las vacas con alteraciones metabólicas al inicio de la lactancia como cetosis, hígado graso y NEFA

altos, tienen un sistema inmune deprimido (Suriyasathaporn et al., 1999). Los cuerpos cetónicos

disminuyen la función de los neutrófilos, junto con los β-hidroxibutiratos y el acetoacetato inhiben la

proliferación de las células hematopoyéticas después del parto (Hoeben et al., 1999). La severidad de

la mastitis por E. coli y su relación con la quimiotáxis de los neutrófilos in vitro fue estudiada en vacas

con balance energético negativo. Las vacas fueron inoculadas con la bacteria y clasificadas en

cetósicas y no cetósicas basados en la concentración de β-hidroxibutiratos; en las vacas no cetósicas la




mastitis inducida experimentalmente fue de moderada a severa, mientras que en todas las vacas

cetóticas la mastitis fue severa (Kremer et al., 1993).

Los macrófagos en la GM sana y en la leche representan las células predominantes, sin embargo

durante la inflamación de la glándula mamaria, estas células disminuyen (Sordillo, 2005a). Los

macrófagos actúan como centinelas contra bacterias invasoras y en caso de infección liberan

quimioatrayentes que causan una rápida migración de los PMN al sitio de infección; los macrófagos

también pueden matar muchos patógenos intracelulares y pueden activar factores como el TNF y el

interferon Gamma (Burvenich et al., 2007).

Después de la apoptosis de los PMN, los macrófagos se encargan de la rápida eliminación de éstos con

el fin de minimizar las lesiones derivadas de efectos inflamatorios en el epitelio secretor de la GM

(Paape et al., 2003).

Los linfocitos son los encargados de construir y regular la respuesta inmunitaria. Existen dos tipos de

linfocitos, los cuales difieren en funciones y en componentes proteicos producidos, llamados linfocitos

B y T (Tizard, 1996). Los linfocitos T se dividen en dos grandes poblaciones, llamadas αβ y γδ. Los

αβ, a su vez, son subdivididos nuevamente en CD4+ (T colaboradores / memoria) y CD8+ (T

citotóxicos / supresores) (Burton and Erskine, 2003). Las funciones biológicas de los linfocitos T

CD4+ son la producción de citoquinas y la activación de la respuesta inmunitaria celular y humoral

(Sordillo et al., 1997; Kimura et al., 1999a). Los linfocitos T CD8+ tienen la capacidad de destruir

blancos específicos, como células infectadas con virus o cancerígenas, o de producir ciertas citoquinas

con efecto supresor de la respuesta inmune (Sordillo et al., 1997; Mallard et al., 1998; Kimura et al.,

1999a).

Las citoquinas son proteínas solubles que participan en una gran variedad de procesos biológicos,

incluyendo inflamación e inmunidad; el término citoquina fue originalmente para describir un grupo

de factores solubles libres que actúan como moléculas comunicadoras entre leucocitos y, aunque

juegan un papel esencial en la respuesta inmune, ellas también tienen efectos deletéreos en el

individuo (Borghetti et al., 2009; Sordillo and Streicher, 2002). Por lo anterior, debe existir un

equilibrio entre los efectos positivos y negativos de las citoquinas en el huésped que es regulado por

la duración, la cantidad y localización donde se expresan (Bannerman, 2009b). Las principales

citoquinas que se expresan en la GM cuando existen infecciones son IL-1, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12,

TNF-α, factor de necrosis tumoral (TNF-α), interferón (IFN-γ) y factor estimulante de colonia (CSF)

(Lee et al., 2006; Oviedo-Boyso et al., 2007).




En infecciones naturales de la GM con coliformes se ha observado que la concentración de IL-1, IL-6

y TNF-α son significativamente altas en vacas que tiene signos severos y respuesta inflamatoria

sistémica (Wenz et al., 2010). No obstante, en infecciones con S. aureus es característico una baja

relativa y un incremento de corta duración de las citoquinas proinflamatorias donde cumple un papel

fundamental la IL-6 (Bannerman, 2009a). Existen citoquinas antiinflamatorias, como la IL-4, IL-10,

IL-13 y el TGF-β, a nivel de la ubre la IL-10 ha sido bien estudiada y se le atribuyen varias funciones

como es inhibir la síntesis de interleuquinas y disminuir factores del MCH-II y regular antígenos y la

diferenciación y función de los linfocitos T (Schukken et al., 2011). Se ha observado un incremento a

nivel de la leche de IL-10 en infecciones por E. coli y otros Gram negativos y S uberis. Sin embargo

en infecciones por S. aureus, éste no induce una significativa respuesta de IL-10 a nivel de la ubre por

la falta de TNFα que estimularía la producción de IL-10 (Bannerman et al., 2004)

Durante la inflamación de la GM es común observar un incremento en el número de células somáticas

(neutrófilos) en leche; los neutrófilos migran del torrente sanguíneo a la GM como respuesta a

citoquinas proinflamatorias como el TNF-α y la IL-1β, sin embargo existen bacterias que son capaz de

modular la producción de citoquinas en la GM y modificar la respuesta inmune innata de la vaca

(Oviedo-Boyso et al., 2007).

Como resultado de la acción sistémica de las citoquinas, las células hepáticas incrementan la síntesis

proteica, en forma de proteínas de fase aguda (PFA), las que ejercen funciones inmunomoduladoras,

previenen el daño tisular, la propagación de la infección y mejoran el proceso de recuperación de la

homeostasis en el organismo (Eckersall et al., 2001). En bovinos, las proteínas de fase aguda más

sensibles son la haptoglobina (Hp) y el amiloide A sérico (AAS), las que muestran un sustancial

aumento en respuesta a la inflamación (Eckersall et al., 2006).

La Hp se clasifica como una alfa-globulina, con dos subunidades alfa y dos subunidades beta. Su

propiedad de combinarse de forma estable con la hemoglobina (Hb) libre permite retirarla de la

circulación y llevarla al hígado para ser catalizada a fin de prevenir lesiones renales y evitar la pérdida

de Hb por la orina cuando ocurre hemólisis (Fagoonee et al., 2005). Además de reciclar el hierro de la

Hb, la formación del complejo Hp-Hb tiene dos efectos beneficiosos: uno bacteriostático al impedir

que el Fe quede disponible para el crecimiento bacteriano (Eaton et al. 1982) y además una función

antioxidante al inhibir la diseminación de radicales libres generados por la Hb (Miller et al. 1997).

A pesar de que la Hp es una proteína clínicamente útil para medir el estado inflamatorio en los

bovinos, es una proteína inespecífica, ya que se aumenta en muchos estados inflamatorios como lo

indican varios autores en el trabajo de (Murata et al., 2004). En rumiantes clínicamente sanos, esta

proteína tiene concentraciones mínimas, sin embargo en procesos inflamatorios puede aumentarse




hasta 1000 veces en comparación con otras especies como los omnívoros donde se aumenta entre 5 y

10 veces (Eckersall et al., 2006). De otra parte, la Hp no solo se aumenta en procesos inflamatorios o

infecciosos, es así como (Nakagawa et al., 1997) observaron un aumento sustancial de Hp en vacas

con hígado graso.

Con respecto a la dinámica de la Hp en la GM, muchos estudios indican el aumento dramático de esta

proteína en suero y leche en vacas con mastitis (Eckersall et al., 2001; Eckersall et al., 2006; Hiss et

al., 2004). También se ha indicado que en vacas con mastitis, los neutrófilos y las células epiteliales de

la GM tienen la capacidad de sintetizar Hp, en un estudio realizado por (Lai et al., 2009) hallaron una

correlación positiva entre el RCS y los niveles de Hp, ya que observaron que todos los neutrófilos

aislados de células somáticas expresaron Hp. Lo anterior demostraría que los neutrófilos y las células

epiteliales de la GM son también una fuente extra-hepática de proteínas de fase aguda.

Las concentración de esta proteína fue mayor significativamente en vacas con infecciones por gram

negativos, 1126 µg/mL, mientras que en vacas con infecciones por gram positivos fue de 575 µg/mL,

también se observan concentraciones más altas de Hp a medida que la infección fue más severa.

(Wenz et al., 2010). Relaciones entre la presencia de PFA en leche y la calidad de la misma ha sido

evaluada, observándose que los niveles de proteínas totales y caseína fueron afectados cuando se

encontraron niveles de Hp altos; en este mismo estudio se encontró que el AAS en leche afecto la

caseína y la lactosa (Åkerstedt et al., 2008).

CETOSIS Y SANIDAD MAMARIA

La cetosis tiene un efecto negativo en los mecanismos de defensa de la ubre, es así como

(Suriyasathaporn et al., 2000) encontraron que los leucocitos de vacas cetóticas tienen una menor

capacidad de fagocitosis a nivel de la ubre. Así mismo, estos autores indican que la capacidad de los

neutrófilos es reducida cuando estas células actúan en presencia de altas concentraciones de cuerpos

cetónicos. De otra parte, (Hoeben et al., 1997), hallaron en un estudio in vitro que la cetosis induce

una supresión de la actividad de los PMN por una inhibición del anión superóxido, fundamental para

la fagocitosis. Las interleuquinas o quimoquinas (IL) son proteínas que favorecen la migración de los

neutrófilos a los sitios de inflamación, en especial la IL8 parece ser uno de los principales mediadores

de la inflamación y migración de leucocitos a la glándula mamaria en los procesos de mastitis

(McClenahan et al., 2006).




d.1 Planteamiento de la pregunta o problema de investigación y su justificación (máximo

1000 palabras).

La producción de leche en Colombia ha aumentado significativamente en las últimas dos décadas,

alcanzando una producción de 5550 millones de litros en el 2010, la que se incrementó 0,2% en el

2011 (Suárez et al., 2012), lo que representa el 25% del PIB pecuario, y el 10,2% del PIB

agropecuario.

El documento Conpes 3576 de 2010 indica que el consumo de leche per cápita en Colombia está por

debajo de la recomendación de la Organización Mundial de la Salud, 30 litros por habitante por año,

pese a estar por encima del consumo en otros países en desarrollo. Sin embargo, el consumo en los

estratos socio-económicos 1, 2 y 3 no supera los 35 litros per cápita, el que está asociado en muchos

casos a la adquisición de leche cruda con una baja calidad nutricional y de alto riesgo sanitario.

La mastitis bovina es la enfermedad más costosa en producción bovina y representa grandes pérdidas a

la industria a nivel mundial , como también considerables alteraciones en el bienestar de las vacas

afectadas (Cha et al., 2011). Cuando se habla de mastitis, concentramos la atención en un individuo

que padece la enfermedad y los costos de tratamiento y las pérdidas directas e indirectas que la

enfermedad genera. No obstante, el riesgo que la enfermedad tiene en el resto del rebaño a partir de un

individuo infectado tiene un impacto potencialmente alto por la posible transmisión de la enfermedad

a otros individuos. El costo de la mastitis en otros países se ha calculado que fluctúa entre los 95 y los

211 dólares (Bar et al., 2008; Cha et al., 2011), estos costos están representados en pérdidas de leche,

medicamentos, asistencia médica y por un aumento en las pérdidas futuras en la producción de leche,

el porcentaje de sacrificio y un mayor número de hembras de reemplazo.

La respuesta inflamatoria de la glándula mamaria depende del tipo de bacteria involucrada y así

mismo el efecto, donde hay agentes patógenos que tienen un mayor impacto en la salud de la vaca, en

la producción y en la rentabilidad del hato (Bannerman, 2009). El S. agalactiae es un agente que

comúnmente da cuadros de mastitis subclínica, o también clínica de leve a moderada. La infección

subclínica va acompañada de un recuento de células somáticas elevado pero sin anormalidades en la

leche. En general, las vacas infectadas con S. agalactiae presentan más de un cuarto infectado y es

generalmente descrita como contagiosa. La infección se disemina desde las vacas infectadas a las

sanas durante el ordeño a través de la máquina de ordeño, las manos del ordeñador y los materiales

que se utilizan para limpiar los pezones, como las toallas, si se utiliza la misma en más de una vaca.

Recientemente, en un estudio en Colombia involucrando una selección aleatoria de tanques de

enfriamiento de leche, se encontró que un 42% de los tanques eran positivos a la presencia de Strep.




agalactiae, siendo variable la prevalencia según la zona geográfica del país (Keefe et al., 2010).

Situación que no ha variado según lo reportado en otros estudios (Calderón et al., 2011; Calderón and

Rodríguez, 2008).

Con la implementación de este proyecto se generara una mayor conocimiento de la enfermedad con el

fin de establecer los programas de control, prevención y erradicación de este patógeno para garantiza

un producto de mejor calidad, lo que se traduce finalmente en un mayor desarrollo económico para la

región y un mejoramiento de la calidad de vida de los consumidores.

d.2 Marco Teórico (máximo 2000 palabras)

De acuerdo a antecedentes de literatura, la cetosis subclínica en bovinos tiene una prevalencia

que fluctúa entre el 8 y 34% en vacas de leche% (Dohoo and Martin, 1984; Duffield et al., 1997),

y en nuestro medio se ha observado una prevalencia del 12% (Datos sin publicar), sin

embargo, no se han cuantificado las pérdidas económicas que genera esta enfermedad y los

efectos que tiene en la predisposición para la presentación de otras enfermedades como la

mastitis y alteraciones reproductivas.

Como se describió anteriormente, la mastitis es la principal causa de pérdidas económicas en

ganado de leche y conociendo que es una enfermedad multicausal y que son muchos los

factores que predisponen a ella, así como, el efecto que tiene en la salud pública, donde

alrededor del 50% de leche que se comercializa en nuestro país es a través del comercio

informal; se hace necesario conocer la dinámica de las infecciones y cuáles son los patógenos

más prevalentes y que generan mayores riesgos en la salud pública. De acuerdo a estudios

previos en nuestro medio existe una alta prevalencia de Streptococcus agalactiae y éste no

solo constituye un problema para la industria lechera del país, causando pérdidas por baja

producción de leche, bajo rendimiento en los subproductos lácteos y baja calidad de los

derivados de la leche, sino que también afecta la salud pública al ser principal agente causal

de muertes neonatales en humanos (Ismail et al., 2011).

En algunos países, como Dinamarca, la prevalencia de infecciones intramamarias en bovinos

causadas por este patógeno se logró disminuir hasta un 2% gracias a esfuerzos de control

establecidos por el gobierno (Andersen et al., 2003). Sin embargo, desde el año 2000 la

prevalencia ha venido incrementándose progresivamente, hasta el punto que en el 2009 se




reportó un 28% de hatos lecheros positivos para esta bacteria, incluyendo también su

positividad para cepas de origen humano (Katholm and Rattenborg, 2009). Se desconoce el

cómo y el por qué reemergió este patógeno con una alta prevalencia, lo que puede

relacionarse con cambios en la virulencia o adaptabilidad (Zadoks et al., 2011)

Por todo lo anterior, esta propuesta de investigación pretende conocer la dinámica de algunas

citoquinas inflamatorias y proteínas de fase aguda en vacas bajo condiciones de cetosis

subclínica y con mastitis inducida con Streptococcus agalactiae. Para implementar programas

de control y erradicación de esta bacteria en nuestro medio.

d.3 Objetivos (máximo 500 palabras)

Objetivo general

Evaluar la respuesta inflamatoria de la glándula mamaria mediante el análisis de citoquinas

inflamatorias específicas y proteínas de fase aguda en vacas infectadas con Strep. agalactiae bajo

condiciones de cetosis subclínica.

Objetivos específicos

Estimar la concentración de albúmina, globulinas, fibrinógeno y proteínas totales en vacas infectadas

con Strep. agalactiae; como también determinar la relación neutrófilos – linfocitos en sangre.

Cuantificar la actividad de la IL8, TNFα en leche de cuartos infectados y no infectados con Strep.

agalactiae.

Analizar los cambios de las proteínas de fase aguda (AAS y Haptoglobina) y la proteína lactoferrina

en leche de cuartos sanos e infectados con Strep. agalactiae.

Determinar la actividad de las integrinas CD 14 y 11B mediante citometría en las células somáticas de

la leche de cuartos sanos e infectados con Strep. agalactiae.

d.4 Metodología propuesta (máximo 1000 palabras)




Con el fin de evaluar la respuesta inflamatoria a nivel de glándula mamaria, a 5 vacas al inicio de la

lactancia se les evaluará la presencia de la cetosis entre la segunda y tercera semana, la cetosis será

medida a través del método cuantitativo Keto-Stix®. Al momento de encontrar a cada una de las vacas

con la cetosis se les hará una determinación de RCS y cultivo de cada uno de los cuartos para conocer

el estado de la sanidad mamaria. Además, a cada vaca se le realizará un hemoleucograma para

determinar el recuento leucocitario. Inmediatamente la glándula mamaria de cada vaca se declare

clínicamente sana se procederá a infectar dos cuartos de cada vaca con Strep. agalactiae. Así mismo,

se realizaran cultivos bacteriológicos durante los cinco días del experimento para establecer la

presencia de la bacteria posterior a la inoculación experimental. A partir del sexto día las vacas serán

tratadas en cada uno de los cuartos mediante terapia extendida con un producto comercial cuyo

proveedor será MSD®.

Durante los cinco días siguientes a la inoculación, se procederá a tomar temperatura dos veces al día y

se tomará una muestra de sangre diariamente para evaluar los posibles cambios hematológicos como

son: albúmina, globulinas, fibrinógeno y proteínas totales. También se hará un hemoleucograma

completo incluyendo un recuento diferencial de los leucocitos. A nivel de cada cuarto se tomará una

muestra de leche de los cuartos infectados y sanos y se procederá a determinar el RCS y se hará una

caracterización y diferenciación de estas células mediante el conteo de 100 células en tres campos.

Posteriormente, estas células se fijaran y se congelaran a <80°C para mediante citometría de flujo

determinar la CD14 y la integrina 11B.

Para la determinación de las citoquinas en leche, inmediatamente obtenida la muestra se procederá a

centrifugarla a 1500 g por 30 minutos a 4°C. La grasa será removida y el supernadante se almacenará

a < 20° C. La concentración de las IL8 y TNFα y las proteínas de fase aguda AAS y Haptoglobina se

cuantificarán usando un kit de ELISA (R&D Systems®) para bovinos de acuerdo a las instrucciones

del fabricante.

Para el análisis de citometría las células somáticas se resuspenderán en una solución balanceada de sal

y suplementada con 10mM de azida de sodio y 1% (w/v) BSA. Los anticuerpos monoclonales que se

usaran son CD14 y 11B integrina anti bovino, utilizando los anticuerpos fluorescentes (Serotec®,

Oxford, UK).

Para el análisis de los resultados se hará estadística descriptiva, para garantizar la distribución normal

del RCS se transformaran al logaritmo natural. Las asociaciones entre las diferentes variables y los

resultados de interés serán evaluados mediante regresión lineal mixta en el programa Stata 13.1 (Stata

Corp. College Station, Texas, USA).




d.5 Resultados esperados5

Mediante este estudio se describirá desde el punto de vista biológico la respuesta inmune de la

glándula mamaria a una bacteria que tiene una alta prevalencia en nuestro medio y bajo condiciones de

cetosis que es una enfermedad metabólica que afecta a muchas vacas al inicio de la lactancia y que se

describe como una patología que induce inmunosupresión. Además, este trabajo sería un soporte

importante para buscar la prevención y erradicación en nuestro medio ya que se conocerá como es la

dinámica de la infección bajo nuestras condiciones, lo que permitirá a los profesionales de campo e

investigadores enfrentar este problema y generar nuevos estudios en el área de la salud pública y

epidemiología veterinaria.

Los resultados de este estudio se divulgados mediante una publicación de carácter internacional y

además serán enviados a un evento internacional como el National Mastitis Council que se celebra

cada año. De otra parte, estos resultados serán un insumo importante para entregarlos a los estudiantes

de pre y postgrados que estén en el área.

d.6 Impactos esperados a partir del uso de los resultados (máximo 1 página)

Conocedores de la alta prevalencia que tiene el Strep. agalactiae como una causa de mastitis a

nivel nacional y el efecto que tienen las enfermedades metabólicas, como la cetosis, al inicio de la

lactancia en vacas de leche; con la ejecución de este proyecto se busca caracterizar el patrón de

inflamación que genera esta bacteria en vacas sometidas a cetosis subclínica. Así mismo, se

implementaran técnicas asociadas a la biología molecular que permitan continuar con otros trabajos

en el campo de la sanidad mamaria y las enfermedades metabólicas.

Con este estudio se promueve nuevo conocimiento de alto impacto a nivel regional, nacional e

internacional, además, se generarán nuevas hipótesis que permitirán continuar en esta misma línea

de investigación y fortalecernos en este campo de la Medicina Veterinaria y adoptar metodologías

diagnósticas de alto impacto científico en nuestra Universidad. En este mismo sentido, es

importante indicar el fortalecimiento de las relaciones de nuestra Universidad con otras

instituciones de alto nivel académico como son la Universidad Tecnológica de Pereira y la

Universidad de Prince Edwards de Canadá, donde con la calidad académica de los coautores de

este estudio se garantiza la ejecución del proyecto. De otra parte, con este estudio se favorecerá la

formación de un estudiante de pregrado.

5 Serán reportados en los informes técnicos de avance (anual) o final, de acuerdo al formato para tal fin,

disponible en la página web de la Universidad en el link de investigaciones




También es de resaltar que la apertura, globalización e internacionalización de la economía

implican cambiar las estrategias competitivas de las empresas. Los productos lácteos colombianos

deben compararse en cuanto a su calidad con los producidos en otros países donde se ha legislado

para maximizar la calidad de la leche cruda; no obstante, para hacer esta comparación se requiere

fortalecer la competitividad de los productos nacionales mediante planes de prevención y

aseguramiento de la calidad en sanidad mamaria.

d.7 Cronograma de actividades: Relación de actividades a realizar en función del tiempo

(meses), en el periodo de ejecución del proyecto.

Año - bimestre 2014 2015

3 4 5 6 1 2 3

Presentación del proyecto X

Selección de los animales y el predios

objeto del trabajo X

Recolección de muestras X

Análisis de muestras X X X

Tabulación de datos X X

Análisis estadístico X

Informe de avance X

Informe final del proyecto X

Presentación a congresos X

Publicaciones X

d.8. Compromisos

Relacione los compromisos que van a adquirir con el desarrollo del proyecto en términos de

informes y productos.

Los autores de este proyecto nos comprometemos a entregar un informe parcial de acuerdo con el

cronograma de actividades y un informe final donde estará consolidando todo el trabajo ejecutado en

el proyecto. De otra parte, nos comprometemos a realizar una publicación en una revista clasificada

como A1 de acuerdo a Colciencias.




Así mismo, hacemos el compromiso de entregar al final del proceso de investigación un documento,

en el formato establecido por la Vicerrectoría de investigaciones donde se indicará el impacto que

tendrá esta investigación desde el punto de vista aplicado. Así mismo, se conocerán aspectos

moleculares implicados en la inmunología de la glándula mamaria que aportaran antecedentes que

permitirán en un futuro disminuir la prevalencia de mastitis por el patógeno objeto de estudio y así

entregar un producto de mejor calidad al consumidor final y disminuir los costos de producción en los

hatos dedicados a la producción de leche en nuestra región.

Desde el punto de vista académico, los conocimientos generados se divulgaran en diferentes espacios

académicos con estudiantes de pre y posgrado, como también a productores de la región.

d.9. Bibliografía

Relacione únicamente la bibliografía referida en el texto, ya sea en forma de pie de página o como

ítem independiente.

d.10 Presupuesto

Completar el anexo 1, sólo en los recuadros claros, los sombreados representan que los rubros no

son permitidos.

PRESUPUESTO (RUBROS Y FUENTES)

AÑO 1 (debe hacerse cada año por separado)

RUBROS*

FUENTES

TOTAL

UNIVERSIDAD FINANCIACIÓN EXTERNA

RECURRENTE6

Recursos

solicitados en

esta

convocatoria

RECURRENTE

RECURSOS

FRESCOS

1. SERVICIOS

PERSONALES

1.1 Investigadores

Néstor Alonso Villa 6.690.360 6.690.360

Alejandro Ceballlos 1.962.192 1.962.192

Juan Carlos Rodríguez 4.890.000 4.890.000

Juan Carlos Sepúlveda 3.600.000 3.600.000

6 Costos recurrentes son los rubros existentes en cada institución o empresa




RUBROS*

FUENTES

TOTAL


RECURRENTE6

Recursos

solicitados en

esta

convocatoria

RECURRENTE

RECURSOS

FRESCOS

2.1 Servicios técnicos

2.1.1 Exámenes

2.1.2 Pruebas

2.2 Materiales e insumos

2.2.1 De campo

Tratamientos Antimastiticos

1.100.000

2.2.2 De oficina (papel, tinta,

fotocopias)

2.2.3 De laboratorio

Kits de Elisa para

interleuquinas y citometría

9.150.000 9.150.000

2.3 Apoyo económico para

gastos de viaje y

transporte

2.3.1 Pasaje terrestres

2.3.2 Gastos de viaje

(Gasolina y Peaje)

2.3.3 Auxilio para viaje

2.3.4 Apoyo económico para

alojamiento y

alimentación7

2.4 Equipos

Elisa y Equipo de citometría

5.000.000

5.000.000

2.4.1 Alquiler

3. INVERSIÓN

3.1 Equipo requerido

3.1.1 Para comprar

3.1.2 Propio

3.2 Material bibliográfico

3.2.1 Para comprar

3.3 Software

3.3.1 Para comprar

3.3.2 Propio

4. ADMINISTRACIÓN 20%

TOTAL 8.652.552 9.150.000 13.490.000 1.100.000 32.392.552

7 Se recomienda que este valor esté por debajo de la liquidación de viáticos estipulada en el Acuerdo No. 04 del

Consejo Superior del 15 de febrero de 2005




RUBROS*

FUENTES

TOTAL


RECURRENTE6

Recursos

solicitados en

esta

convocatoria

RECURRENTE

RECURSOS

FRESCOS

PORCENTAJE DE FUENTES 26.7 28.2 41.6 3.4 100

4. Finalización del proyecto

La finalización del proyecto, está determinada por la presentación de (i) un informe final, y (ii)

acreditación de envío de manuscrito para publicación a revista indexada (mínimo en categoría B) y

recibo del mismo por el respectivo editor, o por la prueba de repositorio de artículo científico en

concordancia con la política editorial de la revista. El segundo requisito puede ser suplido por una obra

de creación (para los proyectos en artes) o por un producto de apropiación (sometimiento de registro

de patente, prototipo de un producto tecnológico, propuesta de documento de política pública

sometido a organismos gubernamentales, o propuesta madura de generación de empresa tipo spin-off).

5. Documentación complementaria para inscripción del proyecto

Si el proyecto es aprobado, los proponentes deberán diligenciar la ficha de inscripción del proyecto,

la ficha de inscripción de cada integrante y la carta de compromiso firmada por todos los autores (ver

formatos para inscripción de proyectos, CÓDIGO:

R-1108-P-IN-77, del procedimiento P-IN-77 del SIG).

NOTA IMPORTANTE:

Los investigadores firmarán con la Universidad de Caldas un acta de propiedad intelectual, una vez

analizada la necesidad, en desarrollo de la política aprobada por el Consejo Superior. Igualmente, el

proyecto estará supeditado a la aprobación del Comité de Ética en Investigación o del Comité de Ética

para experimentación con animales. Los proyectos que involucren colecta de especímenes,

manipulación genética, o trabajo con comunidades étnicas requieren permiso especial de las

autoridades ambientales competentes.

6. Anexos

http://sig.ucaldas.edu.co/gestionDocumental/consultaDocsManual.php?codDoc='Nzc='




Anexo 1: Presupuesto

Anexo 2: Ficha del proyecto (diligenciado por directores de departamento o institutos). Se encuentra

en el paso 7 del flujograma del procedimiento P-IN-77 del SIG.

Anexo 1

PRESUPUESTO (RUBROS Y FUENTES)

DISCRIMINADO AÑO POR AÑO

Instrucciones

1. Diligenciar el presupuesto del archivo Excel “presupuesto_estandar_proyectos” (anexo 1).,

empezando por digitar el nombre del proyecto en la primera pestaña. Acceder solamente a las

pestañas “Año_1”, “Año_2”, y “Año_3”.

2. Usar solamente las celdas en blanco que sean requeridas. Las celdas sombreadas están

programadas para llenarse automáticamente

3. Imprimir el cuadro de la pestaña “presupuesto total” e incluirlo en la versión física del proyecto.

4. Grabar el archivo diligenciado en el CD que se entrega con el proyecto, usando un nombre

distintivo del proyecto en cuestión.

Solamente se aprobará compra de material bibliográfico que se demuestre que es imprescindible para

el proyecto específico, y debe constituirse en material de apoyo INSTITUCIONAL de uso público

para la comunidad académica de la Universidad de Caldas. Finalizada la investigación, el material

bibliográfico debe transferirse a la Biblioteca. Además, solamente se aprobará compra de software que

se demuestre que es una herramienta imprescindible para el desarrollo del proyecto.

Los docentes que requieran asesoría para la elaboración del proyecto, pueden solicitarla a la

Vicerrectoría de Investigaciones y Postgrados.

http://sig.ucaldas.edu.co/gestionDocumental/consultaDocsManual.php?codDoc='Nzc='






DESGLOSE DEL PRESUPUESTO

Descripción de los gastos de personal

Nombre del

Investigador /

Experto/

Auxiliar/estudiante

Formación

Académica

Función

dentro en del

proyecto

Institución o

Empresa

Tipo de

vinculación

DEDICACIÓ

N

Horas/semana

Fuentes

Total Recursos

VIP en

efectivo

Especie8

Néstor Alonso Villa MVZ, MSc Inv. principal U. de Caldas TC 5 6.690.360

Alejandro Ceballos MVZ, MSc. PhD Coinvestigador U. de Caldas TC 2 1.962.192

Juan Carlos

Rodríguez MVZ, MSc. PhD Coinvestigador Prince Edward TC 1

4.890.000

Juan Carlos

Sepúlveda Med. Dr Coinvestigador UTP TC 5

3.600.000

Totales 17.142.552

8 Ya disponibles en la institución




Descripción de equipos a adquirir

Equipos Justificación Fuentes Otras fuentes

Total Recursos VIP en efectivo

Equipos UTP Lector de Elisa y

Totales

Descripción de software a adquirir

Software Justificación Fuentes Otras fuentes

Total Recursos VIP en efectivo

Descripción y justificación de viajes

Lugar /No. de viajes Justificación Pasajes ($) Estadía ($) Total días Total




Totales

Valoración de salidas de campo (complete un cuadro por salida o pondere el total de las salidas)

Lugar de la Salida :

Justificación:

Concepto $ / día No. de Días TOTAL

Alimentación

Alojamiento

Transporte

TOTAL

Material Bibliográfico (en miles de $)

Ítem Justificación Valor

TOTAL




BIBLIOGRAFIA

Åkerstedt, M., Waller, K.P., Larsen, L.B., Forsbäck, L., Sternesjö, Å., 2008. Relationship

between haptoglobin and serum amyloid A in milk and milk quality. International

Dairy Journal 18, 669-674.

Andersen, H.J., Pedersen, L.H., Aarestrup, F.M., Chriel, M., 2003. Evaluation of the

surveillance program of Streptococcus agalactiae in Danish dairy herds. J. Dairy Sci.

86, 1233-1239.

Anderson, L.L., 1988. Subclinical ketosis in dairy cows. Vet Clin North Am Food Anim

Pract 4, 233 - 251.

Bannerman, D., 2009a. Pathogen-dependent induction of cytokines and other soluble

inflammatory mediators during intramammary infection of dairy cows. J Anim Sci

87, 10 - 25.

Bannerman, D., Paape, M., Lee, J., Zhao, X., Hope, J., Rainard, P., 2004. Escherichia coli

and Staphylococcus aureus elicit differential innate immune responses following

intramammary infection. Clin Diagn Lab Immunol 11, 463 - 472.

Bannerman, D.D., 2009b. Pathogen-dependent induction of cytokines and other soluble

inflammatory mediators during intramammary infection of dairy cows. Journal of

Animal Science 87, 10-25.

Bar, D., Tauer, L.W., Bennett, G., González, R.N., Hertl, J.A., Schukken, Y.H., Schulte,

H.F., Welcome, F.L., Gröhn, Y.T., 2008. The Cost of Generic Clinical Mastitis in

Dairy Cows as Estimated by Using Dynamic Programming. Journal of dairy science

91, 2205-2214.

Barker, A.R., Schrick, F.N., Lewis, M.J., Dowlen, H.H., Oliver, S.P., 1998. Influence of

clinical mastitis during early lactation on reproductive performance of jersey cows.

Journal of Dairy Science 81, 1285 - 1290.

Berge, A.C., Vertenten, G., 2014. A field study to determine the prevalence, dairy herd

management systems, and fresh cow clinical conditions associated with ketosis in

western European dairy herds. Journal of dairy science 97, 2145-2154.

Bobe, G., Ametaj, B.N., Young, J.W., Anderson, L.L., Beitz, D.C., 2007. Exogenous

glucagon effects on health and reproductive performance of lactating dairy cows with

mild fatty liver. Animal Reproduction Science 102, 194-207.

Borghetti, P., Saleri, R., Mocchegiani, E., Corradi, A., Martelli, P., 2009. Infection,

immunity and the neuroendocrine response. Veterinary Immunology and

Immunopathology 130, 141-162.

Burton, J.L., Erskine, R.J., 2003. Immunity and mastitis Some new ideas for an old

disease. The Veterinary clinics of North America. Food animal practice 19, 1-45.

Burvenich, C., Bannerman, D.D., Lippolis, J.D., Peelman, L., Nonnecke, B.J., Kehrli,

M.E., Paape, M.J., 2007. Cumulative Physiological Events Influence the

Inflammatory Response of the Bovine Udder to Escherichia coli Infections During

the Transition Period1. Journal of dairy science 90, E39-E54.

Calderón, A., Rodríguez, V., Arrieta, G.J., Máttar, S., 2011. Prevalencia de mastitis

bovina en sistemas doble propósito en Montería (Colombia): Etiología y

susceptibilidad antibacteriana. Rev. Col. Cs. Pec. 24, 19-28.

Calderón, A., Rodríguez, V.C., 2008. Prevalencia de mastitis bovina y su etiología

infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano

cundiboyacense (Colombia). Rev. Colom. Cienc. Pecua. 21, 582 -589.




Calderón, A., Rodríguez, V.C., 2008. Prevalencia de mastitis bovina y su etiología

infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano

cundiboyacense (Colombia). Rev. Col. Cs. Pec. 21, 582-589.

Craven, N., Williams, M.R., 1985. Defences of the bovine mammary gland against

infection and prospects for their enhancement. Veterinary Immunology and


Cha, E., Bar, D., Hertl, J.A., Tauer, L.W., Bennett, G., González, R.N., Schukken, Y.H.,

Welcome, F.L., Gröhn, Y.T., 2011. The cost and management of different types of

clinical mastitis in dairy cows estimated by dynamic programming. Journal of dairy

science 94, 4476-4487.

Chapinal, N., LeBlanc, S.J., Carson, M.E., Leslie, K.E., Godden, S., Capel, M., Santos,

J.E.P., Overton, M.W., Duffield, T.F., 2012. Herd-level association of serum

metabolites in the transition period with disease, milk production, and early lactation

reproductive performance. Journal of dairy science 95, 5676-5682.

Dillon, P., Berry, D.P., Evans, R.D., Buckley, F., Horan, B., 2006. Consequences of

genetic selection for increased milk production in European seasonal pasture based

systems of milk production. 99, 141-158.

Dohoo, I.R., Martin, S.W., 1984. Disease, production and culling in Holstein-Friesian

cows: IV. Effects of disease on production. Preventive Veterinary Medicine 2, 755-

770.

Drackley, J.K., 1999. Biology of Dairy Cows During the Transition Period: the Final

Frontier? Journal of Dairy Science 82, 2259-2273.

Drackley, J.K., Dann, H.M., Douglas, G.N., Janovick Guretzky, N.A., Litherland, N.B.,

Underwood, J.P., Loor, J.J., 2005. Physiological and pathological adaptations in

dairy cows that may increase susceptibility to periparturient diseases and disorders.

Ital. J. Anim. Sci. 4, 323-344.

.

Duffield, T., Kelton, D., Leslie, K., Lissemore, K., Lumsden, J., 1997. Use of test day

milk fat and milk protein to detect subclinical ketosis in dairy cattle in Ontario. Can.

Vet. J 38, 713 - 718.

Duffield, T.F., Lissemore, K.D., McBride, B.W., Leslie, K.E., 2009. Impact of

hyperketonemia in early lactation dairy cows on health and production. Journal of

Dairy Science 92, 571-580.

Eckersall, P.D., Young, F.J., McComb, C., Hogarth, C.J., Safi, S., Fitzpatrick, J.L.,

Nolan, A.M., Weber, A., McDonald, T., 2001. Acute phase proteins in serum and

milk from dairy cows with clinical mastitis. Veterinary Record 148, 35-41.

Eckersall, P.D., Young, F.J., Nolan, A.M., Knight, C.H., McComb, C., Waterston, M.M.,

Hogarth, C.J., Scott, E.M., Fitzpatrick, J.L., 2006. Acute Phase Proteins in Bovine

Milk in an Experimental Model of Staphylococcus aureus Subclinical Mastitis.

Journal of dairy science 89, 1488-1501.

Fagoonee, S., Gburek, J., Hirsch, E., Marro, S., Moestrup, S.K., Laurberg, J.M.,

Christensen, E.I., Silengo, L., Altruda, F., Tolosano, E., 2005. Plasma Protein

Haptoglobin Modulates Renal Iron Loading. The American journal of pathology 166,

973-983.

Gillund, P., Reksen, O., Gröhn, Y.T., Karlberg, K., 2001. Body Condition Related to

Ketosis and Reproductive Performance in Norwegian Dairy Cows. Journal of Dairy

Science 84, 1390-1396.

Heuer, C., Schukken, Y.H., Dobbelaar, P., 1999. Postpartum Body Condition Score and

Results from the First Test Day Milk as Predictors of Disease, Fertility,Yield, and

Culling in Commercial Dairy Herds. Journal of Dairy Science 82, 295 - 304.




Hiss, S., Mielenz, M., Bruckmaier, R.M., Sauerwein, H., 2004. Haptoglobin

Concentrations in Blood and Milk After Endotoxin Challenge and Quantification of

Mammary Hp mRNA Expression. Journal of dairy science 87, 3778-3784.

Hoeben, D., Burvenich, C., Massart-Leën, A.-M., Lenjou, M., Nijs, G., Van Bockstaele,

D., Beckers, J.-F., 1999. In vitro effect of ketone bodies, glucocorticosteroids and

bovine pregnancy-associated glycoprotein on cultures of bone marrow progenitor

cells of cows and calves. Veterinary Immunology and Immunopathology 68, 229-

240.

Hoeben, D., Heyneman, R., Burvenich, C., 1997. Elevated levels of [beta]-

hydroxybutyric acid in periparturient cows and in vitro effect on respiratory burst

activity of bovine neutrophils. Veterinary Immunology and Immunopathology 58,

165-170.

Hogan, J.S., Smith, K.L., Todhunter, D.A., Schoenberger, P.S., 1988. Growth Responses

of Environmental Mastitis Pathogens to Long-Chain Fatty Acids1. Journal of dairy

science 71, 245-249.

Ismail, A.Q., Yeates, D.G., Marciano, A., Goldacre, M., Anthony, M., 2011. Cow's milk

and the emergence of group B streptococcal disease in newborn babies. Neonatology

100, 404-408.

Jorritsma, R., Jorritsma, H., Schukken, Y.H., Bartlett, P.C., Wensing, T., Wentink, G.H.,

2001. Prevalence and indicators of post partum fatty infiltration of the liver in nine

commercial dairy herds in The Netherlands. Livestock Production Science 68, 53-60.

Jorritsma, R., Wensing, T., Kruip, T.A.M., Vos, P.L.A.M., Noordhuizen, J.P.T.M., 2003.

Metabolic changes in early lactation and impaired reproductive performance in dairy

cows Vet. Res. 34, 11 - 26.

Katholm, J., Rattenborg, E., 2009. Surveillance of the B streptococcal infection in Danish

dairy herds [Overvågningen af B-streptokok infektion i danske

malkekvægsbesætninger]. Dansk Veterinærtidsskrift 19, 24-31.

Keefe, G.P., Chaffer, M., Ceballos, A., Jaramillo, M., Londoño, M., Toro, M., Montoya,

M.I. 2010. Prevalence of Streptococcus agalactiae in cooling tanks of Colanta. In:

VI Seminario Internacional en Competitividad en Carne y Leche, Medellín,

Colombia.

Korhonen, H., Marnila, P., Gill, H.S., 2000. Milk immunoglobulins and complement

factors. British Journal of Nutrition 84, 75-80.

Kremer, W.D.J., Noordhuizen-Stassen, E.N., Grommers, F.J., Schukken, Y.H., Heeringa,

R., Brand, A., Burvenich, C., 1993. Severity of Experimental Escherichia coli

Mastitis in Ketonemic and Nonketonemic Dairy Cows. Journal of dairy science 76,

3428-3436.

Lai, I.-H., Tsao, J., Hsu, Lu, Y., Ping, Lee, J., Wei, Zhao, X., Chien, F., Lin, Mao, S.,

J.T., 2009. Neutrophils as one of the major haptoglobin sources in mastitis affected

milk. Vet. Res. 40, 17.

Lamote, I., Meyer, E., Duchateau, L., Burvenich, C., 2004. Influence of 17β-Estradiol,

Progesterone, and Dexamethasone on Diapedesis and Viability of Bovine Blood

Polymorphonuclear Leukocytes. Journal of dairy science 87, 3340-3349.

Leblanc, S., 2010. Monitoring Metabolic Health of Dairy Cattle in the Transition Period.

The Journal of Reproduction and Development 56, S29-S35.

Lee, J.-W., Bannerman, D.D., Paape, M.J., Huang, M.-K., Zhao, X., 2006.

Characterization of cytokine expression in milk somatic cells during intramammary

infections with Escherichia coli or Staphylococcus aureus by real-time PCR. Vet.

Res. 37, 219-229.




Legrand, D., Mazurier, J., 2010. A critical review of the roles of host lactoferrin in

immunity. BioMetals 23, 365-376.

Ma, Y., Ryan, C., Barbano, D.M., Galton, D.M., Rudan, M.A., Boor, K.J., 2000. Effects

of Somatic Cell Count on Quality and Shelf-Life of Pasteurized Fluid Milk1. Journal

of dairy science 83, 264-274.

McClenahan, D., Krueger, R., Lee, H.-Y., Thomas, C., Kehrli Jr, M.E., Czuprynski, C.,

2006. Interleukin-8 expression by mammary gland endothelial and epithelial cells

following experimental mastitis infection with E. coli. Comparative Immunology,

Microbiology and Infectious Diseases 29, 127-137.

Miettinen, P.V.A., Setälä, J.J., 1993. Relationships between subclinical ketosis, milk

production and fertility in Finnish dairy cattle. Preventive Veterinary Medicine 17, 1-

8.

Moreira da Silva, F., Burvenich, C., Massart Leën, A.M., Brossé, L., 1998. Assessment of

blood neutrophil oxidative burst activity in dairy cows during the period of

parturition. Animal Science 67, 421-426.

Moser, M., Leo, O., 2010. Key concepts in immunology. Vaccine 28, C2-C13.

Murata, H., Shimada, N., Yoshioka, M., 2004. Current research on acute phase proteins

in veterinary diagnosis: an overview. The Veterinary Journal 168, 28-40.

Nakagawa, H., Yamamoto, O., Oikawa, S., Higuchi, H., Watanabe, A., Katoh, N., 1997.

Detection of serum haptoglobin by enzyme-linked immunosorbent assay in cows

with fatty liver. Research in Veterinary Science 62, 137-141.

Nickerson, S.C., 1989. Immunological Aspects of Mammary Involution1. Journal of

dairy science 72, 1665-1678.

Ospina, P.A., Nydam, D.V., Stokol, T., Overton, T.R., 2010. Associations of elevated

nonesterified fatty acids and β-hydroxybutyrate concentrations with early lactation

reproductive performance and milk production in transition dairy cattle in the

northeastern United States. Journal of dairy science 93, 1596-1603.

Oviedo-Boyso, J., Valdez-Alarcón, J.J., Cajero-Juárez, M., Ochoa-Zarzosa, A., López-

Meza, J.E., Bravo-Patiño, A., Baizabal-Aguirre, V.M., 2007. Innate immune

response of bovine mammary gland to pathogenic bacteria responsible for mastitis.

Journal of Infection 54, 399-409.

Paape, M., Mehrzad, J., Zhao, X., Detilleux, J., Burvenich, C., 2002. Defense of the

Bovine Mammary Gland by Polymorphonuclear Neutrophil Leukocytes. Journal of

Mammary Gland Biology and Neoplasia 7, 109-121.

Paape, M.J., Bannerman, D.D., Zhao, X., Lee, J.-W., 2003. The bovine neutrophil:

Structure and function in blood and milk. Vet. Res. 34, 597-627.

Rainard, P., 1986. Bacteriostatic activity of bovine milk lactoferrin against mastitic

bacteria. Veterinary Microbiology 11, 387-392.

Rainard, P., Riollet, C., 2006. Innate immunity of the bovine mammary gland. Vet. Res.

37, 369-400.

Rajala-Schultz, P.J., Grohn, Y.T., McCulloch, C.E., Guard, C.L., 1999. Effects of

Clinical Mastitis on Milk Yield in Dairy Cows. Journal of Dairy Science 82, 1213-

1220.

Ramírez, N., Gaviria, G., Arroyave, O., Blanca Sierra, B., Benjumea, J.E., 2001.

Prevalencia de mastitis en vacas lecheras lactantes en el municipio de San Pedro de

los Milagros, Antioquia. Rev. Colom. Cienc. Pecua. 14, 76 - 87.

Roche, J.R., Friggens, N.C., Kay, J.K., Fisher, M.W., Stafford, K.J., Berry, D.P., 2009.

Invited review: Body condition score and its association with dairy cow productivity,

health, and welfare. Journal of Dairy Science 92, 5769-5801.




Schukken, Y.H., Günther, J., Fitzpatrick, J., Fontaine, M.C., Goetze, L., Holst, O., Leigh,

J., Petzl, W., Schuberth, H.J., Sipka, A., Smith, D.G.E., Quesnell, R., Watts, J.,

Yancey, R., Zerbe, H., Gurjar, A., Zadoks, R.N., Seyfert, H.M., 2011. Host-response

patterns of intramammary infections in dairy cows. Veterinary Immunology and


Smith, T.R., Hippen, A.R., Beitz, D.C., Young, J.W., 1997. Metabolic Characteristics of

Induced Ketosis in Normal and Obese Dairy Cows. Journal of Dairy Science 80,

1569-1581.

Sohn, E.J., Paape, M.J., Connor, E.E., Bannerman, D.D., Fetterer, R.H., Peters, R.R.,

2007. Bacterial lipopolysaccharide stimulates bovine neutrophil production of TNF-

$\alpha $, IL-1$\beta $, IL-12 and IFN-$\gamma $. Vet. Res. 38, 809-818.

Sordillo, L.M., 2005a. Factors affecting mammary gland immunity and mastitis

susceptibility. Livestock Production Science 98, 89-99.

Sordillo, L.M., 2005b. Factors affecting mammary gland immunity and mastitis

susceptibility. Livestock Production Science 98, 89-99.

Sordillo, L.M., Shafer-Weaver, K., DeRosa, D., 1997. Immunobiology of the Mammary

Gland. Journal of Dairy Science 80, 1851-1865.

Sordillo, L.M., Streicher, K.L., 2002. Mammary Gland Immunity and Mastitis

Susceptibility. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia 7, 135-146.

Suárez, R., Marentes, Y., Torres, P., 2012. Balance de la leche en Colombia año 2011.

ANALAC.

Suriyasathaporn, W., Daemen, A.J.J.M., Noordhuizen-Stassen, E.N., Dieleman, S.J.,

Nielen, M., Schukken, Y.H., 1999. [beta]-hydroxybutyrate levels in peripheral blood

and ketone bodies supplemented in culture media affect the in vitro chemotaxis of

bovine leukocytes. Veterinary Immunology and Immunopathology 68, 177-186.

Suriyasathaporn, W., Heuer, C., Noordhuizen-Stassen, E.N., Schukken, Y.H., 2000.

Hyperketonemia and the impairment of udder defense: a review. Veterinary

Research 31, 397 - 412.

Weber, P.S.D., Toelboell, T., Chang, L.-C., Tirrell, J.D., Saama, P.M., Smith, G.W.,

Burton, J.L., 2004. Mechanisms of glucocorticoid-induced down-regulation of

neutrophil L-selectin in cattle: evidence for effects at the gene-expression level and

primarily on blood neutrophils. Journal of Leukocyte Biology 75, 815-827.

Wenz, J.R., Fox, L.K., Muller, F.J., Rinaldi, M., Zeng, R., Bannerman, D.D., 2010.

Factors associated with concentrations of select cytokine and acute phase proteins in

dairy cows with naturally occurring clinical mastitis. Journal of dairy science 93,

2458-2470.

Wilson, D.J., Gonzalez, R.N., Das, H.H., 1997. Bovine Mastitis Pathogens in New York

and Pennsylvania: Prevalence and Effects on Somatic Cell Count and Milk

Production. Journal of Dairy Science 80, 2592-2598.

Wittwer, F., Contreras, P., 1980. Consideraciones sobre el empleo de los perfiles

metabólicos en el ganado lechero. Archivos de Medicina Veterinaria 12, 180 - 188.

Zadoks, R.N., Middleton, J.R., McDougall, S., Katholm, J., Schukken, Y.H., 2011.

Molecular epidemiology of mastitis pathogens of dairy cattle and comparative

relevance to humans. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia 16, 357-372.

Zarrin, M., Wellnitz, O., van Dorland, H.A., Bruckmaier, R.M., 2014. Induced

hyperketonemia affects the mammary immune response during lipopolysaccharide

challenge in dairy cows. Journal of dairy science 97, 330-339.

Zecconi, A., Hamann, J., Bronzo, V., Moroni, P., Giovannini, G., Piccinini, R., 2000.

Relationship between teat tissue immune defences and intramammary infections.

Adv Exp Med Biol 480, 287-293.

streptococus agalactiae en bovinos€¦ · de fosfolípidos a nivel de membrana celular en el...

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