simposio concenso de hepatitis b 22-23 noviembre de 2002 el virus de la hepatitis b a.a.e.e.h

Simposio Concenso de Hepatitis B22-23 noviembre de 2002

El Virus de la Hepatitis B

A.A.E.E.H.

Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

• Virus de la Hepatitis B (HBV) - Clasificación

• El descubrimiento del HBsAg por Blumber y Col. (1965).

• Dane y Col (1970) detectaron el virus de la hepatitis B completo (HBV).

• El sistema antígeno-anticuerpo (HBe Ag-AcHBe) relacionado con la infectividad fue descripto por Maquius y Espnark, en 1972.

• Pertenece al género hepadnavirus, que se caracteriza por ser un virus DNA hepatotropo.

• EL HBV es un virus complejo, contiene uno de los genómas más pequeños de todos los virus animales conocidos.

• Posee un DNA pequeño parcialmente bicatenario con genes fuertemente solapados.

• Presenta mecanismos inusuales de replicación de DNA viral que incluyen TRANSCRIPCION INVERSA a partir de RNA de mayor longitud que el DNA viral (Summer 1982).

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• VIRUS DE LA HEPATITIS B


• El HBV está formado por partículas esféricas de 42-47 nm de diámetro, rodeado de una envoltura proteolipídica de 7 nm de espesor que contienen tres formas de AgS (Dane y Col, 1970, Mason y Col, 1980).

• En el interior se observa un núcleo esférico “Core” electrodenso de 22-25 nm. que contiene:

*DNA viral.*DNA polimerasa.*Ag viral C (HBcAg).*DNA primer: iniciador de

replicacíon

• El Ag “e” (HBeAg) no forma parte de su estructura sino que se sintetiza a partir del gen C que codifica las proteínas del core.

Raneyal, Mc Lachianp

Envoltura

Antígeno deSuperficiemediana

Nucleocápside

Antígeno deSuperficie pequeño

Antígeno deSuperficie grande

DNA Genómico

Primer

DNAPolimerasa

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• Partículas virales


VIRUS FILAMENTO ESFERA

Micrografía electrónica

• La concentración de partículas virales en el suero de pacientes infectados pueden exceder las 109 part/ml. Además de las partículas virales se encuentran en el suero otras formas particuladas (esferas y filamentos) llamadas partículas S, compuestas sólo por HBsAg en número superior a las de las partículas infecciosas. • Estas partículas contienen lípidos, carbohidratos y proteínas, pero no componentes del core del virión, y se las considera formas incompletas de la envoltura.

22 nm de espesor16-25 nm partículas

MHBs LHBs

SHBs

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• Estructura del genóma viral


• El genoma de los Hepadnavirus es extraordinariamnete compacto.• DNA circular parcialmente de doble cadena de 3200 nucleótidos.• Cadena larga o negativa de 3.2 Kb. No es un circulo cerrado• Cadena corta o positiva de longitud variable, 1700-2800 pb.• Los extremos 5´ de ambas cadenas de DNA no pueden ser fosforilados, hecho que condujo al descubrimiento de un polipéptido que actúa como Primer.

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• La longitud del genoma varía según el subtipo viral. • Las posiciones de las diferentes características del genoma se indican según numeración de Ono et. al. (1983). Se inicia en la posición correspondiente al corte con la enzima EcoRI.• En el núcleo del hepatocito se produce un intermediario cccDNA por acción de la polimerasa viral.

• Genóma del virus de la Hepatitis B

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• Posee 4 ORFs (C,S,P,X) fuertemente solapado, que se transcriben a 5 mRNA.• La síntesis de cada uno de los mRNA esta dirigido por su promotor correspondiente.• La actividad de los promotores esta regulada por los enhancers.

• Características de los genes (ORF) del HBV


RNA Precore

RNA Pre-S2/S

RNA Pre-S1

RNA Core (pregenómico)

RNA X

Señal de encapsulación


• Estructura del Genóma Viral - Gen C

• Situado en posición 1814-2458, presenta 2 codones de iniciación en fase

• La secuencia corta situada entre dos codones de iniciación se denomina pre C o precore.

• El gen precore/core se transcribe a 2 mRNA:-mRNA precore traduce la proteína HBeAg

de 17000 Da. -mRNA Core traduce:

- HBcAg de 22000 Da.

- DNA polimerasa (proteína P).y actúa como RNA pregenómico.

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• Proteínas codificadas por el Gen C (HBcAg y HBeAg)


GEN PRECORE-CORE HBVPOLIMERASA

HBcAg185

RNApregenómico

1821 RNAcore Traducción

Transcripción1792 RNAprecore

Proteína precore185291 Traducción

p22e18529119

HBeAg15129119 Secreción

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Transcripción

Precore Core 2307

Stop 2456

DNA

1814


• Características y función de las proteínas del gen precore/core

HBcAg

• La proteína core HBcAg es blanco para la inmunolisis celular mediada por células T (Moreno 2000).

HBeAg• No interviene en la replicación viral, sin embargo su región se conserva en todos los Hepadnavirus• Función inhibitoria – Mutación 1896: no produce HBeAg, incrementa replicación viral (Lambert 1993).Otra mutaciones en el PBC alteran su producción y estarían implicadas en la cronicidad y daño hepatocelular. (mutación 1764)

• Modulación inmunológica: al compartir epítopes con HBcAg es reconocido por células T citotóxicas.

• Función inductora de tolerancia inmunológica “in útero” (Millich 1990).º

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• Estructura del Genóma Viral – GEN S

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• Situado en posición 2854-835.

• Presencia de tres codones de iniciación en fase.

• Define tres regiones denominadas PreS1, PreS2 y S

• Codifica los péptidos de envoltura del virión y partículas no infectivas.

• La especificidad en las proteínas de superficie esta constituida en tres polipéptidos de la envoltura del HBV compuestos por formas glicosiladas y no glicosiladas.

• 24000 Daltons - Región S (p24/gp37) --> SHBs --> Reside la especifidad antigénica (Subtipos).

• 33000 Daltons - union pre S2-s (p33/gp36) --> MHBs --> Unión a receptor HSA.

• 39000 Daltons - 3 regiones pre S1 - pre S2 - S (o sea ORF completo) (p39/gp42) --> LHBs --> Unión a hepatocito.

• Características de las proteínas del Gen S


GP33-36281 a.a.

MHBs

Asn 4

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SN pre S1 pre S2

P39-GP42LHBs400 a.a.

Gm

Inhibiciónsecreción

Unión hepatocito

6-19 27-47 119

1

226

113

Sitioproteólisis

unión lectinahígado

unión HSA

4 19-29 55

47

proteólisis

translocaciónret. endoplas.

stopmembrana “loop”

antigénico

…-122…137…146…149…160

a

subtipos

Lysd y

Arg

rLys w

Arg

8-22 80-99 120-160

226 a.a.P24-G27SHBs

Gc

1

1


• Estructura del Genóma Viral – GEN P

* Situado en posición 2307-1623.* Codifica un polipeptido básico de 90.000, que posee 4 dominios con actividad:

- Proteína terminal o primer.- Región espaciadora.- Transcriptasa reversa / DNA polimerasa.- RNasa.

* Interviene en la encapsulación del RNA pregenómico para su posterior retrotranscripción.

Primer

1 178

Regiónespaciadora

304336

P

TranscriptasaReversa/Polimerasa

680 838

RNasa

DNA2302

Proteína

C

2455 28543210/1

PreS1

3211 155

PreS2

833

S

P Enhl1374

X

1623

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• Estructura del Genóma Viral – GEN X

• Situado en posición 1374-1838.• Codifica un polipéptido de 145-154 aa (HBx). Proteína reguladora que actúa como activador transcripcional• Capacidad de inducción a carcinoma hepatocelular (Morearty y Col. 1985).

1 154

ADN

Proteína

13 30 48

57 72

78 88 103 143

21 50 61 91101 154

5´ 3´

6076

110139Región conservada

Dominio transactivador1374 1621

18141836

P

XDR2 Enh2 DR1

Dominio regulador

Región rica en serina/prolina

21 50

126 141

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• Elementos reguladores del genoma viral


Genoma Viral

3221

DNA cebador

Gen PGen P

loop antigénico subtipos

Mutaciones

Atg Atg

precore Gen Cpre S1 pre S2

UniónHSA

Unión a hepatocito

Gen X

1

preS2 S

encapsulación

SEÑAL DE ENCAPSULACION: Importante estructura secundaria. Selección de mRNA pregenómico.

U5

REGION U5 ANALOGA A RETROVIRUS: Region altamente conservada.

poli A

POLI A: Terminación de transcriptos.

GC

RESPUESTA GLUCOCORTICOIDES(GC): Intencifica la expresión génica.

DR2 DR1

DR1 - DR2: Secuencias fuertemente conservadas. Intevienen en la replicación.

enh Ienh II

ENHANCERS(I y II): Activadores.

Prom pre S2Prom pre S1

Prom X

PROMOTORES: Iniciadores de la transcripción. Forman parte integral del gen.

Prom Precore-core

Resumen Transcripción/Traducción


X Gen X mRNA X HB X Activador transcripcional

PROMOTOR 4ORF 5mRNA 7 PROTEINAS

TRANS. TRAD.

PreS1

PreS2

Morfología de la partícula

Unión a hepatocito

Subtipos virales

Gen S

mRNA preS1

mRNA preS2/S

PreS1 LHB

PreS2

S

MHB

SHB

Precore-core

Antígeno soluble en suero

Nucleocápside

Polimerasa

RetrotranscriptosaRNasa

Gen C

Gen P

mRNA precore

mRNA core

HB e

HBc

Proteina P Primer

REPLICACION VIRALRNA pregenómico

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