seroprevalencia y factores de riesgo asociados a riquetsiosis (rickettsia rickettsii) en humanos en...
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Seroprevalencia y Factores de Riesgo Asociados a Riquetsiosis (Rickettsia
rickettsii) en Humanos en Ensenada, Baja California,
México.DR. JORGE FIELD
INTRODUCCIÓN
La riquetsiosis causada por Rickettsia rickettsii (bacteria intracelular obligada) es transmitida por la
garrapata Rhipicepalus sanguineus en México y es capaz de infectar a
vertebrados incluyendo a humanos.
INTRODUCCIÓN
Los síntomas son:
• Fiebre, artralgias, mialgias, náuseas, vómitos, dolor abdominal, exantemas, signos neurológicos, manifestaciones hemorrágicas, epistaxis, trombocitopenia, elevación de transaminasas, leucocitosis, neutrofilia.
La mortalidad puede ser del 30% en pacientes no tratados
En México los principales vectores son:
Rhipicephalus sanguineusAmblyoma americanus
OBJETIVO
Sospechosos – 1453Probables – 734Confirmados – 278Mexicali – 96%Tijuana – 4%Ensenada - 0%Defunciones – sospechosos
(13)Defunciones confirmadas por
el CDC (8)
Demostrar que existe riquetsiosis en Ensenada, Baja California ya que en un brote de riquetsiosis en Baja California en el 2008 y
2009 no se reportaron casos.
Tijuana 4%
Ensenada 0%
Mexicali 96%
• En Ensenada contamos con las condiciones geográficas,
demográficas, epidemiológicas, socioeconómicas,
marginación y pobreza, todo propicio para el desarrollo de
riquetsiosis.
• En base a lo anterior se planteó el siguiente
objetivo:
• Estimar la seroprevalencia para riquetsiosis (Rickettsia
ricketsii) en humanos y medir su asociación a factores de riesgo en Ensenada, Baja
California.
Material y Método
Diseño: Es un estudio prospectivo, descriptivo, seccional, cruzado, efectuado de Octubre 2009-Agosto 2011.Se incluyeron pacientes mayores de un año de edad, que acudieron a uno de los 3 laboratorios en la zona urbana de Ensenada, Baja California.
Análisis de muestras:Se realizaron en el laboratorio de Ciencias Veterinarias de la UABC
Consideraciones éticas y criterios de inclusión
Este estudio cumplió con los lineamientos de investigación y ética que establece la
declaración de Helsinki.Se incluyeron pacientes mayores de un año de
edad, de ambos sexos que acudieron por cualquier motivo y fue requisito que contaran
con carta de consentimiento informado y autorizado por el padre.
Tamaño de la muestra
384 pacientes
Toma de muestra
Se recolectó 2 ml de sangre en tubos de 3ml sin Etilen Diamino Tetra
Acético (EDTA) por punción venosa radial cubital, previa asepsia.
Las muestras fueron identificadas con números correspondientes al
cuestionario aplicado a cada paciente.
Fueron centrifugadas a 3500 RPM por 10 minutos para obtener el suero para efectuar las pruebas de ELISA e IFA.El suero fue
almacenado a -20 ºC hasta el momento de realizar las pruebas serológicas.
Análisis Serológico
Los anticuerpos contra Rickettsia rickettsii fueron
medidos por el Kit Rickettsia Rickettsi Elisa Helica
Biosystem,Inc.
Análisis Serológico
Este detecta y semicuantifica IgG con una sensibilidad de
99.5% y especificidad de 96% en perros
El Kit se adaptó para uso en humanos
usando un conjugado anti-IgG humana a una dilución de 1: 40,000.
Las muestras fueron analizadas en un lector de ELISA, usando un
lector de 450nm y de los resultados se estimó la
seroprevalencia.
Para determinar la sensibilidad y la especificidad en humanos, se sometieron 32 muestras (12 seropositivas y 20 negativas tomadas al azar) a IFA por ser la prueba de ORO en pruebas serológicas.
Se uso el estadístico Kappa para medir la concordancia entre IFA y ELISA.
VALOR DE CORTESe obtuvo con el promedio de 20 sueros
de personas clínicamente sanas sin datos de riquetsiosis ni mordeduras de garrapata más 2 desviaciones estándar,
resultando 0.569 Densidad Óptica
Controles Positivos
Se usaron 2 sueros: Uno del laboratorio de Parasitología
del Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva y Salud
Animal de la Universidad de Sao Paulo, Brazil.
Otro donado por ISESALUD declarado positivo por el INDRELos sueros que resultaron positivos a ELISA fueron probados con IFA.
Para evaluar los factores de riesgo se
aplicó un cuestionario al momento de tomar las
muestras
Factores de Riesgo y Signos Clínicos
Factores de Riesgo Colonia de residenciaEdadSexoOcupación Perros en el hogarAntecedente de mordedura de garrapataTipo de patio (tierra)Desparasitación de mascota contra
garrapataEstancia del perro calle/hogar
Análisis EstadísticoSe diseñó una base de datos usando el
programa EXCEL (Microsoft) para la captura y manejo de información con los siguientes datos:
1. Resultado de los análisis serológicos en humanos
2. Resultados de los cuestionarios
Análisis Estadístico
El valor de seroprevalencia se generó de la siguiente ecuación:
Número de reactivos positivosPrevalencia: ----------------------------------------- x 100 Número total en el grupo
RESULTADOSEl valor generado de seroprevalencia fue
mayor que cero (p<0.05)
La seroprevalencia ajustada de riquetsiosis fue de 3.9 (95% IC 0.8 – 5.3)
De 384 pacientes, 49 fueron sospechosos o sea el 12.7% porque presentaron 4 o más de
las siguientes manifestaciones clínicas:• Fiebre, eritema, epistaxis, cefalea, vómito,
edema o haber sido mordido por alguna garrapata
• Ni en grupos de edad ni ocupación
El valor de seroprevalencia entre hombres y mujeres no fue diferente (p>0.5)
No se observó asociación entre factores de riesgo con los seropositivos
• Epistaxis, vómitos, artralgias y mialgias
Si hubo asociación de la seropositividad con:
Prueba de Concordancia entre los Resultados de ELISA e IFA
Los valores de sensibilidad
generados por el Kit comercial Rickettsia
Rickettsii Elisa Helica Biosystem Inc. fue de 84%
Y la especificidad de 94%
La alta especificidad (94%) puede deberse a la calidad del
antígeno fijado en las placas del kit, ya que la especificidad de
ELISA dependerá de la calidad del antígeno que se fije en la placa.Existen unos lipopolisacaridos
específicos de la capa externa de Rickettsia rickettsii que se han utilizado como antígeno en las
placas de ELISA.
La sensibilidad del 84% puede deberse al alto valor
del punto de corte.
Al confrontar los resultados de Elisa ( 12 seropositivos ) con los resultados de IFA ( 11 seropositivos ) a través del estadístico, Kappa fue de 0.80 diferente a cero (p<0.05) que es alto.
La concordancia entre ambas pruebas es que las dos detectan IgG
De 384 pacientes: 12 fueron seropositivos (8 hombres y 4 mujeres) presentando:
Cefalea 66%Artralgias y mialgias 50%Dolor abdominal 41%Fiebre 25%
CONCLUSIONESLos resultados demostraron que existe
evidencia SEROLÓGICA de Riquetsiosis en humanos en Ensenada, Baja California.
Por lo tanto se debe incluir en los diagnósticos diferenciales en el sector salud
por tener el 30% de mortalidad en pacientes no tratados.
Conclusiones
Con el resultado de 0.80 para el estadístico Kappa entre ELISA y la prueba confirmatoria IFA se traduce una alta confiabilidad en el uso del kit comercial ELISA modificado en humanos para el diagnóstico, ya que es
rápido y confiable. Las manifestaciones clínicas son inespecíficas y difíciles de evaluar en
estudios serológicos ya que se presentan en las primeras 2 semanas de post infección y los anticuerpos se detectan en sangre hasta
por 66 semanas.
