respiración de microorganismos
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Respiración
INTEGRANTES
● Arellanes Avila Mariela
● Cevada Santiago Karen J.
● Luna Zagal Francisco Miguel
● Rodríguez Sánchez Irving
Equipo 8 Laboratorio 3 y 4Grupo 3QM1
Instituto Politécnico NacionalEscuela Nacional de Ciencias Biológicas
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL
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Objetivo
Realizar algunas pruebas bioquímicas para poner de manifiesto las actividades
respiratorias que llevan a cabo los microorganismos.
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TIPOS DE RESPIRACIÓN
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Cadena Transportadora de Electrones en Bacterias
Las bacterias pueden usar múltiples cadenas de transporte de electrones, e incluso simultáneamente.
Las bacterias también generan un gradiente de protones, para ello utilizan al menos tres bombas de protones.
En la respiración aerobia el aceptor final de los electrones es el oxígeno que se reduce a agua.
Hay organismos capaces de respirar:
Nitrato, generando nitrógeno (bacterias denitrificantes)
Sulfato, generando sulfuro (bacterias sulforeductoras)
CO2, generando metano (bacterias metanogénicas)
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Procedimiento
I. Reducción de azul de metileno
Incubar a 37°C
Anotar el tiempo que tardan en decolorarse los tubos.
Leche Descremada
0.5 ml de Azul de metileno
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II.Reducción de nitratos a nitritos
B. subtilis E. coli
Incubar a 37°C / 24Hrs
B. subtilis E. coli
3 gotas
Գ-naftilaminaácido sulfanílico
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III. Pruebas de citocromo oxidasa y catalasa
B. subtilis E. coli
Incubar a 37°C por 24 Hrs
H2O2
Reactivo de oxidasa
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PRUEBA DEL AZUL DE METILENO El citocromo-oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular, que a su vez actúa como un aceptor de
electrones en el periodo terminal del sistema de transferencia de electrones.
Los sustratos artificiales, como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptores de electrones naturales en cualquier lugar de la
cadena de transporte de electrones, donde actúan como reductores del sistema citocromo-c-citocromo-oxidasa.
Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínicaBy Jean F. MacFaddin
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La reacción es catalizada por la enzima reductasa, que es una enzima respiratoria vinculada con la oxidación celular.
En el sistema de transporte de electrones, la transferencia de e- se produce a nivel de la flavoproteina (FAD).
Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínicaBy Jean F. MacFaddin
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RESULTADOS DE LA PRUEBA DE REDUCCIÓN DELAZUL DE METILENO
Tabla de resultados experimentales de la prueba de azul de metileno del laboratorio 4.[ ] Cantidad de inóculo del microorganismo en ml.
fig. 1 resultados del equipo 4 lab.4. prueba de reducción de azul de metileno
fig. 2 resultados del equipo 7 lab.4. prueba de reducción de azul de metileno
fig. 3 resultados del equipo 5 lab.4. prueba de reducción de azul de metileno
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Fig.1 laboratorio 3 equipo 4 reducción del azul de metileno
Fig. 2 laboratorio 3 equipo 7 reducción del azul de metileno
Fig.3 laboratorio 3 equipo 8 reducción del azul de metileno
Tabla de resultados experimentales de la prueba de reducción de azul de metileno del laboratorio 3 [ ] Cantidad de inóculo del microorganismo en ml.
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*microorganismos positivo: enterococos (Streptococcus del grupo D)
*microorganismos negativos: especies de Streptococcus que por lo general no son enterococos
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REDUCCIÓN DE NITRITOS A NITRATOS
La reducción del nitrato en nitrito tiene lugar generalmente en condiciones anaerobicas, el microorganismo obtiene su oxígeno del
nitrato.
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REVELACIÓN DE LA PRUEBA
Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínicaBy Jean F. MacFaddin
Reacción positiva
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Resultados de reducción de nitratos a nitritos
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Staphylococcus aureus (-)Proteus vulgaris (-)
Equipo 4 Laboratorio 4
Klebsiella pneumoniae (+)
Equipo 4Laboratorio 3
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Escherichia coli (+)Equipo 8Laboratorio 3
Bacillus subtilis (+)Equipo 8 Laboratorio 3
Pseudomonas aeruginosa(-) Shigella flexneri(-)Equipo 2Laboratorio 3
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PRUEBA DE LA OXIDASA La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo que es reducido por el
oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana
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PRUEBA DE OXIDASA
N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina
Oxígeno
Oxidasa
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Resultados de Citocromo Oxidasa
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Prueba de OxidasaKlebsiella pneumoniae (izquierda) y Salmonella typhi (derecha)
E5 L3
Staphylococcus aureus (arriba) y Proteus vulgaris (abajo)
E7 L3
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Bacillus subtilis (arriba) (+) yEscherichia coli (abajo) (-)E8 L3
Salmonella typhi (izquierda) (-) Klebsiella pneumoniae (derecha) (+)
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CATALASA
La catalasa es una hemoproteína es una hemoproteína; el grupo prostético está formado por cuatro átomos de hierro trivalente,
que retiene su estado oxidado durante la actividad enzimática.
El peróxido de hidrógeno se forma:
● como un producto terminal oxidativo de la descomposición aeróbica de los azúcares.
● proveniente de la dismutación del radical superóxido
La catalasa descompone el H2O2 u oxidar los sustratos secundarios.
Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínicaBy Jean F. MacFaddin
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Resultado teórico:Positivo para las 8 cepas
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Equipo 7Lab 4
K pneumoniae y S typhi, ambos positivosEq 4 L3
Equipo 3 lab 4 S. flexnery (+) P.aeruginosa (+) K.neumoniae (+) S. typhi (+)
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Conclusiones● Comprendimos la importancia del proceso de respiración para la obtención de
energía en la célula.
● Analizamos las diferentes enzimas que utilizan los microorganismos como apoyo
en el proceso respiratorio y mediante pruebas bioquímicas determinamos qué
organismos son productores de estas.
● Notamos la importancia que tienen los diversos factores externos sobre los
resultados de estas pruebas al comparar nuestros resultados experimentales con
los esperados según la literatura.
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BIBLIOGRAFÍAFaddin M. Pruebas Bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia
clínica. Editorial médica Panamericana. Páginas 198. Páginas consultadas : 142-148,
39-44, 130-133, 154-159.
http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investi
gacion/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAPITULO%20N%BA
%2004.pdf