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ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL

GRUPO

QU-304

MATERIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

ASESORA

Dra. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTAS

Fecha de inicio del análisis: 30 de junio del 2015.

Fecha de término: 09 de julio del 2015.

Nombre Cargo

Ilse Verónica Ávila Araujo Responsable

María Guadalupe Gómez Navarro Administrador

Janet Valeria Guerra Navarro Laboratorista 1

Reyna María Guadalupe Rendón Delgado Laboratorista 2

GENERACIÓN: 2014-2016

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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripción del estatus ambiental del sitio de estudio: Rodeado de árboles, había mucha humedad, basura, muy poca composta, pero se percibía el olor a materia orgánica en descomposición.

SITIO DE MUESTREO

Nombre Ubicación /coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

CUPA - Universidad Tecnológica de León

21° 3'52.25"N

101°34'56.71"O

2. Evidencia fotográfica del sitio Fecha: 30 de junio del 2015. Hora: 10:44h

Fecha: 30 de junio del 2015. Hora: 10:44h

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificación

Matriz ambiental: Suelo Hora de toma de muestra: 10:48h Hora de siembra: 13:36h

Punto de Muestreo (ubicación /coordenadas GPS): 21° 3'52.25"N 101°34'56.71"O

Tiempo de exposición (aplica solo para muestra de aire)

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra: María Guadalupe Gómez Navarro

Nombre del/ los analistas que sembró la muestra: Reyna María Guadalupe Rendón Delgado

2.Parámetros Fisicoquímicos

Color: Café tabaco Temperatura (oC) ambiental: 20°C pH: 6.8

Olor: Humedad y materia en descomposición Describir condiciones climatológicas: Nublado

3. Evidencia fotográfica del sitio de toma de muestra

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Justificación del proceso para la identificación bacteriana

Es necesario identificar la morfología de la bacteria para conocer sus características físicas, lo cual, permite la descripción presuntiva de su taxonomía. Por otro lado el metabolismo de las bacterias es importante porque a través de ella se especifican las condiciones óptimas en las que se desarrolla, permitiéndonos conocer bacterias benéficas para el ambiente que ayudan a remover los contaminantes existentes en las matrices de agua, suelo y aire. Todo esto se logra siguiendo una serie de pruebas bioquímicas en las que se detectan características del metabolismo como la presencia de enzimas específicas para sustratos específicos, generación de compuestos finales a través de reacciones químicas que se llevan a cabo en las reacciones catabólicas, también se observa la producción de diferentes tipos de gases como el ácido sulfhídrico (H2S), dióxido de carbono (CO2) y oxígeno , así como la generación de cambios de color en los medios de cultivo los cuales indican acidez o alcalinidad debidas a los compuestos que se generan de la degradación de sustratos orgánicos por las bacteria. Es así como se logra identificar el tipo de familia a la que pertenece.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Composición)

1. Medio 1: Agar Mac Conkey Fórmula (en gramos por litro)

Peptona 17.0

Pluripeptona 3.0

Lactosa 10.0

Mezcla de sales biliares 1.5

Cloruro de sodio 5.0

Agar 13.5

Rojo neutro 0.03

Cristal violeta 0.001

pH final: 7.1 ± 0.2

2. Medio 2: Agar EMB (Eosina y Azul de Metileno)

Fórmula (en gramos por litro)

Peptona 10.0

Lactosa 5.0

Sacarosa 5.0

Fosfato dipotásico 2.0

Agar 13.5

Eosina 0.4

Azul de metileno 0.065

pH final: 7.2 ± 0.2

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción

Puntiformes, convexas, acuminadas

Incoloras, rosas con punto oscuro.

Se presentan solas o en cadena.

Descripción

Puntiformes, convexas

Incoloras, verdes, negras.

Se pueden presentar solas o en cadenas.

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3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y Composición)

1. Medio 1: Agar XLD

2. Medio 2: Salmonella Shigella Agar Fórmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 5.0

Extracto de carne 5.0

Lactosa 10.0

Mezcla de sales biliares 8.5

Citrato de sodio 8.5

Tiosulfato de sodio 8.5

Citrato férrico 1.0

Agar 13.5

Verde brillante 0.00033

Rojo neutro 0.025

pH final: 7.4 ± 0.2

Fórmula (en gramos por litro)

Lactosa Monohidrato 7.5

Sacarosa 7.5

Tiosulfato sódico 6.8

Cloruro Sódico 5

L-Lisina 5

Xilosa 3.5

Extracto de Levadura 3

Desoxicolato sódico 2.5

Citrato Férrico de Amonio 0.8

Rojo Fenol 0.08

Agar Bacteriológico 13.5

pH final: 7.0 ± 0.2

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción

Puntiformes, convexas.

Incoloras, negras.

Se presentan aisladas o en cadena de forma circular.

Descripción

Puntiformes, convexas, circulares.

Incoloras

Con el centro negro

Se presentan solas o en cadena

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4. Procedimiento de Aislamiento (describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar

Lista de materiales, reactivos y equipo

Materiales Reactivos Equipo

1 Chalora de aluminio Agar Mac Conkey Balanza analítica

1 Espátula pequeña Agua destilada Autoclave

1 Matraz Erlenmeyer de 250 mL Incubadora

1 Probeta de 100 mL Refrigerador

1 Gradilla Campana de flujo laminar

2 Cajas Petri

1 Mechero Fisher

1 Aza de nicromo

2 Hisopos

Preparación del medio de cultivo:

1. Pesar en la charola de aluminio 3 g de Agar Mac Conkey.

2. Al matraz Erlenmeyer, adicionar 60 mL de agua destilada y el agar pesado anteriormente

3. Agitar constantemente hasta disolver

4. Esterilizar a 120° C por 15 minutos.

5. Distribuir en la campana de flujo laminar 30 mL de medio a cada caja Petri.

6. Dejar solidificar el agar.

7. Reservar en el refrigerador.

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Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, selección de la colonia y resiembra):

Siembra

1. Tomar en una charola de aluminio con ayuda de una espátula, una muestra aproximada de 5 g de suelo de CUPA para el análisis.

2. En el laboratorio, sacar una caja Petri del refrigerador y colocarla en la campana de esterilización. 3. Encender la campana. 4. Dentro de la campana, embarrar un hisopo con la muestra. 5. Abrir la caja Petri para hacer el estriado. 6. Cerrar la caja Petri y meterla a la incubadora. 7. Incubar por 24h a 35-37°C

Selección de la Colonia

1. Según la morfología de la colonia que se espera encontrar, seleccionar de la placa sembrada una

colonia aislada que cumpla con las características de dicha morfología. 2. Posteriormente encerrar las colonias deseadas por la parte de debajo de la caja Petri con un marcador

indeleble para una mayor identificación a la hora de tomarla.

Resiembra

1. Tomar del refrigerador una placa con medio de cultivo (Agar Mac Conkey) solidificado para hacer la resiembra.

2. Acercar también la caja Petri con la siembra. 3. Encender el mechero Fisher. 4. Flamear el aza de nicromo hasta que esté de color naranja. 5. Abrir la caja Petri con la siembra por atrás del mechero Fisher. 6. Tomar con el aza de nicromo la colonia deseada. 7. Abrir la caja Petri con el cultivo nuevo por atrás del mechero Fisher. 8. Hacer el estriado correspondiente de forma horizontal y posteriormente vertical. 9. Flamear el aza de nicromo. 10. Cerrar la caja Petri con la resiembra. 11. Incubar 24h a 35-37°C. 12. Apagar el mechero Fisher.

La resiembra se hará como se muestra en la imagen 1.

Nota: Es importante el uso de cubre-bocas y guantes durante todo el proceso.

Imagen 1 Modo de resiembra

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5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico ) para la identificación del microorganismo seleccionado

Bacteria

desconocida

Cápsula

Positiva Negativa

Gram

Positiva Negativa

Motilidad

Positiva Negativa

F. de Lactosa

Positiva Negativa

Sacarosa

Positiva Negativa

CO2

Positiva Negativa

Degradación de Citrato

Positiva Negativa

H2S

Positiva Negativa

Indol

Positiva Negativa

Morfología

Bacilos Cocos

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5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico ) para la identificación del microorganismo seleccionado

Continuación

Ácido mixto

Positiva Negativa

Glucosa

Positiva Negativa

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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

Medio de cultivo: Agar Mac Conkey

Medio de cultivo: Agar Mac Conkey

2. MORFOLOGÍA COLONIAL OBSERVADA Tipo de colonia 1: Descripción

Presenta una forma irregular con bordes ondulados, su elevación es tipo convexa, tiene la superficie lisa y cremosa con color rosado. Se presenta en forma de cadena.

Tipo de colonia 2: Descripción

Presenta una forma circular con borde entero, tiene una elevación convexa, su superficie es lisa y cremosa con un color rosado. Se encuentra aislada.

Tipo de colonia 3: Descripción

Presenta una forma irregular con bordes lobulados, su elevación es convexa y la superficie es áspera, cremosa con color rosado.

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3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)

Medio de cultivo: Agar Mac Conkey

Medio de cultivo: Agar Mac Conkey

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

Descripción

Hay muchas colonias agrupadas, y pocas aisladas, se puede observar que todas tienen un color rosado púrpura, presentan textura mucoide, con borde irregular y convexa

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5. EVIDENCIA FOTOGRÁFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUÍMICO

Nombre de la prueba

Medio de cultivo utilizado

Resultado obtenido (positivo/negativo) Evidencia fotográfica

1. Tinción de Gram detección de pared celular

N/A Negativa

Fundamento de la prueba

El fundamento de la técnica se basa en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas (color morado) y Gram negativas (color rosado). La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática se encuentra el ácido lipoteicoico, y en la superficie, el ácido teicoico está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína). Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (descomposición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen de distintos colores debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.

2.-Tinción de cápsula

N/A Positiva

Fundamento de la prueba

También conocida como: tinciones negativas/tinta china No es una tinción como tal. Se llama así porque lo que realmente se tiñe es el fondo del portaobjetos en el que están los microorganismos apareciendo estos después sin teñir. Para ver la cápsula a través del microscopio, se emplea tinta china (suspensión coloidal de carbono o nigrosina) ya que las partículas de carbono no penetran la célula bacteriana sino que tiñen su entorno y la bacteria puede ser observada como un cuerpo refráctil sin teñir.

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3.-Prueba de

Motilidad Agar SIM Negativo

Fundamento de la prueba

Lo que se detecta son la presencia de cilios y flagelos y por eso se mueve el medio SIM sólido lo permite. El que el medio se enturbie es solo porque se difunde la bacteria

4.- Desarrollo de lactosa

Agar inclinado Triple Azúcar y

Hierro T.S.I Positivo

Fundamento de la prueba

La fermentación de la lactosa requiere dos enzimas, permeasa y β-galactosidasa, mientras la permeasa facilita la

penetración de la molécula de lactosa dentro de la célula bacteriana, la β-galactosidasa hidroliza la lactosa para

formar galactosa y glucosa. Las bacterias no fermentadoras de lactosa carecen de ambas enzimas, sin embargo hay

bacterias que tienen β-galactosidasa pero no permeasa.

Si el organismo fermenta lactosa, la estría permanecerá ácida (amarilla). Si no fermenta lactosa, la estría se vuelve alcalina (roja).

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5.- Fermentación

de Sacarosa

Agar inclinado Triple Azúcar y

Hierro T.S.I Positivo

Fundamento de la prueba

La sacarosa añadida permite la exclusión de determinados organismos coliformes y algunas especies como Proteus, que pueden atacar la sacarosa , pero no la lactosa, en un periodo de incubación de 24 – 48 h. También, esta puede suprimir los mecanismos enzimáticos responsables de la producción del sulfuro de hidrógeno. Si la bacteria problema fermenta sacarosa, acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuará de color rojo

6. Fermentación de Glucosa

Agar inclinado Triple Azúcar y

Hierro T.S.I Positivo

Fundamento de la prueba

Primero los microorganismos empiezan a fermentar la glucosa, produciendo ácidos y virando totalmente el medio a color amarillo. Como solamente utilizan la glucosa, no pueden usar la sacarosa ni la lactosa, cuando la glucosa que se halla en baja concentración se consume (antes de las 24hs) los microorganismos comienzan a utilizar la peptonas con producción de amoníaco que alcaliniza el medio dando un color rojo, pero solamente en el pico, quedando el fondo ácido

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7.-Producción de CO2

Agar inclinado Triple Azúcar y

Hierro T.S.I Positiva

Fundamento de la prueba

Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte de la bacteria sumándole también que puede producir gas (CO2).

La presencia de burbujas que rompen el medio al fermentar los hidratos de carbono presentes tienden a expulsarlo lo cual indica presencia de gas como producto final de la fermentación.

8. Degradación

de Citrato por la enzima citrato

permeasa

Agar inclinado Citrato de Simmons

Positiva

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el fosfato mono-amónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante.

El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa. Citrato Piruvato CO2 + Na + H2O Na2CO3 Azul de Bromotinol

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9. Producción de H2S

Agar SIM Negativa

Fundamento de la prueba . La actividad de las bacterias sobre aminoácidos que contienen azufre, frecuentemente producen la liberación de sulfhídrico, lo cual se demuestra empleando sales de metales pesados como el hierro. El sulfhídrico reacciona con tales metales dando una coloración oscura al medio de cultivo. Para detectar la capacidad de producir el H2S, el tiosulfato de sodio que contiene el medio, es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro El tiosulfato de sodio que se reduce a sulfuro de hidrógeno reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. Dicha reacción es llevada a cabo por enzimas, como: cisteína, desulfhidrasa y latiosulfato reductasa que son las encargadas de liberar al azufre.

10. Producción

de Indol Agar SIM Negativo

Fundamento de la prueba

El Indol, es uno de los productos de la degradación metabólica del aminoácido triptófano. Las bacterias que producen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de Indol, ácido pirúvico y amoniaco. La prueba del indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el Indol reacciona con el grupo aldehído p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo del reactivo de Kovac’s. En la prueba, segundos después de añadir el reactivo de Kovac’s, el desarrollo de un color rojo-fucsia en la interface del reactivo y de los medios, indican la presencia de indol y por lo tanto se considera una prueba positiva.

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11. Fermentación

de ácido mixto (Rojo de Metilo)

Caldo MR-VP Negativo

Fundamento de la prueba En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa, lo que es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil-metil-carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y la producción de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros.

Glucosa Fermentación Acida Mixta Ácidos láctico, Acético y Succinico + CO2, H2 y etanol

12. Fermentación

de Glucosa Caldo MR-VP Positivo

Fundamento de la prueba Voges y Proskauer describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar hidróxido de

potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación del acetil-metil-carbinol a diacetilo, el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.

Para determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un producto final neutro (acetoina y 2,3 Butanodiol) a partir de la fermentación de la glucosa, los productos neutros formados en la presencia de oxigeno atmosférico, alcalisis (Hidróxido de Potasio al 40%) y peptonas, se oxidan en diacetilo, reactante para el color producido en la reacción. El Alfa naftol actúa como catalizador para revelar un complejo color rojo.

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IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: Suelo

1.- Nombre científico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados del perfil bioquímico planteado ( género y especie)

Género : Klebsiella

Especie: K. pneumoniae

2. Taxonomía del o los microorganismo identificados

Dominio : Bacteria Filo : Proteo bacteria

Clase : Gammaproteobacteria Orden: Enterobacteriales

Familia : Enterobacteriaceae Género : Klebsiella

Especie: K. pneumoniae

3. Características generales

Son bacterias Gram negativas, la asimilación y la fermentación de la lactosa se pueden observar en el agar Mac Conkey donde las colonias son de color rosado y en el medio Kliger o TSI donde son Ácido/Ácido, es decir fermentador de la lactosa más la producción de gas; y en la fermentación acetónica o prueba de Voges Proskauer son positivos. Por último, sus condiciones óptimas de cultivo son en agar nutritivo a 37 °C, pH de 7.0, presión osmótica de 1 atm

4. Ciclo(s) biogeoquímicos en el (los) que intervienen

Nitrógeno

5. La función que juegan en la transformación de la materia orgánica a través de los ciclos biogeoquímicos

La bacteria K. pneumoniae a pesar de no contar con un metabolismo, se encuentra de forma natural en el suelo, participa en el ciclo del nitrógeno en la parte de la fijación del N2 que hay en la capa de materia orgánica hacia las raíces de las plantas, por lo tanto, se considera como una bacteria diazotrófica de vida libre, pues al menos 30% de las cepas pueden fijar el N2 en condiciones anaeróbicas.

El género al que pertenece esta bacteria (K. pneumoniae), es considerado importante por tener una amplia capacidad de degradación de compuestos recalcitrantes que se encuentren en el suelo, tales como: bromoxinil, benzonitrilo, butironitrilo y dibenzofurano, cabe mencionar, que dichos compuestos son aquellos que presentan estructuras químicas muy estables y son resistentes a los ataques biológicos o poseen elementos estructurales que raramente se encuentran en la naturaleza

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6. Conclusión parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la microbiología en el área ambiental

El estudio de la microbiología aparte de ser una amplia gama de estudio es de suma importancia por estar presente en las matrices del área ambiental (agua, suelo y aire), y de las cuales podemos obtener y comprender el comportamiento e interacción de los microorganismos existentes, así como los daños y beneficios que pueden causar al ambiente, y a partir de ello se pueden elegir diferentes tipos de bacterias de acuerdo a su metabolismo para realizar remediaciones, degradaciones, fermentaciones entre otras con el fin de mejorar la calidad ambiental. Durante esta práctica se adquirieron conocimientos como: toma de la muestra, métodos de siembra, resiembra y técnicas de estriado, preparación de agares y montaje de las pruebas bioquímicas las cuales sirvieron para observar su comportamiento y parte de su metabolismo a partir de una serie de reacciones químicas como lo son: producción de gas, fermentación de lactosa, degradación de citrato, producción de ácido sulfhídrico (H2S) entre otras, tomando en cuenta los resultados obtenidos en las pruebas y con ayuda de un esquema bioquímico previamente hecho, se logra obtener su identificación. En el presente trabajo, se plantearon una serie de pruebas bioquímicas teniendo como objetivo encontrar a través de ellas la bacteria Proteus vulgaris partiendo de una muestra de suelo tomada del área de compostaje de CUPA ubicado dentro de las instalaciones de la UTL. Dicha muestra, el mismo día que se tomó a 3cm de profundidad partiendo de la superficie del suelo de CUPA, fue sembrada en el laboratorio con un hisopo en la campana de flujo laminar, pero lamentablemente a la hora de hacer el aislamiento de la colonia que contaba con las características físicas aparentes de la bacteria deseada, se tomó otra por error. Los resultados que se observaron en los tubos que contenían los agares y el caldo para realizar las dichas pruebas, fueron distintos a los que se esperaban, ya que en algunas pruebas nos dio el resultado contrario, estas fueron: la degradación de citrato que salió positiva al mostrar una coloración azul en el pico cuando se esperaba diera negativa, la producción de H2S en la que se esperaba un cabio de coloración a negro y quedó en el mismo color (amarillo), la producción de Indol la cual se debía generar un aro color rosado en la parte superficial del tubo al agregarle unas gotas de reactivo Kovac’s y sin embargo no lo obtuvo, la fermentación de ácido mixto en el caldo MR-VP, que al agregarle el indicador rojo de metilo debía cambiarse a color rojo y no cambió y por último la prueba de Voges Proskauer (glucosa) la cual no debía tener un cambio de coloración en la parte media superior del caldo y cuando se le agregaron los reactivos correspondientes si la hubo ya que viró a rosa. Por consiguiente, se buscó una bacteria la cual coincidiera con cada uno de los resultados que se obtuvieron en las pruebas del perfil bioquímico que se había planteado, los cuales nos llevaron a determinar que la bacteria que se había sembrado en la caja de Petri era Klebsiella pneumoniae ya que es la que coincide con todos los resultados del perfil elaborado. Partiendo de este trabajo, se puede decir que el proceso de la identificación de una bacteria en una muestra, puede ser largo y un tanto complicado porque intervienen distintos factores, como: una buena siembra y una correcta aislación de la colonia en condiciones estériles es decir, aislar la colonia cerca de un mechero encendido o bien dentro de la campana de flujo laminar, sin embargo este tipo de pruebas están basadas en el metabolismo y el comportamiento de la bacteria en diversos agares lo cual nos permite poder identificarlas correctamente.