INVENTARIO DE INSTRUMENTOS EN EL LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

En nuestra visita a laboratorio de biología molecular y celular encontramos que estaba dividido en dos areas generales según el tipo de exámenes que necesitamos realizar.

AREA DE GENETICA

1º AREA DE ESTERILIZACION:

AUTOCLAVES: Un autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura para ello, evitando con las altas presiones que el agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura. El fundamento del autoclave es que coagula las proteínas de los microorganismos debido a la presión y temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunos microorganismos, que tal como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave. Funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados. Un tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15-20 minutos. Las autoclaves más modernas permiten realizar procesos a mayores temperaturas y presiones, con ciclos estándares a 134 ºC a 200 kPa durante 5 min para esterilizar material metálico; llegando incluso a realizar ciclos de vacío para acelerar el secado del material esterilizado.

ESTUFA: Artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición que el autoclave. La temperatura varía entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos tiempos de exposición. A 140°C se necesitan por lo menos 5 horas de exposición, mientras que a 160°C se requieren al menos 2 horas de exposición. Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodón no pueden ser esterilizados a más de 160°C.

ENCUVADORES: dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido de dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior. Las incubadoras son esenciales para una gran cantidad de trabajos experimentales en biología celular, la microbiología y en biología

molecular y se utilizan para cultivos celulares, tanto bacterianos como de células eucariotas.

HORNO PARA INCINERAR: Un tipo de horno comúnmente usado para deshidratar reactivos de laboratorio o secar instrumentos. El horno aumenta su temperatura gradualmente conforme pase el tiempo así como también sea su programación, cuando la temperatura sea la óptima y se estabilice, el térmico mantendrá la temperatura; si esta desciende volverá a activar las resistencias para obtener la temperatura programada; posee un tablero de control que muestra el punto de regulación y la temperatura real dentro del horno, está montada al frente para su fácil lectura, aunque algunos modelos anteriores no lo tienen, estos cuentan con una perilla graduada la cual regula temperatura del horno.

MUFLA: Una mufla a combustible técnicamente es un horno para temperaturas elevadas donde la fuente de calor está separada totalmente de la cámara de cocción para que no pueda contaminarse la muestra con los gases de combustión.

MICROTOMO: Los micrótomos para cortar material incluido en parafina son probablemente los más usados en los laboratorios de histología. Todos poseen varias partes comunes: una cuchilla, un portabloques y un sistema mecánico que permite acercar el bloque de parafina a la cuchilla una distancia que se corresponde con el grosor de la sección que pretendemos obtener y realizar el corte.

AUTOCLAVE VERTICAL: Los autoclaves verticales para laboratorio Tuttnauer están disponibles con cámaras de 23 a 160 litros. Con una capacidad superior y una mejor perfomance, la línea ELV de esterilizadores automáticos verticales de vapor Tuttnauer provee una esterilización segura, económica y efectiva. Los modelos ELV tienen un avanzado sistema de control con microprocesador.

LAVADORA: Este instrumento es utilizado para lavar los mandiles de laboratorio ya que éste se encuentra de el nivel 3 de bioseguridad.

2º PREPARACION DE REACTIVOS:

CABINA DE EXTRACCION DE GASES: Las cabinas de extracción de gases ofrecen seguridad, evitan la contaminación del laboratorio y protege al personal de inhalaciones en dónde se generen gases tóxicos. Estas se encargan de retener gases y vapores que desprenden al momento de la manipulación de productos químicos en el laboratorio. Las cabinas de extracción de gases de Acequilabs se ajustan fácilmente a sus necesidades, se ofrecen en modelos de sobremesa y/o con poseta de lavado, sifón de desagüe y base con sistema de rodachinas de seguridad, opcionalmente

diseñamos y fabricamos cabinas acorde a las exigencias de seguridad para su laboratorio.

ESPECTOFOTOMETRO: Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos.

. FUNCIONES: El espectrofotómetro realiza dos funciones principales:

1. Ofrece información de una muestra sobre la naturaleza de la sustancia que contiene.2. Señala indirectamente la cantidad de la sustancia a investigar que se encuentra presente en la muestra

MULTIPORADOR: La unidad básica del multiporador está formada por un módulo diseñado para electroporar células eucariotas.

Dos módulos funcionales suplementarios amplían el espectro de aplicaciones del multiporador para la fusión celular o la transformación de bacterias y levaduras. No son necesarios dispositivos adicionales ni piezas externas. Junto con los tampones, las cubetas y las cámaras, indicados precisamente para las correspondientes aplicaciones, el multiporador conforma un sistema perfecto.

HORNO DE EHIBRIDACION:

LIOFILIZADOR: Equipo de desecación en el que se elimina el agua por congelación del producto húmedo a -86°C y posterior sublimación del hielo en condiciones de vacío. Al suministrar calor el hielo sublima y se evita el paso por la fase líquida.

DETECTOR DE PLACAS ELISA:

CENTRIFUGA CONVECIONAL: Es una máquina que pone en rotación una muestra para acelerar por fuerza centrífuga la decantación o sedimentación de sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad. Existen diversos tipos de estos, comúnmente para objetivos específicos.

BAÑO MARIA:

EQUIPOS DE HOMOGENEIZACION: Esta máquina cuenta con caldero, tanque de agua y tanque de emulsionantes, plataforma de operación y sistema de control. La máquina logra que el diámetro del material llegue

hasta 0.5μm.

Aplicación de la máquina homogenizadora al vacío:Es adecuada para el calentamiento, la fundición y la homogenización de materiales. Es el dispositivo ideal para la elaboración de cremas, pastas y pomadas.

REFRIGERADORA: Siempre es necesario el uso de este instrumento ya que mantiene la conservación de las muestras a estudiar.

CONDUCTIMETRO: El conductímetro es un aparato que mide la resistencia eléctrica que ejerce el volumen de una disolución encerrado entre los dos electrodos. El aparato mide la resistencia, y dependiendo del electrodo, realiza las operaciones necesarias y muestra la conductividad en la pantalla.

PH- metro: Es un sensor utilizado en el método electroquímico para medir el pH de una disolución.

La determinación de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla a través de una fina membrana de vidrio que separa dos soluciones con diferente concentración de protones. En consecuencia se conoce muy bien la sensibilidad y la selectividad de las membranas de vidrio delante el pH.

Una celda para la medida de pH consiste en un par de electrodos, uno de calomel (mercurio, cloruro de mercurio) y otro de vidrio, sumergidos en la disolución de la que queremos medir el pH.

La varita de soporte del electrodo es de vidrio común y no es conductor, mientras que el bulbo sensible, que es el extremo sensible del electrodo, esta formado por un vidrio polarizable (vidrio sensible de pH).

Se llena el bulbo con la solución de ácido clorhídrico 0.1M saturado con cloruro de plata. El voltaje en el interior del bulbo es constante, porque se mantiene su pH constante (pH 7) de manera que la diferencia de potencial solo depende del pH del medio externo.

El alambre que se sumerge al interior (normalmente Ag/AgCl) permite conducir este potencial hasta un amplificador.

HOMOGENIZADOR CON MAGNETO: a temperatura 500 C.

3º AREA DE CULTIVOS

CABINA DE BIOSEGURIDAD: Una cabina de bioseguridad, cabina de seguridad biológica o cabina de seguridad microbiológica es un recinto o espacio de trabajo cerrado y ventilado para trabajar de modo seguro con materiales contaminados (o potencialmente contaminados) con agentes patógenos (bacterias, virus...) y forma parte del equipamiento de laboratorio de muchas unidades biomédicas. Existen diferentes tipos, diferenciados por las características específicas de su construcción.

CABINA DE FLUJO LAMINAR: Una cabina de flujo laminar, cámara de flujo laminar o campana de flujo laminar es un recinto que emplea un ventilador para forzar el paso de aire a través de un filtro HEPA o ULPA y proporcionar aire limpio a la zona de trabajo libre de partículas de hasta 0.1 micras. Este tipo de equipos se fabrican en forma generalmente prismática con una única cara libre (la frontal) que da acceso al interior, donde se localiza la superficie de trabajo, que normalmente permanece limpia y estéril.

Se divide en tres zonas:

1. Zona de material limpio.2. Area de trabajo.3. Area de desecho.

MICROSCOPIO INVERTIDO: Como su nombre indica un microscopio invertido tiene una disposición inversa de sus componentes respecto a un microscopio convencional. La fuente de luz y el condensador están sobre la plataforma apuntando hacia abajo. Los objetivos están debajo de la plataforma apuntando hacia arriba. Los únicos componentes que están en la misma posición son los oculares, así mismo la muestra es colocada sobre la platina mecánica.Aunque un microscopio electrónico tiene gran capacidad demagnificación y resolución de la muestra, éste requiere que el especímen sea procesado. Por otra parte, el microscopio de luz concede una observación temporal de muestras vivas, sin embargo, éstas requieren una hidratación constante que las somete a estrés permanente, imposibilitando de tal manera su supervivencia. A diferencia de estos microscopios, el microscopio invertido permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparación previa, favoreciendo el seguimiento del estado de crecimiento, comportamiento y demás parámetros involucrados en el desarrollo del cultivo. La observación se realiza a través de las bases de diferentes recipientes con espesores y características ópticas variables, tales como placas de Terasaki, frascos Corning, frascos Roux, cajas de Petri plásticas y de vidrio. El material plástico es ópticamente superior que el de vidrio debido que son más delgados y uniformes. 

Una desventaja del microscopio invertido es su limitada magnificación, debido a que los objetivos más potentes son de 40X y de 60X.

4º AREA DE MEDICIONES

BALANZAS ANALITICAS: instrumentos de medida más usados en laboratorio y de la cual dependen basicamente todos los resultados analíticos.

Las balanzas analíticas modernas, que pueden ofrecer valores de precisión de lectura de 0,1 µg a 0,1 mg, están bastante desarrolladas de manera que no es necesaria la utilización de cuartos especiales para la medida del peso. Aún así, el simple empleo de circuitos electrónicos no elimina las interacciones del sistema con el ambiente. De estos, los efectos físicos son los más importantes porque no pueden ser suprimidos.

ESTEREOSCOPIO CON DOS OBJETIVOS: Es un dispositivo muy simple que consta de cuatro pequeños espejos, ubicados en forma tal que permiten desviar las imágenes correspondientes a cada ojo puestas una al lado de la otra de tal manera al verse montadas una sobre la otra dan el efecto estereoscópico o tridimensional; para ajustarse al tamaño de distintas imágenes el dispositivo tiene un eje o pivote que altera el grado de separación. Este aparato sustituye el cruzar los ojos para ver fotos o videos estereoscópicos, que para muchos que es algo difícil y/o incomodo.

CABINA DE PCR: Crean un ambiente ideal para la preparación de muestras para PCR reduciendo la probabilidad de contaminación, permite descontaminar aparatos y reactivos en cuestión de minutos entre los experimentos.

5º AREA DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS (ARN – ADN)

MICROPIPETAS: La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas analíticas.

Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl, respectivamente.

Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para pipetear volúmenes grandes (por ejemplo, 800 μl).

CENTRIFUGA MINISPIN: De 14500 RPM.

TERMOSTATO: Un termostato es el componente de un sistema de control simple que abre o cierra un circuito eléctrico en función de la temperatura. Su versión más simple consiste en una lámina bimetálica como la que

utilizan los equipos de aire acondicionado para apagar o encender el compresor.

Otro ejemplo lo podemos encontrar en los motores de combustión interna, donde controlan el flujo del líquido refrigerante que regresa al radiador dependiendo de la temperatura del motor.

VORTEX MIXER: Un agitador tipo vórtex o mezclador de vórtice es un dispositivo simple que se usa comúnmente en los laboratorios para agitar pequeños tubos o frascos de líquido. Se compone de un motor eléctrico con el eje de transmisión orientado verticalmente y unido a un trozo de goma o caucho montado en forma de copa, ligeramente excéntrico. A medida que el motor gira la pieza de caucho oscila rápidamente en un movimiento circular. Cuando un tubo de ensayo o recipiente adecuado se coloca en el soporte de goma (o toca su borde) el movimiento se transmite al líquido en su interior y se crea un vórtice. La mayoría de los mezcladores de vórtice tienen una configuración de velocidad variable y pueden ser configurados para ejecutarse de forma continua, o para que funcione sólo cuando una débil presión se aplica a la goma. Poseen unos pies de ventosa en la base para evitar desplazamientos.

CENTRIFUGA REFRIGERADA: Equipo que permite la centrifugación de tubos (0.2 – 50ml) para la separación de constituyentes de mezclas liquidas o suspensiones, a temperaturas comprendidas entre 20 y 40C. también permite la separación de células y macrocélulas.

EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS:

CONCENTRADOR PLUS DE ACIDOS NUCLEICOS:

AREA MOLECULAR

1º SALA MASTER MIX PCR

CABINA PCR: Crean un ambiente ideal para la preparación de muestras para PCR reduciendo la probabilidad de contaminación, permite descontaminar aparatos y reactivos en cuestión de minutos entre los experimentos.

2º AREA DE AMPLIFICACION

TERMOCICLADORE TIEMPO REAL: Un termociclador, también conocido como máquina de PCR o reciclador térmico de PCR es un aparato usado en Biología Molecular que permite realizar los ciclos de temperaturas necesarios para una reacción en cadena de la polimerasa de amplificación de ADN o para reacciones de secuencia con el método de Sanger. El modelo más común consiste en un bloque de resistencia eléctrica que distribuye a través de una placa una temperatura homogénea durante tiempos que

pueden ser programables, normalmente con rangos de temperatura de 4 °C a 96 °C. Dado que las reacciones incubadas en el aparato son en soluciones acuosas, suelen incluir una placa de tapa calentada constantemente a 103 °C para evitar la condensación de agua en las tapas de los tubos donde ocurre la reacción, y así evitar que los solutos se concentren, lo que modificaría las condiciones óptimas para la enzima polimerizante y la termodinámica del apareamiento de los iniciadores. También existen otras tecnologías menos populares utilizando distribución de aire caliente en tubos suspendidos, logrando el mismo objetivo de transferir calor eficientemente a la reacción para que cambien los ciclos de temperaturas.

3º EXTENSION FINAL

CAMARA DE ELECTROFORESIS: Ideales para preparaciones rutinarias de técnicas de electroforesis, para la separación de proteinas u ácidos nucleicos, técnicas de secuenciación de ADN, patrones de bandas y análisis de oligonucleótidos, es una solución para estudios e investigaciones sobre mutaciones y polimorfismos de ADN, disponibles en diferentes tamaños según las necesidades del usuario.

I. ANEXOS:

Fig. Nº1: Autoclave horizontal.

Fig. Nº2: Autoclave vertical.

Fig. Nº3: Estufa de laboratorio.

Fig. Nº4: Horno de laboratorio.

Fig. Nº5: Microtomo

Fig. Nº6: Cabina de extracción de gases

Fig. Nº7: Balanza analítica

Fig. Nº8: Cabina de PCR

Fig. Nº9: Cabina de bioseguridad

Fig. Nº 10: Puntas para micropipetas y micropipetas