Universidad Autnoma Del Estado De MxicoFacultad De QumicaQumica LegalQFB

Practica N8 Pruebas Cristalogrficas Para Determinar La Naturaleza Sangunea De Una ManchaObjetivoConfirmar la naturaleza sangunea de una mancha mediante un mtodo microcristralogrfico.

Marco TericoEn cualquier caso, y aunque no hubiera ninguna dificultad en reconocer una mancha como sangre simplemente por observacin, siempre es necesaria una verificacin de su naturaleza sangunea en el momento de la reconstruccin de una caso o de ser presentadas como pruebas de un procedimiento legal.A grandes rasgos, son cuatro las cuestiones que se plantean en el laboratorio a la hora de identificar manchas, una de ellas es: La mancha que estudiamos es de sangre?, lo cual implica la realizacin de una serie de procedimientos que reciben el nombre de conjunto diagnostico genrico. Existen dos tipos de pruebas a aplicar: Pruebas de orientacin. Son muy sensibles pero poco especficas, porque adems de la sangre, hay otras muchas sustancias que son capaces de dar un resultado positivo al ser sometidas a las mismas, por lo que solo se puede valorar un resultado negativo. Pruebas se certeza. Son muy especficas y de menor sensibilidad. Se basan en comprobar la presencia en la muestra de alguno de los componentes de la sangre. Estas pruebas no permiten determinar si la sangre analizada es o no humana.Dentro de las pruebas de certeza se encuentran mtodos cristalogrficos o microqumicos. En estas pruebas, se somete a la mancha a la accin de distintos reactivos, para obtener derivados de la hemoglobina. Estos derivados forman cristales de colores y formas caractersticos que pueden ser identificados por medio de observacin al microscopio y permiten asegurar la naturaleza sangunea de la muestra que se estn analizando. Las dos tcnicas ms utilizadas son las de Teichmann para obtener cristales de clorhidrato de hematina y el mtodo basado en la obtencin de cristales de hemocromgeno es utilizado en el reactivo de Takayama.Cristales De Teichmann O De HematinaLas protenas se separan inmediatamente de la hemoglobina y del grupo prosttico cuando se trata con cido actico, con el cual, se crea un medio acido en donde el grupo Hem se oxida ms rpidamente que en un medio alcalino; si hay algn halgeno inorgnico como el cloro, se formaran cristales insolubles de cloruro de ferriprotoporfirina o hemtica. En caso positivo se observaran unos cristales romboidales de color caf oscuro.Prueba De Takayama O HemocromgenoLa ferroprotoporfirina y la ferriprotoporfirina se combinan con compuestos nitrogenados que incluyen a otras protenas, hidrxido de amonio, piridina y nicotina llamados hemocromgenos mediante la hemoglobina creando cristales tanto en medio acido como alcalino, por capilaridad, se observan cristales romboidales de color rosa al microscopio.

ProcedimientoTeichmann y Takayama

Disposicin de ResiduosColocar las laminillas, cubreobjetos y el residuo de muestra en solucin de hipoclorito de sodio por 15 minutos.

Observaciones

Takayama, muestra directa 40XTeichmann, muestra directa 40XTakayama, muestra indirecta 40X

ResultadosEn las muestras para Teichmann y Takayama en muestra fresca resultan positivas a cada prueba identificando de forma inmediata los cristales en Takayama, y con un poco de dificultad se encontraron los de Teichmann.En las muestras diluidas fue difcil encontrarlos slo en el de Takayama fueron ms perceptibles, pero estaba muy concentrada la dilucin, por lo que al diluirlo ms, ya no pudieron encontrarse.La apariencia de los cristales en las reacciones de Takayama eran de color rosado transparente, algunos en forma de aguja o formas semiromboidales, uno encima de otro. En el caso de los cristales de Teichmann tenan definidamente una forma romboidal y era de un color caf.

ConclusionesLas pruebas que se realizan con las tcnicas de Takayama y Teichmann son relativamente sencillas y rpidas para la determinacin de muestras de sangre, con pequeos inconvenientes en las preparaciones de estos, ya que en el caso de la de Teichmann si el c. Actico no ebulle en su totalidad queda lquido que impide su visualizacin y la totalidad de la reaccin. Pero en la reaccin de Takayama si se expone demasiado tiempo a la llama el portaobjetos, se puede caramelizar el reactivo lo que provocara que no se lograra ver nada en el microscopio y de igual forma la reaccin con la sangre no se llevara a cabo.Es posible que en la muestra diluida no se lograra encontrar los cristales, porque, en todas las pruebas que se realizaron no se realizaron en su totalidad las reacciones correspondientes o de igual forma con el reactivo de Takayama hubo muchas partes caramelizadas. No se puede decir que haba poca cantidad de sangre y que por esto no se vio nada, ya que este tipo de pruebas pueden realizarse con una concentracin baja de sangre, por lo que no es un factor que pueda impedir su visualizacin.

Cuestionario1. Explique el fundamento de la reaccin del cido actico con la sangre.La hemoglobina, cuando es tratada con cido actico, se separa inmediatamente de las protenas y del grupo prosttico. Durante la hidrlisis la globulina se desnaturaliza.2. Explique el fundamento de la reaccin de la sangre con el reactivo de Takayama.El hidrxido de sodio efecta una hidrlisis alcalina, liberando el grupo prosttico de la globina; el fierro del Hem en este momento se encuentra como in frrico (+3) debido a la formacin de la metahemoglobina en el proceso de desecacin de la mancha de sangre. La carga (+3) del fierro se neutraliza por el in OH. Calentando la glucosa (a azcar reducida), se reduce el in frrico a ferroso (+2) y la piridina se combina con ste para formar un producto cristalino insoluble: el hemocromgeno o piridinferroprotoporfirina.3. Cules son las caractersticas cristalogrficas de los cristales de hemocromgeno?Cristales romboidales de color rosa alrededor de la muestra.

4. A qu se le llama rastreo hematolgico?El rastreo de sangre en el sitio de suceso tiene por objeto detectar, mediante una bsqueda metdica, toda clase de vestigio de sangre, tanto en el sitio de suceso mismo, como en el cadver, en vestimentas y tambin en el sospechoso. Una vez detectada la imagen sangunea se aplica el procedimiento criminalstica normal, que es proteger el vestigio para evitar que sea alterado o borrado; fijar mediante la fotografa, planimetra y descripcin escrita; transportar vestigio al laboratorio de criminalstica ( Cuando sea procedente); la imagen sangunea, es decir, reconstruir su origen y mecanismo.

Referencias Tcnicas Utilizadas En Hematologa Forense.http://criminalistica.mx/descargas/documentos/pdf/TecnicasHematologiaForense.pdfConsultado 08/04/2015. Introduccin, Hematologa Forense.http://www.uv.es/acastell/1-Introduccion.pdfConsultado 05/04/2015.

Anlisis Forense de la sangre.http:// www.criminalistica.com.mx/areas-forenses/hematologia-y-serologia/1347-variosConsultado 05/04/2015. Hematologa forense.http://www.mexicoforense.org/biblioteca/criminalistica/hemotologia_forense.pdfConsultado 05/204/2015. Hematologa forense.http: //invesjudiciala.blogspot.mx/ Consultado 08/04/2015. Manchas hemticas.http: //es.slideshare.net/adnestelamartin/captulo-10-anlisis-de-manchas-de-sangreConsultado 08/05/2015.